Dermatoloģijas sasniegumi, izmantojot DNS Aptamer "Aptamin C" inovāciju: oksidatīvā stresa novēršana un C vitamīna ietekmes palielināšana, izmantojot antioksidāciju

joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Sooho Choi PhD1|Džonmins Hans, Ph.D. Kandidāts2|Ji Hyun Kim MS kandidāts1|A‐Ru Kim Ph.D. Kandidāts3|Sang‐Heon Kim Ph.D. Kandidāts3|Weontae Lee Ph.D., profesors2|Moon-Young Yoon Ph.D., profesors3|Gyuyoups Kim PhD1|Yoon-Seong Kim Ph.D., profesors1

Abstrakts

Fons:C vitamīns(pazīstama arī kā L-askorbīnskābe) spēlē izšķirošu lomu reaktīvo skābekļa sugu (ROS) samazināšanā un šūnu atjaunošanā, aizsargājot šūnas no oksidatīvā stresa. Lai gan C vitamīns tiek plaši izmantots kosmētikas un ārstniecības tirgos, ir daudz pierādījumu, ka C vitamīns viegli tiek pakļautsoksidēšanāsgaisa, pH, temperatūras un UV gaismas ietekmē uzglabāšanas laikā. Šis C vitamīna trūkums samazina tā kā antioksidanta spēju un samazina to produktu glabāšanas laiku, kas satur C vitamīnu kā sastāvdaļu. Lai pārvarētu C vitamīna deficītu, mēs esam izstrādājuši Aptamin C, inovatīvu DNS aptameru, kas maksimāli palielina C vitamīna antioksidantu efektivitāti, saistoties ar samazināto C vitamīna formu un aizkavējot tā darbību.oksidēšanās.

Metodes:Aptamīna C saistīšanās ar C vitamīnu tika noteikta, izmantojot ITC analīzi. ITC eksperiments tika veikts ar 0,2 mmol/LC vitamīnskas tika injicēts 25 reizes 2 µL alikvotās daļās 1,8 ml parauga šūnā, kas satur aptamīnu C koncentrācijā 0.02 mmol/L. Dati tika pielāgoti vienas vietas saistīšanas izotermai, izmantojot ITC v.5.0 izcelsmes programmu.

Rezultāti:Lai izpētītu Aptamin C ietekmi unC vitamīnskomplekss cilvēka ādās, tika veikti gan in vitro, gan klīniskie testi. Mēs novērojām, ka Aptamin C un C vitamīna komplekss bija ievērojami efektīvs grumbu uzlabošanā, balināšanas efektā un hidratācijas palielināšanā. Klīniskajā pārbaudē subjektiem, kas tika ārstēti ar kompleksu, tika novērots dramatisks ādas kairinājuma un niezes uzlabojums. Aptamin C komplekss testā neradīja nevēlamas reakcijas.

Secinājums:Kopumā šie rezultāti parādīja, ka Aptamin C, novatorisks jauns savienojums, potenciāli būtu jāizmanto kā galvenā kosmētiskā sastāvdaļa dažādiem ādas stāvokļiem.

ATSLĒGVĀRDIantioksidācija, aptamīns C (C vitamīnu saistošs Aptamer),oksidēšanās, oksidatīvais stress,C vitamīns(L-askorbīnskābe)

cistanchepiemīt spēcīga antioksidācijas spēja

1|IEVADS

Reaktīvās skābekļa sugas (ROS) ir ķīmiski reaģējošas ķīmiskas vielas, kas satur skābekli, kam ir svarīga loma šūnu signalizācijā un homeostāzē.{0}} Tie ietver ne tikai pozitīvus efektus, piemēram, saimnieka aizsardzības gēnu indukciju un jonu transporta sistēmu mobilizāciju, bet arī arī loma apoptozē (ieprogrammētā šūnu nāvē).4,5ROS līmeni var paaugstināt vides stress, izraisot šūnu struktūru bojājumus.3 Šo parādību sauc par "oksidatīvo stresu". Oksidatīvais stress ir viens no galvenajiem dažādu slimību, tostarp neirodeģeneratīvo slimību, Lū Geriga slimības, autisma, multiplās sklerozes un ādas slimību cēloņiem.6-15 Turklāt oksidatīvajam stresam ir tieša ietekme uz ādas novecošanās procesu16; olbaltumvielas, lipīdi un DNS jutīgi reaģē uz oksidatīvo stresu, ko izraisa ROS.17 Antioksidanti ir ļoti efektīvi ādas aizsardzībā, jo tie tieši reaģē uz ROS, neļaujot tiem sasniegt bioloģiskās mērķa molekulas.18,19 Antioksidanti, piemēram,C vitamīns, E vitamīns, koenzīms Q10 un polifenolu savienojumi aizsargā ādu no bojājumiem, ko izraisa ROS. Antioksidanti tādējādi palīdz novērst un ārstēt dažādas ādas slimības un palēnināt ādas novecošanās procesu.20 C vitamīna izmantošana rūpniecībā galvenokārt ir saistīta ar tā antioksidējošām īpašībām, kas ir rezultāts:C vitamīnsspēju neitralizēt brīvos skābekļa radikāļus, izmantojot procesu, ko sauc par radikāļu attīrīšanu.21,22 Tomēr šo pašu antioksidantu īpašību dēļ pati molekula pēc būtības ir jutīga pret degradāciju, izmantojotoksidēšanās. Lai atrisinātu šo problēmu, mēs izstrādājām Aptamin C, DNS aptameru, kas specifiski saistās ar C vitamīnu un inhibē C vitamīna oksidāciju. Aptamēri ir vienpavediena DNS vai RNS oligonukleotīdi, kas spēj selektīvi saistīt plašu molekulu klāstu. Aptamērus parasti identificē ar in vitro atlases metodi, ko dēvē par ligandu sistemātisku attīstību ar EXponenciālo bagātināšanu vai "SELEX". Mēs noskaidrojām, ka Aptamīns C inhibēoksidēšanāsC vitamīnu no vairākiem oksidētājiem un saglabā antioksidantu aktivitāti ilgstošas ​​uzglabāšanas laikā. Lai apstiprinātu Aptamin C drošības novērtējumu, eksperimenti tika veikti šūnu līmenī un tika tieši piemēroti cilvēkiem, un toksicitāte netika novērota. Ādas slimības, piemēram, atopiskais dermatīts, psoriāze un pinnes, ir saistītas ar imūnreakciju un ROS.23C vitamīnsspēj noņemt ROS un tai piemīt pretiekaisuma iedarbība.24 Aptamīns C novēršoksidēšanāsc vitamīna un palielina tā efektivitāti, pateicoties lēnai atbrīvošanai. Tāpēc mēs sagaidām, ka Aptamin C-C vitamīna komplekss parādīs sinerģisku efektu.

2|MATERIĀLI UN METODES

2.1|Aptamer skrīnings pret C vitamīnu ar samazinātu grafēna oksīdu

Šī metode tika veikta, modificējot iepriekšējā pētījuma metodi.25 ssDNS kandidāti, kas var specifiski saistīties arC vitamīnstika izstrādāti no nejaušas ssDNS bibliotēkas, kas sastāv no aptuveni 1X1018 dažādām sekvencēm. ssDNS bibliotēkai mēs izmantojām pēc pasūtījuma izgatavotu secību, kuras izmērs ir 60 mēri un kas satur 30 nejauši ģenerētas nukleotīdu sekvences un praimera vietu amplifikācijai (5′′-ATGCGGATCCCGCGC‐(N)30‐GCGCGAAGCTTGCGC‐3). Mēs veicām pavisam piecas kārtas, mainot eksperimentālo nosacījumu, lai izvēlētos specifiskāku secību. Kopējais reakcijas tilpums bija 200 μL. Apmēram 20 μL 10 × saistīšanās bufera (10 × PBS pievienots 10 mmol/L MgCl2), 80 μL rGO (5 mg/ml, atšķaidīts ūdenī) un 200 pikomoli ssDNS bibliotēkas (20 μL 100 μmol/L krājuma). ) tika pievienoti un ievadīti dH2O līdz 200 μL. Reakcija turpinājās 30 minūtes, lai ssDNS bibliotēku piesaistītu rGO, un pēc tam maisījumu centrifugēja ar 20 000 g 20 minūtes, lai izvadītu supernatantu. RGO granula tika mazgāta 1 reizi ar 200 μL saistīšanās bufera, kas ir tāda pati koncentrācija kā katras kārtas mērķa saistīšanās nosacījums. Lai eluētu kandidātus, 200 nanomolsC vitamīnsAtšķaidīts ar 200 μL saistīšanas bufera, tika pievienots rGO granulai, un eluēšanas posms ilga 1 stundu. Eluētā ssDNS tika sadalīta ar centrifugēšanu, tika veikta ar 20 000 g 20 minūtes un pastiprināta. Pirms amplifikācijas mēs veicām EtOH izgulsnēšanu, lai novērstu piemaisījumus, izņemot ssDNS. Mēs veicām asimetrisku PCR, lai iegūtu pastiprinātu ssDNS. Asimetriskā PCR pārsūtītā primera attiecība pret reverso praimeru bija 10:1. Mēs veicām elektroforēzi ar 2,5% agarozes gēlu, lai apstiprinātu PCR produktu ar dažiem mikrolitriem tā. Asimetriskā PCR nevar radīt tikai ssDNS. Tātad, mēs izmantojām drupināšanas un mērcēšanas metodi, lai izolētu ssDNS kandidātus. Metodei mēs veicām elektroforēzi uz 12% poliakrilamīda dabīgā gēla un iekrāsojām želeju ar etīdija bromīdu (EtBr). Lai atdalītu divpavedienu DNS (dsDNS) un ssDNS, ar ssDNS iekrāsotā gēla daļa tika izgriezta, pulverizēta un ekstrahēta ssDNS ar drupināšanas un mērcēšanas buferi (500 mmol/L NH4OAc, 0,1 procenti SDS, 0,1 mmol/L EDTA). pa nakti. Pulverveida želeja tika atdalīta ar centrifugēšanu. Supernatants, kas satur ssDNS, tiek koncentrēts un attīrīts, veicot EtOH izgulsnēšanu. Žāvēta ssDNS tika savākta ar sterilizētu dH2O un tika izmantota nākamajā kārtā kā bibliotēka.

dabīgas sastāvdaļascistanche amazon

2.2|Izotermiskās titrēšanas kalorimetrijas (ITC) eksperiments

Izotermiskās titrēšanas kalorimetrijas eksperiments tika veikts, izmantojot VP‐ITC sistēmu (MicroCal Inc Northampton) 25 grādu temperatūrā fosfāta buferšķīdumā, kas sastāv no 1 mmol/L magnija hlorīda (pH 7,4). Pirms katra titrēšanas eksperimenta Aptamin C 2 mL unC vitamīns600 µL paraugi tika degazēti 30 minūtes vakuumā, bez maisīšanas, temperatūrā, kas bija dažus grādus zemāka par eksperimenta temperatūru. Mēs sagatavojām 0, 2 mmol / l C vitamīnu, kas tika injicēts 25 reizes 2 µL alikvotās daļās 1, 8 ml parauga šūnā, kurā bija Aptamin C koncentrācijā 0, 02 mmol / l. Dati tika pielāgoti vienas vietas saistīšanas izotermai, izmantojot sākotnējo programmu ITC v.5.0 (MicroCal Inc).

2,3|Uz fluorescenci balstīti mikroplašu testi C vitamīna oksidēšanai

OksidācijanoC vitamīnstika mērīts, nosakot oksidēto produktu dehidroaskorbātu (DHA), izmantojot modificētu Vislisel et al aprakstītās metodes versiju.7 Šajā metodē DHA nosaka, reaģējot ar o-fenilēndiamīnu (OPDA), veidojot fluorescējošu kondensācijas produktu 3‐( dihidroksietil)furo[3,4-b]hinoksalīn-1-ons. Pārbaude tika veikta šādi melnās 384 bedrīšu plāksnēs (Greiner Bio‐One). Aptamēri vispirms tika izšķīdināti ar fosfātu buferšķīdumā, pH 7,2, kas satur 1 mM MgCl2, koncentrācijā 200 µmol/L, pēc tam salocīja, karsējot līdz 95 grādiem, un 15 minūtes ļāva lēnām atdzist līdz istabas temperatūrai. Pēc tam salocītie aptamēri tika atšķaidīti 1:1 (v:v) svaigi pagatavotā 5 mmol/l šķīdumā.C vitamīnstesta buferšķīdumā [50 mmol/l nātrija acetāts, 1% (w/v) BSA, 0,05% (v/v) Tween 20, 1 mM MgCl2 (Sigma, visi komponenti) noregulēts uz pH 5,5] un maisījumu inkubēja 30 minūtes istabas temperatūrā, lai ļautu aptamēriem saistīties pirms oksidētāja pievienošanas. Pēc tam C vitamīna/aptamēra šķīdumiem tika pievienoti oksidētāji (EM) H2O2 (Sigma) koncentrācijā. Oksidētāji tika iepriekš atšķaidīti līdz to darba koncentrācijai testa buferšķīdumā. Pēc tam paraugus inkubēja istabas temperatūrā 10 minūtes pirms OPDA (Sigma) pievienošanas koncentrācijā 5, 5 mmol / l testa buferšķīdumā. Tūlīt pēc OPDA pievienošanas paraugu fluorescence pie 425 nm tika noteikta, izmantojot SpectraMax® i3X plākšņu lasītāju (Molecular Devices) ar ierosmi pie 345 nm, 45 minūšu laikā ar mērījumiem ik pēc 60 sekundēm. Visi paraugi un reaģentu saturošie trauki tika iesaiņoti folijā, lai aizsargātu tos no gaismas visu inkubāciju laikā, kas veiktas fluorescences testiem.

2,4|C vitamīna samazināšanas mērīšana, izmantojot DCPIP (2,6-dihlorfenolindofenolu)

Lai noteiktu samazinājumuC vitamīns, mēs veicām eksperimentus, izmantojot DCPIP reakciju. C vitamīns reaģē ar DCPIP, mainot krāsu no zilas uz bezkrāsainu. Sagatavotais C vitamīns tika apstrādāts ar 5% Aptamin CTM, un neapstrādātais C vitamīns tika inkubēts istabas temperatūrā 8 nedēļas. Paraugs tika mērīts pēc 2, 4 un 8 nedēļām. Koniskajā kolbā, izmantojot pipeti, pievienoja apmēram 2 ml DCPIP, un pievienoja pirmo neapstrādāto C vitamīnu, līdz šķīdums kļuva bezkrāsains. SummaC vitamīnspievienots tika izmērīts un atkārtots ar citiem paraugiem. Pēc šiem datiem tika aprēķināta katra parauga samazinājuma pakāpe.

2,5|In vitro pētījums par pretgrumbu iedarbību cilvēka dermas fibroblastos

Lai novērtētu šūnu dzīvotspēju cilvēka dermas fibroblastos, šūnas tika apstrādātas ar dažādām aptamīna C galīgajām koncentrācijām arC vitamīns(Aptamīns C ug un C vitamīns ug/mL) {{0}}.01 plus 0,5 ug/mL, 0,1 plus 5 ug/mL, 0,5 plus 25 ug /mL, 1 plus 50 ug/ml un 2 plus 100 ug/ml. Un pēc tam šūnas tika apstrādātas aptamīna C koncentrācijās ar C vitamīnu, lai noteiktu intracelulāro kolagēnu, intracelulāro kolagenāzi (MMP‐1) un elastāzes aktivitāti.

Cilvēka dermas fibroblasti (HDF) tika atlasīti, pamatojoties uz MFDS "Funkcionālās kosmētikas (ΙI) efektivitātes novērtēšanas vadlīnijām". HDF tika kultivēti DMEM/F12 3:1 maisījumā ar augstu glikozes līmeni, kas papildināts ar 10% FBS un 1% Antibiotiku-Antimycotic mitrinātā 5% CO2 atmosfērā 37 °C temperatūrā.

HDF (5 × 104 šūnas/iedobē) iesēja 24 bedrīšu plāksnēs un inkubēja 24 stundas un apstrādāja ar dažādu koncentrāciju Aptamin C arC vitamīnsun inkubē 24 stundas. Pēc 24 stundām supernatants tika savākts un barotnē atbrīvotā prokolagēna daudzums tika mērīts pie 450 nm, izmantojot Procollagen Type IC-Peptide (PIP) ELISA komplektu. Kolagēna ražošanas pakāpe tika kalibrēta pēc kopējā olbaltumvielu satura un salīdzināta ar TGF‐1 kā pozitīvu kontroli. Barotne bez testa materiāliem tika izmantota kā šķīdinātāja kontrole.

HDF (5 × 104 šūnas/iedobē) iesēja 24 bedrīšu plāksnēs un inkubēja 24 stundas un apstrādāja ar dažādu koncentrāciju Aptamin C arC vitamīnsun inkubēja 48 stundas. Pēc 48 stundām kolagenāzes aktivitāte tika mērīta pie 450 nm, izmantojot MMP-1 cilvēka ELISA komplektu. MMP-1 aktivitāte tika novērtēta pēc kopējā olbaltumvielu satura un salīdzināta ar TGF-1 kā pozitīvu kontroli. Barotne bez testa materiāliem tika izmantota kā šķīdinātāja kontrole.

Visi dati tika izteikti kā vidējā ± standarta novirze un iegūti no 3 neatkarīgiem eksperimentiem. Statistiskā analīze tika veikta ar neatkarīgu paraugu t-testu, izmantojot SPSS® programmatūras programmu (IBM) P < 0,05="" nozīmīguma="">

2,6|Ādas grumbu mērīšana ar 3D attēlu analīzes sistēmu

Šajā pētījumā piedalījās divdesmit divas sievietes (vidējais vecums: 50,05 ± 2,94 gadi). Vārnu pēdu ādas grumbas tika novērtētas ar 3D attēlu analīzes sistēmu sākotnējā stāvoklī, 4 un 8 nedēļās. Ādas mitrināšana tika novērtēta ar kapacitātes metodi, un TEWL ar ādas virsmas ūdens difūzijas metodi un ādas elastība ar sūkšanas metodi tika novērtēta sākotnējā līmenī, 2, 4 un 8 nedēļas pēc ārstēšanas. Arī pašaptaujas par efektivitāti subjekti aizpildīja 2. un 4. un 8. nedēļā, bet lietojamības anketas aizpildīja 8. nedēļā pēc ārstēšanas. Visi iegūtie dati tika statistiski analizēti ar SPSS® programmatūru. Vārnu pēdu grumbu parametri tika novērtēti, izmantojot PRIMOS® Premium (GFMesstechnik GmbH). Šī sistēma ļāva kvantitatīvi analizēt ādas grumbu raupjumu, dziļumu, laukumu un apjomu. Attēls tika analizēts tajā pašā apgabalā pēc ādas grumbu parametriem (1, vidējais grumbu dziļums; 2, vidējais dziļums lielākā grumba; 3, maksimālais dziļums lielākā grumba; 4, kopējais grumbu laukums; 5, kopējais grumbu apjoms; 6 , kopējās formas faktora grumbas; 7, kopējais grumbu garums; 8, Ra; 9, Ry un 10, Rz) sākotnējā stāvoklī, 4 un 8 nedēļas pēc ārstēšanas ar Primos 5.8 E ver. Programmatūra.

3|REZULTĀTI

3.1|Lai veiksmīgi veiktu rGO‐SELEX ar nestabilu mērķi, bija nepieciešama stingra pieeja bufera sagatavošanai.

SsDNS bibliotēka, kas bija saistīta ar rGO, izmantojot π‐π sakraušanas mijiedarbības starp grafēna virsmas aromātiskajiem gredzeniem un DNS bāzēm 26, 27 un nesaistītu ssDNS uz rGO, tika atdalīta un noņemta ar centrifugēšanu. ssDNS, kas tika adsorbēts uz rGO virsmas, tika eluēts, apstrādājot ar mērķa savienojumu. Saskaņā ar literatūras ziņojumiem aptamera konformācija mainās pēc saistīšanās ar mērķi un vājinot π‐π kraušanas mijiedarbību ar rGO.28-31 Šis process tika atkārtots piecas kārtas. Katra nākamā kārta notika ar bargākiem bufera apstākļiem un īsākiem eluēšanas laikiem. Šī veiktspēja ļāva mums uzturēt ssDNS ar labāku specifiskumu mērķa savienojumiem.

RGO-SELEX procesā iegūtās bagātinātās bibliotēkas NGS dati sniedza 404071 sekvences. No šiem datiem mēs atlasījām 119 sekvences, sakārtojām tās 11 grupās, pamatojoties uz struktūras līdzību, un atlasījām reprezentatīvas sekvences aptamera kandidātiem (1.A attēls).

3.2|Aptamīna C atlase

Aptamin C kandidātu sekundārās struktūras tika prognozētas, izmantojot M‐Fold bezmaksas programmatūru.32,33 Kandidāti tika grupēti pēc to atrašanās vietas, garuma, formas un augstākās potenciālās struktūras stumbra un cilpas skaita (1.B attēls). DHA, oksīds noC vitamīns, tiek noteikts pēc tā reakcijas ar o-fenilēndiamīnu (OPDA), kas spēlē indikatora lomu.34 Ja aptamers saistās un novērš tāoksidēšanāsC vitamīnam un novērš tā oksidēšanos, fluorescences signāls no 3-(dihidroksietil)-furo-[3,4-b]-hinoksalīn-1-ona, C vitamīna un OPDA kondensācijas produkta, būs zemāks nekā bez aptamera kontrole. Katra aptamēra kandidāta diagramma, kas sajaukta ar C vitamīnu un oksidētāju, ar pozitīvajām kontrolēm,C vitamīnsplus oksidētājs un šifrēšanas sekvences, kas sajauktas ar C vitamīnu un oksidētāju (1. C attēls). Pierādīts, ka pieciem aptamēriem, Aptamin Cb, Cc, Cf, Cg un Ck, ir antioksidācijas iedarbība.

3,3|C vitamīna oksidācijas kavēšana ar aptamīnu C

Aptamīnam C ir augsta saistīšanās afinitāte pretC vitamīns. Aptamīna C saistīšanās ar C vitamīnu tika noteikta, izmantojot ITC analīzi. No saistīšanās izotermas var iegūt saistīšanās reakcijas entalpiju (ΔH), entropiju (ΔS) un stehiometriju (n). Aptamīna Cb eksotermiskā saistīšanās tika konstatēta no ITC mērījumiem, un entalpija (ΔH) tika aprēķināta kā 302,5 ± 3,788, entropija (ΔS) tika aprēķināta kā 18,9, stehiometrija (n) tika aprēķināta kā 56,7 ± {{21 }}.426, un disociācijas konstantes (Kd) tika aprēķinātas kā 2,13 uM C vitamīnam. Aptamīna Cf eksotermiskā saistīšanās tika noteikta no ITC mērījumiem, un entalpija (ΔH) tika aprēķināta kā 279,2 ± 2,992, tika aprēķināta entropija (ΔS). kā 18,4, stehiometrija (n) tika aprēķināta kā 167 ± 1,15, un disociācijas konstantes (Kd) tika aprēķinātas kā 0,89 uM C vitamīnam. Aptamīna Ck eksotermiskā saistīšanās tika noteikta, izmantojot ITC mērījumus un entalpiju (ΔH). ) tika aprēķināts kā 250,4 ± 3,742, entropija (ΔS) tika aprēķināta kā 19,8, stehiometrija (n) tika aprēķināta kā 82,2 ± 0,732, un disociācijas konstantes (Kd) tika aprēķinātas kā 0,90 µmol/L. C vitamīns (2.A attēls). ITC mērījumi atklāj, ka entropijas izmaiņas saistībā ar Aptamin C ir galvenais dzinējspēksC vitamīns. Lai novērstuoksidēšanāsC vitamīna šķidrā stāvoklī, visi šķīdumi tika pagatavoti ar dejonizētu ūdeni, kas apstrādāts ar slāpekli. Fluorescence tika izteikta un kvantitatīvi analizēta, kad OPDA (o-fenilēndiamīns) saistās ar DHA, ko radaoksidēšanāsC vitamīna oksidācijas pakāpe atbilstoši aptamīna C koncentrācijai (125, 250, 500 un 1000 nmol/L) tika salīdzināta un apstiprināta ar OPDA testu. Rezultāti parādīja, kaC vitamīnsPārvēršanās par dehidroaskorbīnskābi bija lēnāka, ja aptamīna C koncentrācija bija augstāka. (2.B attēls). Šie dati pierāda, ka Aptamin C ir no devas atkarīgs C vitamīna oksidācijas inhibitors.

Mēs veicām eksperimentus, lai noteiktu, vai Aptamīns C var novērstoksidēšanāsC vitamīna uzņemšana ilgu laiku. Vienlaicīgi ārstēts ar aptamīnu CC vitamīns, un neapstrādāts C vitamīns tika pakļauts gaismai un 8 nedēļas ļāva nostāvēties istabas temperatūrā. Rezultātā, atstājot neārstētu C vitamīnu, samazinājuma pakāpe 2 nedēļu laikā tika samazināta līdz mazāk nekā pusei, un gandrīz visi no tiem tika oksidēti pēc 4 nedēļām. Aptamīna C klātbūtnē C vitamīns tika samazināts līdz apmēram uz pusi mazāk nekā 8 nedēļas (2.C attēls). Tas liecina, ka Aptamin C novērš C vitamīna oksidēšanos ilgā laika periodā.

cistanche kultūrisms

3,4|Intracelulārās kolagenāzes (MMP-1) aktivitātes un kolagēna analīze

Analizējot kolagenāzes aktivitāti, matricas metaloproteināzes-1 (MMP-1) ražošana tika ievērojami samazināta atkarībā no devas — par 706 procentiem, 9,29 procentiem un 31,81 procentiem pie koncentrācijām {{1{ {12}}}}.01 plus 0.5 ug/mL, 0.1 plus 5 ug/mL un 0.5 plus 25 ug/ ml, attiecīgi (3.A attēls). Analizējot kolagēna sintēzi, prokolagēna Ι tipa karboksiterminālais peptīds (PIP) tika ievērojami palielināts atkarībā no devas, palielinoties par 25{{20}} procentiem pie 0,01 plus 0,5 ug/ml , 41,99 procenti pie 0,1 plus 5 ug/ml un 71,18 procenti pie 0,5 plus 25 ug/ml (3.B attēls).

3,5|Klīniskais pētījums par ādas grumbu uzlabošanās ietekmi uz cilvēka ādu

Grumbu parametru statistiskā analīze tika veikta ar 3D attēlu analīzes sistēmu, lai novērtētu testa produkta ādas grumbu uzlabojošo ietekmi uz cilvēka ādu. Salīdzinot ar kontroles grupu, parametrs "Vidējais grumbu dziļums" tika samazināts par 4,77 procentiem pēc 4 nedēļām un par 4,25 procentiem pēc 8 nedēļām, parametrs "Vidējā dziļuma lielākā grumba" tika samazināts par 3,37 procentiem pēc 4 nedēļām un 4,53 procentiem pēc 8 nedēļām. Maksimālā dziļuma lielākā grumba" parametrs tika samazināts par 4,36 procentiem 4 nedēļās un 7,19 procenti pēc 8 nedēļām, parametrs "Kopējais grumbu garums" tika samazināts par 1,61 procentiem pēc 4 nedēļām un 2,67 procentiem pēc 8 nedēļām, parametrs "Ra" tika samazināts par 4,22 procentiem. pēc 4 nedēļām un 3,90 procentiem pēc 8 nedēļām parametrs "Ry" tika samazināts par 2,66 procentiem pēc 4 nedēļām un par 7,11 procentiem pēc 8 nedēļām, parametrs "Rz" tika samazināts par 3,69 procentiem pēc 4 nedēļām un par 6,22 procentiem pēc 8 nedēļām, samazinājums bija 3,69 procenti ‐7,11 procenti (4. attēls).

4|SECINĀJUMS

C vitamīnsir komerciāli svarīga, taču nestabila molekula, tāpēc tās stabilitātes uzlabošana interesē dažādus tirgus sektorus. Mūsu darbs parāda, ka Aptamin C, DNS aptamēri, potenciāli pagarina glabāšanas laiku un palielina šādu produktu iedarbību, aizkavējotC vitamīns oksidēšanāsšķīdumā. Mēs demonstrējām Aptamin C kompleksa klīnisko efektivitāti grumbu uzlabošanā un ādas mitrināšanā. Aptamīna C komplekss var arī palīdzēt atvieglot ādu skarbā situācijā.

uzlabot ādas balināšanu