Anastatica Hierochuntica etanola un ūdens ekstraktu antioksidanta aktivitāte, fenola profils un nefroprotektīvais potenciāls pret CCl{0}}izraisītu nefrotoksicitāti žurkām

Sazināties:ali.ma@wecistanche.com

Tariks I. Almundarijs u.c

Abstract:Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica L.) plaši izmanto, lai ārstētu dažādas veselības problēmas, jo īpaši, lai atvieglotu dzemdības un atvieglotu ar reproduktīvo sistēmu saistītus traucējumus. Šī pētījuma mērķis bija novērtēt A. hierofhantic etanola (KEE) un ūdens (KAE) ekstrakcija CCl4-izraisīja oksidatīvo stresu un nefrotoksicitāti žurkām, izmantojot bioķīmiskos marķierusnierufunkcijasun antioksidanta statuss kā arī nieru audu histopatoloģiskās izmeklēšanas.A. hierofanti saturēja 67,49 mg GAE g–1 kopējo fenola savienojumu (TPC), 3,51 µg g–1 kopējo karotinoīdu (TC) un 49,78 un 17,45 mg QE g–1 kopējo flavonoīdu (TF) un kopējo flavonolu (TFL), attiecīgi. Tā rezultātā tika iegūti 128,71 µmol TE g-1 DPPH-RSA un 141,92 µmol TE g-1 no ABTS-RSA. A. hierofantiķis pasniedza pārākuantioksidanta aktivitāteinhibējot linolskābes radikāļus un helātus veidojot oksidācijas metālus. HPLC analīzes rezultātā tika iegūta 9 un 21 fenolskābe un 6 un 2 flavonoīdiKEEun KAE ar pārsvaru attiecīgi sinapīnskābe un šļirceskābe. Intramuskulāra vit injekcija. E plus Se un KEE, KAE un KEE plus KAE perorāla lietošana ar 250 mg kg–1 ķermeņa svara ievērojami atjaunoja kreatinīna, urīnvielas, K, kopējo olbaltumvielu un albumīna līmeni serumā. Turklāt tie samazināja malondialdehīdu (MOD), atjaunoja reducēto glutationu (GSH) un uzlaboja superoksīda dismutāzes (SOD) līmeni. KEE, KAE un KEE plus KAE aizsargājanieresno CCl4-nefrotoksicitātes, jo tie galvenokārt mazināja inducēto oksidatīvo stresu. Kopējaisnefronssadaļā KEE, KAE un KEE plus KAE bija attiecīgi aptuveni 83,27 procenti, 97,62 procenti un 78,85 procenti. Gan vit. E plus Se un A. hierofantiskie ekstrakti mazināja histopatoloģiskās izmaiņas ar CCl4- ārstētām žurkām. Noslēgumā jāsaka, ka A. hierophantic, īpaši KAE, ir potenciāla spēja atjaunot oksidatīvo stabilitāti un uzlabotnieresfunkcija pēc CCl4akūts nieru bojājumslabāk nekā KEE. Tāpēc A. hierophantic var būt noderīgs terapeitisks līdzeklis zāļu izraisītas nefrotoksicitātes ārstēšanā.

Atslēgvārdi:Kaff-e-Maryam; polifenoli; bioaktivitāte; sekundārie metabolīti;nieru marķieri; antioksidantu enzīmi;nierudisfunkcija

Cistanche NZ, lai novērstu nieru slimības, noklikšķiniet šeit, lai iegūtu paraugu

1. Ievads

Nieru slimībair 9. galvenais nāves cēlonis ar vairāk nekā 1 no 7, tas ir, 15 procentiem no pieaugušajiem ASV jeb 37 miljoniem cilvēku irhroniska nieru slimība(CKD) [1]. Jāatzīmē, ka visizplatītākais HNS cēlonis, kas reģistrēts 2015. gadā, ir cukura diabēts, kam seko augsts asinsspiediens un glomerulonefrīts [2]. Citi HNS cēloņi ir idiopātiski (bieži saistīti ar mazām nierēm nieru ultraskaņā) [3]. Iepriekš CCl4 tika izmantots metālu attaukošanai, ķīmiskai tīrīšanai, audumu smērēšanai, ugunsdzēsības šķidrumiem un graudu fumigācijai [4]. Tas izraisa smagus traucējumus aknās, plaušās un sēkliniekos, kā arī asinīs, radot aktīvos brīvos radikāļus [5]. Saskaņā ar Ogeturka et al. [6], šī šķīdinātāja iedarbība izraisa akūtu un hronisku nieru bojājumu. Tiek uzskatīts, ka brīvo radikāļu izraisīta lipīdu peroksidācija ir viens no primārajiem šūnu membrānas bojājumu cēloņiem, kas izraisa dažādus patoloģiskus stāvokļus [7]. Reaktīvo radikāļu veidošanās ir saistīta ar CCl4-inducētu nefrotoksicitāti, kas ir saistīta ar lipīdu peroksidāciju un disfunkcionālu proteīnu uzkrāšanos, izraisot nieru bojājumus [8]. Pēdējos gados ir pieaudzis pārsteidzošs, tradicionāls ārstniecības augu izmantošanas veids, un daudzi pētījumi ir apstiprinājuši to terapeitisko lomu pret vairākām slimībām [9–12].

2. Materiāli un metodes

2.1. Parauga sagatavošana

Kaff-e-Maryam (A. hierophantic L.) auga paraugs tika iegādāts no vietējā tirgus Buraidas pilsētā, Kasimas reģionā, Saūda Arābijā. Augu materiāla autentiskumu apstiprināja Saūda Arābijas Kasimas universitātes Lauksaimniecības un veterinārmedicīnas koledžas Augu audzēšanas un aizsardzības departaments. Paraugu nomazgāja ar tīru krāna ūdeni, lai no lapām noņemtu smiltis un netīrumus, un pēc tam gaisā žāvēts augu materiāls (28 ± 1 ◦ C temperatūrā 48 stundas) tika mehāniski pulverizēts un glabāts necaurspīdīgos polietilēna maisos 4 ± 1 ◦ C temperatūrā. līdz lietošanai.

2.2. Etanola un ūdens ekstraktu sagatavošana

Aptuveni 200 g žāvētas A. hierophantic tika ekstrahēti ar 300 ml 70 procentu etanola Soksleta ekstraktorā, lai sagatavotu ekstrakciju ar etanolu (KEE). Ekstrakts tika koncentrēts ar rotācijas iztvaicētāju 40 °C temperatūrā, lai iztvaicētu atlikušo šķīdinātāju, un pēc tam līdz sausumam N2 plūsmā. Ūdens ekstrakcija (KAE) tika veikta, kā aprakstījis Asuzu [23] ar nelielām modifikācijām. Divsimt gramus žāvēta augu materiāla pievienoja 500 ml karsta sterila destilēta ūdens. Pēc tam maisījumu labi sakrata un ļauj nostāvēties 1 stundu. Pēc tam kolbai pievienoja atteces dzesinātāju un pēc tam 10 minūtes karsēja līdz vārīšanās temperatūrai, atdzesēja, labi sakrata un filtrēja caur Whatman Nr. 1 filtrpapīru. Filtrāts tika iztvaicēts ar rotācijas iztvaicētāju, pēc tam līdz sausumam N2 plūsmā. Spirta un ūdens ekstrakti (250 mg ml-1) tika svaigi sagatavoti destilētā ūdenī, lai tos izmantotu iekšķīgai lietošanai.

2.3. Kopējais fenola saturs (TPC)

TPC saturs A. hierophantic tika noteikts saskaņā ar Bettaieb et al. adaptēto metodi. [24]. Rezultāti tika salīdzināti ar uzzīmētu gallskābes (GA) standarta līkni, kas izveidota diapazonā no 50 līdz 500 mg ml-1 (R2=0.99), un TPC tika aprēķināts kā gallskābes ekvivalenta (GAE) mg. ) uz gramu A. hierophantic (mg GAE g−1 ).

2.4. Kopējais karotinoīdu (TC), kopējais flavonoīdu (TF) un kopējais flavonolu (TFL) daudzums

Kā ziņo Al-Qabba et al. [10], 5 g A. hierophantic tika atkārtoti ekstrahēti ar acetona un petrolētera maisījumu (1:1, v/v). Kopējais karotinoīdu (TC) saturs tika noteikts spektrofotometriski pie 451 nm. TC tika izteikts kā mg g-1 DW. TF saturs A. hierophantic tika pārbaudīts saskaņā ar Mohdaly et al. aprakstīto protokolu. [25]. TF saturs tika aprēķināts kā mg kvercetīna ekvivalenta (QE) uz 100 g-1 DW. Tajā pašā kontekstā tika veikts TFL saturs [26]. Tika reģistrēta absorbcija pie 440 nm, un TFL tika aprēķināta kā mg kvercetīna ekvivalenta (QE) uz 100 g-1 DW.

2.5. Antioksidantu kapacitātes noteikšana

DPPH radikāļu attīrīšanas tests: RSA tika pārbaudīts spektrofotometriski atkarībā no DPPH purpura krāsas šķīduma balināšanas saskaņā ar Lu et al. [27]. Antiradikālā kapacitāte tika parādīta kā µmol Trolox ekvivalentu (TE) uz gramu A. hierophantic (µmoL TE g-1 ). ABTS radikāļu attīrīšanas aktivitāte: A. hierophantic RSA pret ABTS radikāļiem tika pārbaudīta ar Lu et al. adaptēto metodi. [27]. Rezultāti tika izteikti kā µmoL TE g-1. -karotīna-linolskābes balināšanas tests: A. hierophantic antioksidantu procentuālais daudzums tika novērtēts kā karotīna balināšana salīdzinājumā ar butilētu hidroksianizolu (BHA), izmantojot pielāgotu spektrofotometrisko protokolu, ko norādījuši Koleva et al. [28]; rezultāti tika norādīti procentos, kas saistīti ar BHA. A. hierophantic helātu veidošanās darbība uz dzelzs joniem: A. hierophantic helātu veidošanās aktivitāte tika noteikta saskaņā ar Zhao et al. protokolu. [29]. Ferrozīna-Fe2 plus kompleksa veidošanās inhibīcijas procents kā metālu helātu veidošanās tika izmērīts un parādīts kā mg ml-1, ja kā pozitīvā kontrole tika izmantota etilēndiamīntetraetiķskābe (EDTA).

2.6. A. hierofantisko ūdens un etanola ekstraktu frakcionēšana ar polifenola savienojumu

Polifenolu noteikšana no etanola un ūdens ekstraktiem tika veikta ar HP1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, ASV) HPLC sistēmu, kas aprīkota ar automātisko paraugu ņemšanas ierīci, kvartāro sūkni un diožu matricas detektoru (Hewlett Packard 1050), izmantojot kolonnu (Altima). C18 150 × 4,6 mm, 5 µm) ar 5 mm Altima C18 aizsargkolonnu (Alltech, Nettetal, Vācija) saskaņā ar Goupy et al. [30]. Izmantotā šķīdinātāju sistēma bija A (etiķskābe 2,5 procenti), B (etiķskābe 8 procenti) un C (acetonitrils) gradients. Šķīdinātāja līdzsvara ātrums bija 1 ml min-1, un atdalīšana tika veikta 35 ◦C temperatūrā. Ievadītais tilpums bija 10 µL. Fenola savienojumi tika pārbaudīti ar ārējo standarta kalibrēšanu un izteikti kā mg g–1 DW ekvivalenta (plus)-katehīna flavan-3-oliem un ekvivalentā kumarīnā polārajiem aromātiskajiem savienojumiem. Mainība 8 procentu apmērā tika noteikta piecām fenolu ekstrakcijām no viena un tā paša parauga. Visas vērtības bija dublikātu injekciju vidējās vērtības. Polifenoli un to atvasinājumi tika identificēti un kvantitatīvi noteikti pie 280 un 320 nm, bet flavonoīdi tika identificēti pie 360 ​​nm.

2.7. Eksperimentālais dizains

Visus eksperimentus ir apstiprinājusi Institucionālā dzīvnieku ētikas komiteja (IAEC) KSA (Nr. {{0}}), KSA, ko regulē ar dzīvniekiem veikto eksperimentu kontroles un uzraudzības mērķis (CPCSEA). Nacionālās bioētikas komitejas (NCBE) komiteja, Dzīvu radījumu izpētes ētikas likuma īstenošanas noteikumi. Pašreizējā pētījumā tika izmantoti 36 albīnu žurku tēviņi, kas tika sadalīti 6 grupās pa 6 dzīvniekiem katrā un tika apstrādāti šādi: I grupa (kontrole) saņēma intraperitoneālu (ip) olīveļļas injekciju (1.0 ml kg–1 divas reizes nedēļā) un 0,5 ml destilēta ūdens iekšķīgi/dienā 21 secīgu dienu. II grupa saņēma ip injekciju ar svaigu maisījumu ar vienādiem tilpumiem CCl4 un olīveļļas (devā 1.0 ml kg-1 divas reizes nedēļā) un 0,5 ml destilēta ūdens iekšķīgi/ katru dienu saskaņā ar Al-Qabba et al. [10] ar nelielām izmaiņām. III grupa (references grupa) saņēma intramuskulāru injekciju (im) 50 mg kg-1 vit. E plus Se (Selepherol, Vetoquinol Co., Magny-Vernois, Francija) divas reizes nedēļā, saskaņā ar Asuka et al. [31] un El-Desoky et al. [32] un 0,5 ml destilēta ūdens iekšķīgi/katru dienu. IV grupa kalpoja kā tests un saņēma 250 mg kg-1 KEE iekšķīgi / katru dienu kopā ar CCl4 ip divas reizes nedēļā. V grupa saņēma 250 mg kg-1 KAE iekšķīgi / dienā kopā ar CCl4 ip divas reizes nedēļā. VI grupa saņēma 250 mg kg-1 KEE plus KAE (1:1) iekšķīgi / katru dienu kopā ar CCl4 ip divas reizes nedēļā. Divdesmit četras stundas pēc pēdējās apstrādes (21. diena) žurkas tika anestēzētas ar maisījumu (alkohols:hloroforms:ēteris, 1:2:3). Asins paraugi no sirds punkcijas tika savākti visiem dzīvniekiem, un serums tika atdalīts, centrifugējot ar ātrumu 4000 apgr./min 10 minūtes, un tika turēts -20 ◦ C temperatūrā bioķīmiskai izmeklēšanai.

2.7.1. Nieru bioķīmiskā analīze

Seruma kreatinīna, urīnvielas, kopējā proteīna un albumīna koncentrācija tika noteikta ar automatizētām spektrofotometriskām metodēm (BM/Hitachi autoanalyzer-911; Boehringer Mannheim, Vācija) saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Kālija līmenis tika noteikts ar liesmas fotometriju pie 766 nm.

2.7.2. Nieru antioksidantu aktivitātes novērtējums

Pēc asins paraugu ņemšanas tika nogalināti visu grupu dzīvnieki; pa labinierestika ātri izolēti un noskaloti ar ledusaukstu fizioloģisko šķīdumu. Pēc tam audi tika apgriezti, noskaloti aukstā fizioloģiskā šķīdumā, nosusināti un nekavējoties novietoti uz ledus. Izmantojot elektrisko audu homogenizatoru, audu daļas (1.0 g) tika nosvērtas un homogenizētas ar 9 tilpumiem ledusauksta 0,05 M fosfāta buferšķīduma pie pH 7,4. Šūnu atliekas tika noņemtas, centrifugējot pie 12,000 apgr./min (4 ◦C) 20 minūtes, lai savāktu supernatantus malondialdehīda (MDA) koncentrācijas [33], superoksīda dismutāzes (SOD) aktivitātes noteikšanai [34] un samazinātu. glutationa (GSH) saturs [35]. Olbaltumvielu koncentrācija inniereshomogenāts tika noteikts, izmantojot Bredforda metodi [36].

2.7.3. Nefroprotekcijas procents

Nefroprotekcijas (F) procentuālais daudzums vit. E plus Se, KEE, KAE un KEE plus KAE tika aprēķināti katram bioķīmiskajam parametram atsevišķi saskaņā ar Wakchaure et al. [37], izmantojot šādu vienādojumu:

kur T=ārstēšanas grupas vidējā vērtība, C=pozitīvās kontroles grupas vidējā vērtība un N= negatīvās kontroles grupas vidējā vērtība. Turklāt kopējais nefroprotekcijas procents (TFP procenti) tika salīdzināts ar vit. E plus Seas šādi:

2.7.4. Histopatoloģiskie pētījumi

Autopsijas paraugi tika savākti no kreisās pusesnieresatsevišķas žurku grupas un fiksētas 10% formalīna fizioloģiskā šķīdumā 24 stundas. Mazgāšanai ar krāna ūdeni sekoja dehidratācija ar spirta (metil, etil un absolūtā etil) atšķaidījumiem. Paraugi tika iztīrīti ksilolā un iestrādāti parafīnā 24 stundas 56 ◦C karstā gaisa krāsnī. Bišu parafīna vaska audu bloki tika sagatavoti sagriešanai 4-mikronu biezumā, izmantojot ragavas mikrotomu. Audu šķēles tika savāktas uz stikla priekšmetstikliņiem, deparafinētas un iekrāsotas ar hematoksilīnu un eozīnu, lai regulāri pārbaudītu gaismas elektriskajā mikroskopā [38].

2.8. Statistiskā analīze

Rezultāti tiek parādīti kā vidējā ± standarta kļūda (SE). Vidējo atšķirību nozīmīgums dažādās grupās tika pārbaudīts, izmantojot vienvirziena dispersijas analīzi (ANOVA), kam sekoja Dankana tests, un p-vērtība starp vidējiem tika dota p < 0,05="" līmenī="" [39].="">

3. Rezultāti

3.1. A. hierophantic fitoķīmiskās vielas un antioksidantu kapacitāte

Tika veikta A. hierofantu fitoķīmisko vielu un saistīto antioksidantu aktivitāšu kvantitatīvā analīze, izmantojot DPPH un ABTS radikāļu attīrīšanas, -karotīna-linolskābes balināšanas aktivitātes un helātu veidošanās spēju (CA). Kā skaidri redzams 1. tabulā, TPC saturs bija 67,49 mg GAE g-1. TC saturs bija 3,51 µg g-1. TF un TL saturs bija attiecīgi 49,78 un 17,45 mg QE g-1. Turklāt DPPH-RSA un ABTS-RSA tika izmantoti, lai izmērītu antioksidantu aktivitāšu progresēšanu. Rezultāti uzrādīja attiecīgi 128,71 µmol TE g-1 un 141,92 µmol TE g-1 attiecīgi DPPH-RSA un ABTS-RSA. Turklāt,antioksidanta aktivitāte(AOA) A. hierophantic ir parādīts 1. tabulā. Linolskābes radikāļu inhibīcijas procentuālais daudzums tika aprēķināts kā 45,74 procenti salīdzinājumā ar BHA, izmantojot -Carotene balināšanas (-CB) testu. Turklāt, novērtējot metālu helātu veidojošo aktivitāti, atklājās 42,89 mg g-1, kas, šķiet, spēj traucēt Fe2 plus –ferrozīna kompleksa veidošanos, norādot uz tā spēju helātus oksidēt metālus.

3.2. A. hierofantu fenola savienojumu kvantitatīva noteikšana

Tika veikta fenola savienojumu kvantitatīvā analīze KEE un KAE ar HPLC analīzi, un dati ir apkopoti 2. tabulā. Deviņas atdalītas fenola skābes un seši flavonoīdi tika identificēti nosakāmos daudzumos no A. hierophantic KEE. Visbiežāk sastopamās fenolskābes bija hidroksikanēļskābes, piemēram, sinapīnskābe (28,704 mg 100 g-1), kam sekoja kofeīnskābe (6,621 mg 10{). {61}} g–1 ), rozmarīnskābe (2,884 mg 100 g–1 ), ferulskābe (1,854 mg 100 g–1 ) un kanēļskābe (0,094 mg 100 g–1 ); un hidroksibenzoskābes, piemēram, p-hidroksibenzoskābe (3,440 mg 100 g-1), protokatehīnskābe (1,811 mg 100 g-1), vanilskābe (3,326 mg 100 g-1) un siringskābe (1,083 mg 100 g-1). −1). Flavonoīdi, piemēram, miricetīns (16,269 mg 100 g-1), D-katehīns (2,410 mg 100 g-1), kaempferols (0,434 mg 100 g-1), rutīns (0,539 mg 100 g-1), apigenīns{{56} Tika atklāts nenovērtējams daudzums glikozīda (0,192 mg 100 g-1) un kvercetīna (0,184 mg 100 g-1). Tika noteikti arī A. hierophantic KAE fenola savienojumi, un dati ir apkopoti 2. tabulā. Siringīnskābe tika reģistrēta kā visaugstākā fenola skābe starp 21 identificēto fenolu. Katehols un pirogalols bija attiecīgi 2,526 un 1,589 mg 100 g-1. Dati

norādīja, ka dažas fenola skābes, piemēram, kofeīns, katehīns, hlorogēnskābe, epikatehīns, e-vanilskābe, p-hidroksibenzoskābe un protokatehīnskābe tika konstatētas mērenā daudzumā 0.725, 0.256, { Attiecīgi {6}}.136, 0.193, {{10}}.443, 0.223 un 0,454 mg 100 g–1. Tajā pašā kontekstā neliels daudzums 3,4,5-laikatoksikanēļa, 4-aminobenzoskābes, benzoskābes, kanēļa, kumarīna, elaģskābes, ferulskābes, gallskābes, izoferulskābes, -kumarskābes, p-kumarskābes. , un salicilskābe tika kvantitatīvi noteikta pēc identificēšanas. Epikatehīns un D-katehīns kā flavonoīdi tika kvantificēti arī A. hierophantic KAE.

3.3. Seruma kreatinīna, urīnvielas, K, kopējā proteīna un albumīna līmenis

CCl4 injekcija būtiski paaugstināja seruma kreatinīna, urīnvielas un k līmeni GII žurkām, salīdzinot ar kontroles žurkām (GI). Un otrādi, kopējais olbaltumvielu un albumīna līmenis bija ievērojami pazemināts ar CCl4-ārstētajām žurkām (3. tabula). Vit. E plus Se un A. hierofantiskie ekstrakti (G III, IV, V un VI) būtiski samazināja kreatinīna un urīnvielas izmaiņas, ko izraisīja CCl4 injekcija, savukārt tie palielināja albumīna un kopējo proteīnu līmeni līdz normālam GI vērtībām (3. ). K līmenis serumā bija ievērojami paaugstināts ar CCl4- ārstētām žurkām (GII), salīdzinot ar GI (3. tabula). Vit. E plus Se un A. hierofhantic alkoholisko un ūdens ekstraktu (G IV, V un VI) ievadīšana arī pozitīvi uzlaboja k līmeni, salīdzinot ar GI (3. tabula).

3.4. Nieru antioksidantu biomarķieri

Kā parādīts 4. tabulā, CCl4 ievadīšana ievērojami samazināja SOD un GSH līmeni un palielināja MDA līmeni GII.niereshomogenizēt audus. Tomēr, ja salīdzina ar GI, žurkas tika ārstētas gan ar vit. E plus Se un A. hierofantiskie ekstrakti (GIII, VI, V un VI) uzrādīja būtisku antioksidantu enzīmu SOD un GSH aktivitātes uzlabošanos, kā arī MDA līmeņa samazināšanos (4. tabula). A. hierofhantic spirta ekstrakts (GIV) pārspēja A. hierofhantic ūdens ekstraktu (GV) un apvienoja A. hierofhantic spirta un ūdens ekstraktus, samazinot antioksidantu līmeni, un, apkarojot autoksidācijas procesu, MDA līmenis bija zems, salīdzinot ar GI.

3.5. Nefroprotekcijas procents

Nefroprotekcijas procentuālais daudzums (attiecībā pret negatīvās kontroles (GI) un pozitīvās (GII) grupām).nieresTādas funkcijas kā kreatinīns, urīnviela, k, TP un albumīns, kā arī antioksidantu aktivitātes nieru homogenātā (MDA, SOD, GSH) ir parādītas 5. tabulā. Nefroprotekcijas procents reģistrēts visaugstākajā vērtībā kā kreatinīns, urīnviela, k GIII, TP un albumīns GV, MDA un GSH GIII un SOD GV (5. tabula). Kopējais nefroprotekcijas procents attiecībā pret vit. Apstrāde ar E plus Se reģistrēja maksimālos līmeņus KAE ārstētajā grupā (GV, 97,62 procenti), pēc tam KEE (GIV, 83,27 procenti) un pēc tam KEE plus KAE (GVI, 78,85 procenti), kā parādīts 5. tabulā.

3.6. A. hierofantu ekstraktu ietekme uz nieru histoarhitektūru

Bioķīmisko izmeklējumu rezultātus apstiprināja histopatoloģiskā izmeklēšana. 6. tabulā un 1. attēlā parādīta histoloģisko izmaiņu pakāpe žurku pamatstruktūrānieresdažādās eksperimentālās grupās, kas apstrādātas ar A. hierofantiskajiem ekstraktiem. Pašreizējā izmeklēšanānieresno kontroles grupas (GI) tika konstatēta normāla histoloģiskā struktūra (1. attēls (I.1)). Ar CCl 4- ārstēto žurku (GII) histoarhitektūra uzrādīja fokusa iekaisuma šūnu infiltrāciju (plus plus ) starp kanāliņiem garozā, asinsvadu sastrēgumu (plus plus ) starp kanāliņiem (1. attēls (II.2). ), vairāki eozinofīli ģipša ( plus plus ) veidojumi dažu kanāliņu lūmenā un fokusa asiņošana ( plus plus ) starp deģenerētajiem kanāliņiem kortikomedulārajā daļā (1. attēls (II.3), 6. tabula). GIII injicējot vit. E plus Se, ievadot A. hierophantic (GIV) spirta ekstraktu, A. hierophantic (GV) ūdens ekstraktu un A. hierophantic ekstraktu (GVI) kombināciju, mazināja CCl4 citotoksisko iedarbību un reģistrēja vieglu ( plus ) līdz mērens (plus plus ) sastrēgums asinsvados starp kanāliņiem garozā (1. (III.4.–VI.8. attēls), 6. tabula) ar labi attīstītu Boumena kapsulu ar palielinātiem glomeruliem un izliektiem kanāliņiem. Turklāt A. hierophantic (GV) ūdens ekstrakts reģistrēja fokusa iekaisuma šūnu infiltrāciju (plus plus ) kortikomedulārajā daļā (1. attēls (V.7), 6. tabula).

4. Diskusija

Fitoķīmiskās vielas pārsvarā ir efektīvi brīvo radikāļu iznīcinātāji un tiek uzskatīti par labākajiem augu izcelsmes antioksidantiem. Tiek uzskatīts, ka polifenola vielām cilvēkiem piemīt pretkancerogēna un antimutagēnas īpašības [40]. Vērtīgais TPC saturs A. hierophantic bija nedaudz augstāks nekā Mohamed et al. [21] kā 51,97 mg GAE g × 1 A. hierofhantic herb un AlGamdi et al. [41], kurš atrada 4 mmol L × 1 GAE A. hierofhantic sēklās. Nesen Zin et al. [42] norādīja uz tanīnu klātbūtni A. hierophantic kā bioaktīvu savienojumu un ieteica tā bioaktivitāti, kas bija rūpīgi jāizpēta. Karotīna saturs kā daļa no kopējā karotinoīdu daudzuma bija 2,27 µg g × 1, kā minēts Mohamed et al. [21], un pat pašreizējie rezultāti uzrādīja kopējo karotinoīdu daudzumu kā 3,51 µg g × 1 . Līdzīgus atklājumus flavonoīdu un flavonola saturā ir norādījuši Mohamed et al. [21]. Ir bioloģiski aktīvi komponenti, piemēram, fenola savienojumiantioksidanta aktivitātekā lipīdu oksidācijas ķēdes reakciju sadalīšanās, nododot ūdeņradi aktīvajiem brīvajiem radikāļiem. Šo fenolu attīrīšanas potenciālu, lai inhibētu radikāļus, izskaidroja to fenola hidroksilgrupas [8, 10, 22]. Šī fenolskābe ir aprakstīta kā efektīva antioksidanta sastāvdaļa, tostarp ūdeņraža peroksīds, hidroksilradikālis un superoksīda anjons [43]. Šķiet, ka A. hierofantiskā metālu helātu veidošana spēj traucēt "Fe2 plus-ferrozīna" kompleksa uzbūvi, kas liecina par tā spēju uztvert "dzelzs" jonus pirms "ferozīna". Pozitīvu saistību starp fenola savienojumu satura palielināšanos tajos tieši norāda to antioksidanta spēja [42]. Andjelkovičs et al. [44] noteica daudzu fenolskābju aktivitāti, veidojot kompleksus ar metāliem. Vērtīgās TPC un attiecīgās antioksidantu aktivitātes, izmantojot dažādas mērīšanas metodes, sniedz skaidru priekšstatu par A. hierophantic kā ārstniecības augu, ko izmanto pārtikā vai dzērienos, un apstiprina to bioaktivitāti.

Efektīvi antioksidantu komponenti, tostarp ūdeņraža peroksīds, hidroksilradikālis un superoksīda anjons [43,45,47]. Identificētie un kvantificētie savienojumi ar HPLC A. hierophantic KAE bija lielāki par identificēto savienojumu skaitu KEE, bet identificētie savienojumi A. hierophantic KEE tika uzrādīti lielākā daudzumā [22]. Rezultāti liecina, ka patērējošais A. hierophantic var uzrādīt daudzas sastāvdaļas gan polārās, gan nepolārās formās. Šos rezultātus līdzīgi sniedz AlGamdi et al. [41], jo viņi identificēja un kvantitatīvi noteica 20 polifenolu savienojumus A. hirerochuntica sēklās. Ekstrakts saturēja hlorogēnskābes un hidroksibenzoskābes, bet galvenās sastāvdaļas bija flavona C-glikozīdi, C-diglikozīdi, O-glikozīdi un O-glikozīda-C-glikozīdi, kas galvenokārt sastopami kā luteolīna konjugāti. Turklāt tika izstādīti 14 no 20 A. hierofantiskā ekstrakta savienojumiemantioksidanta aktivitāteizmantojot HPLC tiešsaistes antioksidantu noteikšanas sistēmu [41]. Interesanti, ka pašreizējie dati apstiprināja, ka A. hierophantic ir bagāts ar fitoķīmiskiem savienojumiem un ir labs dabisko antioksidantu avots ar potenciāliem ieguvumiem veselībai, kā tas reti tika uzsvērts sēklās [41]. Tādējādi tēja, kas pagatavota no visa augu pulvera, ir tradicionāls patēriņa veids; dati ilustrē jaunus identificētus bioaktīvos savienojumus A. hirerochuntica KEE un KAE, kas atšķīrās no AlGamdi et al. [41]

Daudzos pētījumos CCl4-inducēta nefrotoksicitāte tiek izmantota kā paraugsistēma augu ekstraktu/zāļu nefroprotektīvās iedarbības pārbaudei [48,49]. Pašreizējā pētījumā tika aplūkota A. hierofantu ekstraktu ietekme uz CCl4-inducētonieresbojājumus, kā arī tā nefroaizsardzību un antioksidantu potenciālu žurkām. Pašreizējā pētījumā CCl4 terapijas (GII) grupa ievērojami palielināja kreatinīna, urīnvielas un k līmeni un samazināja kopējo olbaltumvielu un albumīna koncentrāciju, salīdzinot ar GI. Tas varētu būt tāpēc, ka CCl4 intoksikācija ir galvenais brīvo radikāļu ražošanas avots daudzos orgānos, tostarp aknās, nierēs, plaušās, smadzenēs un asinīs [50]. Ir arī novērots, ka pēc CCl4 injekcijas žurkām CCl4 koncentrācija nierēs sadalās vienmērīgāk nekā aknās [51], jonieresir augsta afinitāte pret CCl4 un satur citohromu P450, galvenokārt garozā. Visizplatītākie brīvie radikāļi no CCl4 ir trihlormetilradikālis (CCl3• ) un trihlormetilperoksilradikālis (CCl3O2• ) [52]. Šie radikāļi saistās ar intracelulāru proteīnu, šūnu membrānas lipīdiem un DNS, izraisot olbaltumvielu denaturāciju, lipīdu peroksidāciju un oksidatīvus DNS bojājumus, kas izraisa šūnu nāvi [53]. Turpretim, ārstējot CCl4-žurkas ar vit. E plus Se (GIII) un A. hierofantiskie ekstrakti (GVI: VI) efektīvi mazināja šo kreatinīna un urīnvielas līmeņa paaugstināšanos, kā arī palielināja seruma albumīna un kopējo proteīnu līmeni, lai tas būtu ļoti tuvu to līmenim GI. Tas var būt saistīts ar antioksidanta īpašībām un bagātīgo fenola saturu A. hierofhantic ekstraktos un antioksidantu spēju un helātus veidojošo vit. E plus Se, kas attīra brīvos radikāļus, tādējādi kavējot nieru bojājumus. Fitoķīmiskās vielas ir visefektīvākie brīvo radikāļu iznīcinātāji un tiek uzskatīti par labākajiem antioksidantiem no augiem [54]. Visizplatītākie fenola savienojumi bija hidroksikanēļskābes, piemēram, sinapīnskābe, starp deviņiem identificētajiem fenola savienojumiem KEE, savukārt siringskābe bija visaugstākā fenola skābe starp 21 identificētajām fenolskābēm KAE. Seši flavonoīdi tika identificēti KEE un divi KAE, izmantojot HPLC analīzi [55]. Turklāt kā antioksidants vit. Tiek uzskatīts, ka E aizsargā audus no kaitējuma, ko izraisa reaktīvie skābekļa metabolīti. Selēns ir arī plaši atzīts par būtisku mikroelementu cilvēka veselībai, pasargājot šūnas no brīvo radikāļu kaitīgās ietekmes [22].

Pašreizējā pētījumā CCl4 ievadīšana ievērojami samazināja GSH un SOD un palielināja MDA līmeniniereshomogenizē attiecībā pret GI. Vit. E plus Se un A. hierofantiskie ekstrakti uzlaboja CCl4 dažādo iedarbību, atjaunojot antioksidantu, piemēram, SOD un GSH, izmainīto aktivitāti un var deaktivizēt MDA ražošanas procesu, kā nesen tika ziņots [15,21,40,41]. . GSH ir neenzīmu antioksidants, kas atrodams visās zīdītāju šūnās. Ar savu oksidēto formu GSSG GSH darbojas kā kofaktors daudziem detoksikācijas enzīmiem (GPx, GST un citiem) pret oksidatīvo stresu un uztur šūnu redoksu līdzsvaru [47]. Šis atklājums seko Khan un Siddique [56] un Makni et al. [57], kurš ziņoja, ka CCl4 samazināja GSH līmeni žurku nierēs. Ārstēšana ar vit. E plus Se un A. hierofantiskie ekstrakti uzrādīja aizsardzību pret GSH līmeņa pazemināšanos, ko izraisīja CCl4. Tajā pašā kontekstā SOD katalizē divu superoksīda anjonu (*O2) molekulu dismutāciju par ūdeņraža peroksīdu (H2O2) un molekulāro skābekli (O2), tādējādi padarot potenciāli kaitīgo superoksīda anjonu mazāk bīstamu [58,59]. CCl4 intoksikācija maina gēnu ekspresijas līmeni, samazinot nieru SOD [60]. SOD aktivitātes samazināšanās ir jutīgs šūnu bojājumu indekss. Mūsu pārbaudītie A. hierofantiskie ekstrakti uzlaboja nieru toksicitāti, mazinot SOD līmeni. Tas piedalās dažādos fermentatīvos procesos, lai samazinātu detoksikācijas reakciju koncentrāciju [61]. MDA ir pirmais lipīdu peroksidācijas produkts un viens no svarīgākajiem oksidatīvā stresa marķieriem. A. hierofantiskie ekstrakti samazināja MDA līmeņa paaugstināšanos un atjaunoja kopējo antioksidantu jaudu CCl4-apstrādātajās žurku nierēs. Šīs aizsargājošās iedarbības iemesls var būt A. hierophantic ekstraktu spēcīga antioksidatīva aktivitāte [15,21,40,41]. Šie rezultāti arī liecina, ka A. hierofantiskie ekstrakti var mazināt oksidatīvo stresu, samazinot lipīdu peroksīda līmeni CCl4-atklātajās žurku nierēs un novēršot nieru bojājumus. Šie rezultāti saskanēja ar Zn antioksidantu aktivitāšu rezultātiem uz CCl4-inducēto akūtu nefrotoksicitāti [62,63].

A. hirerochuntica ekstrakti sniedza vērtīgu nefroprotekcijas spēju attiecībā uznieresfunkcionālie testi (kreatinīns, urīnviela, K, TP un albumīns) un nieres homogenē antioksidantu aktivitātes (GSH, SOD, MDA) attiecīgi GIV, V un IV. Kopējais nefroprotekcijas procents attiecībā pret vit. Apstrāde ar E plus Se reģistrēja maksimālos līmeņus KAE ārstētajā grupā (GV, 97,62 procenti), pēc tam KEE (GIV, 83,27 procenti) un pēc tam KEE plus KAE (GVI, 78,85 procenti) attiecīgi dilstošā secībā. Tas var būt saistīts ar fenola un antioksidantu satura daudzuma un kvalitātes atšķirībām A. hirerochuntica ekstraktos, kam ir saistība ar antioksidantu spēju [15,19,22,40,42].

Histopatoloģiskās atrades innieresatbilst pētīto eksperimentālo grupu bioķīmiskajiem aprēķiniem. CCl4 ievadīšana (GII) izraisīja glomerulāru un tubulāru bojājumu ar asinsvadu sastrēgumu nierēs. Dogukans et al. [64] atklāja līdzīgu histoloģisko modeli žurku nieru audos, reaģējot uz ilgstošu CCl4 ārstēšanu. Tiek arī uzskatīts, ka histoloģiskās izmaiņas izraisa nefronu funkcionāla pārslodze, kas izraisa nieru darbības traucējumus [65], un/vai tās ir audu iznīcināšana, ko izraisa brīvo radikāļu veidošanās ar CCl4 metabolismu [56,66]. . Ietekme vit. E plus Se un A. hierofantiskais ekstrakts, lai labotu un atjaunotu nieres, bija ievērojama CCl4 ietekme. Tas var būt tāpēc, ka vit. E plus Se (kā spēcīgs antioksidants) iedarbojas uz ROS, ko inducē CCl4 [67]. A. hierofantiskie ekstrakti nomāc CCl4-izraisītu akūtu nefrotoksicitāti, pateicoties A. hirerochuntica ekstraktos esošo fenola savienojumu antioksidatīvajai lomai un brīvo radikāļu attīrīšanas īpašībām [22]. Mūsu atklājumi saskan ar citu pētnieku rezultātiem, kuri ir parādījuši, ka dažādiem augu atvasinājumiem ir farmakoloģiska iedarbība, novēršot CCl4 ļaunprātīgu izmantošanu un atjaunojot normālu stāvokli [6].

5. Secinājumi

Šī pētījuma rezultāti skaidri parādīja, ka A. hierofantiskais augs ir bagāts ar polāriem un nepolāriem fenola savienojumiem ar izcilu antioksidantu spēju, kas ir tieši saistīts ar fitoķīmisko saturu. A. hierofantiskais (īpaši ūdens ekstrakts) aizsargā žurkas pret CCl4-izraisītu oksidatīvo stresu un akūtunierestraumas, par ko liecina ievērojams MDA līmeņa kritums un palielināta GSH un SOD aktivitāte, kā arī bioķīmisko un histoloģisko izmaiņu pārtraukšana nierēs. Aizsardzības efektivitāte var izrietēt no A. hierofhantic ekstraktos esošo fenola savienojumu antioksidanta un brīvo radikāļu attīrīšanas īpašībām. Šīs īpašības palīdz izskaidrot auga kā augu izcelsmes zāļu ārstniecisko efektivitāti. Ir nepieciešams vairāk pētījumu, lai pilnībā aprakstītu A. hierophantic aktīvos principus, un šis pētījums ir paredzēts, lai stimulētu visaptverošākus saistītos pētījumus, lai piedāvātu pietiekamus datus un ieteikumus tā mehānismu un drošu devu noteikšanai.

Autora ieguldījums:Konceptualizācija, TIA, YMA un HB; metodoloģija, izmeklēšana, HB un HAA-R.; datu pārvaldīšana, TIA un YMA; rakstīšana — oriģinālā uzmetuma sagatavošana, pārskatīšana un rediģēšana; HB un HAA-R. Visi autori ir izlasījuši un piekrituši publicētajai manuskripta versijai.

Finansējums:Pētnieki vēlas pateikties Qassim Universitātes Zinātniskās pētniecības dekanātei par šī projekta publicēšanas finansējumu.

Paziņojums par datu pieejamību:Šajā pētījumā sniegtie dati ir pieejami pēc attiecīgā autora pieprasījuma.

Abreviatūras ABTS:2,2'-azinobis(3-etilbenzoltiazolīns-6-sulfonskābe); AOA:antioksidanta aktivitāte; BHA: butilēts hidroksianizols; BHA: butilēts hidroksianizols; DPPH: 1,1-difenil-2-pikrilhidrazīns; DW: sausais svars; GA: gallskābe; GAE: gallskābes ekvivalents; GSH: reducēts glutations; HPLC-DAD: augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfijas diožu matricas noteikšana; KAE: A. hierofantiskais ūdens ekstrakts; KEE: A. hierofantiskais etanola ekstrakts; MDA: malonaldehīds; QE: kvercetīna ekvivalents; RAA: relatīvā antioksidanta aktivitāte; ROS: reaktīvās skābekļa sugas; RSA: radikāļu attīrīšanas darbība; Se: selēns; SE: standarta kļūda; SOD: superoksīda dismutāze; TC: kopējais karotinoīdu daudzums; TC: kopējais karotinoīdu daudzums; TF: kopējais flavonoīdu daudzums; TE: Trolox ekvivalenti; TFL: kopējais flavonolu daudzums; TPC: kopējie fenola savienojumi.

References

1. Statistika, KD hroniska nieru slimība Amerikas Savienotajās Valstīs. 2021. Pieejams tiešsaistē:(aplūkots 2021. gada 20. jūlijā).

2. Ku, E.; Glidden, DV; Johansens, KL; Sarnaks, M.; Tigouart, H.; Grimes, B.; Hsu, CY Asociācija starp stingru asinsspiediena kontroli hroniskas nieru slimības laikā un zemāku mirstību pēc nieru slimības beigu stadijas sākuma. Kidney Int. 2015, 87, 1055–1060.

3. Tumlins, JA; Madaio, deputāts; Hennigar, R. Idiopātiskā IgA nefropātija: patoģenēze, histopatoloģija un terapeitiskās iespējas. Clin. J. Am. Soc. Nefrols. 2007, 2, 1054–1061.

4. Olahs, G.; Redijs, VP; Prakaša, GS; Reakcijas, FC Kirk-Othmer ķīmiskās tehnoloģijas enciklopēdija. Kontaktlēcas 1978, 720–742.

5. Ozturks, F.; Ukārs, M.; Ozturk, IC; Vardi, N.; Batcioglu, K. Oglekļa tetrahlorīda izraisīta nefrotoksicitāte un betaīna aizsargājošā iedarbība Sprague-Dawley žurkām. Uroloģija 2003, 62, 353–356.

6. Ogeturks, M.; Kus, I.; Colakoglu, N.; Zararsiz, I.; Ilhans, N.; Sarsilmaz, M. Kofeīnskābes fenetilesteris aizsargā nieres pret oglekļa tetrahlorīda toksicitāti žurkām. J. Ethnopharmacol. 2005, 97, 273–280.

7. Slater, TF Brīvo radikāļu mehānismi audu bojājumu gadījumā. Šūnu funkcijās un slimībās; Cañedo, LE, Todd, LE, Packer, L., Jaz, J., Eds.; Springer: Bostona, MA, ASV, 1988; 209.–218.lpp.

8. Khan, MR; Rižvi, W.; Khan, GN; Khan, RA; Shaheen, S. Oglekļa tetrahlorīda izraisīta nefrotoksicitāte žurkām: Digerati muricata aizsargājošā loma. J. Ethnopharmacol. 2009, 122, 91–99.

9. Afsārs, T.; Kāns, MR; Razaks, S.; Ullah, S.; Mirza, B. Acacia hydaspica R. Parker pretdrudža, pretiekaisuma un pretsāpju iedarbība un tās fitoķīmiskā analīze. BMC papildinājums. Altern. Med. 2015, 15, 1.–12.

10. Al-Qabba, MM; El-Movafi, MA; Althwab, SA; Alfheeaid, HA; Aljutaily, T.; Barakat, H. Chenopodium quinoa asnu fenola profils, antioksidantu aktivitāte un uzlabojošā efektivitāte pret CCl4 izraisītu oksidatīvo stresu žurkām. Uzturvielas 2020, 12, 2904.

11. Al Žrani, MM; Althwab, SA; Aljutaily, T.; Alfheeaid, HA; Ashish, IS; Barakat, H. Moringa bāzes dzērienu aizsargājoša iedarbība pret hiperlipidēmiju un hiperglikēmiju 2. tipa diabēta izraisītām žurkām. Food Res. 2021, 5, 279–289.

12. Halifa, I.; Navazs, A.; Sobijs, R.; Althwab, SA; Barakat, H. Poliacilēti antocianīni konstruktīvi savienojas ar 2019-nCoV 3CLpro katalītiskajiem diādes atlikumiem nekā monomēru antocianīni: Strukturālās attiecības aktivitātes pētījums ar 10 antocianīniem, izmantojot in-silico pieejas. J. Mol. Grafiks. Modelis. 2020, 100, 107690.

13. Jusofs, Dž. Mahdijs, ZA; Noor, RM Papildu un alternatīvo medicīnu lietošana grūtniecības laikā un tās ietekme uz dzemdniecības iznākumu. Papildināt. Tur. Clin. Prakse. 2016, 25, 155–163.

14. Salah, SH; Abdou, HS; Abds El-Azīms, A.; Abdel-Rahim, E. Dažu ārstniecības augu kā hipoglikemizējošu līdzekļu antioksidatīvā iedarbība uz hromosomu aberāciju un patoloģisku nukleīnskābju metabolismu, ko rada cukura diabēta stress pieaugušo albīnu žurku tēviņiem.J. Cukura diabēts. 2011, 1., 6.–14.

15. Daur, I. Ārstniecības auga Kaff Maryam (Anastatica hierochuntica L.) ķīmiskās īpašības un to saistība ar lietošanu tautas medicīnā. Afr. J. Microbiol. Res. 2012, 6, 5048–5051.