Fenilpropanoīdu glikozīdu antioksidantu un antikoagulantu iedarbība

lai iegūtu plašāku informāciju:ali.ma@wecistanche.com

Bartošs Skalskis u.c

Abstrakts

Orobanchaceae holoparazītiskie augi, tostarp Cistanche, Orobanche un Phelipanche spp, ir pazīstami ar savu bagātību.fenilpropanoīdsglikozīdi(PPG). Ir konstatēts, ka daudziem PPG savienojumiem ir plašs darbību spektrs, piemēram, pretmikrobu, pretiekaisuma, antioksidantu un atmiņu uzlabojoši. Lai labāk izpētītu Eiropas spārnu (O. Caryophyllaceae – OC, P. Arenaria – PA, P. ramosa – PR) un desmit atsevišķu izolētu fenilpropanoīdu sastāvdaļu bioaktivitātes potenciālu, pētījām to antiradikālo iedarbību, aizsargājošo iedarbību pret oksidāciju plazmas in vitro sistēmā. , un ietekme uz koagulācijas parametriem. Pārbaudītie ekstrakti uzrādīja 50–70 procentus no Trolox jaudas. OC ekstraktam, kas bagāts ar akteozīdu, bija par vairāk nekā 20 procentiem labāks pretradikālais potenciāls nekā PR ekstraktam, kas bija vienīgais, kas saturēja PPG, kam acilvienībā nebija B-gredzena katehola daļas. Turklāt tika konstatēts, ka tikai astoņi pārbaudīti PPG(pfenilpropanoīdsglikozīdi)pierādīts antioksidanta potenciāls cilvēka plazmā, kas apstrādāta ar H2O2/Fe; tomēr trīs pārbaudītās PPG(pfenilpropanoīdsglikozīdi)papildus antioksidanta īpašībām piemīt arī antikoagulanta potenciāls. Šķiet, ka PPG struktūra, īpaši acilu un kateholu daļu klātbūtne, galvenokārt ir saistīta ar to antioksidanta īpašībām. Šo savienojumu antikoagulanta potenciāls ir saistīts arī ar to ķīmisko struktūru. Atsevišķiem PPG ir potenciāls ārstēt sirds un asinsvadu slimības, kas saistītas aroksidatīvsstress.

Atslēgvārdi:Broomrape, fenilpropanoīdu glikozīdi, oksidatīvais stress, plazmas hemostāze

CistancheirFenilpropanoīdsglikozīdi

Noklikšķiniet uz Cistanche produktiem

1. Ievads

Oksidatīvsstressir plaši pazīstama ar savu negatīvo ietekmi uz dzīvo organismu veselību, tostarp paātrinātu novecošanos un dažiem vēža veidiem. Notikumsoksidatīvsstressir saistīta ar traucētu līdzsvaru starp oksidatīvajiem un antioksidanta mehānismiem (tostarp fermentatīvo (katalāzes, glutationa peroksidāzes) un neenzimātisko (glutationa) aizsardzību) ķermeņa šūnās [1]. Reaktīvo skābekļa sugu (ROS) pārprodukcija, tostarp oksidējošie radikāļi un slēgta apvalka sugas, ir viens no galvenajiem oksidatīvā stresa veidošanās mehānismiem. Tomēr ROS izraisītā bioloģiskā ietekme lielā mērā ir atkarīga no koncentrācijas, iedarbības laika un atrašanās vietas. Normālos apstākļos (zemā koncentrācijā) skābekļa/slāpekļa radikāļi var spēlēt sekundāro sūtņu lomu, bet augstākā līmenī tie var sākt reaģēt ar bioloģiskām struktūrām, piemēram, šūnu membrānām [2]. Starp visām ROS sugām hidroksilgrupa (HO.) izraisaOksidatīvsuzsverIr zināms, ka tam ir svarīga loma daudzu slimību, tostarp sirds un asinsvadu slimību, ārstēšanā. Asins sistēmas traucējumi ir korelēti un/vai pirms tam notikušas izmaiņas dažādos hemostāzes un plazmas biomarķieru parametros [1,3].

No otras puses, daudzas dabiskas vielas, piemēram, polifenoli un polinepiesātinātās taukskābes, ir identificētas kā spēcīgi antioksidanti, kas spēj novērst reaktīvo skābekļa veidu veidošanos un/vai samazināt to daudzumu. Savienojumi ar šādām īpašībām ir atrodami daudzos augu izcelsmes pārtikas produktos un farmaceitiskajos preparātos. Tāpēc plaši tiek ieteikta diēta, kas bagātināta ar svaigiem dārzeņiem un augļiem, kā arī antioksidantu terapija, kuras pamatā ir dabiskie antioksidanti, jo tie var samazinātoksidatīvsstressun novērst dažādus patofizioloģiskus procesus [4,5]. Augu polifenoli ir daudzveidīga sekundāro metabolītu grupa, starp kurām fenolskābes ieņem nozīmīgu vietu, jo tie ir plaši izplatīti un tiem piemīt dažādas bioloģiskas iedarbības, piemēram, pretmikrobu, antioksidantu un pretiekaisuma iedarbība.Fenilpropanoīdsglikozīdi(PPG) ir hidroksikanēļskābes esteru atvasinājumi, un tie ir galvenā/vienīgā sekundāro metabolītu klase, kas atrodas holoparazītiskajos Orobanchaceae augos, tostarp Cistanche, Orobanche un Phelipanche spp. Vairākas šīs dzimtas sugas ir nopietni kultūraugu kaitēkļi, no kuriem zemnieki vēlas atbrīvoties laukos (Phelipanche ramosa piemērs), dažas tiek izmantotas farmakoloģijā, savukārt vairumam cilvēku ir maza nozīme. Herba Cistanche plaši izmanto Āzijas tradicionālajā medicīnā nieru mazspējas ārstēšanā un kā imunitāti un atmiņu uzlabojošu, pretnovecošanās un noguruma līdzekli [6]. To ir pierādījušas dažādu pētījumu grupu fitoķīmiskās analīzesfenilpropanoīdsglikozīdi, piemēram, akteozīds, ehinakozīds un pjedestāla puse, ir viena no galvenajām Herba Cistanche aktīvajām sastāvdaļām [7]. Nesen veikts pētījums par vairākām slotu sugām, kuras Polijā atrada Jedrejek et al. [8] ir parādījis, ka šim augu materiālam ir līdzīgs kvalitatīvais sastāvs (PPG dominēšana)(pfenilpropanoīdsglikozīdi), turklāt tas ir vienāds vai pat pārsniedz Cistanche spp. attiecībā uz aktīvo vielu saturu [8]

Šī pētījuma mērķis bija novērtēt trīs ar dažādiem fenilpropanoīdiem bagāto sloksnes ekstraktu (Orobanche caryophyllacea – OC, Phelipanche Arenaria – PA un P. ramosa – PR) antiradikālo un antioksidantu potenciālu, kā arī ietekmi uz hemostāzes parametriem. kā arī to atsevišķie PPG komponenti. Antiradikālā kapacitāte tika mērīta, izmantojot 2,2′-azinobis-3-etilbenztiazolīna-6-sulfonskābes/troloksa ekvivalentu (ABTS/TE) un 2,2-difenil-1-pikrilhidrazilu (DPPH). ) testi. Theoksidatīvsstressplazmas testa sistēmā tika ierosināts, izmantojot hidroksilgrupu (H2O2/Fe), pēc tam tika mērīta lipīdu peroksidācija (tiobarbitūrskābes reaktīvo sugu (TBARS) tests) un proteīna karbonilgrupu un tiola grupu līmenis. Starp noteiktajiem hemostāzes parametriem bija: aktivētais daļējais tromboplastīna laiks (APTT), protrombīna laiks (PT) un trombīna laiks (TT).

CistancheirFenilpropanoīdsglikozīdi

2. Materiāli un metodes

2.1. Ķimikālijas

2,2-difenil-1-pikrilhidrazilgrupa (DPPH), 2,2′-azinobis-3-etilbenztiazolīns-6-sulfonskābe (ABTS), kālija persulfāts, 6- hidroksi-2,5,7,8-tetrametilhromāna-2-karbonskābe (Trolokss), dimetilsulfoksīds (DMSO), tiobarbitūrskābe (TBA), skudrskābe (LC-MS pakāpe) un H2O2 tika iegādāti no Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ASV). Metanols (HPLC gradienta pakāpe) un acetonitrils (LC-MS pakāpe) tika iegūti no Merck (Darmštate, Vācija). Šajā darbā pārbaudīti desmit fenilpropanoīdu savienojumi, tostarp 2′-O-acetilakteozīds (97 procenti), 2′-O-acetilpoliumosīds (98 procenti), 3-O-metilpoliumosīds (96 procenti), akteozīds (99 procenti), Arēnu iekšpusē (97 procenti), krenatozīdu (98 procenti), tenipozīdu (99 procenti), poliumosīdu (99 procenti), tubulozīdu A (96 procenti) un wiede manniosīdu D (96 procenti) mēs iepriekš izolējām no zemāk norādītā auga. materiāls [8]. Savienojumu tīrība tika novērtēta, izmantojot UHPLC-PDA-MS analīzi. Īpaši tīrs ūdens tika sagatavots uz vietas, izmantojot Milli-Q ūdens attīrīšanas sistēmu (Millipore Co.). Citi reaģenti bija analītiskas kvalitātes, un tos nodrošināja vietējie komerciālie piegādātāji.

2.2. Augu materiāls

Ziedošus augus trīs sugām, tostarp Orobanche Caryophyllaceae Sm., Phelipanche Arenaria Pomel un P. ramosa (L.) Pomel identificēja prof. Renata Piwowarczyk (Jan Kochanowski Uni versity, Kielce, Polija) un savākta no dabiska avota Polijā. Vaučera eksemplāri (O. Caryophyllaceae – Chomentowek ´ (50.3349◦N, 20.4000◦E), kserotermisks zālājs, parazitē Galium boreale, 2014. gada maijs; P. Arenaria – Zwierzyniec, parasizewland, E.50.3652◦ps. Artemisia campestris, 2014. gada jūnijs; P. ramosa – Szewce (50.3553◦N, 22.3038◦E), lauks, parazitē Solanum Lycopersicum, 2014. gada septembris) ir deponēts Kielces Jana Kočanovska universitātes herbārijā (KTC). Pirms ekstrakcijas augu materiāls tika liofilizēts un smalki samalts.

2.3. Slotu ekstraktu sagatavošana

Pulverveida augu materiāls (O. Caryophyllaceae (OC) – 2 g, P. Arenaria (PA) – 3 g un P. ramosa (PR) – 3 g) tika ekstrahēts ar 80% MeOH 40 ◦C un 1500 psi (šķīdinātāja spiediens) ), izmantojot ASE 200 paātrinātu šķīdinātāja ekstraktoru (Dionex, Sunnyvale, CA, ASV). Ekstrakti tika iztvaicēti un liofilizēti (Gamma 2–16 LSC saldēšanas žāvētājs, Kristus, Vācija). OC, PA un PR ekstrakcijas efektivitāte bija attiecīgi 55 procenti, 37 procenti un 43 procenti no augu materiāla svara. Sakarā ar lielo ogļhidrātu saturu (dati nav parādīti), neapstrādātos ekstraktus tālāk attīrīja ar cietās fāzes ekstrakciju (SPE) uz Oasis HLB mikrokolonnas (500 mg; Waters, Milford, MA, ASV). Cukuri tika noņemti ar 1 procentu MeOH, pēc tam interesējošie savienojumi tika eluēti ar 80 procentiem MeOH. Pēc šķīdinātāja noņemšanas OC, PA un PR ekstrakti tika liofilizēti (Gamma 2–16 LSC saldētava), un SPE attīrīšanas iznākums bija 53 procenti (OC), 67 procenti (PA) un 51 procents (PR). .

2.4. Slotu ekstraktu fitoķīmiskās īpašības

Broomrape ekstraktu kvalitatīvās un kvantitatīvās analīzes tika veiktas, izmantojot ACQUITY UPLC sistēmu (Waters), kas savienota ar fotodiodes masīva detektoru (PDA) un tandēma kvadrupola masas spektrometru (TQD-MS/MS). Liofilizētie OC, PA un PR ekstrakti tika izšķīdināti 50 procentu metanolā ar koncentrāciju 0,50 mg/mL un pēc tam hromatografēti uz BEH C18 kolonnas (1{ {21}}0 × 2,1 mm, 1,7 µm, Voterss). Hromatogrāfiskie apstākļi bija šādi: krāsns temperatūra – 25 ◦C, lineārais gradients 10 → 25 procenti kustīgās fāzes B (0,1 % skudrskābe acetonitrilā) kustīgajā fāzē A (0,1 % skudrskābe H2O) 12 minūšu laikā, plūsmas ātrums – 0,4 mL/min, injekcijas tilpums – 2 μL, UV diapazons – 190–490 nm (3,6 nm izšķirtspēja). MS analīze veikta negatīvo jonu režīmā ar elektrosmidzināšanas jonizāciju (ESI), izmantojot šādus iestatījumus: skenēšanas diapazons 100–1200 m/z; kapilārais spriegums 2,8 kV; konusa spriegums 35 V; avota temperatūra 150 ◦C; desolvatācijas temperatūra 450 ◦C; desolvatācijas gāzes plūsma 900 L/h, un konusa gāzes plūsma 100 L/h. Datu iegūšana un apstrāde tika veikta, izmantojot Waters MassLynx 4.1 programmatūru.

Fenilpropanoīda glikozīda (PPG) maksimumi tika identificēti, salīdzinot iegūtos LC-MS datus ar iepriekš izolētu savienojumu datiem [8]. PPG kvantitatīvā noteikšana(pfenilpropanoīdsglikozīdi)broomrape ekstraktos balstījās uz UPLC-UV metodi ar noteikšanu pie 330 nm un ārēju standarta kalibrēšanu, izmantojot akteozīdu (Sigma-Aldrich, lielāks vai vienāds ar 99 procentiem, HPLC) kā grupas standartu. Lineārā kalibrēšanas līkne tika sagatavota sešās koncentrācijās diapazonā no 1 līdz 200 ug/ml, un tai bija laba linearitāte (R2, kas ir lielāks vai vienāds ar 0,999). Kvantitatīvie rezultāti atspoguļo trīs injekciju vidējo ± SD vērtību un tika izteikti kā akteozīda ekvivalentu miligrami (ekv.) uz gramu ekstrakta (mg akteozīda ekv/g).

CistancheirFenilpropanoīdsglikozīdi

2.5. Antiradikāla aktivitāte in vitro

2.5.1. ABTS radikāļu attīrīšanas tests

ABTS antiradikālais tests tika veikts, izmantojot metodi, ko aprakstīja Kontek et al. [9], ar nelielām modifikācijām šādi: 20 procenti MeOH tika izmantoti, lai sagatavotu reaģentus (7 mM ABTS un 4,9 mM kālija persulfātu); OC, PA un PR ekstraktu šķīdumi četrās koncentrācijas pakāpēs diapazonā no 100–400 ug/mL un Trolox šķīdumi sešās koncentrācijas pakāpēs diapazonā no 10–250 ug/mL tika pagatavoti ar 50 procentiem. MeOH. Parauga attiecība pret ABTS plus darba šķīdumu bija 1:25 (v/v). Absorbcija pie 734 nm tika mērīta pēc 30 minūšu inkubācijas tumsā, izmantojot UV-redzes spektrofotometru (Evolution 260 Bio, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, ASV).

Absorbcijas kavēšana (procentos) tika aprēķināta šādi: [(Abscontrol–Abssample)/Abscontrol] × 100.

Slotu ekstraktu Troloksa ekvivalenti (TE) tika aprēķināti, izmantojot formulu TE {{0}} paraugs/standarts, kur m ir taisnās līnijas līkņu slīpums (absorbcijas inhibīcija pret koncentrāciju). Parauga TE vērtība raksturo tā normalizēto aktivitāti pret Trolox (TEstandarts =1.0). IC50 vērtības OC, PA un PR ekstraktiem un Trolox tika sasniegtas eksperimentāli, pēc tam tika aprēķinātas no to taisnajām līknēm (absorbcijas kavēšana pret koncentrāciju) un ir izteiktas ug/mL.

Pārbaude tika veikta trīs eksemplāros, un rezultāti ir parādīti kā vidējie ± standartnovirzes (SD).

2.5.2. DPPH radikāļu attīrīšanas tests

DPPH antiradikālais tests tika veikts, izmantojot metodi, ko aprakstīja Jedrejek et al. [8] un Brand-Williams et al. [10], ar nelielām modifikācijām šādi: OC, PA un PR ekstraktu šķīdumi četros koncentrācijas līmeņos diapazonā no 50-250 ug/mL un Trolox šķīdumi sešos koncentrācijas līmeņos diapazonā no 10- 250 ug/ml, tika sagatavoti ar 50 procentiem MeOH. Parauga attiecība pret DPPH bija 1:19 (v/v). Absorbcija pie 517 nm tika mērīta pēc 30 minūšu inkubācijas tumsā, izmantojot UV-redz spektrofotometru (Evolution 260 Bio).

Absorbcijas kavēšana (procentos) tika aprēķināta šādi: [(Abscontrol–Abssample)/Abscontrol] × 100.

Testa paraugu Trolox Equivalent (TE) un IC50 vērtības tika aprēķinātas tādā pašā veidā kā ABTS testā (2.5.1. sadaļa). Pārbaude tika veikta trīs eksemplāros, un rezultāti ir parādīti kā vidējie ± SD.

2.6. Pārbaudītu augu savienojumu un ekstraktu pamatšķīdumi eksperimentiem ar cilvēka plazmu

Pārbaudīto savienojumu un augu ekstraktu izejas šķīdumi tika pagatavoti 50 procentu DMSO. DMSO galīgā koncentrācija pārbaudītajos paraugos bija mazāka par 0,05 procentiem, un tās ietekme tika noteikta visos eksperimentos.

2.7. Cilvēka plazmas izolācija

Cilvēka asinis jeb plazma tika iegūta no sešiem regulāriem donoriem (nesmēķētājiem vīriešiem un sievietēm) asins bankai (Lodza, Polija) un medicīnas centram (Lodza, Polija). Asinis tika savāktas kā CPD šķīdums (citrāts/fosfāts/dekstroze; 9:1; tilpums/tilpums asinis/CPD) vai CPDA šķīdums (citrāts/fosfāts/dekstroze/adenīns; 8,5:1; tilpums/tilpums; asinis/CPDA). Vismaz divas nedēļas pirms ziedošanas donori nebija lietojuši medikamentus vai atkarību izraisošas vielas (tostarp tabaku, alkoholu un antioksidantus). Mūsu asins paraugu analīze tika veikta saskaņā ar Helsinku deklarācijas par cilvēka pētniecību vadlīnijām, un to apstiprināja Lodzas Universitātes Cilvēku eksperimentu pētījumu ētikas komiteja. Plazmu sagatavoja, centrifugējot svaigas cilvēka asinis pie 4500x g 25 minūtes istabas temperatūrā. Olbaltumvielu koncentrācija tika aprēķināta, mērot pārbaudīto paraugu absorbciju pie 280 nm, saskaņā ar Whitaker un Granum procedūru [11].

CistancheirFenilpropanoīdsglikozīdi

2.8. Oksidatīvā stresa marķieri cilvēka plazmā

2.8.1. Lipīdu peroksidācijas mērīšana

Plazmas lipīdu peroksidācija tika kvantitatīvi noteikta, mērot tiobarbitūrskābes reaktīvo vielu (TBARS) koncentrāciju. TBARS koncentrācija tika aprēķināta, izmantojot molāro ekstinkcijas koeficientu (ε =156, 000 M− 1cm− 1). Metode ir sīkāk aprakstīta citur [12,13].

2.8.2. Karbonilgrupu mērīšana

Karbonilgrupu līmenis tika aprēķināts, izmantojot molāro ekstinkcijas koeficientu (ε=22, 000 M− 1 cm−1), un tika izteikts kā nmol karbonilgrupas/mg plazmas proteīna saskaņā ar Bartosz [13]. ] un Levine et al. [14].

2.8.3. Tiola grupas noteikšana

Tiola grupas saturs plazmas olbaltumvielās tika mērīts spektrofotometriski, izmantojot SPECTROstar Nano Microplate Reader (BMG LABTECH, Vācija) pēc absorbcijas pie 412 nm ar 5,5′-ditiol-bis-(2- nitrobenzoskābi). Sīkāk metode ir aprakstīta citur [15–17].

2.9. Hemostāzes parametri

2.9.1. Protrombīna laika (PT) mērīšana

PT tika noteikts koagulometriski, izmantojot Optic Coagulation Analyzer (modelis K-3002, Kselmed, Grudziadz, Polija) saskaņā ar Malinowska et al. [18].

2.9.2. Trombīna laika (TT) mērīšana

TT tika noteikts koagulometriski, izmantojot Optic Coagulation Analyzer (modelis K-3002, Kselmed, Grudziadz, Polija), saskaņā ar metodi, ko aprakstīja Malinowska et al. [18].

2.9.3. Aktivētā daļējā tromboplastīna laika (APTT) mērīšana

APTT tika noteikts koagulometriski, izmantojot K-3002 Optic Coagulation Analyzer (Kselmed, Grudziadz, Polija) saskaņā ar Malinowska et al. [18].

2.10. Datu analīze

Q-Dixon tests tika veikts, lai novērstu neskaidrus datus. Dati tika pārbaudīti attiecībā uz normālu sadalījumu ar Šapiro-Vilka testu un dispersijas vienlīdzību ar Levēna testu. Statistiski nozīmīgas atšķirības tika identificētas, izmantojot ANOVA, kam sekoja Tukey vairāku salīdzinājumu tests vai Kruskal-Wallis tests. Salīdzinājumi tika uzskatīti par nozīmīgiem pie p < 0.05.="" vērtības="" ir="" parādītas="" kā="" vidējie="" ±="">

3. Rezultāti un diskusijas

Desmit mēs iepriekš izolējāmfenilpropanoīdsglikozīdi[8], tostarp 2′-O-acetillakteozīds, 2′-O-acetilpoliumosīds, 3-O-metilpoliumosīds, akteozīds, iekšpuse, krenatosīds, felipozīds, pjedestāla puse, tubulozīds A un wiedemanniosīds D kopā ar trim Pašlaik tika pētīti broomrape ekstrakti (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche are naria (PA) un P. ramosa (PR))).oksidatīvsstressun antikoagulanta īpašības cilvēka plazmas sistēmā. Pārbaudīto fenilpropanoīdu ķīmiskās struktūras ir parādītas 1. attēlā, un, kā redzams, tie visi ir veidoti pēc līdzīga modeļa ar vienādām/līdzīgām apakšvienībām: hidroksitirozolu, monosaharīdiem (glikozi, ramnozi un/vai). ksiloze) un hidroksikanēļskābe. Lielākā daļa pārbaudīto PPG savienojumu ir aizstāti ar kofeīnskābi, bet to var aizstāt ar kumārskābi vai ferulskābi.

Neskaitot atsevišķus PPG savienojumus, trīs slotiņu ekstrakti – OC, PA un PR, kas ir vairāku PPG maisījumi.(pfenilpropanoīdsglikozīdi)un iepriekš kalpoja par izejmateriālu savienojumu izolācijai, tika iekļauti arī bioloģiskajā pētījumā. Vēl viens iemesls trīs dažādu sugu atlasei bija lielās atšķirības to fitoķīmiskajā profilā, kā redzams 2. attēlā. Detalizētāks OC, PA un PR ekstraktu salīdzinājums, ieskaitot kvantitatīvos datus, ir parādīts tabulā. 1. Akteozīds bija galvenā O. Caryophyllaceae ekstrakta (690 mg/g) sastāvdaļa, P. Arenaria dominēja tenipozīds un arēna iekšā (kopā 550 mg/g), savukārt poliumosīds un tā acetilētais atvasinājums bija svarīgākie metabolīti. P. ramosa ekstrakts (kopā 640 mg/g). Apskatītie ekstrakti atšķīrās arī pēc kopējā fenilpropanoīdu satura, lielākais daudzums konstatēts OC (810 mg/g), nedaudz mazāks PR (795 mg/g), mazāks PA (685 mg/g). Turklāt ir vērts atzīmēt, ka PPG klātbūtne ar citām, nevis kofeoilgrupām, piemēram, kumaroilu vai feruloilu, tika konstatēta tikai P. ramosa ekstraktā, kur šie savienojumi veidoja aptuveni vienu sesto daļu no kopējā PPG (apmēram 120 mg/ g) (1. tabula).

Iepriekšējie pētījumi par antiradikālo aktivitātifenilpropanoīdsglikozīdiHeilmans et al. [19] un Jedrejek et al. [8], tostarp aptuveni 30 dažādu PPG(pfenilpropanoīdsglikozīdi)piemēram, akteozīds, izoakteozīds un krenatosīds, ir atklājuši savu spēcīgo saistību ar acilgrupu (fenolskābes un tirozola) struktūru. Kopumā acilvienības katehola daļas modifikācija vai aizstāšana izraisīja ievērojamu attīrīšanas aktivitātes samazināšanos pret reaktīvām skābekļa sugām (ROS) un DPPH radikāli. Pašreizējā pētījumā ar ABTS un DPPH testiem tika pētīts trīs broomrape ekstraktu (OC, PA un PR) antiradikālais potenciāls in vitro, un rezultāti tika salīdzināti gan savā starpā, gan ar atsevišķu fenilpropanoīdu komponentu aktivitāti, kas izmērīta mūsu iepriekšējais pētījums [8]. Rezultāti tika izteikti kā Trolox ekvivalenti (TE) un IC50 (2. tabula). Kopumā visi trīs ekstrakti labi absorbēja gan ABTS, gan DPPH radikāļus, taču tika novērotas arī atšķirības starp pārbaudītajiem paraugiem (aptuvenais TE bija diapazonā no 0,5–0,7; 1,0 bija Trolox ekvivalents). Paraugu antiradikālas attīrīšanas aktivitāte bija šādā secībā: Trolox > OC > PA > PR. Orobanche Caryophyllaceae ekstraktam (IC50=155–275 µg/mL) bija par vairāk nekā 20 procentiem lielāka aktivitāte nekā Phelipanche ramosa ekstraktam (IC50=200–320 µg/mL).

Ziņotā OC ekstrakta augstākā radikāļu attīrīšanas aktivitāte ir izskaidrojama ar augstākajiem PPG(pfenilpropanoīdsglikozīdi)saturs šajā paraugā, kā arī akteozīda ievade, tā dominējošā sastāvdaļa, kas saskaņā ar iepriekšējiem pētījumiem [8,19] ir viens no spēcīgākajiem brīvo radikāļu savācējiem starp šīs grupas metabolītiem (TEDPPH=0). .87; [4]). Tomēr, ņemot vērā pretradikālas aktivitātes un fenilpropanoīdu satura savstarpējo saistību OC, PA un PR ekstraktos, starp šiem diviem faktoriem netika atrasta vienkārša korelācija (r < 0.5),="" kas="" liecina="" par="" nozīmīgu="" kvalitatīvs="" profils.="" tas="" galvenokārt="" ir="" saistīts="" ar="" p.="" ramosa="" ekstraktu,="" kas,="" neskatoties="" uz="" augsto="" ppg="">(pfenilpropanoīdsglikozīdi)({0}},8 g/g) bija zemākā bioloģiskā aktivitāte starp pārbaudītajiem paraugiem (TE ~ 0,5). PR ekstrakts, kā minēts iepriekš, bija vienīgais paraugs, kurā bija fenilpropanoīdi ar kumarīnskābi vai ferulskābi, vielām, kurām trūkst B-gredzena katehola daļas, un par kurām ziņots, ka tām ir samazināts antioksidatīvais potenciāls. Iepriekš pārbaudītajiem četriem PPG savienojumiem ar modificētu kofeīnskābi, tostarp 3-O-metilpoliumosīdu, ramozi A un viedemanniozīdu D, TEDPPH bija aptuveni 0,3 [8]. Tādējādi pašreizējie rezultāti atbilst un apstiprina iepriekšējo antiradikālo in vitro eksperimentu ar fenilpropanoīdiem konstatējumus.

Kā Chen et al. [20] aprakstīts, tas ir saistīts ar lielāku H-donorēšanas spēju vai radikāļu stabilizāciju ar dažādām savienojumu maisījuma funkcionālajām grupām. Ir identificēti vairāki strukturālie elementi, kas pastiprina polifenolu tiešu antioksidantu aktivitāti, īpaši tos, kas saistīti ar hidroksilgrupu skaitu un stāvokli. Tiek uzskatīts, ka brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitāte palielinās, palielinoties –OH grupu skaitam. Tomēr šo grupu pozīcija molekulā vēl vairāk ietekmē iedarbināto aktivitāti. Salīdzinoši stabili spēcīgi savienojumi ir tie, kuru struktūrā ir 3,4-dihidroksigrupa, kā arī tie, kuriem ir vairāk nekā divas hidroksilgrupas [21]. Antioksidanta vielas ķīmiskā struktūra ļauj izprast antioksidantu reakcijas mehānismu. Lopesa-Mungija u.c. [22], pamatojoties uz blīvuma funkcionālās teorijas (DFT) aprēķiniem, noteica, ka PPG(pfenilpropanoīdsglikozīdi)antioksidantu mehānisms notiek, izmantojot secīgu protonu zudumu viena elektrona pārnesi (SPLET). Tomēr Li et al. [23] mēģinājums izpētīt fenola fenilpropanoīdu antioksidantu mehānismus, secināja, ka PPG (akteozīds, forsitozīds B un poliumosīds) var būt iesaistīti vairākos antioksidanta iedarbības veidos, pastiprināja cukura atlikumu lomu.

Pētījumi liecina, ka augu izcelsmes antioksidanti ir efektīvi hemostāzes modulatori sirds un asinsvadu slimību gadījumā [24–26]. Dažādi tradicionālajā medicīnā izmantotie augi satur ievērojamu daudzumu PPG [27,28]. Turklāt PPG(pfenilpropanoīdsglikozīdi)Ir zināms, ka tiem piemīt virkne bioloģisku aktivitāšu, tostarp pretiekaisuma, pretnefrītiskas un antihepatotoksiskas īpašības [29–33].

Savā nesenajā pētījumā Jedrejek et al. [8] aprakstīja PPG izolāciju(pfenilpropanoīdsglikozīdi)no trim Polijas slotām un novērtēja to antioksidantu aktivitāti ar DPPH testu. Pamatojoties uz to, šajā pētījumā tiek novērtēts, vai desmit atlasītie PPG, kas izolēti no šiem augiem, varētu samazinātiesoksidatīvsstresscilvēka plazmā, kas apstrādāta ar spēcīgu bioloģisko oksidētāju, ti, hidroksilradikāļa donoru H2O2/Fe, un modulē plazmas koagulācijas īpašības in vitro. Desmit izolētu PPG antioksidanta īpašības tika noteiktas atbilstoši atlasītajiem parametriemoksidatīvsstress: TBARS līmenis kā lipīdu peroksidācijas marķieris kopā ar karbonilgrupas un tiola grupas līmeņiem, kā oksidatīvo proteīnu bojājumu marķieri.

Gan plazmas lipīdu peroksidācijas, gan olbaltumvielu karbonilācijas līmenis plazmā, ko inducēja H2O2/Fe, tika ievērojami samazināts astoņu pārbaudītu savienojumu klātbūtnē, t. akteozīds, krenatozīds, 2′-O-acetilakteozīds, felipozīds, iekšpuse, tubulozīds A, poliumosīds un 3- O-metilpolimuozīds visās pārbaudītajās koncentrācijās (1, 5 un 50 µg/ml); tomēr neviena ietekme netika novērota diviem no pārbaudītajiem savienojumiem, t. 2′-O-acetilpoliumosīds un wiedemanniosīds D vai jebkurš no pārbaudītajiem ekstraktiem jebkurā koncentrācijā (1, 5 un 50 µg/ml). Turklāt netika konstatēts, ka neviens no pārbaudītajiem savienojumiem vai pārbaudītajiem ekstraktiem aizsargātu plazmu pret H2O2/Fe izraisītu tiolgrupu oksidāciju olbaltumvielās (3.–5. att.). Tomēr pārbaudītie ekstrakti var būt savienojumu avots ar dažādām bioloģiskām īpašībām.

Pirmo reizi šī pētījuma rezultāti liecina, ka astoņi no pārbaudītajiem PPG(pfenilpropanoīdsglikozīdi)demonstrē antioksidanta potenciālu cilvēka plazmā eksogēnu reaktīvo skābekļa sugu klātbūtnē, inhibējot lipīdu peroksidāciju un olbaltumvielu karbonilāciju plazmā, kas apstrādāta ar H2O2/Fe. Turklāt 2′-O-acetilpoliumosīds un wiedemannioside D neradīja šādu efektu. Kopumā mūsu atklājumi atbilst iepriekšējiem in vitro eksperimentiem ar PPG. Heilmans u.c. [19] un Jedrejek et al. [8] ziņo par korelāciju starp PPG ķīmisko struktūru un to darbību. PPG antioksidanta īpašības(pfenilpropanoīdsglikozīdi)šķiet, ka tie galvenokārt ir saistīti ar to acilgrupu struktūru, ti, fenolskābes un fenilpropanoīda vienību, tostarp katehola daļas klātbūtni un/vai modifikāciju. Piemēram, tika konstatēts, ka wiedemannioside D zaudē savu antioksidācijas potenciālu pret plazmu, kas apstrādāta ar H2O2/Fe pēc tā kofeoilgrupas aizstāšanas ar feruloilgrupu.

Izmaiņas koagulācijas procesā bieži rodas nooksidatīvsstress; šīs izmaiņas var modulēt sirds un asinsvadu sistēmas funkcijas un izraisīt sirds un asinsvadu slimību attīstību [1]. No desmit šajā pētījumā pārbaudītajiem augu savienojumiem un trim augu ekstraktiem tika pierādīts, ka tubulozīds, pjedestāla puse un 3-O-metilpoliumosīds un visi pārbaudītie ekstrakti ievērojami pagarina trombīna laiku visās pārbaudītajās koncentrācijās, t. 1, 5 un 50 µg/mL (6.B attēls). Tomēr neviens no šiem ekstraktiem un neviens no pārbaudītajiem savienojumiem nemainīja PT vai APTT (6.A un C att.).

6. att. Pārbaudīto savienojumu (akteozīds, krenatozīds, 2′-O-acetilakteozīds, felipozīds, arenariosīds, tubulozīds A, poliumosīds, 3-O-metilpoliumosīds, 2′-O-cetilpolimuozīds, vedemanniozīds D) un augu ietekme. ekstrakti (P. arenaria ekstrakts - PA, P. ramosa ekstrakts - PR un O. caryophyllacea ekstrakts - OC) (1–50 µg/mL) uz atsevišķiem plazmas hemostatiskajiem parametriem: PT (A), TTn (B) un APTT (C). Dati atspoguļo vidējos ± SEM no sešiem neatkarīgiem eksperimentiem.n* p < 0,05="" (salīdzinot="" ar="" kontroli),="" ns="" –="" p=""> 0,05 (salīdzinot ar kontroli).

3. tabulā ir salīdzināta PPG (5 µg/ml) ietekme uz biomarķieriem.oksidatīvsstressplazmā, kas apstrādāta ar H2O2/Fe, un to ietekme uz koagulāciju. Astoņi no pārbaudītajiem PPG(pfenilpropanoīdsglikozīdi)pierādīts antioksidanta potenciāls tikai apstrādātajā cilvēka plazmā; tomēr tika konstatēts, ka trim pārbaudītajiem PPG piemīt gan antioksidanta īpašības, gan antikoagulanta potenciāls. Interesanti, ka DPPH testa rezultāti nesakrita ar tiem, kas iegūti bioloģiskajā modelī, izmantojot cilvēka plazmu, kas apstrādāta ar H2O2/Fe: pārbaudīto ekstraktu antioksidanta potenciālu var bloķēt daži plazmā esošie savienojumi.

Noslēgumā jāsaka, ka mūsu pašreizējie atklājumi atklāj jaunu gaismu par PPG antioksidantu potenciālu un antikoagulantu īpašībām(pfenilpropanoīdsglikozīdi). Šķiet, ka PPG struktūra(pfenilpropanoīdsglikozīdi), jo īpaši acilu un kateholu daļu klātbūtne, galvenokārt ir saistīta ar to antioksidanta un antikoagulanta īpašībām. Atsevišķiem PPG var būt potenciāls sirds un asinsvadu slimību ārstēšanai, kas saistītas aroksidatīvsstress. Tomēr ir nepieciešami turpmāki eksperimenti, lai noteiktu šo savienojumu koncentrācijas, kas nepieciešamas in vivo modeļiem.

Paziņojums par interešu konfliktu

Autori paziņo, ka viņiem nav zināmu konkurējošu finanšu interešu vai personisku attiecību, kas varētu ietekmēt šajā dokumentā aprakstīto darbu.

Atsauces

[1] A. Daiber, S. Chlopicki, Revisiting pharmacology ofoksidatīvsstressun endotēlija disfunkcija sirds un asinsvadu slimību gadījumā: pierādījumi par redoksu balstītām terapijām, Free Radic. Biol. Med. 157 (2020) 15.–37.
[2] J.-J. Sauvain, A. Setyan, P. Wild, P. Tacchini, G. Lagger, F. Storti, S. Deslarzes, MJ Guillemin, M. Rossi, M. Riediker, Biomarkers ofoksidatīvsstressun tā saistība ar urīna samazināšanas spēju autobusu apkopes darbiniekiem, J. Occupat. Med. Toksikols. 6 (2011) 18.–23.
[3] P. Novaks, B. Olass, B. Vachovics,Oksidatīvsstressun hemostāze, Post. Biochem. 56 (2010) 239–247.
[4] M. Martinez-Huelamo, J. Rodriguez-Morato, A. Boronat, R. de la Torre, Modulation of Nrf2 by olive oil and wine polyphenols and neuroprotection, Antioxidants 6 (2017) 73.
[5] S. Amor, P. Chalons, V. Aires, D. Delmas, Polifenola ekstrakti no sarkanvīna un vīnogulājiem: iespējamā ietekme uz vēzi, Diseases 6 (2018) 1.–12.
[6] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): viena no labākajām tradicionālās ķīniešu medicīnas farmaceitiskajām dāvanām, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41–49.
[7] Y. Jiang, P.-F. Tu, Pārskats: ķīmisko sastāvdaļu analīze Cistanche sugās, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970.–1979.
[8] D. Jedrejek, S. Pawelec, R. Piwowarczyk, L. Precio, A. Stochmal, Feniletanoīdu un iridoīdu glikozīdu identifikācija un sastopamība sešos Polijas spārnos (Orobanche spp. un Phelipanche spp., Orobanchaceae), Phytoche (mistry), 170 2020), 112189.
[9] B. Konteks, D. Jedrejeks, V. Olešeks, B. Olass, No apiņiem iegūto ekstraktu, kas bagāti ar rūgtskābēm un ksantohumolu, pretradikālas un antioksidantu aktivitāte in vitro, Ind. Crops Prod. 161 (2021) 1.–9.
[10] W. Brand-Williams, ME Cuvelier, C. Berset, Brīvo radikāļu metodes izmantošana antioksidantu aktivitātes novērtēšanai, Lebensm. Wiss. Tehn. 28 (1995) 25.–30.
[11] JR Whitaker, PE Granum, Absolūtā metode proteīnu noteikšanai, pamatojoties uz absorbcijas starpību pie 235 un 280 nm, Anal. Biochem. 109 (1980) 156–159.
[12] B. Wachowicz, Adenīna nukleotīdi putnu trombocītos, Cell Biochem. Funkcija. 2 (1984) 167–170.
[13] G. Bartosz, Druga twarz tlenu, Warsz. PWN 1 (2008) 7.
[14] RL Levine, D. Garland, CN Oliver, A. Amici, I. Climent, AG Lenz, BW Ahu, S. Shaltier, ER Stadtman, Determination of carbonyl content in oksidatively modified proteins, Methods Enzym. 186 (1990) 464–478.
[15] DM Joel, J. Gressel, LJ (eds.), Musselman, Parasitic Orobanchaceae: Parasitic Mechanisms and Control Strategies, Springer, Heidelberga, Vācija, 2013, 1.–10. lpp.
[16] Y. Ando, ​​M. Steiner, Trombocītu membrānu sulfhidrila un disulfīda grupas: disulfīda grupu noteikšana, Biochim. Biophys. Acta 311 (1973) 26–37.
[17] Y. Ando, ​​M. Steiner, Trombocītu membrānu sulfhidril- un disulfīda grupas: sulfidrilgrupu noteikšana, Biochim. Biophys. Acta 311 (1973) 38–44.
[18] J. Malinowska, J. Kołodziejczyk-Czepas, M. Moniuszko-Szajwaj, I. Kowalska, W. Oleszek, A. Stochmal, B. Olas, Phenolic fractions from Trifolium pallidum un Trifolium scabrum aerial parts in human plasma aizsarg pret hiperhomocisteinēmijas izraisītas izmaiņas, Food Chem. Toksikols. 50 (2012) 4023–4027.
[19] J. Heilmann, I. Calis, H. Kirmizibekmez, W. Schuhly, S. Harput, O. Stiher, Radical scavenger activity offenilpropanoīdsglikozīdiFMLP stimulētos polimorfonukleārajos leikocītos: struktūras un aktivitātes attiecības, Planta Med. 66 (2000) 746–748.
[20] H. Chen, Y. Zhou, Y. Shao, F. Chen, Free phenolic acids in Shanxi aged etiķis: izmaiņas novecošanās laikā un sinerģiskas antioksidantu aktivitātes, Int. J. Food Prop. 19 (2015) 1183–1193.
[21] CA Rice-Evans, NJ Miller, G. Paganga, Flavonoīdu un fenola skābju struktūras un antioksidantu aktivitātes attiecības, Free Radic. Biol. Med. 20 (1996) 933–956.
[22] A. Lopess-Munguía, Y. Hernandez-Romero, J. Pedraza-Chaverri, A. MirandaMolina, I. Regla, A. Martinez, E. Castillo, Fenilpropanoīda glikozīdu analogi: fermentatīvā sintēze, antioksidanta aktivitāte un teorētiskā to brīvo radikāļu iznīcinātāja mehānisma pētījums, PloS One 6 (2011) 20115.
[23] X. Li, Y. Xie, K. Li, A. Wu, H. Xie, Q. Guo, P. Xue, Y. Maleshibek, W. Zhao, J. Guo, D. Chen, Antioxidation and cytoprotection Akteozīda un tā atvasinājumu salīdzinājums un mehāniskā ķīmija, Molecules 23 (2018) 498.
[24] SE Kulling, HM Rawel, Aronija (Aronia melanocarpa) – pārskats par raksturīgajām sastāvdaļām un iespējamo ietekmi uz veselību, Planta Med. 74 (2008) 1625–1634.
[25] BJ Mc Even, Uztura un uzturvielu ietekme uz trombocītu darbību, Semin. Trombs. Hemost. 40 (2008) 214–226.
[26] B. Olas, Ogu daudzfunkcionalitāte pret asins trombocītiem un ogu fenolu loma sirds un asinsvadu slimībās, Trombocīti 5 (2016) 1–10.
[27] UB Ismailoglu, I. Saracoglu, US Harput, I. Sahin-Eredemli, Effects of phenylpropanoid and iridoid glycosides on the free radical induced impairment of endotheliumdependent relaksation in žurku aortas gredzeni, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 193.–197.
[28] ZF Bai, Y. Liu, XQ Wang, Etnisko ārstniecības augu Orobanche, Cistanche un Boschniakia izpēte, Zhongguo Zhong Yao Zhi 93 (2014) 4548–4552.
[29] K. Hajaši, T. Nagamatsu, M. Ito, H. Jagita, Y. Suzuki, Acteoside, Stachys sieboldii MIQ sastāvdaļa, var būt daudzsološs pretnefrīts līdzeklis (3): acetonīda ietekme uz ekspresiju starpšūnu sistēmā. adhēzijas molekula-1 eksperimentālos nefrīta glomerulos žurkām un kultivētās endotēlija šūnās, Jpn. J. Pharmacol. 70 (1996) 157–168.
[30] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, S. Kadota, Hepatoprotective activity of phenylpropanoids from Cistanche deserticola, Planta Med. 64 (1998) 120-125.
[31] WF Chiou, LC Lin, CF Chen, Acteoside aizsargā endotēlija šūnas pret brīvo radikāļu izraisītāmoksidatīvsstress, J. Pharm. Pharm. 56 (2004) 743–748.
[32] S. Sahpaz, N. Garbacki, M. Tits, F. Bailleul, Izolācija un farmakoloģiskā aktivitāte fenilpropanoīda esteriem no Marrubium vulgare, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 389–392.
[33] L. Lie-Chwen, W. Yea-Hwey, H. Yu-Chang, Ch Shiou, L. Kuo-Tong, Ch Yueh-Ching, W. Wen-Yen, S. Yoh-Chiang, The inhibitory effect nofenilpropanoīdsglikozīdiun iridoīdu glikozīdi uz brīvo radikāļu veidošanos un 2 integrīna ekspresiju cilvēka leikocītos, J. Pharm. Pharmacol. 58 (2006) 129–135.