Cistanche Deserticola ekstrakts palielina kaulu veidošanos osteoblastos
Mar 05, 2022
Kontaktpersona: Odrija Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pasts:audrey.hu@wecistanche.com
Te-Mao Lia, Hsin-Chih Huangb, Chen-Ming Suc, Tin-Yun Hoa, Chi-Ming Wua, Wen-Chi Chend, Yi-Chin Fonga,eun Chih-Hsin Tangf,c
Abstrakts
Mērķi:Mēs izpētījām ietekmiCistanche deserticola Ma. (CD) par kaulu veidošanos kultivētiem osteoblastiem.MetodesMineralizēto mezgliņu veidošanās tests tika izmantots, lai pārbaudītu CD ietekmi uz kaulu veidošanos in vitro. Sārmainās fosfatāzes (ALP), kaulu morfoģenētisko proteīnu (BMP)-2 un osteopontīna (OPN) mRNS ekspresija tika analizēta ar kvantitatīvu reāllaika polimerāzes ķēdes reakciju. CD ekstrakta darbības mehānisms tika pētīts, izmantojot Western blot metodi. CD ekstrakta anti-osteoporotiskā iedarbība in vivo tika novērtēta pelēm ar olnīcu izņemšanu.Galvenie atklājumiCD ekstrakts neietekmēja kultivēto osteoblastu proliferāciju, migrāciju vai brūču dzīšanu, bet palielināja ALP, BMP-2 un OPN mRNS un kaulu mineralizāciju. Mitogēnu aktivētās proteīnkināzes (MAPK) vai kodolfaktora (NF)-kB inhibitori samazināja CD ekstrakta izraisīto kaulu veidošanos un ALP, BMP-2 un OPN ekspresiju. Tomēr CD ekstrakts neietekmēja osteoklastoģenēzi. Turklāt CD ekstrakts novērsa kaulu zudumu, ko in vivo izraisīja olnīcu izņemšana.SecinājumiCD var būt jauns kaulu veidošanās līdzeklis osteoporozes ārstēšanai.
Ievads
Kauls ir sarežģīts audi, kas sastāv no vairākiem šūnu tipiem, kas tiek pakļauti nepārtrauktam atjaunošanas un atjaunošanas procesam, ko sauc par “kaulu remodelāciju”. Divi galvenie šūnu veidi, kas ir atbildīgi par kaulu remodelāciju, ir osteoklasti, kas resorbē kaulus, un osteoblasti, kas veido jaunu kaulu. Kaulu remodelāciju regulē vairāki sistēmiski hormoni (piemēram, parathormons, 1, 25-hidroksivitamīns D3, dzimumhormoni un kalcitonīns) un vietējie faktori (piemēram, slāpekļa oksīds, prostaglandīni, augšanas faktori un citokīni).[1]
Osteoporoze rodas, ja kaulu rezorbcija un veidošanās ir nekoordinēta un pārmērīga kaulu sadalīšanās pārsniedz kaulu veidošanās apjomu.[2] Pašreizējie osteoporozes ārstēšanas līdzekļi ietver bisfosfonātus, kalcitonīnu un estrogēnu, kas ir kaulu rezorbcijas inhibitori, kas uztur kaulu masu, kavējot osteoklastu aktivitāti.[3] Taču šo medikamentu ietekme uz kaulu masas palielināšanu vai atjaunošanos ir salīdzinoši neliela, noteikti ne vairāk kā 2 procenti gadā.[3] Tāpēc ir nepieciešami kaulu veidojošie līdzekļi, piemēram, teriparatīds, kas stimulē jaunu kaulu veidošanos un koriģē trabekulārās mikroarhitektūras izmaiņas, kas raksturīgas konstatētai osteoporozei.[4,5] Tā kā jaunu kaulu veidošanās galvenokārt ir funkcija osteoblasti, kas darbojas, vai nu pastiprinot osteoblastu cilmes šūnu proliferāciju vai izraisot osteoblastu diferenciāciju, var veicināt kaulu veidošanos.[5,6]
Lai gan osteoporozes mehānismi joprojām ir neskaidri, tie, visticamāk, ir saistīti ar kaulu augšanas faktoru, piemēram, kaulu morfoģenētisko proteīnu (BMP) samazinātu pieejamību vai ietekmi.[7] BMP, kas ir strukturāli saistītas ar trans-formējošo augšanas faktoru-b virsģimeni, sākotnēji tika identificētas pēc to spējas izraisīt ārpusdzemdes kaulu veidošanos grauzējiem.[8] BMP ir svarīga loma kaulu veidošanā un kaulu šūnu diferenciācijā, stimulējot sārmainās fosfatāzes (ALP) aktivitāti, kā arī proteoglikāna, kolagēna un osteopontīna (OPN) sintēzi.[9] Nesen veikts pētījums atklāja saikni starp osteoporozi un specifiskiem BMP-2, ALP un OPN gēnu polimorfismiem, kas liecina, ka tie ir saistīti ar osteoporozes attīstību.[10]
Cistanche deserticola Ma.(Orobanchaceae; saīsināts kā CD) ir Ķīnas izcelsmes augs, un to plaši izmanto tradicionālajā medicīnā kā terapeitisku līdzekli, pateicoties tā nomierinošajām, pretsāpju un imūnstimulējošām īpašībām.[11] Mūsdienu farmakoloģiskie pētījumi ir parādījuši, ka CD ekstrakti var stimulēt imunitāti[12], attīrīt brīvos radikāļus[13] un palielināt superoksīda dismutāzes aktivitāti[14]. Pretiekaisuma un antioksidantu līdzekļi spēj ārstēt osteoporozi, palielinot kaulu veidošanos un/vai nomācot kaulu rezorbciju.[15,16] Tomēr CD ietekme uz kaulu šūnu darbību vēl nav noteikta. Šeit mēs ziņojam, ka CD ekstrakts neietekmēja kultivēto osteoblastu proliferāciju, migrāciju vai brūču dzīšanas aktivitāti, bet palielināja ALP, BMP-2 un OPN ekspresiju un kaulu mineralizāciju. Turklāt mēs parādām, ka mitogēnu aktivētās proteīnkināzes (MAPK) un kodolfaktora (NF)-kB signalizācijas ceļi var būt iesaistīti CD izraisītā gēnu ekspresijas un kaulu mineralizācijas palielināšanā. Turpretim CD ekstrakts in vitro nenomāca osteoklastoģenēzi. Proti, peļu ārstēšana ar CD ekstraktu novērsa kaulu zudumu, ko in vivo izraisīja olnīcu izņemšana. Tāpēc mūsu dati liecina, ka CD var izmantot, lai stimulētu kaulu veidošanos osteoporozes ārstēšanai.
Cistanche deserticola
Materiāli un metodes
Cistanche deserticola ekstrakts un materiāli
CD ekstrakts tika iegādāts no Chuang Song-Zong Pharmaceutical Company (Kaohsiung, Taivāna). CD ekstrakcija un izolēšana tika veikta, kā aprakstīts iepriekš (pamatojoties uz spektrālajiem datiem, viņi identificēja ķīmisko sastāvu, tostarp beta-sitosterīnu, daukosterīnu, dzintarskābi, triakontanolu, akteozīdu, betaīnu un polisaharīdu).[17] Trušu poliklonālās antivielas, kas specifiskas p-ekstracelulārajām signālu regulētajām kināzēm (ERK), ERK, p-p38, p38, pc-Jun N-termināla kināzēm (JNK), JNK, p-p65 un p65, tika iegādātas no Santa Cruz Biotechnology ( Santakrusa, ASV). Osteokalcīna ELISA komplekts tika iegādāts no Biosource Technology (Nivelles, Beļģija). I tipa kolagēna ELISA komplekta C-gala telopeptīdi tika iegūti no Cross Laps (Herlev, Dānija). P38 dominējošo-negatīvo mutantu nodrošināja Dr. J. Han (South-Western Medical Center, Dalasa, ASV). JNK dominējošo-negatīvo mutantu nodrošināja Dr. M. Karin (Kalifornijas Universitāte, Sandjego, ASV). ERK2 dominējošo negatīvo mutantu nodrošināja Dr. M. Cobb (Dienvidrietumu medicīnas centrs). Visi pārējie reaģenti tika iegūti no Sigma-Aldrich (Sentluisas, ASV).
Šūnu kultūra
Peļu osteoblastu šūnu līnija MC3T3-E1 tika iegādāta no American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, ASV). Šūnas tika kultivētas 95% gaisā, 5% CO2 ar a-MEM, kas tika papildināts ar 20 mm HEPES un 10% termiski inaktivētu teļa augļa serumu, 2 mm-glutamīnu, penicilīnu (100 V/ml) un streptomicīnu (100 mg). /ml).
Mineralizēto mezgliņu veidošanās mērīšana
Mineralizēto mezgliņu veidošanās tika novērtēta, kā aprakstīts.[18] Īsumā, osteoblasti tika kultivēti barotnē, kas satur C vitamīnu (50 mg / ml) un b-glicerofosfātu (10 mm) divas nedēļas, un barotne tika mainīta ik pēc trim dienām. Pēc 12 dienu inkubācijas ar CD ekstraktu šūnas divas reizes mazgāja ar 20 mm Tris buferšķīdumu, kas saturēja
0,15 m NaCl (pH 7,4), fiksēts ledusaukstā 75 procentu (v/v) etanolā 30 minūtes un žāvēts gaisā. Kalcija nogulsnēšanās tika noteikta, izmantojot alizarīna sarkano-S krāsošanu. Īsumā, etanolā fiksētās šūnas un matrica tika iekrāsota 1 stundu ar 40 mm alizarīna sarkano-S (pH 4, 2) un plaši izskalota ar ūdeni. Saistītais traips tika eluēts ar 10% (w/v) cetilpiridīnija hlorīdu, un alizarīna sarkanais-S paraugos tika kvantificēts, mērot absorbciju pie 550 nm un salīdzinot ar standarta līkni. Viens mols alizarīna sarkanā-S selektīvi saista aptuveni divus molus kalcija.
Kvantitatīvā reālā laika polimerāzes ķēdes reakcija
Kopējā RNS tika ekstrahēta no osteoblastiem, izmantojot TRIzol komplektu (MDBio Inc., Taipeja, Taivāna). Reversā transkripcija tika veikta, izmantojot 2 mg kopējās RNS un oligo(dT) praimeru.[19,20] Kvantitatīvā reālā laika polimerāzes ķēdes reakcija (qPCR) tika veikta, izmantojot TaqMan® vienpakāpju PCR Master Mix (Applied Biosystems, Carlsbad, ASV). Kopējais cDNS tika pievienots (100 ng uz 25- ml reakcijas) ar secībai specifiskiem praimeriem un Taqman® zondēm. Visi mērķa gēnu praimeri un zondes tika iegādāti komerciāli, ieskaitot b-aktīnu kā iekšējo kontroli (Applied Biosystems). qPCR testi tika veikti trīs eksemplāros ar StepOnePlus sekvences noteikšanas sistēmu (Applied Biosystems). Cikla apstākļi bija 10-min polimerāzes aktivācija 95 grādos, kam sekoja 40 cikli 95 grādos 15 s un 60 grādos 60 s. Slieksnis tika iestatīts virs ne-veidnes kontroles fona un mērķa gēna amplifikācijas lineārajā fāzē, lai aprēķinātu cikla numuru, kurā tika atklāts transkripts (apzīmēts ar CT).
Western blot analīze
Šūnu lizāti tika sagatavoti, kā aprakstīts iepriekš.[21,22] Olbaltumvielas tika atdalītas ar SDS-PAGE un pārnestas uz Immobilon polivinildifluorīda membrānām (Millipore, Billerica, ASV). Bloti tika bloķēti ar 4% liellopu seruma albumīna 1 stundu istabas temperatūrā un pēc tam zondēti ar trušu anti-cilvēka antivielām pret p-65 vai p-p65 (1: 1000) 1 stundu istabas temperatūrā. Pēc trīs mazgāšanas blotus 1 stundu istabas temperatūrā inkubēja ar peroksidāzi konjugētu ēzeļa anti-trušu sekundāro antivielu (1: 1000). Bloti tika vizualizēti ar pastiprinātu ķīmisko luminiscenci, izmantojot X-OMAT LS plēvi (Eastman Kodak, Ročestera, ASV).
Ovariektomijas izraisīta osteoporoze
Šajā pētījumā tika izmantotas četras nedēļas vecas ICR peļu mātītes, kuru svars bija 22–28 g. Pelēm abpusēji tika veikta olnīcu izņemšana ar trihloracetaldehīda (100 mg/kg) anestēziju, un kontroles pelēm salīdzinājumam tika veikta fiktīva operācija (Sham). Kaulu minerālvielu blīvums un kaulu minerālvielu saturs tika mērīti pēc dažādu koncentrāciju CD ekstraktu perorālas ievadīšanas ik pēc divām dienām četras nedēļas. Kopējais ķermeņa kaulu minerālvielu blīvums un kaulu minerālvielu saturs tika noteikts ar divu enerģiju rentgena absorbcijas mērītāju (DEXA; XR-26; Norland, Fort Atkinson, ASV), izmantojot režīmu maziem subjektiem, kā aprakstīts iepriekš.[18, 23] Visi protokoli atbilda institucionālajām vadlīnijām, un tos apstiprināja Ķīnas Medicīnas universitātes Dzīvnieku aprūpes komiteja.
Statistiskā analīze
Statistiskā analīze tika veikta, izmantojot Prism 4.{6}}1programmatūru. (GraphPad Software Inc., Sandjego, ASV). Norādītās vērtības ir vidējās ± SEM. Statistiskā analīze starp diviem paraugiem tika veikta, izmantojot Stjudenta t-testu. Vairāk nekā divu grupu statistiskie salīdzinājumi tika veikti, izmantojot vienvirziena dispersijas analīzi ar Bonfera-Roni posthoc testu. Visos gadījumos P <0,05 tika="" uzskatīts="" par="">
Cistanche deserticola ekstrakts
Rezultāti
Cistanche deserticola ekstrakts palielina kaulu mineralizāciju ar osteoblastiem
CD ekstrakta pievienošana 24 vai 48 stundas neietekmēja peles osteoblastu MC3T3-E1 šūnu proliferāciju MTT testā (dati nav parādīti). Tā kā osteoblastu diferenciācija ir sarežģīts process, kas ietver šūnu proliferāciju un migrāciju, mēs pārbaudījām arī MC3T3-E1 šūnu migrācijas spēju pēc apstrādes ar CD ekstraktu. Izmantojot Transvela un brūču dzīšanas testus, mēs atklājām, ka CD ekstrakts neietekmēja osteoblastu migrāciju (dati nav parādīti). Mineralizētu mezgliņu veidošanās ir viens no osteoblastu nobriešanas marķieriem. Krāsošana ar alizarīna sarkano S parādīja, ka, osteoblastus kultivējot divas nedēļas barotnē, kas satur C vitamīnu (50 mg/ml) un b-glicerofosfātu (10 mm), veidojās mineralizēti mezgliņi, un to pievienošana palielināja atkarībā no koncentrācijas. CD (1.a attēls). Tāpēc CD ekstrakts izraisīja kaulu mezglu veidošanos kultivētiem osteoblastiem, bet ne to proliferāciju vai migrāciju. Mēs arī pārbaudījām CD ekstrakta lomu RANKL izraisītā osteoklastoģenēzē, bet nekonstatējām nekādu efektu (dati nav parādīti).
Cistanche deserticola ekstrakts palielina sārmainās fosfatāzes, kaulu morfoģenētisko proteīnu-2 un osteopontīna ekspresiju kultivētos osteoblastos
Diferencētie osteoblasti uzrāda paaugstinātu ALP aktivitāti, kas korelē ar augstu enzīmu ekspresijas līmeni.[18] Mēs noskaidrojām, ka ārstēšana ar CD ekstraktu 72 stundas ievērojami palielināja osteoblastu ALP aktivitāti (1.b attēls). Ņemot vērā BMP-2, ALP un OPN izšķirošo lomu osteoblastu diferenciācijā, mēs pārbaudījām, vai CD ekstrakts ietekmē osteoblastu diferenciāciju, regulējot BMP-2, ALP un OPN ekspresiju. Šūnu apstrāde ar CD ekstraktu palielināja ALP, BMP-2 un OPN mRNS ekspresiju no koncentrācijas atkarīgā veidā (1.c attēls), parādot, ka CD ekstrakts izraisīja osteoblastu diferenciāciju, pārregulējot ALP, BMP-2 , un OPN izteiksme.
Cistanche deserticola ekstrakts palielina kaulu mezgliņu veidošanos, izmantojot mitogēnu aktivētu proteīnkināzes ceļu
Ir ziņots, ka MAPK ir svarīga loma kaulu veidošanā [24, 25], tāpēc mēs pēc tam pārbaudījām, vai šis signalizācijas ceļš ir iesaistīts CD ekstrakta izraisītā kaulu mineralizācijā. Šūnu pirmapstrāde ar ERK inhibitoru U0126, p38 inhibitoru SB203580 vai JNK inhibitoru SP600125 samazināja CD ekstrakta izraisīto kaulu mineralizāciju (2.a, 3.a un 4.a attēls). Turklāt inhibitori bloķēja arī CD ekstrakta izraisīto ALP, BMP-2 un OPN ekspresiju (2.b–4.c attēls). Šūnu transfekcija ar ERK2, p38 vai JNK mutantu samazināja CD ekstrakta palielināšanos ALP, BMP-2 un OPN mRNS ekspresijā (2.c, 3.c un 4.c attēls). Pēc tam mēs tieši pārbaudījām ERK, p38 un JNK aktivāciju pēc CD ekstrakta apstrādes. Šūnu inkubācija ar CD ekstraktu izraisīja ERK, p38 un JNK fosforilēšanos (2.d, 3.d un 4.d attēls). Tāpēc ERK, p38 un JNK veicina palielinātu kaulu veidošanos, ko izraisa osteoblastu CD ārstēšana.
Cistanche deserticola ekstrakts palielina kaulu mezgliņu veidošanos, izmantojot kodolfaktora-kB ceļu
Kā jau minēts iepriekš, NF-kB aktivācija ir nepieciešama kaulu veidošanai.[26,27] Pēc tam mēs osteoblastus apstrādājām ar NF-kB inhibitoriem pirolidīna ditiokarbamātu (PDTC) un N-tosil-L-fenilalanīna hlormetilketonu (TPCK) no uzņēmuma. Calbiochem (Darmštate, Vācija), lai noteiktu, vai NF-kB aktivācija ir iesaistīta CD ekstrakta izraisītā kaulu mineralizācijā. 5.a attēlā parādīts, ka osteoblastu pirmapstrāde ar PDTC vai TPCK inhibēja CD ekstrakta izraisītu kaulu mezgliņu veidošanos un arī samazināja ALP, BMP-2 un OPN ekspresijas palielināšanos (5.b un 5.c attēls). NF-kB p65 apakšvienības fosforilācija ir NF-kB aktivācijas indikators; [28] saskaņā ar to mēs atklājām, ka CD ekstrakts palielināja p65 fosforilāciju osteoblastos (5.d attēls). Šie rezultāti norādīja, ka NF-kB aktivācija ir svarīga CD ekstrakta izraisītai ALP, BMP-2 un OPN ekspresijai un kaulu mezgliņu veidošanai.
Kaulu zuduma kavēšana ar Cistanche deserticola ekstraktu pelēm ar olnīcu izņemšanu
Lai pārbaudītu CD ekstrakta ietekmi uz kaulu zudumu, peļu mātītēm ar olnīcu izņemšanu tika izraisīta osteoporoze. Kā gaidīts, pelēm ar olnīcu izņemšanu bija samazināts kopējais ķermeņa kaulu minerālu blīvums un kaulu minerālvielu saturs (6.a un 6.b attēls). Ārstēšana ar CD ekstraktu četras nedēļas kavēja kaulu minerālā blīvuma un kaulu minerālvielu satura zudumu atkarībā no devas (6.a un 6.b attēls). ALP koncentrācija asinīs var atspoguļot osteoblastisko aktivitāti.[29] Kā parādīts 6.c attēlā, CD ekstrakts inhibēja seruma ALP aktivitātes samazināšanos, ko izraisīja olnīcu izņemšana. Turklāt CD ekstrakts paaugstināja arī osteokalcīna līmeni, kas ir kaulu veidošanās marķieris, un samazināja I tipa kolagēna C-gala telopeptīdu līmeni, kas ir kaulu rezorbcijas marķieris (6.d un 6.e attēls). Tādējādi šie atklājumi apstiprina CD ekstrakta potenciālu un efektivitāti kaulu zuduma novēršanā in vivo.
Diskusija
Cistanche deserticolaMa, Ķīnas zālaugu augs, tiek plaši izmantots tradicionālajā medicīnā dažādām terapeitiskām procedūrām, pateicoties tā nomierinošai, pretsāpju un imūnstimulējošai iedarbībai.[11–15] Šeit mēs parādījām, ka CD ekstrakts kultivētos osteoblastos izraisīja kaulu mineralizāciju, taču tas notika. neietekmē to šūnu migrāciju vai proliferāciju. Turklāt mēs atklājām, ka ALP, BMP-2 un OPN ir CD ekstrakta izraisītas signalizācijas mērķa proteīni, kam nepieciešama ERK, p38, JNK un NF-kB aktivizēšana.
Kauls ir sarežģīts audi, kas sastāv no vairākiem šūnu tipiem, kas nepārtraukti tiek atjaunoti un laboti.[30] Ja kaulu rezorbcija un veidošanās ir nelīdzsvarota, kaulu sabrukšana ir svarīgāka par kaulu veidošanos un osteoporozes rezultātiem.[30] Mēs izmantojām peles ar olnīcu izņemšanu, lai pārbaudītu CD ekstrakta anti-osteoporotisko efektu. Pelēm ar olnīcu izņemšanu bija samazināts kopējais ķermeņa kaulu minerālvielu blīvums un kaulu minerālvielu saturs, ko mazināja ārstēšana ar CD ekstraktu. CD ekstrakts arī palielināja osteogēnā marķiera ALP un osteokalcīna līmeni serumā. Tāpēc CD ir kaulu veidošanās līdzeklis, kas novērš kaulu zudumu, ko izraisa ovariektomija in vivo.
Lai gan osteoporozes mehānismi nav pilnībā skaidri, tie, visticamāk, ir saistīti ar kaulu augšanas faktoru, piemēram, ALP, BMP-2 un OPN, samazinātu pieejamību vai samazinātu ietekmi. Šiem trim faktoriem ir svarīga loma kaulu veidošanās un remodelācijas procesā[31], un ir labi dokumentēts, ka osteoblastu šūnu diferenciācijas stimulāciju galvenokārt raksturo paaugstināta ALP, BMP-2 un OPN ekspresija.[32] ] Šajā pētījumā mēs atklājām, ka CD ekstrakts palielināja ALP, BMP-2 un OPN ekspresiju un uzlaboja kaulu mineralizāciju. Tāpēc CD ekstrakts daļēji veicina kaulu veidošanos, pārregulējot ALP, BMP-2 un OPN ekspresiju.
Ir ziņots, ka p38 ir iesaistīts ALP ekspresijas regulēšanā osteoblastu šūnu diferenciācijas laikā; [33] tāpat ERK1/2 ir svarīgs osteoblastu proliferācijai un diferenciācijai.[34,35] JNK ir iesaistīts osteoklastu veidošanā. [36] Šeit mēs parādījām, ka CD ekstrakts izraisīja ERK, p38 un JNK fosforilāciju, un šo enzīmu inhibitori antagonizēja CD ekstrakta izraisīto kaulu mineralizācijas pastiprināšanos, kas liecina, ka ERK, p38 un JNK aktivācijai ir obligāta loma CD ekstrakta izraisītā kaulu veidošanā. osteoblasti. Turklāt enzīmu inhibitori un ERK, p38 un JNK dominējošie negatīvie mutanti samazināja CD ekstrakta pastiprināto ALP, BMP-2 un OPN ekspresiju. Šie dati liecina, ka ERK, p38 un JNK ceļu aktivizēšana ir nepieciešama, lai palielinātu ALP, BMP-2 un OPN ekspresiju un nobriešanu, ko izraisa CD ekstrakts osteoblastos. Ir ziņots, ka ERK palielina osteoblastu proliferāciju un diferenciāciju.[34,35] Tomēr mēs nekonstatējām CD ekstrakta ietekmi uz osteoblastu proliferāciju. Tāpēc citi ceļi var būt neitralizējuši ERK efektu pēc CD ekstrakta stimulācijas vai būt nepieciešami proliferācijai. Šajā sakarā mēs esam atklājuši, ka PI3K un Akt inhibitori samazina arī CD ekstrakta izraisīto kaulu mineralizāciju un ALP, BMP-2 vai OPN mRNS ekspresiju (dati nav parādīti). Tāpēc šie ceļi var būt nepieciešami CD ekstrakta izraisītai kaulu veidošanai.
Ir pierādīts, ka NF-kB kontrolē osteoblastu funkciju kaulos.[37] Šī pētījuma rezultāti liecina, ka NF-kB aktivācija veicina CD ekstrakta izraisītu kaulu mineralizāciju un ALP, BMP-2 un OPN ekspresiju kultivētos osteoblastos un ka NF-kB atkarīgā signalizācijas ceļa (PDTC un TPCK) inhibitori. ) inhibēja CD ekstrakta izraisīto kaulu mineralizāciju un ALP, BMP-2 un OPN ekspresiju. p65 tiek fosforilēts Ser536, izmantojot dažādas kināzes vairākos signalizācijas ceļos, kas uzlabo p65 transaktivācijas potenciālu.[38] Šī pētījuma rezultāti parādīja, ka CD ekstrakts palielināja p65 fosforilāciju. Kopumā šie rezultāti liecina, ka CD ekstrakta izraisītai kaulu veidošanai kultivētos osteoblastos ir nepieciešama NF-kB aktivācija. Mēs arī atklājām, ka ERK, p38 un JNK inhibitori apvērsa CD ekstrakta izraisīto NF-KB luciferāzes aktivitāti (dati nav parādīti), kas atbilst tam, ka šie enzīmi ir CD ekstrakta izraisītas NF-KB aktivācijas augšupējie mediatori. Tāpēc CD ekstrakts izraisa kaulu veidošanos, izmantojot ERK / p38 / JNK / un NF-KB ceļus.
Secinājumi
Šis pētījums parādīja, ka CD ekstrakts izraisa osteoblastu diferenciāciju un nobriešanu, bet ne proliferāciju vai migrāciju. CD ekstrakts arī palielināja ALP, BMP{0}} un OPN ekspresiju un kaulu mineralizāciju. Mēs parādījām, ka ERK, p38, JNK un NF-kB ceļi ir iesaistīti CD ekstrakta mediētā kaulu veidošanā un ALP, BMP-2 un OPN ekspresijā. Turklāt CD ekstrakts novērsa in vivo kaulu zudumu, ko izraisīja olnīcu izņemšana. Tāpēc CD var būt labvēlīgs kaulu veidošanās stimulēšanai osteoporozes slimību ārstēšanā.
