Cistanche Tubulosa aizsargā dopamīnerģiskos neironus, regulējot apoptozi un no glia šūnām iegūto neirotrofisko faktoru: in vivo un in vitro-Ⅱ

Uzvedības testi

Peldēšanas tests (Zhu et al., 2014)

Ķermeņa kustību koordinācija pelēm tika mērīta ar peldēšanas testu. Peles tika atsevišķi ievietotas ūdens tvertnē (25 cm augstumā un 10 cm diametrā), kas satur 10 cm ūdens, un testēja klusā vidē, lai reģistrētu to stacionāro ilgumu 5 minūšu laikā.

Atklātā lauka tests (Kawai et al., 1998)

Lokomotorā aktivitāte tika mērīta, izmantojot atklātā lauka testu. Peles tika pārbaudītas klusā un vāji apgaismotā vidē un atsevišķi ievietotas 30 cm × 30 cm × 15 cm caurspīdīgā akrila traukā ar 6 cm × 6 cm atdalīšanas režģi apakšā. Pelēm tika dotas 10 minūtes, lai pielāgotos videi, un pēc tam piecas reizes pēc kārtas tika mērīts režģa skaita kustība un atsevišķu peļu audzēšanas biežums, lai iegūtu vidējās vērtības.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA SEKSUĀLĀS FUNKCIJAS UZLABOŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Smadzeņu audu paraugu ņemšana

Pirms audu paraugu ņemšanas peles tika barotas ad libitum ar brīvu piekļuvi ūdenim un saņēma zāļu iejaukšanos 14 dienas pēc kārtas. Katrā grupā tika atlasītas četras peles un ātri nocirstas. Katra dzīvnieka SN (Bregma: –2,75 mm –2,92 mm) tika izolēts un novietots uz ledus. Smadzeņu audi tika izskaloti ar 0,9% ledusaukstu nātrija hlorīda šķīdumu, lai noņemtu visas asinis, un pirms uzglabāšanas –80 ◦C nosusināja uz filtrpapīra. Četras peles no katras grupas tika anestēzētas intraperitoneāli, un to krūtis tika atvērtas. Pēc tam katra dzīvnieka kreisajā kambarī tika ievietota infūzijas adata. Lai izvadītu asinis asinsrites sistēmā, labā priekškambara piedēklis tika pārgriezts un dzīvniekam tika ievadīts 4◦C normāls sālsūdens, līdz aknas kļuva bālas, lai nodrošinātu secīgu perfūziju. Kad labā ātrija izplūde kļuva skaidra, katrs dzīvnieks tika perfūzēts ar 4% paraformaldehīda fiksatoru. Pēc perfūzijas katra dzīvnieka smadzeņu audi tika rūpīgi sadalīti un 24 stundas pēc tam fiksēti 4% paraformaldehīdā. Fiksētie smadzeņu audi pēc tam tika noskaloti zem tekoša ūdens, dehidrēti etanola šķīdumu sērijā un notīrīti ksilola šķīdumā. Pēc tam sekoja iegremdēšana un iegremdēšana parafīnā.

DA daudzuma izmaiņas, izmērītas ar HPLC

Nanopulverveida SN no katras grupas tika ievietots ledus vannā, kas satur 0,9% nātrija hlorīda šķīdumu (attiecība 1:9). Smadzeņu audi tika homogenizēti, izmantojot ultraskaņas šūnu grautāju, un centrifugēti ar ātrumu 1200 apgr./min 20 minūtes 4 ° C temperatūrā, lai iegūtu supernatantu. HPLC tika izmantota Hypersil AA-ODS kolonna (2,1 mm × 200 mm, 5 µm) 30 °C kolonnas temperatūrā. Fluorescences noteikšana tika veikta pie 280 nm λex un 340 nm λem. Injekcijas tilpums bija 10 µL.

TH, GDNF, GFR 1 un Ret ekspresija, ko nosaka imūnhistoķīmija

Atsevišķu smadzeņu audu parafīna sekcijas (5 µm biezas) tika izolētas no katra dzīvnieka un ievietotas 40◦C silta ūdens vannā, lai saplacinātu un piestiprinātu stikla priekšmetstikliņus. Visus audu priekšmetstikliņus inkubēja 60 ◦C krāsnī 3–6 stundas, kam sekoja ksilola atsvaidzināšana, gradienta etanola dehidratācija un antigēna iegūšana, inkubējot citronskābes buferšķīdumā un karsējot mikroviļņu krāsnī 20 minūtes. Pēc tam audu priekšmetstikliņus 10 minūtes inkubēja 3% H2O2 šķīdumā istabas temperatūrā. Pēc trīs reizes mazgāšanas PBS, audu priekšmetstikliņus 20 minūtes inkubēja ar normālu serumu slēgtā kamerā istabas temperatūrā. Imūnhistoķīmiskā krāsošana tika veikta saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Motic Med 6.0 attēla analizators tika izmantots, lai aprēķinātu integrētā optiskā blīvuma vērtību pozitīvi iekrāsotajās šūnās.

Western blot analīze peļu smadzeņu audos

Šajā pētījumā tika novērtēta tirozīna hidroksilāzes (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 un Bax olbaltumvielu ekspresija. Katras grupas smadzeņu lizāts tika homogenizēts 3{{10}} minūtes uz ledus, kam sekoja centrifugēšana zemā temperatūrā, 20, 000 apgr./min, 4 ◦C temperatūrā. 5 minūtes, lai savāktu supernatantu. Olbaltumvielu paraugi tika atdalīti pastāvīgā spiedienā, izmantojot 10% SDS-PAGE gēlu, kā aprakstīts iepriekš. Primārā antivielu koncentrācija: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml un Bax 0,11 mg/ml. Procedūra bija tāda pati kā iepriekš.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA PAR ANTI AGEING ANTI-ALCHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Statistiskā analīze

Šajā pētījumā datu apstrādei un analīzei tika izmantota statistikas programmatūra SPSS 20.0. Parametru vērtības tika izteiktas kā vidējā ± standarta novirze (¯x ± S). Viena faktora datu analīzei tika izmantota ANOVA. Lai salīdzinātu grupas, tika izmantots LSD vai Games-Howell tests. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

REZULTĀTI

C. tubulosa nanopulvera aktīvās sastāvdaļas

200–400 nm skenēšanas diapazonā ECH C. tubulosa un VER 330 nm bija maksimālais absorbcijas maksimums, kas parādījās 20 minūšu laikā. ICA maksimālās absorbcijas virsotnes bija pie 270 nm, un tās parādījās pēc 20 minūtēm (1.A attēls). Rezultāti parādīja, ka negatīvie paraugi netraucēja noteikšanu (1.B attēls). Paraugiem un kontrolei bija vienādas hromatogrāfiskās virsotnes, un negatīvajam paraugam nebija neviena. Tas parādīja, ka pārējās sastāvdaļas paraugā neietekmēja izmērāmo komponentu. Turklāt trīs komponenti un blakus esošās virsotnes var sasniegt atdalīšanas bāzes līniju, un atdalīšanas pakāpe bija lielāka par 1, 5.

C. tubulosa ar nanopulvera samazinātu MPP{0}}izraisīta citotoksicitāte MES23.5 šūnās

MES23.5 šūnu dzīvotspēja tika ievērojami samazināta, palielinoties MPP+ koncentrācijai. 2F attēlā parādīta dažādu MPP+ koncentrāciju ievērojamā citotoksicitāte.

C. tubulosa nanopulveris samazināja MPP{0}}inducēto citotoksicitāti un uzlaboja MES23.5 šūnu dzīvotspēju. 2.G attēlā parādīts, ka C. tubulosa nanopulvera devām 10–250 µg/mL bija no devas atkarīga aizsargājoša iedarbība uz MPP+- apstrādātajām MES23.5 šūnām.

C. tubulosa nanopulvera citomorfoloģiskā iedarbība

Normālām MES23.5 šūnām bija laba šūnu adhēzija, un tās bija vārpstas formas ar skaidrām šūnu robežām un sinapsēm. MPP+-bojātajām MES23.5 šūnām bija slikta šūnu adhēzija un saraušanās, un daudzas tika apturētas vidē ar saraujošām sinapsēm. Šīs šūnas tika apkopotas, saruktas un apaļas ar vakuoliem iekšpusē, un kodoli tika sadalīti vai sabrukuši. C. tubulosa nanopulveris dažādās devās dažādās pakāpēs uzlaboja MES23.5 šūnu citomorfoloģiju, uzlabojot šūnu adhēziju un nesēju grupas sinaptisko klīrensu. MES23.5 šūnām lielas devas C. tubulosa terapijas grupā bija līdzīga morfoloģija kā parastajai kontroles grupai (2.A–E. attēls).

C. tubulosa nanopulvera ietekme uz TH ekspresiju un apoptozi šūnās

3. attēlā parādīts ievērojams TH proteīna ekspresijas samazinājums nesēju grupā. TH proteīna ekspresija palielinājās atšķirīgi grupās, kas tika ārstētas ar dažādām C. tubulosa devām. Tomēr LSD tests parādīja, ka starp trim ārstētajām grupām nebija būtiskas atšķirības.

4. attēlā parādīti apoptozes novērtējuma rezultāti, izmantojot plūsmas citometriju. Apoptozes ātrums nesēju grupā bija ievērojami augstāks nekā citās grupās. Šūnas, kas apstrādātas ar dažādām C. tubulosa nanopulvera devām, uzrādīja dažādas apoptozes ātruma samazināšanās pakāpes, salīdzinot ar nesēju grupu. Šūnām vidējas un lielas devas C. tubulosa ārstēšanas grupā bija visnozīmīgākie apoptozes ātruma uzlabojumi, salīdzinot ar citām C. tubulosa ārstēšanas grupām. LSD tests parādīja, ka starp abām ārstētajām grupām nebija būtiskas atšķirības, bet arī starp mazu devu grupu.

C. tubulosa nanopulvera ietekme uz Bcl2/Bax proteīna ekspresiju šūnās

5. attēlā parādīts, ka Bcl2 proteīna ekspresija nesēju grupas šūnās bija ievērojami zemāka, salīdzinot ar parasto kontroles grupu. Turpretim Bax proteīna ekspresija nesēju grupas šūnās bija ievērojami augstāka nekā parastajā kontroles grupā. C. tubulosa ārstēšanas grupās tika novērota paaugstināta Bcl2 proteīna ekspresija un samazināta Bax proteīna ekspresija MPP+-apstrādātajās MES23.5 šūnās. Starp trim ārstētajām grupām LSD testā bija būtiskas atšķirības. Šīs sekas bija atkarīgas no devas.

Uzvedības testi

Peldēšanas testa rezultāti liecināja, ka transportlīdzekļu grupas pelēm bija salīdzinoši ilgs stacionāra ilgums, kas laika gaitā palielinājās. 14. dienā pelēm nesēju grupā bija ievērojami ilgāks stacionārais ilgums nekā pelēm parastajā kontroles grupā. Peļu stacionārais ilgums

mazās devasC. tubulosaārstēšanas grupa būtiski neatšķīrās no pelēm transportlīdzekļa grupā. Tomēr stacionārais ilgums pelēm lielas devas C. tubulosa terapijas grupā bija ievērojami mazāks nekā pelēm nesēju grupā.

Atklātā lauka testa rezultāti liecina, ka pēc MPTP izraisītiem bojājumiem pelēm, transportlīdzekļa grupas pelēm bija ievērojama spontānas aktivitātes samazināšanās, ko parāda audzēšanas biežums. Pēc 14-dienas administrēšanasC. tubulosa nanopulveris, pelēm vidējas un lielas devas ārstēšanas grupās bija ievērojami augstāks audzēšanas biežums, salīdzinot ar pelēm transportlīdzekļa grupā (6.A, B attēls).

C. tubulosa nanopulvera ietekme uz DA saturu pelēm

Izmaiņas SN DA saturā noteica ar HPLC. Tika konstatēts, ka DA saturs transportlīdzekļu grupas smadzenēs ir ievērojami samazināts. DA saturs smadzenēs PD pelēm mazas devas C. tubulosa terapijas grupā būtiski neatšķīrās no pelēm nesēju grupā. tomērC. tubulosa ārstēšanapalielināja DA līmeni PD peļu smadzenēs atkarībā no devas. PD peļu smadzenēs, kas tika ārstētas ar lielu C. tubulosa devu, bija ievērojami augstāks DA saturs nekā peļu smadzenēs nesēju grupā (6.C attēls).

C. tubulosa nanopulvera ietekme uz TH ekspresiju pelēm

TH pozitīvo šūnu skaits un TH proteīna ekspresijas līmenis MPTP izraisīto PD peļu SN bija zemāks, salīdzinot ar pelēm kontroles grupā. Pēc C. tubulosa terapijas palielinājās TH pozitīvo šūnu skaits un TH proteīna ekspresijas līmenis MPTP izraisītu PD peļu SN, ar ievērojamu atšķirību starp C. tubulosa lielu devu ārstēšanas grupu un nesēju grupu. ar LSD testu; un starp trim ārstētajām grupām bija būtiskas atšķirības (7. attēls).

C. tubulosa nanopulvera ietekme uz GDNF un tā receptoru proteīna ekspresiju, GFR 1 un Ret pelēm

GDNF un tā receptoru, GFR 1 un Ret, olbaltumvielu ekspresija pozitīvi iekrāsotajās šūnās tika novērtēta, izmantojot imūnhistoķīmiju. Western blot analīze tika izmantota, lai novērtētu olbaltumvielu ekspresijas līmeņus dažādu peļu grupu SN. Rezultāti dažādām grupām bija līdzīgi, izmantojot abas noteikšanas metodes. GDNF un tā receptoru proteīnu, GFR 1 un Ret, ekspresija pozitīvi iekrāsotajās šūnās peļu SN transportlīdzekļa grupā bija ievērojami zemāka nekā pelēm parastajā kontroles grupā. Dažādas C. tubulosa ārstēšanas devas palielināja GDNF-, GFR 1- un Ret-pozitīvo šūnu skaitu (8.A–S. attēls).

GDNF, GFR 1 un Ret proteīna ekspresija SN pelēm transportlīdzekļa grupā bija ievērojami zemāka nekā kontroles grupas pelēm. Ārstēšanas koncentrācijas palielināšanaC. tubulosa nanopowerievērojami uzlaboja šo proteīnu ekspresiju. GDNF, GFR 1 un Ret proteīna ekspresija SN pelēm lielas devas C. tubulosa terapijas grupā bija ievērojami augstāka nekā pelēm nesēju grupā (P< 0.01; Figures 8T, U). 

C. tubulosa nanopulvera ietekme uz Bcl2/Bax proteīna ekspresiju pelēm

Bcl2 proteīna ekspresija tika ievērojami samazināta un Bax proteīna ekspresija tika ievērojami uzlabota peļu SN transportlīdzekļa grupā (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

DISKUSIJA

PD un apoptoze

PD ir neirodeģeneratīvs traucējums. Saskaņā ar Zhang et al. (2005), izplatība ir 10,7% Ķīnas iedzīvotāju vidū, kas vecāki par 55 gadiem, un 1,67% - tiem, kas vecāki par 65 gadiem. PD pacientu skaits katru gadu ir palielinājies līdz ar globālās novecošanas paātrināšanos, radot smagu finansiālu slogu pacientu ģimenēm. un sabiedrību kopumā. Smadzenēs dopamīnerģiskie neironi galvenokārt ir iesaistīti DA sintēzē un sekrēcijā. Tie ir plaši izplatīti centrālajā nervu sistēmā un galvenokārt atrodas SN (80%). TH ir galvenais ātrumu ierobežojošais enzīms DA sintēzei. Tādējādi TH aktivitātes kavēšana samazina DA sintēzi (Huot un Parent, 2007). Galvenās PD patoloģiskās un bioķīmiskās izmaiņas ir dopamīnerģisko neironu apoptoze SN, ievērojama nigrostriatālā DA samazināšanās un Lewy ķermeņu veidošanās dopamīnerģiskajos neironos (Dexter un Jenner, 2013). PD etioloģija ietver saistītos ģenētiskos faktorus, vides faktorus un nervu sistēmas novecošanos (Allam et al., 2005). PD patoģenēze mūsdienu medicīnā joprojām ir neskaidra. Kopš 1960. gadu beigām levodopas aizstājterapija ir veiksmīgi izmantota PD ārstēšanai, un tā ir atzīta par galveno pagrieziena punktu PD ārstēšanā. Tomēr šīs terapijas ilgstoša lietošana izraisa blakusparādības, un terapija neārstē PD pamatcēloņus (Del Sorbo un Albanese, 2008). Tāpēc PD ārstēšanā izšķiroša nozīme ir aktīviem jaunu zāļu vai ārstēšanas metožu pētījumiem, kas vērsti uz dopamīnerģisko neironu aizsardzību.

Iepriekšējos pētījumos terminālās dezoksinukleotidiltransferāzes mediētās dUTP nick end marķējuma izmantošana liecināja, ka 0,6%–4,8% dopamīnerģisko neironu PD pacientu SN bija apoptoze (Mochizuki et al., 1996). Elektronu mikroskopija parādīja apoptotiskas pazīmes, tostarp hromatisku kondensāciju un apoptotiskus ķermeņus dopamīnerģiskajās šūnās (Anglade et al., 1997). Tompkins et al. (1997) veica smadzeņu audu autopsiju ultrastrukturālo analīzi pacientiem ar PD, AD un difūzo Lewy ķermeņa slimību (DLBD). Viņi atrada apoptotiskus ķermeņus blīvajā SN slānī PD un DLBD pacientiem, sniedzot pārliecinošus pierādījumus par neironu apoptozi PD un ar to saistītajās slimībās. Tāpēc PD ārstēšanā būtiska nozīme ir apoptozes samazināšanai vai nomākšanai dopamīnerģiskajos neironos.

Iepriekšējie pētījumi parādīja, ka MPTP izraisīja PD līdzīgus simptomus. MPTP šķērso hematoencefālisko barjeru un tiek metabolizēts ar B tipa monoamīnoksidāzēm astrocītos. Pēc tam tas tiek pārveidots par toksisku MPP+, kas uzkrājas dopamīnerģisko neironu mitohondrijās, uzņemot DA transportera proteīnu. Tādējādi tas rada lieko skābekļa brīvo radikāļu daudzumu, kas kavē mitohondriju elpošanas ķēdes kompleksa I aktivitāti un ATP sintēzi. Šie notikumi vēl vairāk veicina brīvo radikāļu veidošanos un oksidatīvā stresa reakcijas, un galu galā noved pie dopamīnerģisko neironu deģenerācijas un nāves. Tādējādi šajā pētījumā tika izmantots MPP+, lai izveidotu in vitro nesēju MES23.5 dopamīnerģiskajos neironos un MPTP, lai izraisītu transportlīdzekļa peli savstarpējai pārbaudei. Saskaņā ar MTT testa rezultātiem MPP+ ievērojami samazināja MES23.5 šūnu dzīvotspēju, kas liecina, ka MPP+ bija citotoksisks pret dopamīnerģiskiem neironiem. Rezultāti arī parādīja, ka C. tubulosa efektīvi uzlaboja anti-apoptotisko proteīnu ekspresiju un inhibēja MPP{11}}inducētās apoptozes palielināšanos.

PD un GDNF

GDNF ir neirotrofisks faktors, ko pirmo reizi izolēja Lin et al. (1993). Lin et al. (1993) arī parādīja, ka GDNF ir specifiska uztura ietekme uz dopamīnerģiskiem neironiem žurku vidus smadzenēs. GDNF, neirturīns (NTN), persefīns (PSP) un artemīns (ART) veido GDNF saimi. Tie ir strukturāli līdzīgi un funkcionāli saistīti sekrēcijas proteīni (Kotzbauer et al., 1996; Baloh et al., 1998; Milbrandt et al., 1998; Woodbury et al., 1998).

GDNF receptors sastāv no diviem komponentiem. Pirmais komponents, GFR, ir piestiprināts pie glikozilfosfatidilinozīta (GPI) ārējās membrānas un piestiprināts pie konneksīna virsmas. Otrais komponents ir Ret proteīns. Pētījumi liecina, ka ir četri dažādi GFR veidi: GFR 1, GFR 2, GFR 3 un GFR 4. GFR 1 ir augstas afinitātes GDNF receptors (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl et al., 2001). Ret proteīns ir funkcionāls GDNF receptors. GDNF homodimēra molekula tieši saistās ar GFR 1, veidojot kompleksus un mijiedarbojas ar Ret, kā rezultātā notiek Ret dimerizācija un aktivācija. Ret autofosforilācijas dēļ Ret aktivizē vairākus izplatītus TH signalizācijas ceļus. Ja nav Ret proteīna, GDNF izraisa MAPK, PI-3 un PLC- proteīnu fosforilēšanos, papildus mRNS ekspresijai un C-fos funkcionālajai aktivitātei, izmantojot tā receptoru proteīnu GFR 1 (He et al., 2008).

Pētījumi ir parādījuši, ka GDNF bija visspēcīgākā aizsargājošā iedarbība uz dopamīnerģiskiem neironiem (Rangasamy et al., 2010; Campos et al., 2012). Transportlīdzekļos, kas izmanto MPTP un 6-hidroksidopamīnu (6-OHDA), lai izraisītu bojājumus dopamīnerģiskajos neironos, GDNF aizsargā dopamīnerģiskos neironus, samazinot apoptozi un veicinot aksonu augšanu, lai izraisītu cilmes šūnu diferenciāciju (Lucas et al., 2012; Littrell et al., 2013). Lin et al. (1993) parādīja, ka GDNF īpaši veicināja dopamīnerģisko neironu dzīvotspēju, diferenciāciju un aksonu augšanu, lai veicinātu DA uzņemšanu neironos. Pētījums arī parādīja, ka GDNF ne tikai novērsa akūtu toksicitāti, bet arī mazināja MPP+ vai 6-OHDA ilgtermiņa toksicitāti dopamīnerģiskajos neironos, turklāt novēršot šūnu nāvi stresa vai bojātās šūnās (Yu et al., 2010). Turklāt GDNF veicināja nervu cilmes šūnu proliferāciju un diferenciāciju pret dopamīnerģiskiem neironiem vidussmadzenēs (Lindsay, 1995), lai glābtu dopamīnerģiskos neironus no retrogrādas deģenerācijas (Hong-Juan et al., 2011).

Pētījumi liecina, ka GDNF ekspresija SN bija ievērojami samazināta dzīvnieku transportlīdzekļos (Yang et al., 2010). Tas liecina, ka tas var būt viens no patoģenēzes mehānismiem PD žurkām. 5–15 µg/d GDNF injekcija MPTP izraisīta nesējdzīvnieka sānu kambarī vai striatumā trīs mēnešus pēc kārtas veicināja nesējdzīvnieka dopamīnerģiskās sistēmas nigrostriatālo atjaunošanos (Grondin et al., 2002). Pētījumi par PD GDNF ārstēšanu dzīvnieku transportlīdzekļos ir parādījuši, ka GDNF intracerebrāla injekcija dažādos smadzeņu reģionos, piemēram, SN, astes kodolā un sānu kambarī, uzlaboja kustību traucējumus, kas saistīti ar PD dzīvnieku modeļiem, tostarp samazinātu kustību aktivitāti, muskuļu stīvumu un trīce (Grondin et al., 2002). Tomēr GDNF nevar tieši iziet cauri asins-smadzeņu barjerai. Tāpēc lokāla GDNF smadzeņu injekcija ir saistīta ar būtisku risku un grūtībām klīniskajā pielietojumā. Lietojumprogrammas, lai ieviestu eksogēnu GDNF, izmantojot kontrolētas darbības mikrosfēras, ilgstošas ​​​​darbības kapsulas un vīrusu gēnus, joprojām tiek pētīti (Liang et al., 2010; Yang et al., 2010; Qiao et al., 2012). Ņemot vērā dažādu paņēmienu ierobežojumus eksogēna GDNF ievadīšanai smadzenēs, neiroprotektīvie līdzekļi, kas veicina endogēnā GDNF izdalīšanos, ir nozīmīgi klīniskai lietošanai.

PD unC. tubulosaNanopulveris

PD biežāk sastopams pusmūža pieaugušajiem un gados vecākiem cilvēkiem. TCM teorija uzskata, ka PD galvenokārt atrodas smadzenēs un galvenokārt ir saistīts ar aknu un nieru deficītu, papildus dzīvībai svarīgajai enerģijai un asins nepietiekamībai. Saskaņā ar šo teoriju PD ārstēšanai jākoncentrējas uz nieru un kaulu smadzeņu uzmundrināšanu.Yang et al. (2010)izmantoja randomizētus, dubultmaskētus un placebo kontrolētus klīniskos pētījumus un atklāja, ka kombinētā terapija, izmantojot Madopar un nieres tonizējošas receptes, mazināja PD pacientu motoriskās disfunkcijas. Ārstēšanas rezultāts bija labāks nekā vienreizējai terapijai, izmantojot Madopar. TCM monoterapijas vai kombinētās receptes ārstēšanas efektivitāte PD ir apstiprināta PD dzīvnieku modeļos un klīniskos lietojumos. TCM lietojumi nieru tonizēšanai un asinsrites veicināšanai samazināja PD monoterapijas devu, izmantojot Madopar. Daži pētījumi liecina, ka TCM uzlaboja PD simptomus un aizsargāja dopamīnerģiskos neironus, kas varētu būt cieši saistīti ar endogēnās GDNF ekspresijas veicināšanu.Hong-Juan et al., 2011; Qiao et al., 2012).

Šajā pētījumā izmantotais nieru tonizējošais savienojums,C. tubulosananopulveris, saturCistanche, epimedijs, unRhizoma polygonati. Mūsdienu pētījumi liecina, ka ķīmiskais sastāvsCistancheir ECH, kas aizsargā dopamīnerģiskos neironus SN MPTP inducētās PD pelēs un kavē DA un DA transportera samazināšanos (Zhao et al., 2010). Turklāt tas novērš 6-OHDA izraisītu DA samazināšanos un aizsargā striatāla dopamīnerģiskos neironus (Chen et al., 2007). Epimēdijs kavē kaspāzes -3 aktivāciju un veic neiroprotektīvas funkcijas (Liu et al., 2011). Epimēdija flavonoīdi efektīvi veicina nervu cilmes šūnu proliferāciju un diferenciāciju (Yao et al., 2010).

Šajā pētījumāC. tubulosananopulveris antagonizēja MPP palielināšanos+- izraisīta apoptoze atkarībā no devas. Tas ievērojami uzlaboja TH izteiksmiin vitronesējs, un tam bija ievērojama anti-apoptotiska iedarbība dopamīnerģiskajos neironos. MPTP izraisītajām transportlīdzekļa pelēm bija uzvedības traucējumi un ievērojami samazināta TH ekspresija vidus smadzeņu audos un DA līmenis, kas ir tipiskas PD patoloģiskas pazīmes. Dažādas devasC. tubulosananopulveris saīsināja stacionāro ilgumu, uzlaboja autonomās aktivitātes, uzlaboja uzvedības traucējumus, paaugstināja DA līmeni smadzenēs un palielināja TH ekspresiju transportlīdzekļos. Šie rezultāti liecināja par toC. tubulosananopulveris radīja aizsargājošu iedarbību uz dopamīnerģiskiem neironiem, tādējādi uzlabojot transportlīdzekļu uzvedības traucējumus. Dažādas devasC. tubulosananopulveris palielināja GDNF proteīna un tā receptoru proteīnu ekspresiju transportlīdzekļa peļu smadzenēs. Augstas devasC. tubulosaārstēšana ievērojami pārregulēja Bcl2 ekspresiju un samazināja Bax ekspresiju, kas to liecinājaC. tubulosananopulverisvar veicināt GDNF ekspresiju un sekrēciju MPTP bojātajās peles smadzenēs. Turklāt tas var radīt neiroprotektīvu iedarbību dopamīnerģiskajos neironos un samazināt neironu apoptozi, izmantojot GDNF neirotrofiskās atbalsta lomas.

Šis pētījums to pierādījaC. tubulosananopulveris radīja aizsargājošu iedarbību uz dopamīnerģiskiem neironiem abosin vitrounin vivoun palielināta TH izteiksme, lai uzlabotu DA saturu. Tas arī uzlaboja uzvedības traucējumus MPTP izraisītām transportlīdzekļa pelēm, regulēja GDNF un tā receptoru proteīnu proteīnu ekspresiju SN, un tam bija anti-apoptotiska iedarbība PD pelēm. Mehānisms, kas ir klīniskās iedarbības pamatāC. tubulosananopulveris PD var ietvert endogēnā GDNF satura palielināšanu smadzenēs un tādējādi samazinot dopamīnerģisko neironu bojājumus.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA SEKSUĀLĀS FUNKCIJAS UZLABOŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12