Citokīnu absorbcija cilvēka nieru perfūzijas laikā samazina aizkavētu transplantāta funkciju, kas saistīta ar iekaisuma gēna parakstu

Kontaktpersona: Odrija Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pasts:audrey.hu@wecistanche.com

Džons R. Ferdinands1,2|Sarah A. Hosgood2,3|Toms Mūrs2,3|Ešlija Fero1|Christopher J. Ward1|Tomass Kastro-Dopiko1|Maikls L. Nikolsons2,3|Menna R. Kletvorts1,2

1 Molekulārās imunitātes nodaļa, Kembridžas Universitātes Medicīnas nodaļa, Molekulārās bioloģijas laboratorija, Kembridža, Apvienotā Karaliste

2 Nacionālā veselības pētniecības institūta Asins un transplantācijas pētniecības nodaļa orgānu ziedošanas jomā, Kembridža, Apvienotā Karaliste

3 Kembridžas Universitātes Ķirurģijas nodaļa, Kembridža, Apvienotā Karaliste

Transplantācija ir optimāla ārstēšana lielākajai daļai pacientu ar beigu stadijunieresslimībabet orgānu trūkums ir liela problēma. Normotermiskā mašīna perfūzija (NMP) ir izmantota, lai atjaunotu marginālos orgānus; tomēr mehānismi, ar kuriem NMP varētu dot labumu orgāniem, nav labi saprotami. Izmantojot cilvēka nieru pārus, kas iegūti no viena donora, mēs salīdzinājām NMP ietekmi ar aukstuma uzglabāšanas ietekmi uz globālo.nierestranskripts. Mēs atklājām, ka uzglabāšana aukstumā izraisīja globālu gēnu ekspresijas samazināšanos, tostarp iekaisuma ceļa gēnus un tos, kas nepieciešami enerģijas ražošanas procesiem, piemēram, oksidatīvā fosforilācija (OXPHOS). Turpretim NMP laikā tika novērota izteikta OXPHOS gēnu, kā arī vairāku imūnsistēmas un iekaisuma ceļa gēnu regulēšana. Izmantojot biopsijas no nierēm, kurām tika veikta NMP un kuras pēc tam tika transplantētas, mēs atklājām, ka augstāka iekaisuma gēnu ekspresija notika orgānos ar ilgstošu aizkavētu transplantāta funkciju (DGF). Tāpēc mēs izmantojām hem-adsorber (HA), lai noņemtu pretiekaisuma citokīnus. Šī novājinātā iekaisuma gēna ekspresija palielināja OXPHOS ceļa gēnus, un tai bija potenciāli klīniski nozīmīga ietekme, samazinot ar DGF saistītā gēna parakstu. Kopā mūsu dati liecina, ka iekaisuma mediatoru adsorbcija no perfūzāta ir potenciāla iejaukšanās, kas var uzlabot orgānu dzīvotspēju.

ATSLĒGVĀRDI:klīniskā izpēte/prakse, aizkavēta transplantāta funkcija (DGF), donori un ziedojums: miruši,nieres(alografta) funkcija/disfunkcija,nieresslimība: imūns / iekaisuma, nieru

Cistanche augs uzlabo nieru darbību

1. IEVADS

Nierestransplantācija ir optimālā ārstēšana lielākajai daļai pacientu arbeigu stadijanieresslimība, kas dod labumu gan dzīves kvalitātei, gan kvantitātei.1 Orgānu trūkums ir liela problēma, un ir izmantotas vairākas stratēģijas, lai palielinātu pieejamo nieru skaitu, tostarp mirušo asinsrites nāves (DCD) donoru un paplašinātu kritēriju donoru (ECD) izmantošana. ), kas abi ir saistīti ar augstāku transplantāta funkcijas kavējuma (DGF) līmeni, salīdzinot ar mirušu smadzeņu stumbra nāves (DBD) donoru.2,3 DCD nierēs pakļaušana siltai išēmijai asinsrites pārtraukšanas procesa laikā ievērojami veicina DGF. . DGF rodas išēmisku kanāliņu šūnu bojājuma vai nāves dēļ, kas var stimulēt iedzimtu imūnsistēmas aktivāciju, izmantojot NLRP3 iekaisuma mezglu, izraisot interleikīna (IL)1 un IL18 veidošanos.{6}} Patiešām, iekaisuma citokīnu klātbūtne urīnā ir konstatēta. izmanto kā biomarķieriakūtsnieresievainojumsun DGF.{0}}

Normotermiskā mašīnaperfūzija (NMP) ļauj transplantētos orgānus perfūzēt ar siltām, skābekli saturošām sarkanajām asins šūnām, ja nav cirkulējošo imūnkomponentu, tostarp komplementa un neitrofilu.{0}} Šis process tika izmantots, lai novērtētu marginālos orgānus15 un " atjaunošanas" orgāni, lai atvieglotu nieru transplantāciju, kas sākotnēji tika noraidīta pēc valsts orgānu piešķiršanas dienesta piedāvājuma.16 Mūsu iepriekšējā pieredze, izmantojot NMP, sniedza pamatojumu randomizētam kontrolētam pētījumam, lai novērtētu tā efektivitāti DGF novēršanā DCD nierēs17, bet mehānismi, ar kuriem NMP varētu dot labumu transplantētajām nierēm, nav pilnībā izprotami. Turklāt jautājums par to, vai papildu manipulācijas arnieresNMP laikā, piemēram, no perfūzāta noņemot pro-iekaisuma citokīnus un kemokīnus, var sniegt papildu priekšrocības orgāna optimizēšanā pirms transplantācijas, tas nav aplūkots cilvēka nierēs, taču mūsu pētījums par cūku NMP parādīja daudzsološus rezultātus.18

Šeit mēs izmantojām objektīvu pieeju, lai risinātu šos divus jautājumus, izmantojot cilvēka transkriptomisko analīzinieresbiopsijas, kas ņemtas NMP sākumā un beigās, lai novērtētu globālās izmaiņas gēnu ekspresijā. Mēs izmantojām cilvēka nieru pārus no viena donora, kas ļāva salīdzināt dažādu iejaukšanās ietekmi orgānos ar identisku ģenētisko fonu, un varējām novērtēt šo izmaiņu ietekmi uz transplantāta iznākuma prognozi.

Cistanche ekstrakta ieguvums: novērš akūtunieresievainojums

2. REZULTĀTI

2.1. Pārī savienotās nieres ir ģenētiski līdzīgas un noderīgs modelis intervences novērtēšanai

Mēs pētījām transkripcijas izmaiņas, kas saistītas ar orgānu saglabāšanu un NMP, divos neatkarīgos pētījumos, katrā no kuriem bija pieci pāri nieru, kopā veidojot 10 pārus/20 cilvēka nieres. No tiem divi bija no DBD un astoņi no DCD donoriem (S1, S2 tabula un S1 attēls). Šajos pētījumos mēs paņēmām kortikālās biopsijas pirms un pēc iejaukšanās (aukstā uzglabāšana vai NMP) un pētījām transkripcijas ainavu, izmantojot RNS sekvencēšanu (RNA-Seq). Pāru nieru un pāru biopsiju izmantošana no tā pašanieresļāva mums kontrolēt bioloģiskās variācijas un izņemt šo neskaidrību no analīzes (S2A attēls). Mēs to apstiprinājāmnierespāri sākas ar kopīgu transkripcijas ainavu (S2B att.) un katram piemēro dažādas iejaukšanāsnierespārī mēs varam pētīt iejaukšanās ietekmi neatkarīgi no bioloģiskās variācijas.

1. ATTĒLS Nieres, kas pakļautas aukstumglabāšanai, uzrāda ierobežotas gēnu ekspresijas izmaiņas, salīdzinot ar tām, kurām tiek veikta NMP. Tika iegūts pāris nieres, kuras tika noraidītas lietošanai transplantācijā. Viensnierestika uzturēta statiskā aukstuma noliktavā, bet otrai tika veikta normotermiskā mašīnas perfūzija (NMP). Biopsijas tika ņemtas no ārējās garozas sākumā un pēc 2 stundām. B, vulkāna diagramma, kas norāda uz gēnu ekspresijas izmaiņām norādītajā grupā 2 stundu laikā, salīdzinot ar sākumu. Sarkanie punkti norāda atšķirīgi izteiktus gēnus ar pielāgotu P vērtību<0.05 and="" the="" experimental="" group="" is="" indicated="" above="" the="" plot.="" c,="" gene="" set="" enrichment="" analyses="" of="" the="" differential="" expressions="" from="" b="" against="" the="" hallmarks="" pathways.="" only="" significant="" pathways="" (fdr="" q="" value=""><0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="" (nes).="" d,="" heatmap="" of="" the="" top="" 20="" significantly="" upregulated="" genes="" during="" nmp,="" genes="" are="" ranked="" by="" log2="" fold="" change.="" e,="" string="" analysis="" of="" the="" top="" 50="" genes="" upregulated="" during="" nmp.="" the="" color="" of="" each="" node="" indicates="" membership="" of="" each="">

2. ATTĒLS Transkripta korelācija pēc NMP ar aizkavētās transplantāta funkcijas ilgumu. Gēnu ekspresija tika korelēta ar DGF garumu biopsijās, kas tika ņemtas pēc NMP kā daļa no randomizēta klīniskā pētījuma. Ir attēloti 1000 gēnu ekspresijas līmeņi ar vislielāko korelāciju ar rezultātu. B, GSEA tika veikta korelācijai no A pret pazīmju datu kopu. Tikai nozīmīgi ceļi (FDR q vērtība<0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="">

2.2. NMP izraisa OXPHOS un iekaisuma ceļa gēnu pieaugumu, salīdzinot ar saldētavu

Lai izpētītu iespējamos mehānismus, ar kuriem NMP varētu ietekmēt nieres, mēs sākotnēji izmantojām piecusnierespāri (n {{0}} DCD donori un n=1 miruši smadzeņu stumbra nāves [DBD] donori, S1 attēls, S1 tabula) un veica laika 0 (0 stundas) garozas biopsiju . Šajā brīdī nieres tika nejaušināti iedalītas statiskā saldētavā vai NMP, kā aprakstīts iepriekš 10 (1.A attēls). Pēc 2 stundām no abām nierēm tika ņemta otrā biopsija un tika veikta RNS-Seq. Salīdzinot gēnu ekspresiju starp laika 0- un 2-stundu biopsijām, mēs atklājām, ka nierēm, kas ievietotas statiskā aukstuma kamerā, nebija statistiski nozīmīgu izmaiņu neviena atsevišķa gēna ekspresijā, ja tās tika koriģētas vairākām pārbaudēm (1.B attēls). , kreisais panelis). Turpretim 2 stundu NMP laikā 956 gēni tika regulēti un 353 gēni tika pazemināti (1B attēls, labais panelis). Pēc tam mēs novērtējām izmaiņas gēnu grupu ekspresijā kopējā ceļā, salīdzinot desmitiem vai simtiem gēnu, nevis jebkuru atsevišķu gēnu, tādējādi vēl vairāk samazinot bioloģisko starpindividuālo variāciju ietekmi uz analīzi. Tas atklāja izmaiņas funkcionāli svarīgos ceļos, kur katra atsevišķā gēna ekspresija šajā ceļā netika mainīta pietiekami lielā mērā, lai sasniegtu statistisku nozīmīgumu. Šī gēnu komplekta bagātināšanas analīze (GSEA) parādīja, ka uzglabāšanai aukstumā bija būtiska ietekme uz vairākiem vielmaiņas ceļiem (1.C attēls, kreisais panelis). Jo īpaši tika novērots ievērojams gēnu samazinājums, kas iesaistīts oksidatīvajā fosforilācijā (OXPHOS), kas ir galvenais ceļš, kas nepieciešams ATP ģenerēšanai.19 Turpretim OXPHOS bija viens no ceļiem, kas NMP laikā tika ievērojami pārregulēti (1. C attēls, labais panelis), un tam bija potenciāli ieguvumi. šūnu dzīvotspējai un šūnu homeostāzes atjaunošanai. Turklāt NMP laikā tika ierosināti vairāki imūnsistēmas vai iekaisuma procesos iesaistīti ceļi, un "TNF signalizācija caur NFkB" demonstrēja lielāko pieaugumu. Saskaņā ar to TNF, kā arī IL1B un neitrofilus vervējošie ķīmokīni CXCL8 (IL8) un CXCL2 bija vieni no visvairāk regulētajiem gēniem 2- stundu NMP biopsijās (1. D attēls). 50 augstāk regulēto gēnu virkņu analīze atklāja bioķīmiski saistīto gēnu regulēšanu, kas tika sagrupēti četros galvenajos mezglos; IL8 un neitrofilu rekrutējošie ķīmokīni, ar iekaisumu saistīti gēni, NFkB signalizācija un transkripcijas regulēšana (1. E attēls). Jāatzīmē, ka sākotnēji DBD un DCD nieres bija transkripcijas ziņā līdzīgas (S2C attēls), un gēnu ceļi, kas mainījās NMP laikā, bija līdzīgi DBD un DCD nierēs (S2D attēls). Kopā mūsu analīze parāda, ka NMP laikā tiek palielināta gēnu ekspresija, kas veicina enerģijas ģenerēšanu, ar potenciāli labvēlīgu ietekmi uz orgānu, bet vienlaikus izraisa iekaisuma gēnu indukciju, kas var būt kaitīga.

Cistanche tubulosa ekstrakts: uzlabo nieru darbību

2.3. Iekaisuma ceļa gēni NMP nierēs, kas saistīti ar ilgstošu aizkavētu transplantāta funkciju

Lai saistītu transkripcijas izmaiņas, kas notiek uzglabāšanas aukstumā un NMP laikā, ar klīniskajiem rezultātiem, mēs veicām RNS-Seq biopsijām, kas ņemtas no 33 DCD nierēm, kurām tika veikta NMP kā daļa no randomizēta klīniskā pētījuma, kurā pašlaik tika novērtēta tā efektivitāte.17 Paraugi bija pieejami nieru apakškopa, kas randomizēta pētījuma NMP grupā, kas pēc tam tika transplantēta (S3 tabula, S1 attēls). DGF ir biežāk sastopams DCD nierēs, un tas ir klasiski definēts kā nepieciešamība veikt dialīzi pirmajā nedēļā pēc transplantācijas. Tomēr tiešā pēctransplantācijas periodā daži pacienti saņem vienu dialīzes epizodi hiperkaliēmijas dēļ, kas ne vienmēr atspoguļo nozīmīgu akūtu tubulāru nekrozi. Tāpēc mēs izmantojām modeli, kas korelē gēnu ekspresiju ar laiku starp transplantācijas operāciju un pēdējo dialīzes sesiju (ti, DGF ilgumu). Tas parādīja izteiktākas transkripcijas izmaiņas transplantātos, kam nepieciešama dialīze pēc pirmajām 24 stundām pēc transplantācijas (2.A attēls), kā arī nozīmīgu pozitīvu korelāciju starp iekaisuma ceļa gēnu ekspresiju, tostarp "TNFA signalizāciju caur NFkB" un "iekaisuma reakcijas" ceļiem un DGF garums ar lielāku šo ceļu bagātināšanu nierēs, kurām pēc transplantācijas bija ilgāks DGF (attēls 2B). Un otrādi, DGF garums negatīvi korelēja ar "OXPHOS" ceļa gēnu ekspresijas lielumu (2.B attēls). Kopumā šie dati liecina, ka pēc NMP nieres, kurām ir zemāka iekaisuma ceļa gēnu ekspresija un augstāka "OXPHOS" ceļa gēnu ekspresija, ir mazāk jutīgas pret ilgstošu DGF pēc transplantācijas. Tas apstiprinātu secinājumu, ka NMP laikā notiekošajām molekulārajām izmaiņām var būt gan labvēlīga (OXPHOS ceļa gēnu indukcija), gan kaitīga (iekaisuma ceļu gēnu indukcija) ietekme.

2.4. Urīna izdalīšanās un nieru asins plūsma NMP laikā parāda dažādas saistības ar OXPHOS un iekaisuma ceļa gēniem

NMP laikā saražotā urīna daudzums ir viens no vairākiem parametriem, kas iekļauti ķirurģiskās kvalitātes novērtējuma rādītājos, ko izmanto, lai vadītu lēmumus par orgānu izmantošanu15, bet vai augsts urīna daudzums NMP laikā patiešām liecina par labu nierēm un pamatā esošajiem molekulārajiem ceļiem, kas aktivizēti nieres ar augstu urīna izdalīšanos nav skaidrs. Kopumā 10 nierēs, kurām tika veikta NMP (tikai NMP nierēm, S1 un S2 tabula, S1 attēls), mēs novērojām urīna izvadīšanas diapazonu no 0 līdz 340 ml 2-stundu perfūzijas periodā. (3.A attēls kreisais panelis). Jāatzīmē, ka, salīdzinot ceļus, kas NMP laikā mainās piecās nierēs divos neatkarīgos eksperimentos, mēs atklājām, ka tika ierosināti līdzīgi ceļi (S3A attēls), kas apstiprina mūsu eksperimentālā dizaina reproducējamību un ceļu, nevis atsevišķu gēnu salīdzināšanas lietderību. 2-Stundu pēcperfūzijas biopsijās 11 gēnu ekspresija būtiski korelēja ar šajā periodā saražoto urīna daudzumu. Tie ietvēra karstuma šoka proteīnus (HSP), HSPA1A, HSPA1B un HSPH1, kas pozitīvi korelēja ar palielinātu urīna izdalīšanos (3.A attēls labais panelis). Gēnu komplekta bagātināšanas analīze parādīja, ka urīna izdalīšanās arī pozitīvi korelē ar "TNF signalizāciju caur NFkB" ceļa gēniem un negatīvi korelēja ar OXPHOS gēniem pēcperfūzijas biopsijās (3.B attēls, S3C). Tāpat pirmsperfūzijas biopsijās OXPHOS negatīvi korelēja ar urīna izdalīšanos šajās nierēs, savukārt ceļi, kas saistīti ar imūnsistēmas aktivāciju, tostarp "TNF signalizācija caur NFkB" un "allografta atgrūšana", pozitīvi korelēja ar urīna izdalīšanos, kas liecina, ka NMP bija maza ietekme uz šiem procesiem. , vai citos analizētos ceļos nierēs ar augstu urīna izdalīšanos (3.B attēls, S3C-D). Tā kā mūsu klīniskajos paraugos ar ilgstošu DGF tika novērota iekaisuma ceļa gēnu indukcija (2.B attēls), šie dati apstrīd dogmu, ka dzīvotspējīgākās, "veselīgākās" nierēs ir daudz urīna, un liecina, ka patiesībā šīm nierēm var būt vairāk iekaisuma potenciālu, ir mazāk spējīgi radīt enerģiju un ka tas NMP laikā būtiski nemainās.

Nieru asins plūsma perfūzijas laikā ir arī novērtēta kā parametrs, kas var atspoguļot turpmāko transplantācijas funkciju.15 10 pētītajās nierēs nieru asins plūsma 2 stundu laikā pēc perfūzijas svārstījās no 14,1 līdz 168,8 ml/min (3.C attēls, kreisais panelis). 2-stundu pēcperfūzijas biopsijās astoņi gēni būtiski pozitīvi korelēja ar nieru asinsrites palielināšanos (3.C attēls labais panelis), tostarp HSPA1L, taču nebija tiešas pārklāšanās starp šo gēnu sarakstu un tiem, kas korelē ar urīna izdalīšanos (3.A attēls). ). Gēnu kopas bagātināšanas analīze parādīja, ka augsta nieru asins plūsma pozitīvi korelē ar OXPHOS gēniem 0-stundu biopsijās, taču atšķirībā no tām, kurām bija vislielākā urīna izdalīšanās, perfūzijai bija būtiska ietekme, kā rezultātā radās negatīva korelācija ar "OXPHOS" ceļa gēnus par 2 stundām (3.D attēls, S4A-B attēls). Nieru asins plūsmas negatīvi korelē ar vairākiem imūnsistēmas un iekaisuma gēnu ceļiem gan 0-, gan 2-stundu biopsijās (3.D attēls, S4B attēls), atšķirībā no urīna izvadīšanas (3.B attēls, S3C attēls). Kopā šie dati liecina, ka nieru asins plūsma un urīna izdalīšanās var nebūt līdzvērtīgi dzīvotspējīgākas nieres rādītāji, bet pirmais var ticamāk identificētnieresmazāka iespējamība, ka būs ilgstoša DGF.

cistanche ieguvumi un blakusparādības: pretiekaisuma

2.5. Hem-adsorbera pievienošana perfūzijas ķēdei neietekmē perfūzijas parametrus, bet ievērojami samazina iekaisuma gēnu ekspresiju, tostarp NLRP3 un IL1B

Analīzes parnieresperfuzāts ir pierādījis būtisku pro-iekaisuma citokīnu un kemokīnu koncentrācijas pieaugumu hipotermijas un NMP laikā.20,21 Šīs bioaktīvās molekulas recirkulē nierēs, potenciāli izraisot turpmāku iekaisumu. Ņemot vērā, ka mūsu analīze pārstādītnieresparaugi norādīja, ka no TNF atkarīgo gēnu indukcija NMP nierēs bija saistīta ar DGF (2.B attēls), mēs izvirzījām hipotēzi, ka citokīnu un kemokīnu noņemšana no perfūzijas ķēdes var vājināt iekaisuma gēnu indukciju ar potenciāli labvēlīgu ietekmi uz nierēm. Šāda pieeja ir pierādījusi zināmu efektivitāti pacientiem ar sistēmiskas iekaisuma reakcijas sindromu,22,23, un bija saistīta ar palielinātu nieru asins plūsmu cūku nierēs, kurām tiek veikta NMP.18 Lai to pārbaudītu cilvēka nierēs, mēs paņēmām papildu piecus nieru pārus un veicām NMP 4 stundas ar biopsijām, kas ņemtas pēc 0, 2 un 4 stundām (S1 attēls). Katrā gadījumā vienas nieres perfūzijas ķēdei katrā pārī (NMP plus HA) tika pievienots citozola hem-adsorber (HA), kas noņem molekulas ar molekulmasu 10-50 kDa (4A attēls). Kā paredzēts, HA pievienošana izraisīja zemāku dažādu citokīnu koncentrāciju perfūzātā (4.B attēls), bet neietekmēja nieru asins plūsmu, urīna izdalīšanos vai sastāvu, skābekļa patēriņu un skābju-bāzes homeostāzi (4C attēls, Tabula S4, S5). Tādējādi vairāk nekā 4 NMP stundu laikā HA neietekmēja pašlaik klīniski izmantotos perfūzijas parametrus, lai radītu kvalitātes novērtējuma rādītājus, bet būtiski ietekmēja gēnu ekspresiju; Pēc NMP 1794 un 4026 gēni tika regulēti attiecīgi pēc 2 un 4 stundām, ieskaitot TNF un IL6 (attēls 4D, E). bet tikai puse no šī skaitļa (n=898 un n=2606) tika palielināti, kad bija HA (attēls 4D, attēls S5A un B). Samazināto gēnu skaits tika samazināts arī, pievienojot HA (4.D attēls). Pēc 4 stundu ilgas NMP lietošanas 46 gēni tika ievērojami paaugstināti un 181 gēni pazemināti, pievienojot HA (attēls 4F). Šī novājinātā transkripcijas reakcija ietvēra ar NLRP3 iekaisuma aktivāciju saistītos gēnus, piemēram, IL1B, NLRP3 un CASP1 (4.G attēls, S4B attēls) un dažus neitrofilus piesaistošus ķīmokīnus (S5C attēls), kas iepriekš bija saistīti ar nieru bojājumiem dzīvnieku modeļos.24,25 Tas parāda, ka šķīstošie mediatori izdalās nonieresrecirkulēt un virzīt de novo iekaisuma gēnu ekspresiju orgānā, bet to var mazināt, tos noņemot no perfūzijas ķēdes.

4. ATTĒLS Apmales adsorbera pievienošana normotermiskās mašīnas perfūzijas ķēdei būtiski ietekmē citokīnu līmeni perfūzātā un transkriptā, bet ne fiziskos parametrus, kas reģistrēti platformā. No viena donora tika ņemts pāris cilvēka nieres, vienam no pāriem 4 stundas tika veikts standarta normotermiskās mašīnas perfūzijas (NMP) protokols, bet otram.nierestika veikta NMP, ķēdei pievienojot hem-adsorberu. Paraugi tika ņemti RNS-Seq pirms perfūzijas (0 stundas), pēc 2 stundām un beigās (4 stundas). B, galveno citokīnu koncentrācija perfūzā pēc 4 stundu ilgas NMP. Līnija norāda nieru pārus. Citokīnu mērījumi tika normalizēti līdz kopējam perfūzāta proteīna saturam. Norādītā P vērtība ir iegūta no pāra t-testa, lai samazinātu citokīnus, pievienojot HA. C, urīna veidošanās un nieru asins plūsma (RBF) visā perfūzijas laikā. Zaļā līnija norāda tikai NMP un oranžu, pievienojot hem-adsorber. D, Venna diagramma, kas parāda gēnu skaitu, kas izteikti ievērojami atšķirīgi, salīdzinot 2-h vai 4-h paraugus ar pirms(0-h) paraugiem. Sarkanās diagrammas ir paaugstināti regulēti gēni, bet zilās - pazemināti. Krustpunkts ir gēni, kas tiek izteikti abos laika punktos vienā virzienā. E, log2 normalizētās ekspresijas vērtības norādītajiem gēniem caur perfūziju no audu transkripta, ir norādītas standarta kļūdu joslas. F, Vulkāna diagramma NMP salīdzināšanai tikai ar NMP plus HA 4 stundu laikā. Sarkans norāda atšķirīgi izteiktus gēnus ar pielāgotu P vērtību<0.05. g,="" as="" for="">

ārstē nieru slimības cistanche ekstrakts

2.6. HA, kas saistīts ar aizkavēta transplantāta funkciju saistītā gēna paraksta samazināšanos

Gēnu kopas bagātināšanas analīze parādīja ievērojamu "TNF signalizācijas caur NFkB" ceļa samazināšanos NMP plus HA nierēs, salīdzinot ar tikai NMP (attēls 5A-B). Proti, HA klātbūtne ne tikai samazināja iekaisuma gēna ekspresijunieresbet arī palielināja OXPHOS un taukskābju metabolisma ceļus, kas abi veicina enerģijas ražošanu (5A-B attēls). Tāpēc izmaiņas gēnu ekspresijas ceļos, kas notiek ar HA, ļautu secināt, ka tā ietekme ir klīniski labvēlīga, jo tā samazināja "TNFA signālu pārraidi caur NFkB" ceļa gēniem un palielināja "OXPHOS" ceļa gēnus, kas abi bija saistīti ar īsāku DGF ilgums (2.B attēls).

Lai turpinātu izpētīt saistību starp transkripcijas izmaiņām NMP un klīniskajiem rezultātiem, mēs centāmies izveidot gēna parakstu, kas atrodas nierēs ar DGF. Mēs identificējām 100 labākos pozitīvi (UP) un negatīvi (DOWN) regulētos gēnus (sakārtoti pēc logaritmiskās izmaiņas), kas korelēja ar DGF garumu 33 klīniskā pētījuma paraugos (5.C attēls, dati S1). Mēs atklājām ievērojamu gēna paraksta bagātināšanos, kas saistīta ar palielinātu DGF garumu paraugos ar lielāku urīna izdalīšanos (5.D attēls), kas liecina, ka augsts urīna daudzums NMP laikā identificē nieres, kurām ir ilgāka DGF risks. Nebija statistiski nozīmīgas korelācijas starp DGF parakstu un gēniem, kas saistīti ar lielāku nieru asins plūsmu (attēls 5E). Pēc tam mēs novērtējām, vai un kā HA pievienošana NMP ķēdei ietekmēja DGF "UP" un "DOWN" gēnu parakstu ekspresiju. Jāatzīmē, ka tas parādīja, ka ar palielinātu DGF garumu saistītā gēna paraksta ekspresija tika ievērojami samazināta, pievienojot HA, un paraksts, kas saistīts ar samazinātu DGF garumu, tika ievērojami palielināts, pievienojot HA (attēls 5F).

Kopumā mūsu identificētās transkripcijas izmaiņas liecina, ka NMP ir potenciāls ieguvums salīdzinājumā ar aukstuma uzglabāšanu, jo tas ietekmē enerģijas ražošanu nierēs. Tomēr perfūzijas laikā dažas bioaktīvās molekulas tiek atbrīvotas no nierēm perfūzijas ķēdē, radot pastiprināšanas cilpu, kas izraisa iekaisumu, kad tās atkārtoti nonāk nierēs. Šo molekulu noņemšana pārtrauc šo cilpu un var būt noderīga, lai samazinātu iekaisumu un palielinātu enerģijas ražošanu, vēl vairāk pastiprinot NMP labvēlīgo ietekmi un samazinot uzņēmību pret DGF (6. attēls).

5. ATTĒLS Šķiņķa adsorbera pievienošana samazina ar DGF saistīto gēna parakstu. GSEA analīze par HA pievienošanas ietekmi transkriptam pēc 4 stundām NMP pret ģenētisko kopu pazīmju ceļu. Uzzīmēti tikai nozīmīgi ceļi. Sarkanie punkti norāda uz pozitīvu bagātināšanu un zili negatīvu, punkta lielums ir apgriezti korelēts ar FDR q vērtību, un pozīcija norāda normalizēto bagātināšanas rādītāju (NES). B. Bagātināšanas diagrammas no GSEA galvenajiem ceļiem no Hallmark datu bāzes, lai salīdzinātu ar A. Līnija norāda esošo bagātināšanas punktu skaitu, un vijoles diagramma norāda gēnu kopas locekļu gēnu sadalījumu visā sarindotajā gēnu sarakstā, ko izmanto katrā analīzē. C, karstuma karte par četrām lielākajām pozitīvām (UP) un negatīvajām (DOWN) korelācijām ar DGF garumu un tiek izmantota kā daļa no DGF gēnu ekspresijas paraksta. Pilns DGF paraksts norādīts papildu datos. DF, DGF saistītais gēna paraksts tika izmantots kopā ar GSEA, lai izpētītu paraksta izpausmi korelācijā starp 2-h urīna izvadīšanu ar 2-h transkriptu (D), korelāciju ar 2-h RBF. ar 2-h transkriptu (E) un HA pievienošanas ietekmi uz transkriptu pēc 4 stundām (F). Sižeti kā A

6. ATTĒLS Grafisks kopsavilkums. A, Uzglabāšanas aukstumā laikā transkripcija tiek samazināta visā pasaulē. NMP laikā gēnu ekspresija vairākos ceļos tiek regulēta, ieskaitot oksidatīvo fosforilāciju (OXPHOS) un iekaisuma ceļa gēnus, piemēram, TNF, IL8 un NFkB. B kreisais panelis, NMP laikā iekaisuma mediatori (dzelteni apļi) tiek atbrīvoti nonieresperfūzijas šķīdumā. Tie recirkulē un stimulē pro-iekaisuma gēnu transkripciju nierēs, un tie ir saistīti ar enerģijas ceļa ražošanas gēnu samazināšanos, samazinot ATP. Labais panelis. Apmales adsorbera (HA) klātbūtne pārtrauc šo iekaisuma pastiprināšanas cilpu

Cistanche augs uzlabo nieru darbību

3. DISKUSIJA

Mūsu dati liecina, ka uzglabāšana aukstumā ir efektīva, lai ierobežotu būtiskas izmaiņas gēnu ekspresijā. Tas atbilst grauzēju modeļiem, kur nierēs, kas uzglabātas aukstumā līdz 18 stundām, bija nelielas izmaiņas iekaisuma veicinošo citokīnu, tostarp IL1 , TNF un IL6, ekspresijā.26 Mēs izmantojam objektīvu, globālu transkripcijas profilēšanu, nevis neliela skaita kandidātu gēnu mērīšana ļāva mums analizēt konkrētos ceļos atrasto gēnu grupu ekspresiju. Tas atklāja būtisku OXPHOS un glikolīzes ceļa gēnu ekspresijas samazināšanos aukstumā uzglabātās nierēs, potenciāli samazinot šo nieru spēju radīt ATP, saskaņā ar iepriekšējo pētījumu, kas liecina par ATP samazināšanos aukstumā uzglabātās cilvēka nierēs.27 Pro-iekaisuma ceļi tika arī pazemināti uzglabāšanas laikā aukstumā, tostarp TNF aktivācija caur NFkB un reaktīvo skābekļa sugu ceļi, kas var būt potenciāli labvēlīgi. Tomēr var gadīties, ka uzglabāšana aukstumā tikai īslaicīgi bloķē šos ceļus un ka pēc reperfūzijas saņēmējā notiktu līdzīgas izmaiņas iekaisuma gēnu ekspresijā, kā novērots NMP.

NMP bija pretējs efekts aukstuma uzglabāšanai uz OXPHOS un glikolīzes ceļa gēniem, palielinot to ekspresiju, ar potenciālu palielināt šūnu spēju radīt ATP un atjaunot homeostāzi. Jāatzīmē, ka ir pierādīts, ka cilvēka nieru hipotermiskā skābekļa perfūzija palielina ATP līmeni, salīdzinot ar aukstuma uzglabāšanu 27, tāpēc skābekļa atjaunošana var būt galvenais šo procesu stimuls, nevis normotermija. Neskatoties uz to, šīs izmaiņas, visticamāk, būs labvēlīgas orgānam, ņemot vērā mūsu novērojumus par negatīvu korelāciju starp palielinātu OXPHOS ceļa gēnu ekspresiju un ilgstošu DGF.

Nesenajā Hameed et al28 dokumentā tika veikta arī NMP transkriptomiskā analīze trīs nierēs, kurām tika veikta NMP. Diemžēl autori savus datus nedarīja publiski pieejamus, tāpēc padziļināts salīdzinājums ar mūsu datu kopu nav iespējams. Tomēr viņu manuskripts norādīja uz imūnreakciju saistītu gēnu indukciju NMP laikā, tostarp IL1B, CXCL2 un TNF, kas atbilst mūsu atklājumiem.

Analizējot nieres, kurām tiek veikta NMP klīniskā pētījuma kontekstā, mēs korelējām gēnu ekspresijas parakstus ar DGF garumu, nevis ar DGF sastopamību (definēts kā nepieciešamība pēc dialīzes pirmajā nedēļā pēc transplantācijas). Proti, nieres, kuru DGF ilgums bija 1 diena vai mazāk, bija ļoti līdzīgas nierēm, kurām nebija DGF, iespējams, atspoguļojot dialīzes nepieciešamību perioperatīvās hiperkaliēmijas dēļ, nevis bona fide DGF. Mēs noskaidrojām, ka garāks DGF bija saistīts ar augstāku TNFA signālu ekspresiju, izmantojot NFkB ceļa gēnus, un zemāku gēnu ekspresiju, kas saistīti ar OXPHOS. Šie dati liecina, ka nierēm ar paaugstinātu OXPHOS un samazinātu imūno signalizāciju var būt labāks potenciāls kā donoru nierēm, taču šis secinājums ir jāapstiprina plašākā perspektīvā pētījumā.

Mēs arī novērtējām molekulāros procesus, kas korelē ar urīna izdalīšanos un nieru asinīm NMP laikā. Šie parametri iepriekš tika izmantoti kopā ar vairākiem citiem pasākumiem, lai izveidotu perfūzijas nieru kvalitātes novērtējuma punktu. Tiek uzskatīts, ka augstas urīna izdalīšanās un nieru asins plūsmas vērtības atspoguļo dzīvotspējīgāku transplantātu.15 Mūsu dati atklāj, ka ceļi, kas korelē ar lielu urīna izdalīšanos un augstu nieru asins plūsmu, atšķiras, un patiesībā šie parametri parāda polāri pretēju saistību ar iekaisuma ceļiem. . Augsta urīna izdalīšanās bija saistīta ar augstāku imūnceļu gēnu ekspresiju, savukārt augsta nieru asins plūsma bija negatīvi korelēta ar šiem ceļiem. Mēs arī atklājām, ka mūsu radītais DGF gēna paraksts tika bagātināts ar nierēm ar augstu urīna izdalīšanos NMP laikā, kas liecina, ka šis parametrs var identificēt nieres, kurām ir ilgāka DGF risks, atšķirībā no pašreizējās dogmas. Viens no iespējamiem izskaidrojumiem ir tas, ka ļoti liela urīna izdalīšanās atspoguļo nieres ar vairāk kanāliņu bojājumiem, kurām trūkst spējas koncentrēt urīnu. Tādējādi attiecībā uz urīna izdalīšanos var būt "zeltšķiedras efekts", kur nierēs ar zemu/mazu urīna izdalīšanos ir būtiskas novirzes filtrāta veidošanā, bet nierēm ar ļoti lielu urīna izdalīšanos ir būtiski cauruļveida bojājumi, kas izslēdz urīna koncentrāciju. Šī hipotēze būtu jāpārbauda lielākā skaitā nieru, kuras pēc tam tika pārstādītas.

4 stundu NMP laikā nierēs notika iekaisuma gēnu indukcija. Tomēr ir vērts atzīmēt, ka pašreizējā klīniskā prakse ietver tikai 1 stundu NMP, un šī ietekme var nebūt pamanāma īsākā perfūzijas laikā. Tomēr ilgākai perfūzijai var būt priekšrocības skābekļa atjaunošanas un enerģijas ražošanas ziņā, un mūsu eksperimentā imūngēnu indukcijas negatīvo ietekmi var būtiski noliegt, ievadot citozola HA perfūzijas ķēdē. Šie dati liecina, ka iekaisuma mediatori, ko nieres rada NMP laikā, nonāk perfūzijas ķēdē un spēj saasināt sterilu iekaisumu un ka to noņemšana uzlabo NMP laikā novēroto iekaisuma ceļa gēnu indukciju. Svarīgi, ka mēs parādījām, ka HA pievienošana ietekmē gēnu ekspresiju, kas klīniski saistīti ar sliktākiem rezultātiem. Mūsu DGF gēna paraksts tika iegūts no paraugiem, kuriem tika veikta NMP kā daļa no klīniskā pētījuma, kurā tika novērtēta tā efektivitāte, ļaujot mums stingri saistīt izmaiņas, ko novērojām mūsu pāra nieru pētījumos, ar klīniskajiem galapunktiem nierēs, kurām tiek veikta transplantācija. Tomēr tā izmantošana klīniskā izmēģinājuma kontekstā būs nepieciešama, lai galīgi pierādītu tā lietošanas lietderību nierēm pirms transplantācijas. HA ir nespecifisks un var noņemt molekulas, kas ir noderīgas, papildus tām, kas kaitē orgānam. Mēs atklājām, ka HA tīrā ietekme uz nieru transkriptu izrādījās labvēlīga, taču var būt, ka precizējums, lai īpaši noņemtu pārbaudītus, kaitīgos mediatorus, var būt vēl efektīvāks.

Nieru pāri, kurus mēs izmantojām, bija no viena un tā paša indivīda, un tāpēc tie bija ģenētiski identiski un bija piedzīvojuši līdzīgu vidi visā donora dzīves laikā. Mēs apstiprinājām, ka viņu laika 0 transkripts bija ļoti līdzīgs (S2 A, B attēls). Tomēr šajās biopsijās tiek ņemta neliela nieres daļa, un nieru pārus var asimetriski ietekmēt patoloģija, piemēram, cistas vai mazo asinsvadu slimība. Papildu brīdinājums ir tāds, ka visas šeit aprakstītajos intervences eksperimentos izmantotās nieres tika noraidītas transplantācijai, un dažas pārstāv transplantētos orgānus kvalitātes spektra apakšējā daļā. Neskatoties uz to, mēs novērojām ļoti reproducējamus rezultātus, salīdzinot gēnu ceļus piecu nieru grupās. Mēs arī varējām pierādīt, ka DCD un DBD nierēm bija līdzīga reakcija uz perfūziju. Apvienojot to ar mūsu izveidoto pēc NMP DGF parakstu, mēs varējām paredzēt iespējamos klīniskos ieguvumus. Šo eksperimentālo pieeju varētu izmantot kā preklīnisku instrumentu, lai pārbaudītu turpmākās iejaukšanās iespējamo terapeitisko efektivitāti, lai ļautu racionāli atlasīt intervences kandidātus klīniskajiem pētījumiem.

Rezumējot, mūsu pētījums sniedz pirmo globālo transkripcijas profilu cilvēka nierēm, kurām tiek veikta NMP, atrisinot dažādus molekulāros ceļus, kas tiek aktivizēti NMP, salīdzinot ar aukstuma uzglabāšanu, un parādot, ka NMP laikā ražoto vai no nierēm atbrīvoto bioaktīvo molekulu kaitīgā ietekme var var mainīt, pievienojot HA. Turklāt šī iejaukšanās samazināja ar ilgstošu DGF saistīto gēnu ekspresiju, nodrošinot spēcīgu mehānisku pamatojumu šādas iejaukšanās piemērošanai turpmākajā klīniskajā pētījumā. Mūsu dati ietekmē arī perfūzijas stratēģijas ārpus nierēm, tostarp aknu un plaušu transplantācijas gadījumā, kas liecina, ka bioaktīvo molekulu noņemšana no perfusātiem ir jāizpēta šajos kontekstos, kur arvien vairāk tiek izmantots NMP. Visbeidzot, mūsu pētījums izceļ globālās transkripcijas profilēšanas lietderību pārīniereslai novērtētu jaunas iejaukšanās perfūzijas orgānos; transkripcijas izmaiņas notiek pirms izmaiņām olbaltumvielu pārpilnībā (tradicionāli izmanto kā biomarķierusnierestraumas) un var viegli izmērīt desmitiem tūkstošu gēnu transkriptu. Tādējādi RNS mērījumiem ir potenciāls nodrošināt agrīnu, jutīgu transplantācijai iegūto cilvēka orgānu šūnu funkcijas nolasījumu, ko var izmantot turpmākajos pētījumos.

PATEICĪBA

Autori pateicas visiem orgānu donoriem un viņu ģimenēm. Clatworthy Lab ir pateicīgs par galvenajām iespējām, ko nodrošina MRC Molekulārās bioloģijas laboratorija. Šis darbs tika veikts, izmantojot resursus, ko nodrošina Cambridge Service for Data-Driven Discovery (CSD3), ko pārvalda Kembridžas Universitātes Pētniecības skaitļošanas dienests, ko nodrošināja Dell EMC un Intel, izmantojot Tier{2}} finansējumu no Inženierzinātņu un fizikālo zinātņu pētniecības. Padome (kapitāla dotācija EP/P020259/1) un DiRAC finansējums no Zinātnes un tehnoloģiju iekārtu padomes (www. Dirac. ac. Apvienotā Karaliste).

ATKLĀŠANA

Autoriem nav interešu konflikta, ko atklāt, kā aprakstīts American Journal of Transplantation.

AUTORU IEGULDĪJUMI

JRF, SH, MLN un MRC izstrādāja pētījumu un interpretēja datus. JRF, SH, TM, CJW, AF un TCD veica eksperimentus. JRF, SH un MRC izveidoja attēlus un tabulas. MRC uzrakstīja galveno manuskriptu. JRF un SH izveidoja metodes un figūru leģendas, JRF, SH un MLN rediģēja manuskriptu.

Cistanche ieguvums: uzlabo nieru darbību

Atsauces:
1. Methven S, Steenkamp R, Fraser S. Apvienotās Karalistes nieru reģistra 19. gada pārskats: 5. nodaļa Apvienotās Karalistes pieaugušo pacientu izdzīvošana un nāves cēloņi nieru aizstājterapijā 2015. gadā: Nacionālās un centra specifiskās analīzes. Nefrons. 2017;137(1):117–150.
2. Summers DM, Johnson RJ, Allen J u.c. To faktoru analīze, kas ietekmē iznākumu pēc nieru transplantācijas, kas ziedoti pēc sirds nāves Apvienotajā Karalistē: kohortas pētījums. Lancete. 2010;376(9749):1303–1311.
3. Summers DM, Johnson RJ, Hudson A, Collett D, Watson CJ, Bradley JA. Donora vecuma un aukstuma uzglabāšanas laika ietekme uz iznākumu nierēm, kas ziedotas pēc asinsrites nāves Apvienotajā Karalistē: kohortas pētījums. Lancete. 2013;381(9868):727–734.
4. Friedewald JJ, Rabb H. Iekaisuma šūnas išēmiskas akūtas nieru mazspējas gadījumā.NieresInt. 2004;66(2):486–491.
5. Kono H, Rock KL. Kā mirstošās šūnas brīdina imūnsistēmu par briesmām. Nat Rev Immunol. 2008;8(4):279–289.
6. Berry M, Clatworthy MR. Imūnterapija akūtunieresievainojums. Imūnterapija. 2012;4(3):1–12.
7. Parikh CR, Coca SG, Thiessen-Philbrook H u.c. Pēcoperācijas biomarķieri prognozē akūtunierestraumas un slikti rezultāti pēc pieaugušo sirds operācijas. J Am Soc Nephrol. 2011;22(9):1748–1757.
8. Halle IE, Yarlagadda SG, Coca SG u.c. IL-18 un urīna NGAL prognozē dialīzi un transplantāta atveseļošanos pēc tamnierestransplantācija. J Am Soc Nephrol. 2010;21(1):189–197.
9. Malyszko J, Lukaszyk E, Glowinska I, Durlik M. Biomarkers of delayed graft function as a form of acutenieresievainojums iekšānierestransplantācija. Sci Rep. 2015;5:11684.
10. Hosgood SA, Nicholson ML. Pirmā cilvēka nieru transplantācija pēc ex vivo normotermiskās perfūzijas. Transplantācija. 2011;92(7):735–738.
11. Yong C, Hosgood SA, Nicholson ML. Ex vivo normotermiskā perfūzija nieru transplantācijā: pagātne, tagadne un nākotne. Curr Opin orgānu transplantācija. 2016;21(3):301–307.
12. Fisher A, Andreasson A, Chrysos A u.c. Novērošanas pētījums par donoru Ex Vivo plaušu perfūziju Apvienotās Karalistes plaušu transplantācijā: DEVELOP-UK. Veselības tehnoloģiju novērtējums. 2016; 20(85):1–276.
13. Slama A, Schillab L, Barta M u.c. Standarta donoru plaušu ieguve ar normotermisku ex vivo plaušu perfūziju: perspektīvs randomizēts klīniskais pētījums. J Sirds plaušu transplantācija. 2017;36(7):744–753.
14. Nasralla D, Coussios CC, Mergental H u.c. Randomizēts pētījums par normotermisko saglabāšanu aknu transplantācijas gadījumā. Daba. 2018;557(7703):50–56.
15. Barlow AD, Hamed MO, Mallon DH u.c. Ex vivo normotermiskās perfūzijas izmantošana izmestu cilvēka donoru aizkuņģa dziedzera kvalitātes novērtēšanai. Esmu J Transplantācija. 2015;15(9):2475–2482.

16. Hosgood SA, Saeb-Party K, Hamed MO, Nicholson ML. Veiksmīga cilvēka nieru transplantācija, kas tika uzskatīta par netransplantējamu, bet tika atdzīvināta ar Ex Vivo normotermiskās iekārtas perfūziju. Esmu J Transplantācija. 2016;16(11):3282–3285.
17. Hosgood SA, Saeb-Party K, Wilson C, Callaghan C, Collett D, Nicholson ML. Protokols randomizētam, kontrolētam, atklātam pētījumam par normotermisko perfūziju ex vivo pret statisku aukstuma uzglabāšanu ziedot pēc asinsrites izraisītas nāves nieru transplantācijas. BMJ Open. 2017;7(1):e012237.
18. Hosgood SA, Moore T, Kleverlaan T, Adams T, Nicholson ML. Hemoadsorbcija samazina iekaisuma reakciju un uzlabo asins plūsmu ex vivo nieru perfūzijas laikā eksperimentālā modelī. J Transl Med. 2017;15(1):216.
19. Krebs HA. Trikarbonskābes cikla vēsture. Perspect Biol Med. 1970;14(1):154–170.
20. Hoogland ER, de Vries EE, Christiaans MH, Winkens B, Snoeijs MG, van Heurn LW. Mašīnas perfūzijas biomarķiera koncentrācijas vērtība DCDnierestransplantācijas. Transplantācija. 2013;95(4):603–610.
21. van Balkom BWM, Gremmels H, Ooms LSS u.c. Proteīni konservēšanas šķidrumā kā aizkavētas transplantāta funkcijas prognozētāji nierēs no donoriem pēc asinsrites nāves. Clin J Am Soc Nephrol. 2017;12(5):817–824.
22. Kogelmann K, Jurczak D, Scheller M, Druner M. Hemoadsorbtion by CytoSorb in septic patients: a case series. Kritu aprūpe. 2017; 21(1):74.
23. David S, Thamm K, Schmidt BMW, Falk CS, Kielstein JT. Ekstrakorporālās citokīnu noņemšanas ietekme uz asinsvadu barjeras funkciju septiskā šoka pacientam. J Intensīvā aprūpe. 2017;5:12.
24. Li L, Huang L, Vergis AL u.c. IL-17, ko ražo neitrofīli, regulē IFN-gamma mediētu neitrofilu migrāciju pelēmnieresišēmijas-reperfūzijas bojājums. J Clin Invest. 2010;120(1):331–342.
25. Hayama T, Matsuyama M, Funao K u.c. Neitrofilu elastāzes inhibitora labvēlīgā ietekme uz nieru siltiem išēmijas-reperfūzijas bojājumiem žurkām. Transplantācijas proc. 2006;38(7):2201–2202.
26. Saat TC, Susa D, Roest HP u.c. Iekaisuma, citoprotektīvo un traumu gēnu ekspresijas profilu salīdzinājums nierēs no smadzeņu nāves un sirds nāves donoriem. Transplantācija. 2014;98(1):15–21.
27. Ravaioli M, Baldassare M, Vasari F u.c. Stratēģijas adenozīna trifosfāta (ATP) līmeņa atjaunošanai pēc vairāk nekā 20 stundām aukstā išēmijas laika cilvēka robežāsNieresPotējumi. Annas transplantācija. 2018;23:34–44.
28. Hameed AM, Lu DB, Patrick E u.c. Īsa normotermiskā aparāta perfūzija atjauno izmestās cilvēka nieres. Transplant Direct. 2019;5(11):e502.