Angiotenzīna II I tipa receptoru ShRNS ietekme uz asinsspiedienu un kreisā kambara remodelāciju spontāni hipertensīvām žurkām

Abstract:

Šis pētījums tika izstrādāts, lai izpētītu angiotenzīna II I tipa receptoru (AT1R) shRNS ietekmi uz asinsspiedienu un kreisā kambara remodelāciju žurkām ar spontāni hipertensiju. Desmit Wistar Kyoto (WKY) žurkas tika izmantotas kā normāla asinsspiediena kontroles grupa, un 20 spontāni hipertensīvas žurkas (SHR) tika nejauši sadalītas eksperimentālajā un hipertensijas kontroles grupā. Eksperimentālās grupas žurkām caur astes vēnu tika injicēts AT1R shRNS rekombinants adenovīruss (Ad5-AT1R-shRNS), bet pārējo divu grupu žurkām tika ievadīts rekombinants adenovīruss (Ad5-EGFP). ). Sistoliskais asinsspiediens (SBP) žurkas arteria caudalis tika mērīts pirms un pēc injekcijas, un sirds, nieres, aorta un virsnieru audi tika iegūti divas dienas pēc atkārtotas injekcijas, lai novērotu Ad5-AT1R- izplatību. shRNS fluorescences mikroskopā. Pirms Ad5-AT1R-shRNS injekcijas eksperimentālās grupas un hipertensijas kontroles grupas asinsspiediens bija ievērojami augstāks nekā normālā asinsspiediena kontroles grupā (P<0.01). After two injections, the blood pressure in the experimental group decreased significantly, and the duration of blood pressure reduction reached 19 days. In the experimental group, the kidney, heart, aorta, and adrenal gland tissues showed vigorous fluorescence expression under the fluorescence microscope. Repeated administration of Ad5- AT1R-shRNA has a long-lasting hypotensive effect on SHR and can significantly improve ventricular remodeling.

Eksperimentālajā pētījumā ar žurkām mēs arī atklājām, ka Cistanche ir aizsargājoša iedarbība uz nierēm, kas var novērst nieru bojājumus un uzlabot nieru darbību. Tostarp Cistanche var samazināt glomerulu un nieru kanāliņu oksidatīvā stresa reakciju un samazināt brīvo radikāļu līmeni nieru audos. Turklāt Cistanche var arī samazināt nieru iekaisuma reakciju un veicināt nieru šūnu atjaunošanos un atjaunošanos.

Noklikšķiniet uz tīra cistanche produkta

Ievads

Ventrikulāra (vai miokarda) remodelācija ir koncepcija, kas ierosināta išēmiskās kardiomiopātijas, hipertensīvās sirds slimības, dilatācijas kardiomiopātijas un citu sirds bojājumu veidu pētījumos, kurus galvenokārt raksturo izmaiņas pēc miokarda traumas, piemēram, kardiomiocītu hipertrofija, ne-miocītu. proliferācija un miokarda fibroze, kā arī sirds dobuma paplašināšanās un sirds masas palielināšanās, pamatojoties uz to [1]. Sirds hipertrofija ir visizplatītākās hipertensijas patoloģiskās izmaiņas, kur hipertrofiskā miokardā bieži parādās vairākas subcelulārās morfoloģijas un struktūras izmaiņas.

Iepriekšējais pētījums ir apstiprinājis, ka RAS sistēmas (renīna-angiotenzīna sistēmas) pārmērīgai aktivizēšanai ir izšķiroša nozīme hipertensīvās ventrikulārās remodelācijas patoloģiskajā procesā, pateicoties vazopresora funkcijai, šūnu augšanai un proliferāciju veicinošai iedarbībai [2]. Ang II ir galvenā RAS aktīvā viela, un tā var radīt bioloģisku iedarbību, īpaši aktivizējot AT1R, kam ir augsta afinitāte uz sirds fibroblastu virsmu [3]. Turklāt Ang II piemīt arī zināms augšanas faktoram līdzīgs efekts, un tas var tieši veicināt RNS un proteīna sintēzi kardiomiocītos, lai veicinātu šķiedru šūnu proliferāciju, izraisot kambaru remodelāciju [4].

Turklāt RNS traucējumu tehnoloģija attiecas uz shRNS izmantošanu, lai šūnās ražotu aktīvu RNS īsu interferējošu RNS (siRNS) un specifiski saistās un degradē komplementāro mērķa gēnu mRNS, lai kavētu mērķa gēna ekspresiju [5]. Rekombinantais adenovīrusa vektors (Ad5-AT1R-shRNS), kas izstrādāts, pamatojoties uz RNS iejaukšanās principu, īpaši bloķēja AT1R ekspresiju, un iepriekšējos pētnieku veiktajos antihipertensīvos pētījumos ir bijis ievērojams hipotensīvs efekts [6–8]. Tomēr kā salīdzinoši jauna hipertensijas gēnu terapijas forma nav zināms, vai tā ietekmē hipertensijas izraisītu sirds kambaru pārveidošanu, un nav ziņots par atkārtotas intravenozas injekcijas sekām un blakusparādībām.

Šajā pētījumā par eksperimentālajiem subjektiem tika izvēlētas spontāni hipertensīvas žurkas (SHR), asinsspiediens un SHR ventrikulārā pārveide tika novērota pēc atkārtotas Ad5-AT1R-shRNS injekcijas, lai izpētītu AT1R gēnu bloķēšanas ietekmi. ko izraisa Ad5-AT1R-shRNS uz hipertensijas remodelāciju.

Materiāli un metodes

Zāles, reaģenti un instrumenti

Ad5-AT1R-shRNS un kontroles rekombinanto adenovīrusa vektoru (Ad5-EGFP), kas satur angiotenzīna II 1. tipa receptoru (AT1R) shRNS, konstruēja un sintezēja uzņēmums Benyuan-Zhengyang Gene Technology Co., Ltd. (Pekina, Ķīna). Hidroksiprolīna (HYA) noteikšanas komplekts tika iegādāts no Nanjing Jiancheng Bioloģiskās inženierijas institūta. Neinvazīvo asinsspiediena instrumentu žurkas astes artērijai (PowerLab, ADInstruments, Jaundienvidvelsa, Austrālija) nodrošināja mūsu koledžas Kardioloģijas laboratorija. 722 režģa spektrofotometrus izgatavoja Šanhajas trešā analītisko instrumentu rūpnīca (Šanhaja, Ķīna). Transmisijas elektronu mikroskops (Fei Tecnai G2 12 tipa transmisijas elektronu mikroskopija, FEI Company, Hillsboro, OR, ASV) tika nodrošināts Huazhong Zinātnes un tehnoloģijas universitātes Tongji Medicīnas koledžas elektronu mikroskopa telpā. Pašreizējo pētījumu ir apstiprinājusi Tian Jin Chest slimnīcas ētikas komiteja.

Dzīvnieku grupēšana un administrēšana

Pieaugušie SHR un Wistar Kyoto (WKY) žurku tēviņi bija 12 nedēļas veci un svēra 280–320 g. Katrā būrī bija 3–5 žurkas, istabas temperatūra tika uzturēta 24 ± 2 grādu robežās, un relatīvais mitrums tika uzturēts 60–65 procentu līmenī. Tika nodrošināts 12-h mākslīgais dienas un nakts cikls, kurā 7:00 PM–7:00 PM norādīja cikla apgaismoto daļu, bet 7:00 PM –7:00 AM norādīja cikla tumšo daļu. Žurkas varēja brīvi ēst un dzert. Žurku grupās bija normāla asinsspiediena kontroles grupa (WKY grupa, n=10), hipertensijas kontroles grupa (SHR grupa, n=10) un hipertensijas eksperimentālā grupa (eksperimentālā grupa, n{ {20}}).

Eksperimentālās grupas žurkām caur astes vēnu intravenozi injicēja 1 ml Ad5-AT1R-shRNS ar titru TCID50 1,7 × 109, bet žurkām SHR un WKY grupās. tika intravenozi injicēti ar 1 ml Ad5-EGFP ar TCID50 1,7 × 109 titru caur astes vēnu. Injekcijas laiks notika eksperimenta sākumā un tad, kad asinsspiediens bija atgriezies sākotnējā stāvoklī pēc pirmās injekcijas.

Visām žurkām katrā grupā tika ņemti aptuveni 80–90 g miokarda audu, un operācija tika veikta stingri saskaņā ar hidroksiko3īna noteikšanas komplekta norādījumiem.

Asinsspiediena un sirdsdarbības mērīšana un izmēģinājumu dzīvnieku novērošana

Astes artērijas sistoliskais asinsspiediens (SBP) un sirdsdarbības ātrums tika mērīts ar astes manžetes metodi klusā vidē 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19 un 21 injekcijas diena. Šīs žurkas aste tika uzkarsēta līdz aptuveni 40 grādiem un fiksēta ērtā stāvoklī. Kompresijas aproce tika novietota žurkas astes saknē, uzpūsta un pakļauta spiedienam. Kad spiediens sasniedza 270 mm Hg (1 mm Hg=0.133 kPa), spiediens tika samazināts automātiski un lēni, un asinsspiedienu un sirdsdarbības ātrumu reģistrēja Medlab bioloģisko funkciju eksperimentu sistēma, kas savienota ar spiediena devēju. un pastiprinātājs. Visas žurkas tika mērītas piecas reizes nepārtraukti, un vidējie rādītāji tika aprēķināti un izmantoti kā SBP un ​​sirdsdarbības ātrums. Dzīvnieku apetīte, aktivitāte, ķermeņa temperatūra, ķermeņa svars (BW) un citas reakcijas tika novērotas katru dienu līdz eksperimenta beigām.

Rekombinantā adenovīrusa vektora izplatības noteikšana galvenajos audos

Eksperimentālās grupas dzīvniekiem injicēja Ad{{0}}AT1R-shRNS, kas marķēta ar fluorescējošu proteīnu. Divas dienas pēc atkārtotas Ad5-AT1R-shRNS injekcijas tika iegūti eksperimentālās grupas sirds, nieres, aortas un virsnieru audi un pēc tam tie nekavējoties sagatavoti saldētās sekcijās. Fluorescences ekspresija tika novērota fluorescences mikroskopā. Kad asinsspiediens tika pazemināts, daži dzīvnieki tika upurēti un nosvērti. Dzīvniekiem anestēzijai peritoneāli injicēja 0,4 ml/100 g pentobarbitāla, un ātri tika izņemti sirds, nieres, aortas un virsnieru audi. Ar asu asmeni šie orgāni tika sagriezti 1 × 1 × 1 cm mazos audu gabaliņos un tika nosūtīti uz Patoloģijas nodaļu, kur tos sagatavoja saldētās sekcijās. To biezums tika mērīts no 5 līdz 8 µm, un fluorescences proteīna ekspresija tika novērota fluorescences mikroskopā, lai novērtētu Ad5-AT1R-shRNS uzsūkšanos galvenajos orgānos.

Miokarda paraugu sagatavošana

Eksperimenta beigās tika izmērīts žurku ķermeņa svars. Žurkām anestēzijai peritoneāli injicēja {{0}},4 ml/100 g pentobarbitāla. Pēc krūškurvja atvēršanas tika ātri izņemta sirds, nogriezti apkārtējie asinsvadi, sirds asinis nosusinātas ar filtrpapīru, nosvērts viss sirds mitrais svars (HW) un sirds svara attiecība pret ĶW (HW/ BW) tika aprēķināts [9, 10]. Daži 1-mm3 miokarda audu gabali tika ņemti no apikālā reģiona, noskaloti ar 0,1 mol/l fosfātu buferšķīdumu (PBS), pēc tam sākotnēji fiksēti ar 2,5% glutaraldehīdu (pH 7,2). Pēc tam tos fiksēja ar 1% osmija tetroksīda šķīdumu (pH 7,2), dehidrēja ar augošu gradientu spirtu un acetoniem, iemērc un iestrādāja epoksīdsveķos un sagatavoja īpaši plānās sekcijās. HYA mērīšanai tika ņemti vēl 60–100 g kreisā kambara miokarda.

Novērošanas indeksi

Astes artērijas SBP klusā nomoda stāvoklī tika reģistrēts pirms injekcijas un visos laika punktos pēc injekcijas. Tika ņemti apmēram 80–90 g miokarda audu, un HYA saturs miokarda audos tika noteikts ar bioloģisku metodi saskaņā ar HYA noteikšanas komplekta norādījumiem un pēc tam pārveidots par kolagēna saturu pēc formulas: kolagēns. saturs=HYA saturs × 7,46 [11]. Tika reģistrēts žurku BW un HW, un tika aprēķināta HW / BW attiecība. Īpaši plānās sekcijas tika iekrāsotas gan ar uranilacetātu, gan svina citrātu un novērotas un fotografētas transmisijas elektronu mikroskopijā.

AT1R mRNS ekspresijas noteikšana ar reāllaika fluorescējošu kvantitatīvu polimerāzes ķēdes reakciju (RT-qPCR)

Eksperimenta beigās no visām grupām tika paņemti {{0}},5 g kreisā kambara audu, lai noteiktu AT1R mRNS ekspresiju. Žurkas AT1R gēna secība tika atlasīta GenBank (sērijas numurs NM_030685), un praimeri un zondes tika izstrādātas, izmantojot Primer Premier 5.0, un sintezēja Sangon Biotech (Šanhaja, Ķīna). AT1R augšējais primers bija 5'-ACG ATG CTG GTG GCC AAA GT -3', bet pakārtotais primers bija 5'-ATG ATA AGG AAA GGG AAC AAG AAG C -3'. Zondes secība bija 5'-ATT ATG AGT CTC GGAATT CGA CGC TCC CCA-3', un zondes modifikācija bija 5'-FAM, 3'-TAMRA, 3'-PO4. -aktīna augšējais primers bija 5'-AGG GAA ATC GTG CGT GAC AT -3', un pakārtotais primers bija 5'- CCA TAC CCA GGA AGG AAG GCT-3'. Zondes secība bija 5'-CAC TGC CGC ATC CTC TTC CTC CCT GG-3', un zondes modifikācija bija 5'-FAM, 3'-TAMRA, 3'-PO4.

Kopējā RNS tika ekstrahēta no audiem, izmantojot Trizol vienpakāpes metodi, un ar Moloney peles leikēmijas vīrusa (MMLV) reversās transkripcijas sistēmu apgriezti transkribēja cDNS. Standarta līknes paraugu sagatavošana sastāvēja no parauga mērķa gēna un mājturības gēna (-aktīna), kas bija jāpastiprina ar PCR (polimerāzes ķēdes reakciju). Produkts tika atšķaidīts ar gradientu, lai izveidotu standarta līkni. PCR reakcijas sistēma bija 2 µl 10 × buferšķīduma, 2 µl MgCl2 un 0,5 µl dNTP. Bija {{10}},5 µl augšpus praimera, 0,5 µl pakārtotā praimera, 1 µl zondes, 0,4 µl Taq enzīma un 2 µl reakcijas veidnes un sterili dejonizēti. tika pievienots ūdens, līdz tilpums sasniedza 20 µl. PCR sistēma tika ievietota fluorescējošā PCR mēģenē, tika veikta amplifikācija, un fluorescences signāli tika savākti ar Rotor-gēna fluorescences kvantitatīvo PCR detektoru. Reakcijas apstākļi bija šādi: 95 grādi, 5 min; 94 grādi , 5 s; 60 grādi, 30 s, kopā 45 veikti cikli. Pēc tam tika savākti fluorescējošie signāli, un rezultāti tika analizēti.

Lai vēl vairāk novērstu mRNS kvantitatīvās noteikšanas un PCR reakcijas efektivitātes ietekmi uz eksperimenta rezultātiem, vienlaicīgi tika veikta iekšējās kontroles -aktīna absolūtā kopiju skaita kvantitatīvā noteikšana, AT1R absolūtā kopiju skaita attiecība pret -aktīnu. tika izmantota kā AT1R gēna relatīvā ekspresija.

Statistiskā analīze

Datu statistiskā analīze veikta, izmantojot statistikas programmatūru SPSS 12.0. Atkārtotu mērījumu dati starp trim grupām tika analizēti, izmantojot kovariācijas analīzi. Visas datu kopas izpildīja ANCOVA veikšanas pieņēmumus. Studenta-Ņūmena-Keula (SNK)-q tests tika izmantots vairākiem salīdzinājumiem starp vairāku grupu līdzekļiem. Dati visās grupās tika izteikti kā vidējais ± SD. P<0.05 was considered statistically significant.

Rezultāti

Ad5-AT1R-shRNS ievērojami samazināja SBP SHR

Pirms injekcijas SBP bija ievērojami augstāks eksperimentālajā grupā, un SHR grupā bija augstāks nekā WKY grupā (P<0.05). Twenty-four hours after the first injection, SBP was significantly lower in the experimental group than in the SHR group (P<0.01), and="sbp=" did=" not=" decrease=" significantly=" in=" the=" shr=" group=" wky=" p=">0.05). Pēc pirmās Ad5-AT1R-shRNS injekcijas eksperimentālajā grupā hipotensīvā iedarbība ilga piecas dienas, un asinsspiediens atjaunojās 7. dienā. Pēc otrās injekcijas asinsspiediens atkal ievērojami pazeminājās, un ilgums bija ilgāks nekā pēc pirmās injekcijas, kas ilga 14 dienas (1. att.). Dzīvnieku lokālās un sistēmiskās reakcijas tika novērotas katru dienu, un netika konstatētas nekādas novirzes, piemēram, anoreksija, svara zudums un paaugstināta temperatūra. Trijās grupās nebija nozīmīgu sirdsdarbības ātruma izmaiņu, un atšķirības starp trim grupām nebija statistiski nozīmīgas.

Ad5-AT1R-shRNS ievērojami samazina AT1R mRNS ekspresiju sirds audos

Lai pārbaudītu, vai Ad5-AT1R-shRNS ietekmē RNS traucējumus AT1R mRNS ekspresijā audos, 21. dienā pēc Ad5-AT1RshRNS injekcijas tika veikta sirds audu kopējā RNS. iegūti visās grupās. Pēc reversās transkripcijas cDNS gēnu kopiju skaits tika noteikts ar reālā laika fluorescences kvantitatīvo PCR. PCR amplifikācijas līknes rezultāti atklāja, ka AT1R mRNS ekspresija eksperimentālajā grupā bija ievērojami zemāka nekā hipertensijas kontroles grupā. Turklāt atšķirība bija statistiski nozīmīga (P<0.05, Fig. 2).

Ad5-AT1R-shRNS izplatība audos

Ar fluorescenci iezīmētais rekombinantais adenovīruss tika izplatīts sirds, nieres, aortas un virsnieru audos pēc 2 dienām pēc atkārtotas Ad5-AT1RshRNS injekcijas (3. att.). Tā kā AT1R bija plaši izplatīts audos, šī pētījuma rezultāti atbilda AT1R izplatībai in vivo.

Ad5-AT1R-shRNS ievērojami samazina miokarda hipertrofiju SHR

Miokarda hipertrofijas stāvokli žurkām var atspoguļot, mērot HW un HW/BW attiecību. Izmērot žurku sirds svaru un ķermeņa svaru, šis pētījums atklāja, ka HW un HW/BW bija ievērojami augstāki SHR grupā nekā WKY grupā (P<0.01). The result suggests that there was obvious myocardial hypertrophy in untreated SHR. On the 21st day after Ad5-AT1R-shRNA injection, HW and HW/ BW were lower in the experimental group than in the SHR group (P<0.05) (Fig. 4).

Ad5-AT1R-shRNS var samazināt miokarda fibrozes pakāpi SHR

HYA un kolagēna saturs SHR grupā bija ievērojami augstāks nekā WKY grupā (P<0.01). These results suggest that obvious myocardial fibrosis has been found in the cardiac ventricle in the SHR group. The contents of HYA and collagen were significantly lower in the SHR group than in the SHR group (P<0.01) (Fig. 5).

Ad5-AT1R-shRNS būtiski uzlabo SHR miokarda ultrastruktūru

Miokarda ultrastrukturālais novērojums ar transmisijas elektronu mikroskopu parādīja, ka WKY grupā miokarda šūnu kodola membrāna bija neskarta, miofibrillas bija skaidras, izkārtojums bija glīts, šķērslīnijas bija skaidras, mitohondriji bija skaidri un to bija nav kolagēna šķiedru proliferācijas miokarda interstitijā (6.A un B att.). SHR grupā miokarda šūnu kodola membrāna nebija neskarta, miofibrillas bija izplūdušas, un izkārtojums bija neregulārs, daži miofilamenti pazuda. Varēja redzēt, ka šķērseniskās līnijas nebija skaidras, un mitohondriji bija pietūkuši un uzkrājušies. Turklāt tajā veidojās vakuoli, un miokarda intersticijā tika novērots liels skaits endoplazmatiskā tīkla hiperplāzijas un kolagēna šķiedru proliferācijas (6.C un D att.). Salīdzinot ar WKY un SHR grupām, eksperimentālajā grupā miokarda šūnu kodola membrāna bija salīdzinoši neskarta, miofibrillas bija skaidras, izvietojums bija salīdzinoši glīts, šķērseniskās līnijas bija skaidras un mitohondriji nebija pietūkuši. Tomēr mitohondriju skaits palielinājās vietējos reģionos, un miokarda interstitijā nebija acīmredzamas kolagēna šķiedru proliferācijas (6. E un F att.).

Diskusija

Šajā pētījumā mēs atklājām, ka Ad5-AT1R-shRNS var ievērojami samazināt SHR asinsspiedienu un samazināt AT1R mRNS ekspresiju sirds audos. Rekombinantajam adenovīrusa vektoram ir noteikts mērķa efekts, ko pēc astes vēnās injekcijas var absorbēt audi, kas satur AT1R. Turklāt Ad5-AT1R-shRNS var samazināt miokarda hipertrofiju SHR, uzlabot miokarda fibrozi SHR, inhibējot AT1R ekspresiju, un uzlabot miokarda ultrastrukturālās izmaiņas SHR.

Normālām žurkām SBP ir 110–120 mmHg, un SHR SBP var būt pat vairāk nekā 200 mmHg. Hipertensijas sastopamība bija 100 procenti, un šīs žurkas norādīja arī uz hipertensīvu sirds un asinsvadu slimību. Tāpēc šāda veida žurkas ir piemērotas cilvēka hipertensijas pētīšanai. Spontāni hipertensīvām žurkām parasti sāk parādīties kreisā kambara hipertrofija 10 nedēļu vecumā, kas pakāpeniski saasinās līdz ar vecumu, ievērojami palielinās kolagēna saturs miokardā un notiek miokarda fibroze un miokarda intersticiāla pārveidošana [12, 13]. Šis pētījums atklāja, ka, salīdzinot ar 16-nedēļu vecām WKY žurkām, HW, HW/BW, HPA un kolagēna saturs miokardā ievērojami palielinājās 16-nedēļu vecā SHR gadījumā. HW un HW/BW palielināšanās atspoguļo kardiomiocītu proliferāciju un hipertrofiju un sirds masas palielināšanos.

Turklāt HYA ir unikāla kolagēna šķiedrām, un tā saturs var atspoguļot kolagēna saturu un fibrozes pakāpi. Turklāt elektronu mikroskopiskās izmeklēšanas rezultāti atklāja, ka SHR grupā miokarda šūnu kodola membrāna nebija neskarta, miofibrillas bija izplūdušas, izkārtojums bija neregulārs, daži miofilamenti pazuda, šķērseniskās līnijas bija neskaidras, mitohondriji bija pietūkuši. un uzkrājās, un tajā veidojās vakuoli. Miokarda intersticijā tika novērots liels skaits endoplazmatiskās retikuluma hiperplāzijas un kolagēna šķiedru proliferācijas. Rezultāti atklāja, ka kambaru pārveide bija acīmredzama 16-nedēļas vecajā SHR.

Hipertensijas gēnu terapijas pētījumi atklāja, ka AT1R un citu RAS sistēmas locekļu ekspresiju antisense inhibīcija samazināja asinsspiedienu un uzlaboja sirds patoloģiskās izmaiņas SHR [14, 15]. Iepriekšējo pētījumu rezultāti atklāja, ka shRNS bija ļoti izteikta nierēs, sirdī, aknās, aortā un virsnieru audos. Tas ir līdzīgs šī pētījuma rezultātiem. Turklāt Ad5-ACE-AT1R-shRNS var uzlabot kardiomiocītu ultrastruktūru un samazināt asinsspiedienu, samazinot ACE un AT1R izpausmes.

Līdzīgi RNS traucējumu tehnoloģija tika izmantota iepriekšējos eksperimentos, ko veica citi pētnieki [16], kur AT1R gēnu ekspresiju kavēja Ad5-AT1RshRNS astes vēnu infūzija, kas ir samazinājusi asinsspiedienu. Mēs mēģinājām mainīt kreisā kambara hipertrofiju un miokarda fibrozi, izmantojot gēnu terapiju. Šis pētījums atklāja, ka pēc atkārtotas Ad5-AT1RshRNS injekcijas asinsspiediens SHR ne tikai uzrādīja acīmredzamu hipotensīvo efektu, bet arī radīja superpozīcijas efektu, tas ir, hipotensīvās iedarbības amplitūdu un ilgumu pēc otrās injekcijas. injekcijas bija ievērojami augstākas nekā pēc pirmās injekcijas. Rezultāti liecina, ka atkārtotas Ad5-AT1R-shRNS injekcijas efekts ir labāks. HW, HW/BW un HYA un kolagēna saturs sirdī bija ievērojami zemāks eksperimentālajā grupā nekā SHR grupā. Elektronu mikroskopiskās izmeklēšanas rezultāti arī atklāja, ka miokarda bojājums eksperimentālajā grupā bija ievērojami vieglāks nekā SHR grupā, un AT1R mRNS ekspresija eksperimentālajā grupā bija ievērojami zemāka nekā SHR grupā.

Visi šie rezultāti atklāja, ka Ad5-AT1RshRNS izraisīja RNS traucējumus, kas bloķēja virkni Ang II un AT1R kombinācijas bioloģisko efektu, ko izraisīja hipertensija un ventrikulāra remodelācija, kas liecina, ka šī gēnu terapija var samazināt tikai asinsspiedienu, bet arī uzlabo sirds kambaru remodelāciju SHR. Angiotenzīna II līmenis plazmā palielinātos, bloķējot 1. tipa angiotenzīna II receptoru gēnu. Angiotenzīna II klasisko ietekmi uz tā mērķa orgāniem galvenokārt mediē divi membrānas receptori — 1. tipa receptori (AT1Rs) un 2. tipa receptori (AT2Rs), kas mediē dažādas funkcijas. Ir pierādīts, ka AT1R veicina augšanu un proliferāciju, piemēram, vazokonstrikciju, paaugstinātu asinsspiedienu un sirds kontraktilitāti, kā arī veicina kaitīgu ietekmi, tostarp endotēlija disfunkciju, sirds un asinsvadu slimības un iekaisumu.

Turpretim tiek uzskatīts, ka AT2R izraisa pretējus efektus, kavē augšanu, veicina apoptozi, vazodilatāciju un hipotensiju, kā arī novērš sirds un asinsvadu pārveidošanu [17]. Pēc atkārtotas injekcijas adenovīrusa vektors neizraisīja acīmredzamas blakusparādības, un hipotensīvā iedarbība bija ilgstošāka. Eksperimenta beigās eksperimentālajā grupā asinsspiediens būtībā atgriezās sākotnējā stāvoklī. Tomēr AT1R ekspresija miokardā bija zemāka nekā SHR grupā. Tas neliecina, ka asinsspiediena izmaiņas ir tieši saistītas ar AT1R ekspresiju miokardā. Tiek spekulēts, ka audu fibrozes lomā galvenokārt ir iesaistīta vietējo audu RAS sistēma.

Viens no šī pētījuma ierobežojumiem bija tāds, ka asinsspiediens jāmēra invazīvi ar radiotelemetriju vai vismaz ar piesietu sistēmu, taču tehnisku problēmu dēļ mēs varējām izmantot tikai astes manžetes asinsspiediena mērījumus, kas nebija īpaši ticami.

Secinājums

Gēnu terapiju, izmantojot RNAi tehnoloģiju, lai inhibētu AT1R ekspresiju, var izmantot ne tikai kā jaunu metodi asinsspiediena pazemināšanai, bet arī paredzams, ka tā būs jauna metode miokarda remodelācijas un sirds mazspējas uzlabošanai. Tomēr pašlaik šī jaunā tehnoloģija attiecas tikai uz pētījumiem ar dzīvniekiem. Ir jāturpina pētīt tā lietošanas drošumu un efektivitāti cilvēku ārstēšanā. Piemēram, transdukcijas vektora drošība un efektivitāte, kā arī tas, vai šo gēnu terapijas stratēģiju var piemērot cita veida miokarda izmaiņām, ir nepieciešami turpmāki pētījumi.

Atsauces

1. Suthahar N, Meijers WC, Silljé HHW, de Boer RA. No iekaisuma līdz fibrozei – miokarda audu remodelācijas molekulārie un šūnu mehānismi un atšķirīgas ārstēšanas iespējas. Curr Heart Fail Rep. 2017; 14: 235–250. [Medline] [CrossRef]

2. Hasan HF, Radwan RR, Galal SM. Bradikinīnu pastiprinošais faktors, kas izolēts no Leiurus quinquestriatus skorpiona indes, atvieglo kardiomiopātiju apstarotām žurkām, pārveidojot RAAS ceļu. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2020. gads; 47: 263–273. [Medline] [CrossRef]

3. Harvey A, Montezano AC, Lopes RA, Rios F, Touyz RM. Asinsvadu fibroze novecošanas un hipertensijas gadījumā: molekulārie mehānismi un klīniskās sekas. Vai J Cardiol. 2016. gads; 32: 659–668. [Medline] [CrossRef]

4. Wu J, Montaniel KR, Saleh MA, Xiao L, Chen W, Owens GK u.c. Matricu veidojošo šūnu izcelsme, kas veicina aortas fibrozi hipertensijas gadījumā. Hipertensija. 2016. gads; 67: 461–468. [Medline] [CrossRef]

5. Lu M, Xing H, Xun Z, Yang T, Ding P, Cai C u.c. Uz eksosomām balstīta maza RNS piegāde: progress un izredzes. Asian J Pharm Sci. 2018. gads; 13: 1–11. [Medline] [CrossRef]

6. Xiao C, Qiu L, Zen Q. Uz žurku angiotenzīna II 1. tipa receptoriem vērstas shRNS un tās RNSi konstruēšana citoplazmā. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2006. gads; 26: 4–8. [Medline] [CrossRef]

7. Xiao CS, Zhang JL, Qiu L. [ShRNS, kas vērsta uz angiotenzīna II 1. tipa receptoru, ietekme uz asinsspiedienu un AT1R mRNS ekspresiju spontāni hipertensīvām žurkām. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2007. gads; 35: 354–358 ķīniešu valoda. [Medline]

8. Zhang JQ, Sun HL, Ma YX, Wang DW. [RNS traucējumu ietekme uz angiotenzīna 1a receptoru uz asinsspiedienu un sirds hipertrofiju žurkām ar 2K1C hipertensiju]. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2006. gads; 86: 1138–1143. [Medline]

9. Reaves PY, Wang HW, Katovich MJ, Gelband CH, Raizada MK. Hipertensijas mazināšana, sistēmiski ievadot retrovīrusu vektoru, kas satur I tipa angiotenzīna II receptoru antisensu cDNS. Metodes. 2000; 22: 211–218. [Medline] [CrossRef]

10. Guo K, Lan CZ, Yu TT, Huang LL, Wang XH, Pan C u.c. Xin-Ji-Er-Kang formulas ietekme uz 2K1C izraisītu hipertensiju un sirds un asinsvadu remodelāciju žurkām. J Etnofarmakols. 2014. gads; 155: 1227–1235. [Medline] [CrossRef]

11. Paulis L, Matuskova J, Adamcova M, Pelouch V, Simko J, Krajcirovicova K, et al. Kreisā kambara hipertrofijas un aortas remodelācijas regresija hipertensīvām žurkām ar NO deficītu: L-arginīna un spironolaktona ietekme. Acta Physiol (Oxf). 2008. gads; 194: 45–55. [Medline] [CrossRef]

12. Kang L, Ge CJ, Hu SJ. Atorvastatīna labvēlīgā ietekme uz kreisā kambara remodelāciju spontāni hipertensīvām žurkām. Farmakoloģija. 2007. gads; 80: 120–126. [Medline] [CrossRef]

13. Bessa ASM, Jesus ÉF, Nunes ADC, Pontes CNR, Lacerda IS, Costa JM u.c. ACE2/Ang-(1-7)/Mas ass stimulēšana grūsnām žurkām ar hipertensiju mazina sirds un asinsvadu disfunkciju pieaugušiem vīriešu kārtas pēcnācējiem. Hypertens Res. 2019. gads; 42:1883–1893. [Medline] [CrossRef]

14. Kimura B, Mohuczy D, Tang X, Phillips MI. Hipertensijas un sirds hipertrofijas mazināšana ar adenosaistītu vīrusu, kas nodrošina angiotenzinogēna antisensu. Hipertensija. 2001. gads; 37: 376–380. [Medline] [CrossRef]

15. Džou H, Bjans YF, Li ML, Gao F, Sjao CS. [RNS traucējumu ietekme uz angiotenzīna 1 receptoru un angiotenzīnu konvertējošo enzīmu uz asinsspiedienu un miokarda remodelāciju spontāni hipertensīvām žurkām. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2010. gads; 38: 60–66 (ķīniešu valodā). [Medline]

16. Raja MAG, Katas H, Amjad MW. Kanoniskā un Dicer substrāta siRNS dizains, mehānisms, piegāde un terapija. Asian J Pharm Sci. 2019. gads; 14: 497–510. [Medline] [CrossRef]

17. Dasgupta C, Zhang L. Angiotenzīna II receptori un zāļu atklāšana sirds un asinsvadu slimībās. Narkotiku disks šodien. 2011. gads; 16: 22–34. [Medline] [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com