Cistanche Deserticola neapstrādāta polisaharīda ietekme uz mutes un nagu sērgas vīrusu vakcīnas antivielu un T šūnu apakšgrupu

Kontaktpersona: Odrija Huaudrey.hu@wecistanche.com

DŽANGS Ai-Lians; BA Xue-li; WANG Dan-yang; ŽAO Bings

Mutes un nagu sērga (FMD)ir slimība, ko izraisamutes un nagu sērgas vīruss (FMDV)kas izplatās pārnadžu vidū, nopietni apdraudot mājlopu veselību un radot milzīgus ekonomiskos zaudējumus. Vakcināciju plaši izmanto kā efektīvu līdzekli mutes un nagu sērgas profilaksei, un tā ir sasniegusi ievērojamus rezultātus. Mutes un nagu sērgas vīrusa inaktivētā antigēna vājās imunogenitātes dēļ bieži ir nepieciešams pievienot adjuvantu, lai pildītu savu lomu [1-2]. Pašlaik komerciālajās mutes un nagu sērgas vakcīnās plaši izmantotais adjuvants ir ISA-206 eļļas emulsija, kas ir šūnu aktivators un var arī uzlabot humorālo imūnreakciju, taču tās blakusparādības ir salīdzinoši lielas. Lai gan ir daudz veidu adjuvanti, piemēram, plaši izmantotie palīglīdzekļi (alumīnija sāls palīgvielas, eļļas-ūdens emulsijas utt.) un jauni adjuvanti (MF59, augu polisaharīdi utt.), adjuvantus izmanto mutes un nagu sērgas vakcīnās. joprojām ir ierobežotas, galvenokārt ietverot alumīnija hidroksīdu, Span, vieglo minerāleļļu utt., visiem ir dažādi defekti, piemēram, neapmierinoša imūnsistēmas iedarbība vai ļoti toksiska iedarbība un blakusparādības [3-4]. Tāpēc ir steidzami jāizstrādā augstas efektivitātes, zemas toksicitātes jauni adjuvanti mutes un nagu sērgas vakcīnām, lai uzlabotu vakcīnas imūnās aizsardzības efektu, kas ir pozitīvi svarīgimutes un nagu sērgas profilakse un ārstēšana.

Ķīniešu medicīnaaugu izcelsmes ir plašas pielietojuma perspektīvas infekcijas slimību profilaksē un ārstēšanā. Ķīniešu augu izcelsmes zālēm ir sena vēsture cilvēku un dzīvnieku slimību ārstēšanā. Vakcīnu adjuvantu pētījumu jomā vietējie un ārvalstu pētnieki ir ekstrahējuši polisaharīdus no dažādām Ķīnas augu izcelsmes zālēm, lai izpētītu to adjuvantu iedarbību, piemēram, žeņšeņa polisaharīdus, astragalus polisaharīdus, tuckahoe polisaharīdus, epimēdiju polisaharīdus utt., un atklājuši, ka tiem ir imūnās funkcijas cilvēkiem un dzīvniekiem. Tam ir labs veicināšanas efekts, un tas kļūst par jaunu kandidāta adjuvantu [5-7].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)ir Dangu dzimtas augs. Tā ir plaši izmantota barojoša ķīniešu augu izcelsmes medicīna, un to cilvēki izmantoja kā barojošu pārtiku ilgstošai lietošanai. Pēdējos gados pētnieki ir veikuši daudz pētījumu par Cistanche polisaharīda ķīmisko struktūru un farmakoloģisko aktivitāti un atklājuši, ka tā aktīvās sastāvdaļas galvenokārt ietver polisaharīdus, kopējo feniletanoīdu glikozīdu, alkaloīdus utt., starp kuriem ir polisaharīdu saturs. salīdzinoši augsts un to var regulēt. Imūnsistēmai ir antioksidējoša un pretnovecošanās iedarbība [8-9].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)

Sākotnējie pētījumi atklāja, ka neapstrādāta cistanche tuksneša polisaharīda un OVA imunizēto peļu kombinācija ievērojami uzlaboja OVA specifisko antivielu līmeni, un saderība ar gripas vakcīnu var paaugstināt gripas vakcīnas antivielu līmeni [10-11]. Ņemot to vērā, šajā pētījumā tika izmantots neapstrādāts Cistanche deserticola polisaharīds kā kandidāta adjuvants inaktivētai mutes un nagu sērgas vakcīnai un izvēlēti ūdenī šķīstoši adjuvanti ar ievērojamu imunitāti uzlabojošu iedarbību un nelielām blakusparādībām.Neapstrādātu polisaharīdu no Cistanche deserticola var efektīvi izmantot kā jaunu palīgvielu mutes un nagu sērgas vakcīnām.

Aģenta sagatavošana

Šajā pētījumāNeapstrādāts polisaharīds no Cistanche deserticola (CDCP)tika apvienots armutes un nagu sērgas vīrusssagatavot vakcīnas. ICR peles tika imunizētas, izmantojot muskuļu ceļu. Tika atklāta imunizācijas ietekme uz peļu humorālo un šūnu imūnreakciju un novērota to drošība. Atsauce ir jauna droša adjuvanta izstrāde mutes un nagu sērgas vakcīnai.

Neapstrādāts polisaharīds no Cistanche deserticola

Cistanche deserticola (CDCP) neapstrādāta polisaharīda ietekme uz FMDV specifisko antivielu līmeni serumā

IgG līmenis serumā uzrādīja pakāpenisku pieauguma tendenci 14 dienu, 21 dienu un 28 dienu laikā pēc sākotnējās epidēmijas (1. attēls). 14 un 21 dienu pēc sākotnējās imunizācijas antivielu līmenis FMDV Ag/CDCP grupā bija ievērojami augstāks nekā grupā, kas nesatur FMDV-Ag adjuvantus (P<0.05), and="" there="" was="" no="" significant="" difference="" from="" the="" fmdv="" group="" (p="">0.05). 28 dienas pēc sākotnējās imunizācijas, salīdzinot ar FMDV-Ag bez adjuvanta, FMDV-Ag/CDCP IgG antivielu līmenis bija ievērojami paaugstināts (P<0.05), but="" it="" was="" extremely="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" fmdv/isa-206="" group=""><0.01). the="" antibody="" level="" of="" the="" fmdv-ag="" adjuvant-free="" group="" was="" significantly="" different="" from="" that="" of="" the="" 0.9%="" nacl="" control="" group=""><>

Neapstrādāts polisaharīds no Cistanche deserticola (CDCP) par liesas limfocītu proliferāciju

21 dienu pēc sākotnējās imunizācijas tika izmantota MTT metode, lai noteiktu Cistanche deserticola neapstrādātā polisaharīda proliferācijas ietekmi uz liesas limfocītiem. Kā parādīts 2. attēlā, pēc FMDV-Ag stimulētiem liesas limfocītiem in vitro FMDV-Ag/CDCP grupas limfocītu stimulācijas indekss bija ievērojami augstāks nekā FMDV-Ag bez adjuvanta grupā (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-206="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" (p="">0.05). Pēc ConA un LPS stimulācijas tas var ievērojami uzlabot liesas limfocītu proliferāciju (P<>

Cistanche deserticola (CDCP) neapstrādāta polisaharīda ietekme uz CD4 plus un CD8 plus T šūnu ekspresiju

21 dienu pēc sākotnējās imunizācijas tika pārbaudīta CDCP un FMDV-Ag ietekme uz CD4 plus un CD8 plus T šūnām peļu liesā. Rezultāti ir parādīti attēlā 3-A D. CD3 plus , CD4 plus , CD3 plus , CD8 plus T šūnu apakškopu attiecība FMDV-Ag/CDCP grupā bija ievērojami augstāka nekā FMDV-Ag adjuvantam. -brīvā grupa (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-="" the="" difference="" between="" the="" 206="" groups="" was="" not="" significant="" (p="">0.05). FMDV-Ag adjuvantu nesaturošā grupa nepastiprināja CD4 plus un CD8 plus T šūnu ekspresiju.

Cistanche deserticola (CDCP) neapstrādātā polisaharīda ietekme uz CD4 plus, CD44 plus un CD8 plus CD44 plus efektoru T šūnu apakškopām

Lai novērotu Cistanche deserticola neapstrādātā polisaharīda ietekmi uz efektora T šūnām, tika izmantota plūsmas citometrija, lai noteiktu CD4 plus , CD44 plus un CD8 plus , CD44 plus ekspresiju peļu liesas šūnās pēc imunizācijas. Rezultāti ir parādīti attēlā 4-AD. CD4 plus , CD44 plus un CD8 plus , CD44 plus procentuālais daudzums FMDV Ag/CDCP grupā bija ievērojami augstāks nekā grupā, kas nesatur FMDV-Ag adjuvantus (P<0.05), and="" were="" different="" from="" the="" fmdv/isa-206="" group="" not="" significant="" (p="">0.05).

Cistanche deserticola (CDCP) neapstrādāta polisaharīda ietekme uz peļu augšanu

After immunizing animals with Crude Polysaccharide from Cistanche deserticola through the muscle route, the growth of the mice was observed during the entire immunization period and the body weight was weighed weekly to observe the granuloma at the injection site (Table 1). After the immunization, the mice did not have hair loss or refusal to eat. The weight of each group of mice increased normally at 14 d, 21 d, and 28 d after immunization, and there was no significant change in body weight between the groups (P>0.05). Pelēm FMDV Ag/CDCP grupā injekcijas vietā nebija granulomu, un pelēmmutes un nagu sērgas vīrussvakcīnu grupai, kas satur ISA 206 eļļas adjuvantu, injekcijas vietā bija granulomas.

Adjuvanti dažādās vakcīnās ir izmantoti jau ilgu laiku, tie var palīdzēt vakcīnām nodrošināt imunitāti veicinošu efektu, samazināt vakcīnas devu, un tiem ir ļoti svarīga loma infekcijas slimību profilaksē un epidēmijā [3]. Attīstoties jaunām vakcīnām, vienalga, vai tas būtu veterināro vakcīnu pētījumu vai cilvēku vakcīnu pētījumu jomā, prasības pret vakcīnu adjuvantu kvantitāti un kvalitāti kļūst arvien augstākas. Ideālajam jaunajam adjuvantam vajadzētu efektīvi stimulēt ķermeņa šūnu vai humorālo imunitāti, tai jābūt ilgstošai un stabilai iedarbībai, jāsamazina imunizāciju skaits, jābūt mazākam blakusparādību skaitam, kā arī viegli ražojamam un viegli injicējamam [13]. .

Inmutes un nagu sērgas vīrussinaktivētām vakcīnām, parasti pievieno eļļas palīgvielas, lai uzlabotu vakcīnas imunitāti, taču ir trūkumi, piemēram, augsts imūnsistēmas stress. Salīdzinot ar eļļas palīgvielām, ūdens palīgvielas ir vienkārši lietojamas, var sajaukties ar vakcīnas antigēniem jebkurā attiecībā, nav nepieciešama emulgācija un ir viegli injicējamas. Tāpēc ūdens adjuvantiem ir labas pielietošanas perspektīvas FMDV vakcīnās. Ķīniešu augu polisaharīdiem ir laba imūnmodulējoša iedarbība, apvienojumā ar to priekšrocībām drošībā, pleiotropijā un neatkarībā, un tie kļūst par karsto punktu jaunu vakcīnu adjuvantu izpētē [14]. FMDV vakcīnas adjuvantu pētījumu jomā daži Ķīnas augu polisaharīdi tiek izmantoti jaunu palīgvielu izpētē. Piemēram, astragalus polisaharīdi tiek izmantoti kā adjuvanti FMDV vakcīnām. Perorālā imunizācija var uzlabot humorālo un šūnu imunitāti, un mazas devas var kavēt dendritisko šūnu nobriešanu, lielas devas var veicināt to briedumu.

Pētnieki ir izmantojuši arī polisaharīdus no Baizu un polisaharīdus noEucommiakā palīgvielasmutes un nagu sērgas vīrussvakcīnu, lai izpētītu to imunitāti uzlabojošo iedarbību [15-17]. Tā kā dažādu ķīniešu augu izcelsmes zāļu aktīvo sastāvdaļu saturs ir ļoti atšķirīgs, plašai ķīniešu augu izcelsmes zāļu ar imunoloģisku aktivitāti skrīningam, lai atrastu piemērotus palīglīdzekļus, ir liela nozīme slimību profilaksē un cilvēku veselībai, un tas ir arī pētniecības karstais punkts vakcinācija. Šajā eksperimentā aNeapstrādāts polisaharīds no Cistanche deserticolatika izvēlēts kā kandidāta adjuvantsmutes un nagu sērgas vīrussvakcīnu, un tika veikts eksperimentāls adjuvanta efekta pētījums. Infekcijas slimību profilakse un ārstēšana galvenokārt ir atkarīga no humorālās imūnās atbildes reakcijas, ko mediē B limfocīti, un šūnu imūnās atbildes reakcijas, ko mediē T limfocīti [18-20].

Tāpēc kamutes un nagu sērgas vīrussVakcīnas ražošanā faktiski tiek izmantota muskuļu imunizācija, eksperimentā peļu imunizācijai tiek izmantots muskuļu ceļš, un CDCP imunitāti uzlabojošais efekts tiek novērtēts, novērtējot CDCP ietekmi uz antivielu veidošanos un T šūnu apakšgrupām, un tiek novērtēta tās drošība. Iepriekšējie novērojumi. Pētījuma rezultāti parādīja, ka Cistanche cistanche neapstrādāts polisaharīds var paaugstināt FMDV specifisko antivielu līmeni 14 un 21 dienu pēc imunizācijas, un nav būtiskas atšķirības starp ISA-206 adjuvanta iedarbību un līmeni. ; antivielu līmenis 28 dienas pēc imunizācijas ir zemāks nekā ISA-206 eļļas adjuvantam, kas liecina, kaNeapstrādāts Cistanche deserticola polisaharīds var uzlabot humorālās imunitātes līmeninoteiktā laika periodā pēc imunizācijas. Limfocītu proliferācijas ātrums ir pozitīvi korelēts ar stimulācijas indeksa līmeni. MTT eksperimentāNeapstrādāts polisaharīds no Cistanche deserticola var veicināt limfocītu proliferācijustimulēts ar FMDV antigēnu, ConA un LPS. T šūnu apakšgrupas eksperimentā CDCP var ne tikai palielināt CD4 plus un CD8 plus T šūnu ekspresiju, bet arī uzlabot CD4 plus , CD44 plus un CD8 plus , CD44 plus efektoru T šūnu līmeni, un nav būtiskas atšķirības. no ISA-206 adjuvantu grupas; drošībā Seksuālajos eksperimentos tika atklāts, ka pelēm vakcīnas grupā, kas satur ISA-206, injekcijas vietā bija granulomas, savukārt vakcīnu grupai, kas saturēja CDCP ūdens adjuvantu, granulomas netika konstatētas, kas sākotnēji norādīja, kaCistanche deserticola neapstrādātajam polisaharīdam ir laba drošība. Lai nodrošinātu turpmāku drošību, ir jāveic attiecīgi eksperimenti, lai apstiprinātu.

Neapstrādāts polisaharīds no Cistanche deserticolane tikai uzlaboja humorālo imūnreakciju, bet arī palielināja limfocītu proliferācijas līmeni, veicināja CD4 plus un CD8 plus T šūnu apakšgrupu līmeni, aktivēja efektoru T šūnas, un granulomas injekcijas vietā pēc injekcijas netika konstatētas. Peles aug normāli un tām nav neparastas uzvedības. Šie pētījumu rezultāti ir pamats turpmākiem pētījumiem parNeapstrādāts polisaharīds no Cistanche deserticolakā jauns adjuvantsmutes un nagu sērgas vīrussvakcīnu, kā arī sniedz noderīgu atsauci polisaharīdu adjuvantu lietošanai citās vakcīnās.

Atsauce

［1］Diaz-san Segundo F, Median GN, Steinfeldt C, et al. Mutes un nagu sērgas vakcīnas［J］. Vet Microbiol, 2017, 206:102-112.

［2］Parks JH. Prasības uzlabotām vakcīnām pret mutes un nagu sērgas epidēmijām［J］. Clin Exp Vaccine Res, 2013, 2(1): 8-18.

［3］Cao Y. Adjuvanti mutes un nagu sērgas vīrusu vakcīnām: jaunākais progress［J］. Expert Rev Vaccines, 2014, 13(11):1377-1385.

［4］Parid AS. Vakcinācija pret mutes un nagu sērgas vīrusu: stratēģijas un efektivitāte［J］. Expert Rev Vaccines, 2009, 8:347-365.

［5］Licciardi PV, Underwood JR. Augu izcelsmes zāles: jauna imunoloģisko adjuvantu klase［J］. Int Immunopharmacol, 2011, 11(3):390-398.

［6］Sun B, Yu S, Zhao D u.c. Polisaharīdi kā vakcīnas adjuvanti［J］. Vakcīna, 2018, 36:5226-5234.

［7］Meng XY, Chu ZF, Zhang JJ u.c. Ginkgo biloba imūnmodulējošās funkcijas atstāj polisaharīdu uz vvIBDV vakcīnas［J］. ChinaJ Vet Sci, 2019, 39(4):640-645.

［8］Tu PF, Jiang Y, Guo YH u.c. Cistanche［J］ pētniecība un rūpnieciskā attīstība. Chin Pharm J, 2011, 46(12):882-887.

［9］Zhang W, Huang J, Wei W u.c. Polisaharīdu ekstrakcija, attīrīšana, raksturošana un antioksidanta darbība no Cistanche tubulosa［J］. Int J Biol Macromol, 2016, 93:448-458.