ABSTＲACT

Mērķis: noskaidrot, vai vispārējscistanozīdi(GC) uzlabokognitīvā disfunkcijaātri novecojošas peles (SAMP8), mediējot specifiskus androgēnu receptorus (AＲ)sinaptiskā proteīna ekspresijas regulēšana． 

Metodes: pavisam 76 7-mēnešus veci SAMP8 peļu tēviņi tika nejauši sadalīti modeļu grupā, GC grupā, GC + flutamīda (F) grupā, GC + fulvestranta (ICI) grupā, F grupā un ICI grupā. Peļu mācīšanās un atmiņas funkcijas katrā grupā tika pārbaudītas ar Morisa ūdens labirintu. Lai pārbaudītu, tika izmantota Western blotēšana un RT-PCRsinaptofizīna ekspresijas līmenis(SYN), postsinaptiskais blīvums – 95 (PSD–95) un no smadzenēm iegūtais neirotrofiskais faktors (BDNF) katrā grupā.

Rezultāti: GC ievērojami uzlaboja SAMP8 peļu mācīšanās un kognitīvo funkciju.

Salīdzinot ar GCsgroup, peļu mācīšanās un atmiņas funkcija GCs + F grupā un GCs + ICI grupā bija ievērojami pazemināta. Western blotēšanas un RT-PCR rezultāti parādīja, ka BDNF, SYN un PSD-95 ekspresijas līmenis ir ievērojami paaugstināts proteīna līmenī un gēnu līmenī GC grupā, salīdzinot ar modeļa grupu (P ＜ 0． {{ 11}}5) SYN ekspresijas līmenis tika paaugstināts GCs + F un GCs + ICI grupā, un BDNF un PSD -95 ekspresijas līmenis bija ievērojami samazināts GCs + F un GCs + ICI grupā, salīdzinot ar GC grupu (P ＜ 0 - 05) .

Secinājums: GC var īpaši mediēt AＲ, lai uzlabotu sinaptisko plastiskumu SAMP8 pelēm, kas savukārt uzlabo mācīšanos un kognitīvo funkciju.

ATSLĒGVĀRDI:Vispārējie cistanozīdi; Androgēnu receptors; Sinaptiskā plastiskums; SAMP8 peles

Cistanche uztura bagātinātājs Kognitīvo funkciju uzlabošanai Uztura bagātinātājs PhGs75% Ech 30% Act 12%

Alcheimera slimība(AD) ir izplatītaneiroloģiska deģeneratīva slimība, ko klīniski raksturo progresējoša kognitīvo funkciju pasliktināšanās un garīgā un psiholoģiskā stāvokļa izmaiņas [1]. Pētījumos atklāts, ka testosterona līmenis vīriešiem ar AD ir ievērojami zemāks nekā parastiem vīriešiem.

Gadapacientu kognitīvā funkcijapēc tam ir dažādās pakāpēs uzlabotsketonu aizstājterapija[2], kas norāda, ka ar vecumu saistīta androgēnu līmeņa pazemināšanās var būt AD riska faktors gados vecākiem vīriešiem.

Cistanche deserticola kopējie glikozīdi (vispārējie cistanozīdi, GC) ir viens no galvenajiem Cistanche deserticola ekstraktiem, kas var uzlabot ar AD saistītu mācīšanos unkognitīvā disfunkcija[3]. Turklāt GC ievadīšana ar zondi ievērojami palielināja testosterona līmeni dzīvniekiem [4]. GC ir arī jaņ veicināšanas funkcija un var iedarboties

Androgēniem līdzīga farmakodinamiskā iedarbība. Iepriekšējie pētījumi ir ziņojuši, ka testosterons var uzlabot AD modeļu dzīvnieku mācīšanās un kognitīvās funkcijas, un šis process ir balstīts uz specifiskiem androgēnu receptoriem (androgēnu receptoriem, AR) [5].

Ir labi zināms, ka kognitīvā disfunkcija AD pacientiem ir cieši saistīta ar sinaptisko plastiskumu. Tomēr joprojām nav skaidrs konkrētais mehānisms, ar kura palīdzību GC regulē sinaptisko plastiskumu un tādējādi uzlabo mācīšanās un kognitīvās funkcijas. Šī pētījuma mērķis bija izpētīt, vai GC ir starpnieks specifiskā ARＲ, lai ietekmētu sinaptisko plastiskumu un tādējādi uzlabotu mācīšanās un kognitīvās funkcijas AD.

1 Materiāli un metodes

1. 1 Eksperimentālie dzīvnieki un aprīkojums

3-mēnešus vecas SAMP8 peles tēviņi tika iegādāti no Pekinas Universitātes Medicīnas skolas (SCXK [Pekina] 2016-0010) un tika audzēti līdz 7 mēnešu vecumam. Dzīvnieki tika turēti tīrā vidē (24 ± 1) grādos un

Dzīvniekiem tika nodrošināts dabisks apgaismojums, brīva pieeja pārtikai un ūdenim, kā arī humānā palīdzība saskaņā ar eksperimentālo dzīvnieku izmantošanas 3R principiem. Šo eksperimentālo pētījumu ir apstiprinājusi Baotou Medicīnas koledžas Eksperimentālo dzīvnieku ētikas komiteja (Baotou Medicīnas koledža Nr. 20201102).

Galvenie reaģenti eksperimentā ir:Cistanche deserticola kopējie glikozīdi(GC, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); androgēnu receptoru antagonists-flutamīds (Sigma Company, ASV); estrogēnu receptoru antagonists-fulvestrants (ICI 182780, ASV) Med Chem Express); Trušu anti-peļu BDNF antiviela,

PSD-95 antiviela, SYN antiviela, -aktīna antiviela (Proteintech Company of the United States); proteīna elektroforēzes šķīdums, olbaltumvielu pārneses šķīdums, TEMED, akrilamīda buferšķīdums, amonija persulfāts, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); cDNS sintēzes komplekts, talantu fluorescences kvantitatīvā noteikšana

Reaģentu komplekts (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.) uc Galvenās eksperimentālās iekārtas ietver vertikālo plākšņu elektroforēzes tvertni, elektroforēzes aparātu, pārneses tvertni, atkrāsošanas kratītāju (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), proteīna gēla attēlveidošanas analīzes sistēmu. (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), reāllaika fluorescences kvantitatīvais PCR instruments (ASV Roche) utt.

1. 2 Grupēšana un administrēšana

Divas peles nomira dabiski barošanas procesā, un atlikušās 78 peles tika nejauši sadalītas modeļu grupā, GC grupā, GCs + flutamīda (F) grupā, GCs + fulvestranta (ICI) grupā, F grupā, ICI.

Grupās pa 13 dzīvniekiem katrā. Izņemot modeļu grupu, F grupu un ICI grupu, pārējām grupām 30 dienas nepārtraukti tika ievadītas GC devā 50 mg / (kg · d).

No 24. dienas pēc GC ievadīšanas GC + flutamīda (F) grupai un GC + fulvestranta (ICI) grupai tika ievadīta intraperitoneāla F injekcija (5 mg/kg/d) 30 minūtes pēc GC ievadīšanas. ar zondi. ), ICI (1 mg/kg/d), nepārtraukta injekcija 7 dienas. Pielāgojiet dozēšanas koncentrāciju, lai nodrošinātu, ka peles maksimālais kuņģa tilpums ir 0,5 ml, 1 reizi dienā.

1. 3 Morisa ūdens labirinta tests

Peles vienu dienu iepriekš pielāgojās ūdens videi. Morisa ūdens labirints ilga 6 dienas. Pirmās 5 dienas bija pozicionēšanas un navigācijas tests. Peles tika apmācītas vienu reizi dienā katrā no četriem kvadrantiem katru reizi 1 minūti. Katrs treniņu intervāls bija 15 minūtes, un tajā pašā laikā tika reģistrēti rekordi. Dzīvnieka pozicionēšanas un navigācijas testa bēgšanas latentums; 6. dienā noņemiet platformu no ūdens un veiciet kosmosa izpētes testu. Reģistrējiet platformas šķērsojumu skaitu un peles mērķa kvadrantā pavadītā laika procentuālo daļu. mērķa kvadrants) un telpiskās izpētes peldēšanas trajektorija (Swimming trajectory of spatialprobe test) un citi rādītāji.

1. 4 Western blot noteikšana

Ar SYN, PSD-95 un BDNF sinapsēm saistītu proteīnu ekspresija. Pēc Morisa ūdens labirinta testa visas peles tika regulāri anestēzijas, to galvas tika nogrieztas, smadzenes tika noņemtas un hipokampi tika noņemti. Hipokampu audi tika lizēti ar olbaltumvielām, izjaukti ar ultraskaņu 4 grādu temperatūrā, atstāti uz ledus 30 minūtes un centrifugēti ar ātrumu 12, 000 apgr./min 15 minūtes 4 grādu temperatūrā. Tika ņemts supernatants, un olbaltumvielu koncentrācija tika mērīta, izmantojot BCA metodi. Pēc proteīna iekraušanas veic kraušanas gēla elektroforēzi ar nemainīgu spriegumu 80 V, atdalīšanas gēla elektroforēzi ar nemainīgu spriegumu 120 V un mitru pārnesi pie nemainīgas plūsmas 300 mA; izņemiet PVDF membrānu, bloķējiet to ar 5% vājpienu 80 minūtes istabas temperatūrā un trīs reizes mazgājiet membrānu ar TBST. 15 min/laikā primārā antiviela tika inkubēta nakti uz kratīšanas galda 4 grādu temperatūrā; nākamajā dienā membrāna tika mazgāta 3 reizes ar TBST.

15 min/laikā sekundārā antiviela tika inkubēta istabas temperatūrā 2 stundas, pēc tam tika veikta ECL krāsas attīstība un attēlveidošana tika veikta ar hemiluminiscences attēlveidošanas sistēmu. -aktīns tika izmantots kā iekšējā atsauce, un joslas optiskā blīvuma vērtība tika analizēta, izmantojot Image J programmatūru.

1. 5ＲRT-PCRＲNoteikšana

SYN, PSD-95 un BDNF mRNS ekspresija tika iegūta no hipokampu audu kopējās RNS saskaņā ar Trizol ekstrakcijas metodi, un cDNS tika ģenerēta pēc reversās transkripcijas. Relatīvās fluorescences kvantitatīvajai noteikšanai tika izmantots Talent fluorescences kvantitatīvās noteikšanas komplekts. Eksperiments tika atkārtots trīs reizes, un rezultāti tika pārveidoti par 2 - ΔΔCT tika analizēti. Peles aktīna, SYN, PSD-95 un BDNF primerus izstrādāja Shanghai Sangon Company, un praimeru secības ir parādītas 1. tabulā.

1. 6 Statistiskā analīze

Izmantojot SPSS 25. 0 statistikas programmatūra apstrādei, Graphpad Prism 8 programmatūra tika izmantota statistikas grafiku zīmēšanai, un vienvirziena ANOVA tika izmantota, lai salīdzinātu vairāku paraugu pāru vidējos rādītājus. P < 0. 05 nozīmē, ka atšķirība ir statistiski nozīmīga.