Cistanche glikozīdu ietekme uz sinaptisko morfoloģisko plastiskumu senescences paātrinātās pelēs
Mar 11, 2022
Kontakti: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 e-pasts:audrey.hu@wecistanche.com
LIAN Juanqi1, WANG Lu2, ZHAO Fujun3, LIN Shuai3, YAN Xusheng4, JIA Jianxin4, CAI Zhiping4
(1. Baotou Medicīnas koledžas augstskolas 2014. gada klase, Baotou 014060, Ķīna)
(2. 2015. gada 12. klases klīniskā medicīna Baotou medicīnas koledžā)
(3. 2013. gada kriminālistikas medicīnas 1. klase Baotou medicīnas koledžā)
(4. Baotou Medicīnas koledžas Cilvēka anatomijas katedra)
ABSTRAKTS
Mērķis: Lai izpētītuglikozīdi nocistanche (GCs) par hipokampālo neironu sinaptisko plastiskumu senescences paātrinātās pelēs, kurām ir nosliece uz 8 (SAMP8).Metodes: 40 peles tika nejauši sadalītas kontroles grupā, nesējgrupā, mazu devu grupā (ievadītie ĢS 2,5 mg / kg ·d), vidējās devas grupā (ievadītie ĢN 5,0 mg / kg? d) un lielu devu grupā (ievadītie GCs 10, 0 mg / kg · d). Kontroles grupas pelēm netika veikta nekāda iejaukšanās; tiem, kas bija ievadītajās grupās un nesējgrupā, tika veikta intraperitoneāla ievadīšana (GCs / sāls šķīdums) vai sāls šķīdums 30 d. Normālo piramīdas neironu skaitu hipokampa CA1 reģionā saskaitīja Nissl krāsošana; dendritisko muguriņu skaits sinapsēs tika skaitīts ar Golgi iekrāsošanu, un PSD-95 olbaltumvielu ekspresiju kvantificēja imūnhistoķīmija.Rezultātus: Salīdzinot ar tiem, kas atrodas kontroles grupā, GCs ievērojami palielināja normālu piramīdas neironu skaitu hipokampālā CA1 reģionā (P<0.05) and="" increased="" the="" number="" of="" dendritic="" spines="" in="" synapses="" (p=""><0.05). the="" expression="" levels="" of="" psd-95="" in="" administered="" groups="" were="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" control="" group="" (p=""><0.05), and="" the="" effect="" in="" the="" middle="" dose="" group="" was="" the="" most="" significant.="">Secinājums: GCs var pierādīt hipokampāla piramīdveida šūnu izdzīvošanas līmeni un uzlabot sinaptisko plastiskumu.
ATSLĒGVĀRDI: Cistanche glikozīdi (GCs); Senescence paātrināta pele; Dendritisks mugurkauls; PSD-95
Tā kā sociālo iedzīvotāju novecošanās kļūst arvien nopietnāka,Alcheimera slimība(AD) ir pakāpeniski palielinājies, kas ir radījis smagu slogu pacientu ģimenēm un sabiedrībai;
[1]. Galvenās AD klīniskās izpausmes ir kognitīvie traucējumi un atmiņas traucējumi, un galvenās pazīmes ir senila plāksnes, ko veido ekstracelulāri amiloīdu nogulsnes un intracelulāri neirofibrilāri tangles[2]. AD patoģenēze joprojām ir nepārliecinoša. Sinapses patoloģiskās izmaiņas tiek uzskatītas par AD atmiņas un kognitīvās disfunkcijas neirobioloģisko pamatu. Nenormālas izmaiņas sinapsēs var būt galvenā saite AD. Senescences paātrinātā pele (SAM) ir inbred novecošanās modeļa pele. Tās P8 apakšlīnijai ir vienādas un stabilas novecošanās patoloģiskās īpašības, kas izpaužas kā pakāpeniska mācīšanās un atmiņas samazināšanās un atpazīšana ar mēnešu pieaugumu. Zināmā disfunkcija un patoloģiskās izpausmes ir līdzīgas AD pacientiem, tāpēc SAMP8 peles ir ideāls dzīvnieku modelis, lai izpētītu ar novecošanu saistītas mācīšanās un atmiņas traucējumu mehānismu.
Šī raksta mērķis ir analizēt šūnu izdzīvošanas ātrumu, izmērīt dendrītisko mugurkaula blīvumu un noteikt pēcsinspomatiskos sablīvējumus, lai izpētītu iespējamo GCs mehānismu(glikozīdi nocistanche)ietekmē hipokampālo neironu sinaptisko morfoloģisko plastiskumu strauji novecojošām pelēm, lai ārstētu ar AD saistītucistancheGlikozīdi(ĢK) Telpiskā mācīšanās un atmiņas traucējumi nodrošina teorētisku un eksperimentālu pamatu.
1 Materiāls un metodes
1.1 Eksperimentālie dzīvnieki un 40 vīriešu kārtas 10 mēnešus vecu SAMP8 peļu grupēšana (iegādātas no Tjaņdzjiņas tradicionālās ķīniešu medicīnas universitātes), kas audzētas tīrā vidē, apkārtējās vides temperatūrā (24,0 ± 1,0) °C, mitrumā (50,0 ± 5,0%), brīvā pārtikā un ūdenī. Lai sāktu eksperimentu, dzīvnieki tika audzēti līdz 11 mēnešu vecumam. Dzīvniekus pēc nejaušības principa iedalīja 5 grupās (8 dzīvnieki/grupa): tukšās kontroles (kontroles) grupa, šķīdinātāju kontroles (nesēja) grupa,cistanche kopējie glikozīdi(GCs) mazu devu grupa [2,5 mg / (kg ·d)], vidējas devas grupa [5, 0 mg / (kg · d)], lielu devu grupa [10,0 mg / (kg · d)]. Kontroles grupas dzīvniekiem netika veikta nekāda iejaukšanās. Mazas devas grupas dzīvniekiem tika ievadīti GCs 2,5 mg / (kg ·d), dzīvniekiem, kas bija vidējas devas grupā, tika ievadīti GCs 5,0 mg / (kg ·d), un dzīvniekiem lielās devas grupā tika ievadīti GC. 0 mg / (kg ·d), dzīvniekiem transportlīdzekļu grupā tika ievadīts tāds pats normāla sāls šķīduma daudzums. Nepārtraukta intraperitoneāla zāļu vai fizioloģiskā šķīduma injicēšana 30 dienas, 0,5 ml/d.
1.2 Paraugu sagatavošana un apstrāde Dzīvnieki tika upurēti 24 stundas pēc pēdējās ievadīšanas, anestēzēti, un kakls tika upurēts. Izgrieziet krūšu dobumu, lai atklātu sirdi, nogrieziet labo priekškambaru piedēkli, lai izlaistu asinis, un ievietojiet perfūzijas adatu kreisajā kambarī. Pēc tam, kad tika ievadīts 100 ml normāla sāls šķīduma, 4% paraformaldehīda lietošana tika turpināta, līdz peļu ekstremitātes bija stīvas. Paņemiet smadzenes un ievietojiet tos 4% paraformaldehīda veidā ilgāk par 24 stundām.
1.3. Zāles un reaģenti GCs(glikozīdi nocistanche) tika iegādāti no Ķīnas Tradicionālās ķīniešu medicīnas akadēmijas, postsinaptiskais blīvums -95, PSD -95 tika iegādāti no Epitomic, Coomassie Brilliant Blue CBBG 250 komplekts tika iegādāts no Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd. Inženierzinātņu institūts, DAB imūnhistoķīmijas komplekts tika iegādāts no Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Company.
1.4 Nissl krāsošana un šūnu skaits 4% paraformaldehīda fiksācija smadzeņu audos ilgāk par 24 stundām, apgriešana un dehidratācija ar gradienta spirtu, caurspīdīgu ksilolu, vaska iegremdēšanu, parasto parafīna iestrādāšanu, 5 μm biezuma sērijas sekciju. Sagrieziet šķēles un de vasku uz ūdens, krāsojiet ar 1% toluidīna zilu 37 °C temperatūrā 60 minūtes, mazgājiet 5 minūtes × 3 reizes, diferencējiet ar 95% spirtu, 100% spirtu Dehidrēt, caurspīdīgu ksilolu, piestipriniet ar neitrālu gumiju, novērojiet mikroskopā. Katras grupas vienas un tās pašas hipokampālās daļas CA1 laukums tika nejauši izvēlēts no 3 novērošanas laukiem (×100), tika saskaitīts normālu piramīdas šūnu skaits 1 mm robežās, un vidējais tika ņemts vērā analīzei.
1.5 Modificēta Golgi krāsošana Ievietojiet salabotos smadzeņu audus Golgi-Cox krāsošanas šķīdumā, 14 dienas aizsargājiet no gaismas un mainiet šķīdumu ik pēc 2 dienām; ievieto smadzeņu audus 30 % saharozes un ievieto ledusskapī 4 °C temperatūrā. Audus var sadalīt pēc nogrimšanas apakšā; vibrējošs mikrotoms sekcijām un krāsošanai; fiksatora risinājums attīstībai; montāžas plāksnes žāvēšanu, novērošanu un skaitīšanu mikroskopā. Ievērojiet katras peļu grupas hipokampu CA1 un CA3 neironu virsotnes dendritiskās mugurkaula izmaiņas un aprēķiniet dendritiskā mugurkaula blīvumu.
1.6 Imūnhistoķīmiskās sekcijas tika deparafinētas ūdenī, inkubētas ar 3% H2O2 10 minūtes, lai novērstu endogēno peroksidāzes aktivitāti, mazgātas ar destilētu ūdeni 5 minūtes × 3 reizes, salabotas ar augstspiediena mikroviļņu krāsni, mazgātas ar PBS 5 minūtes × 3 reizes, Kazas serums tika bloķēts 30 minūtes istabas temperatūrā, trušu pretpeles PSD-95 primārā antiviela tika pievienota pilienam, pa nakti 4 °C temperatūrā, mazgājot ar PBS 5 minūtes × 3 reizes, pa pilienam tika pievienotas sekundārās antivielas ar biotīna marķējumu, inkubētas 37 °C temperatūrā 2 stundas, mazgātas ar PBS 5 minūtes × 3 reizes, nomest mārrutku peroksidāzes marķētu streptavidīnu, mazgāt ar PBS 5 minūtes × 3 reizes, mazgāt ar DAB 2 minūtes, pretsvīrāt ar hematoksilīnu, dehidrēt ar gradienta spirtu, caurspīdīgs ar ksilolu un stiprinājumu. 1.7. Attēlu apstrāde un statistiskā analīze. Novērošanai tika izvēlēti vienādi katras grupas hipokampu šķērsgriezumi. CA1 apgabalā nejauši tika atlasīti trīs redzes lauki (×100), lai saskaitītu normālu piramīdveida šūnu skaitu 1 mm robežās, un vidējais tika analizēts. Imūnhistoķīmijas rezultātus noteica ar IPP 7.0 attēlu analīzes programmatūru. Eksperimentālos datus analizēja AR SPSS 17.0 programmatūru, un vienvirziena ANOVA tika izmantota vairāku paraugu līdzekļu salīdzināšanai pārī. P<0.05 was="" considered="" statistically="">
Alcheimera slimības apkarošana
2 rezultāti
2.1 Kopējā glikozīdu ietekmecistanchepar normālu piramīdas šūnu skaitu SAMP8 peļu Hipokampā Nissl krāsošana Nissl krāsošana Nissl krāsošanas rezultāti parādīja, ka neironu skaits kontroles grupas CA1 apgabalā samazinājās, izkārtojums bija nekārtīgs, un lielākā daļa šūnu bija patoloģiskas morfoloģijā un līzē un nekrozē. GC šūnu morfoloģija(glikozīdi nocistanche)grupa bija salīdzinoši skaidra un pilnīga, ar lielu skaitu izvirzījumu, bija redzams liels skaits izvirzījumu, Nissl ķermenis bija violets, kodoli bija dziļi iekrāsoti, dzidri un centrēti, un kodoli nebija iekrāsoti. Nesēja grupas šūnu morfoloģija ir līdzīga kontroles grupas morfoloģijai. Šūnu skaits parādīja, ka palielinājās normālu piramīdveida neironu skaits administrācijas grupas CA1 apgabalā (P<0.05); the="" difference="" between="" the="" medium="" and="" high="" dose="" groups="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0,05), normālu piramīdveida neironu skaits Zināmā mērā tas parāda augšupejošu tendenci, palielinot devu. Nebija būtiskas atšķirības normālo piramīdveida šūnu skaitā starp nesēja grupu un kontroles grupu (P>0,05). Skatīt 1. tabulu.
1. tabula Cistanche glikozīdu ietekme uz SAMP8 peles hipokampāla Nis krāsošanu, normālu piramīdveida šūnu skaitu un dendritisko muguriņu skaitu (gab.)
a salīdzina ar kontroles grupu t = 0, 193, P = 0, 582; b salīdzina ar kontroles grupu t = 13, 621, P = 0, 008; c salīdzina ar kontroles grupu t = 21,798 , P = 0,005; d salīdzina ar kontroles grupu t = 18,326, P = 0,006; e salīdzina ar kontroles grupu t = 0, 244, P = 0, 463; f salīdzina ar kontroles grupu Salīdzinot ar t = 10,903, P = 0,010; g salīdzina ar kontroles grupu t = 21, 817, P = 0, 005; h salīdzina ar kontroles grupu t = 15,572, P=0. 007.
2.2.kopējā glikozīdu ietekme uzcistanche par dendritisko muguriņu blīvumu SAMP8 pelēm Golgi iekrāsošana parādīja, ka dendrītisko muguriņu skaits kontroles grupā samazinājās un blīvums samazinājās. Pēc dzīvnieku GC piešķiršanas palielinājās dendritisko muguriņu skaits un blīvums, un tika novērots liels skaits izvirzījumu (P = 0, 048). Nebija statistiski nozīmīgas atšķirības starp vidējo devu grupu un lielo devu grupu (P = 0,853). Dendritiskā mugurkaula skaits un blīvums Grāds parāda augšupejošu tendenci, palielinot devu. transportlīdzekļu grupa un kontrole
Dendritisko muguriņu skaitam un blīvumam grupā nav statistiskas nozīmes (P = 0,764). Skatīt 1. tabulu.
2.3.Cistancheglikozīdi par PSD-95 ekspresiju SAMP8 pelēm PSD-95 imūnhistoķīmiskā kvalitatīvā noteikšana parādīja, ka kontroles grupai bija mazāka PSD-95 ekspresija, šūnu ķermeņa iekrāsošanās bija vieglāka, un pozitīvās ekspresijas ātrums bija zemāks. Pēc GC papildināšanas in vitro šūnu ķermenis iekrāsojās dziļāk, un PSD-95 ekspresija un pozitīvais ātrums palielinājās (t = 5,751, P<0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" middle-dose="" group="" and="" the="" high-dose="" group="" (t="1.077," p="">0,05). Zināmā mērā PSD-95 ekspresija uzrādīja augšupejošu tendenci, palielinoties devām. Transportlīdzekļa
PSD-95 izteiksmē starp kontroles grupu un kontroles grupu (t = 0,585, P>0,05) nebija statistiski nozīmīgas atšķirības.
3 Diskusija
PSD-95 ir galvenā postinaptiskā sastāvdaļa un ir saistīta ar dažādām sinaptiskām funkcijām, kas ietver jonu kanālus, sinaptisko aktivitāti, intracelulāro signālu transdukcijas ceļus utt. PSD-95 klasterus saista ar proteīniem NMDA receptoru signalizācijas ceļā, lai izveidotu receptorus signalizējošu molekulu regulējošu molekulu mērķēšanas molekulu kompleksu [4], kam ir galvenā loma signāla transdukcijas ceļā. NMDA receptori ir iesaistīti ilgtermiņa potencēšanas (LTP) inducēšanā hipokampu CA1 reģionā un mācīšanās un atmiņas procesā [5]. PSD-95 šajā procesā ir galvenā regulējošā loma, un tā olbaltumvielu saturu var izmantot kā vēl vienu molekulāro marķieri sinaptiskā plastiskuma mērīšanai. Mūsu iepriekšējos pētījumos mēs esam pierādījuši, ka GCs(glikozīdi nocistanche)var uzlabot mācīšanās un kognitīvos traucējumus SAMP8 pelēm, bet mēs neesam noskaidrojuši tā iespējamo šūnu morfoloģisko mehānismu. Šī eksperimenta mērķis ir izpētīt tā iespējamo šūnu morfoloģisko mehānismu.
Šajā eksperimentā piramīdas šūnu izdzīvošanas ātruma un sinaptiskā plastiskuma uzlabošanās GCs(glikozīdi nocistanche)grupa bija labāka nekā transportlīdzekļu grupas un kontroles grupas grupa. Var redzēt, ka GCs ievērojami uzlaboja piramīdas šūnu morfoloģiju. Eksperimentālie rezultāti liecina, ka lielākas ĢS devas var radīt labāku efektu. Salīdzinot vidējo devu grupu un lielo devu grupu, var redzēt, ka efekts būtiski nemainās, kad deva sasniedz noteiktu koncentrāciju. Tādēļ, lai izvairītos no GC izšķērdēšanas un blakusparādībām, lietojot ĢS, jāizvēlas vispiemērotākā koncentrācija [6].
Iepriekšējie pētījumi ir parādījuši, ka GCs(glikozīdi nocistanche)var uzlabot SAMP8 peļu mācīšanās un kognitīvos traucējumus, uzlabojot piramīdveida šūnu izdzīvošanas ātrumu [7]. Ir arī dati, kas norāda, ka ĢS var uzlabot neirodeģeneratīvās slimības, veicinot neironu cilmes šūnu proliferāciju un diferenciāciju [8-10]. Autors uzskata, ka GCs mehānismu AD uzlabošanai var sasniegt, uzlabojot sinaptiskās morfoloģijas plastiskumu un saglabājot piramīdas šūnu skaitu, kas liek pamatus GC galīgai izmantošanai klīniskās AD profilaksē un ārstēšanā.
Atsauces
[1] Chen Juluo, Chen Xingui, Hu Panpan utt. Alcheimera slimības pacienti izmanto funkcijas Iepriekšējie pētījumi [J]. Ķīniešu uzvedības medicīnas un smadzeņu zinātnes žurnāls, 2013, 22 (10): 889-891.
[2] Jin Chunhui, Liu Xiaowei, Yuan Jianmin u.c. Šķirošanas receptors 1 Gēns Viens nukleozīds Korelācija starp skābes polimorfismu un sporādisku Alcheimera slimību[J]. Ķīniešu uzvedības medicīnas un smadzeņu zinātnes žurnāls, 2014, 23 (5): 427-429.
[3] Šlībs R, Arendts T. Holīnerģiskās sistēmas nozīme smadzenēs novecošanās laikā un Alcheimera slimības gadījumā[J]. Neironu transms, 2006, 113 (11): 1625-1644.
[4] Soriano FX. Specifisks mērķēts uz nāvi veicinošiem NMDA receptoru signāliem ar atšķirīgu paļaušanos uz NR2B PDZ ligandu[J]. J Neurosci, 2008, 28 (42): 10696-10710.
[5] Selkoe dīdžejs. Šķīstošie amiloīda beta-proteīna oligomēri pasliktina sinaptisko plastiskumu un uzvedību [J]. Behav Brain Res, 2008, 192 (1): 106 -113.
[6] Huang Zonghui, Chen Guanmin, Zhao Kangtao u.c. Pētījums par Cistanche [J] toksicitāti. Ķīnas Higiēnas inspekcijas žurnāls, 2014, 24 (8): 1098 -1100.
[7] Jia Jianxin, Song Wei, Yan Xusheng utt. Cistanche kopējie glikozīdi ietekmē SAMP8 peles. Mācīšanās un atmiņas ietekme un mehānisms[J]. Baotou Medicīnas koledžas žurnāls, 2014, 30 (6): 6-8.
[8] Sjao Q, Jans P, Ma X u.c. Astrocītu lizosomu bioģenēzes uzlabošana atvieglo Aβ klīrensu un vājina amiloīda plāksnes patoģenēzi[J]. J Neurosci, 2014, 34 (29): 9607-9620.
[9] Li QJ, Tang YM, Liu J utt. Parkinsona slimības ārstēšana ar C172 nervu cilmes šūnām, kas pārmērīgi ekspresē NURR1, ar rekombinētu republikas deficīta adenovīrusu, kas satur NURR1 gēnu[J]. Synapse, 2007, 61 (12): 971-977.
[10] Qin Wei, Wei Wei, Xu Qian utt. Cistanche par C172 neironu cilmes šūnu proliferāciju [J] ietekme. Šauruma aptieka, 2015, 27 (12): 263-265.