Cistanche Tubulosa ūdens ekstrakta ietekme uz peļu ar zarnu trakta traucējumiem zarnu mikrobiotu

1. Ievads

Zarnu mikroorganismi galvenokārt kolonizē zarnu lūmenu un gļotādas slāni un savstarpēji sadarbojas ar saimniekorganismu, izmantojot materiālu un enerģijas apmaiņu, transformāciju un citus procesus [1]. Tie ir signālu centri, kas integrē vides ziņojumus, piemēram, diētu, ar ģenētiskiem un imūniem signāliem, tādējādi ietekmējot saimnieka vielmaiņu, imunitāti, nervu sistēmu un reakciju uz infekcijām [2]. Parasti pastāv dinamisks līdzsvars starp zarnu floru un saimniekiem; tomēr zarnu disbioze var izraisīt izmaiņas veselības/slimību līdzsvarā, imūnsistēmas traucējumus un daudzas slimības [3]. Saimniekam ir pieņemamas mērenas izmaiņas zarnu mikrobiotā; tomēr tas joprojām var nodrošināt iespējas pastiprināt izmaiņas citos pastiprinošos faktoros, piemēram, bakteriofāgos, bakteriocīnos un oksidatīvajā stresā [4].

CISTANCHE TUBULOSA ZARNU MIKROBIOTAS UZLABOŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Iepriekšējie pētījumi to ir pierādījušiCistanche tubulosa etanola ekstrakts(CT), tradicionālā ķīniešu augu formula, var regulēt zarnu mikrobu sastāvu žurkām [5], un kopējie CT glikozīdi pielāgo nesakārtoto zarnu mikrobiotu [6]. Cistanche sugas, kas galvenokārt parazitē uz Tamarix sugu saknēm, tiek sauktas arī par "tuksneša žeņšeņu", un toniku, kas sastāv no Cistanche deserticola (CD) un Cistanche tubulosa (CT) kātiem, izmanto kā augu izcelsmes līdzekli [7 ].ÞTika konstatēts, ka galvenās CT feniletanola glikozīdu (PHG) ķīmiskās sastāvdaļas, kas ir antioksidanta vielas [8, 9], uzlabo reproduktīvo disfunkciju [10], nomāc aknu zvaigžņu šūnu aktivāciju, bloķē signālu ceļu vadīšanu TGF{{3} }/ SMAD [11] un novērš liellopu seruma albumīna izraisītu aknu fibrozi žurkām [12]. Starp vairāk nekā 100 CT komponentiem polisaharīds ir arī viena no svarīgākajām vielām ar bagātīgu saturu [13, 14]. Iepriekšējie pētījumi ir pierādījuši, ka C. deserticola polisaharīdi izraisa melanoģenēzi melanocītos, samazina oksidatīvo stresu [15], mazina kognitīvo disfunkciju, regulējot antioksidantu un pretiekaisuma procesus žurkām [16], aizsargā PC12 šūnas pret OGD/RP izraisītiem bojājumiem [17]. ],uzlabot ehinakozīda uzsūkšanos in vivo, un ietekmē zarnu mikrobiotu [18].

Probiotikas ir dzīvi nepatogēni mikroorganismi, kuriem ir labvēlīga ietekme uz veselību un tie nodrošina mikrobu līdzsvaru kuņģa-zarnu traktā, ja tos ievada atbilstošā daudzumā [19].Þvar uzlabot nespecifiskas šūnu imūnās atbildes, ko raksturo makrofāgu, dabisko killer (NK) šūnu un antigēnu specifisko citotoksisko T limfocītu aktivizēšana un dažādu citokīnu izdalīšanās celmam raksturīgā un no devas atkarīgā veidā [20]. Probiotiskie celmi uzlabo zarnu epitēlija īpašības, izmantojot TJ modulāciju, un ir pierādīts, ka specifiski probiotiskie celmi regulē mucīna ekspresiju, tādējādi ietekmējot gļotu slāņa īpašības un netieši regulējot zarnu imūnsistēmu [21]. Pienskābes baktēriju (LAB) un Bifidobacterium celmi ir galvenās probiotikas, kas ir izmantotas daudzās jomās [22–26].ÞViņiem ir daudz ieguvumu veselībai, un to antioksidanta spēja ir svarīgs faktors ar veselību saistītajās funkcijās [27]. Probiotikas var helātus veidot metālu jonus, lai neļautu tiem katalizēt oksidēšanos [28, 29]; tie var arī palielināt antioksidantu enzīmu ekspresiju [30, 31], ražot dažādus metabolītus ar antioksidantu aktivitāti [32, 33], mediēt antioksidantu signālu ceļus [34–36] un regulēt fermentus, kas ražo reaktīvās skābekļa sugas (ROS) un zarnu mikroorganismu reakcija uz oksidatīvo stresu [37].

Nesenais pētījums parādīja, ka CD polisaharīdi varētustimulē dažu pienskābes baktēriju augšanu, kas varētu dot labumu cilvēku veselībai [38]. Tomēr polisaharīdu saturs CD atšķiras no satura CT [7, 39], un šī atšķirība var izraisīt atšķirīgu ietekmi uz zarnu mikroorganismiem. Turklāt, lai gan CD polisaharīdi var samazināt oksidatīvo stresu, aktivizējot NRF2/HO-1 ceļu [15], viena polisaharīda iedarbība var atšķirties no vairāku kompozīciju kopējās ietekmes CT.Þmums, ir nepieciešams precīzi definēt CT ūdens ekstraktu ietekmi uz zarnu mikroorganismiem. Turklāt PHG var arī pretoties oksidatīvajam stresam [40] un nomākt lipopolisaharīdu izraisītas iekaisuma reakcijas, aktivizējot Keap1/Nrf2/HO-1 ceļu [41].Þtādēļ CT ūdens ekstrakta iedarbības noteikšanai ir liela nozīme. Turklāt dažu CD ūdens ekstrakta sastāvdaļu ietekme uz oksidatīvo stresu un zarnu floru liecina, ka izturība pret oksidatīvo stresu var būt saistīta ar zarnu floras izmaiņām.

Lai aizpildītu nepilnības zināšanās par iepriekš minētajām tēmām, mēs pētījām CT ūdens ekstrakta ietekmi uz zarnu mikrobiotu pelēm ar zarnu floras traucējumiem.ÞŠie rezultāti sniegs vērtīgu informāciju par iespējamiem mehānismiem, ar kuru palīdzību CT maina zarnu floru un nodrošina zarnu rezistenci pret oksidatīvo stresu.

2. Materiāli un metodes

2.1. Eksperimentālie dzīvnieki.

Pavisam no Sjiņdzjanas Medicīnas universitātes Eksperimentālo dzīvnieku centra tika iegādātas 18 SPF klases vīriešu kārtas C57BL/6J peles, kuru svars bija 18–22 g, ar licences numuru SCXK (jauna) 2018-0003.Þacis tika izmitinātas būros standartizētos apstākļos: 12 h gaismas/tumsas fotoperiods, temperatūra 23 ± 2 grādi un mitrums 55 ± 5%.ÞDzīvnieki tika baroti ar komerciālu barību (51% bezslāpekļa ekstrakta, 25% kopproteīna, 4,6% koptauku, 6,5% koppelnu, 4,{8}}% kopšķiedras un 8,9% mitruma) un krāna ūdeni.ÞDzīvnieki tika ārstēti saskaņā ar ieteikumiem, kas aprakstīti Nacionālo veselības institūtu laboratorijas dzīvnieku kopšanas un lietošanas rokasgrāmatā.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA IMUNITĀTES UZLABOŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.2. Ūdens ekstrakta ekstrakcija.

Žāvētas C. tubulosa šķēles, ko nodrošināja Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd., tika samaltas pulverī un tika atlasītas granulas ar daļiņu izmēru no 20 līdz 40 acīm.ÞEkstrakcijas apstākļi bija šādi: cietā šķidruma attiecība 1:19, temperatūra 80 grādi, mikroviļņu laiks 6 minūtes, ultraskaņas laiks 16 minūtes, mikroviļņu jauda 400 W un ultraskaņas jauda 400 W.ÞŪdens ekstrakta galveno komponentu saturs tika noteikts ar HPLC (Agilent 1260 Infinity II, Kalifornija, ASV). Īsāk sakot, ehinakozīda (0,2 mg/ml) un akteozīda (0,2 mg/ml) standartvielas tika izšķīdinātas 50% metanolā, lai kalpotu par standartvielas šķīdumu.Þlv, 1 g CT ūdens ekstrakta tika izšķīdināts 100 ml 50% metanola un atstāts sastingt 30 minūtes.ÞEkstrakta šķīdums tika apstrādāts ar ultraskaņu pie 250 W un 35 kHz 10 minūtes un pēc tam centrifugēts ar ātrumu 12, 000 apgr./min.ÞSupernatants tika filtrēts ar 0,45 μm mikroporainu filtra membrānu.ThStandartvielas šķīdumu un filtrātu pēc tam noteica ar HPLC šādos apstākļos: oktadecilsilānam piesaistīts silikagels kā pildviela, metanols kā kustīgā fāze A un 0,1% skudrskābe kā kustīgā fāze B.ÞKolonnas temperatūra tika iestatīta uz 30 grādiem, noteikšanas viļņa garums bija 330 nm, un injekcijas tilpums bija 10 μL.

2.3. Eksperimenti.

Pēc vienas nedēļas adaptācijas 18 peles tika nejauši sadalītas sešās grupās: A (normāla ar pievienotu vidējas devas CT ūdens ekstraktu), B (normāla bez CT ūdens ekstrakta), C (modelis bez ūdens ekstrakta), D ( modelis ar pievienotu augstas devas CT ūdens ekstraktu), E (modelis ar pievienotu vidējas devas CT ūdens ekstraktu) un F (modelis ar pievienotu mazas devas CT ūdens ekstraktu).ÞGrupas tika apstrādātas šādi: parastā grupa tika piesūcināta ar parasto sāls šķīdumu, modeļa grupa tika piesūcināta ar cefiksīmu (30 mg/kg, Shiyao Group Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang, Ķīna) un parasto sāls šķīdumu, augstu temperatūru -devu grupa tika piesūcināta ar cefiksīmu un 221,14 mg/kg CT ūdens ekstrakta, vidējās devas grupa tika piesūcināta ar cefiksīmu un 165,54 mg/kg ūdens ekstrakta, un mazo devu grupa tika piesūcināta ar cefiksīmu un 110,57 mg/kg. no ūdens ekstrakta.Þe Grupa tika piesūcināta ar 165,54 mg/kg ūdens ekstrakta, un cefiksīms netika pievienots. Cefiksīms tika ievadīts katru dienu pusdienlaikā h, bet citas vielas tika ievadītas katru dienu pulksten 15:00 h. Eksperimentu laikā C, D, E un F grupas tika turētas zarnu traucējumu modeļa stāvoklī.ÞIzkārnījumi tika savākti ik pēc septiņām dienām uz sterila darbināma galda un uzglabāti -20 grādu temperatūrā.

2.4. Peļu resnās zarnas histopatoloģiskais novērojums.

Eksperimenta beigās peles tika nogalinātas ar dzemdes kakla izmežģījumu, un to resnās zarnas saturs tika savākts uz sterila darbināma galda un uzglabāts -80 ° C temperatūrā; tajā pašā laikā resnās zarnas audu paraugi tika fiksēti 10% neitrālā formalīnā.Þlv, paraugi tika dehidrēti, izmantojot gradienta etanola koncentrāciju, hialinizēti, izmantojot ksilolu, iestrādāti parafīnā, sadalīti un iekrāsoti ar hematoksilīna-eozīnu. Morfoloģiskās izmaiņas resnās zarnas gļotādā tika novērotas un salīdzinātas, izmantojot optisko mikroskopu. Tika izmērīts villu garums un kripta dziļums resnajā zarnā, kā arī tika aprēķināta villu garuma attiecība pret kripta dziļumu (V/C vērtība) (51).

2.5. DNS ieguve un bibliotēkas izveide.

DNS tika ekstrahēta no fekālijām, izmantojot EZNA®Soil DNS komplektu (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, ASV) saskaņā ar ražotāja protokolu. DNS kvalitāte tika noteikta, izmantojot fluorometru (QuantiFluor™-ST, Promega Corporation, ASV). Pārī savienotie praimeri 16s rDNS V3-V4 reģionā tika izstrādāti, lai pastiprinātu šo reģionu un ražotu 466 bp DNS fragmentus.Þe forward primer bija 341F (-5- CCTACGGGNGGCWGCAG-3-), un reversais primer bija 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Katrs PCR tilpums bija 25 μL, kas satur 2, 5 μL 10 × PCR buferšķīduma, 2 μL dNTP, 1 μL katra primera un 20–30 ng veidnes DNS.Þlv, indeksētie adapteri tika pievienoti amplikonu galiem, lai izveidotu sekvencēšanas bibliotēkas.ÞBibliotēkas tika apstiprinātas, izmantojot QuantiFluor™ fluorometru, un kvantitatīvi noteiktas līdz 10 nmol.

2.6. 16s rRNS gēnu sekvencēšana un mikrobu kopienas analīze.

Þe Illumina platforma (Illumina MiSeq) tika izmantota, lai iegūtu 2 × 250 bp pāra gala datus. Operatīvās taksonomiskās vienības (OTU) tika iegūtas, izmantojot Uparse programmatūru, izmantojot standarta klasterus ar 97% līdzību.ÞLai saskaņotu OTU ar Greengene datu bāzes versiju 13.5 un veiktu sugu anotāciju, tika izmantots naivais RDP klasifikatora Bajesa piešķiršanas algoritms.ÞZarnu mikrobiotas alfa daudzveidība tika aprēķināta, izmantojot Šenona un Simpsona indeksus, un atšķirības starp grupām tika analizētas ar lineārās diskriminācijas analīzes efekta lielumu (LEfSe).ÞBeta daudzveidība tika analizēta, izmantojot Bray-Curtis atšķirību galveno koordinātu analīzi (PCoA). PICRUSt2 tika izmantots, lai novērtētu zarnu mikrobioma mikrobu vielmaiņas spēju [42].

2.7. Statistisko datu analīze.

Vienvirziena ANOVA tika izmantots SPSS 20, un eksperimentālie dati tika izteikti kā X ± S; X norāda vidējo vērtību, bet S norāda standarta novirzi.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA METABOLISKO IZMAIŅU MĒRĒŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3. Rezultāti

3.1. 8e CT ūdens ekstrakta ietekme uz resnās zarnas morfoloģiju.

The reprezentatīvie savienojumi (ehinakozīds un akteozīds) un to CT ekstrakta koncentrācijas tika apstiprinātas ar HPLC (S1 attēls). Lai noteiktu ūdens ekstrakta ietekmi uz zarnām, mēs pētījām resnās zarnas bārkstiņu garumu un padziļinājumu dziļumu pēc apstrādes ar CT ūdens ekstraktu.Þresnās zarnas bārkstiņas normālā un lielas devas grupā (A, B un D) bija garākas un līdzīgas pirkstiem, turpretim resnās zarnas bārkstiņas modelī un mazo devu grupās (C un F) bija īsas un resnās zarnas gali bārkstiņas bija salauztas (1. attēls). Attiecīgi lielas devas CT ūdens ekstrakts ievērojami palielināja resnās zarnas bārkstiņu garumu un samazināja recesijas dziļumu pelēm ar zarnu traucējumiem, salīdzinot ar pelēm modeļu grupā (P < 0.01). Turpretim recesijas dziļums lielas devas grupā un parastajā grupā būtiski neatšķīrās (P > 0,05) (S1 tabula).ÞŠie rezultāti liecināja, ka liela CT ūdens ekstrakta deva var uzlabot morfoloģiju resnās zarnas iekšienē pelēm ar zarnu traucējumiem.

3.2. 8e CT ūdens ekstrakta ietekme uz zarnu mikrobiotas daudzveidību.

Mēs veicām 16s rRNS gēnu sekvencēšanu, lai izpētītu iespējamo morfoloģisko izmaiņu cēloni resnās zarnas iekšienē un izpētītu zarnu mikrobiotas izmaiņas pēc apstrādes ar CT ūdens ekstraktu. No neapstrādātajiem datiem tika iegūti vidēji 100 553 efektīvi tagi, sākot no 77 734 līdz 125 144 (S2 tabula).Þšie tagi tika sagrupēti 4932 OTU (S3 tabula). Pēc tam mēs analizējām zarnu mikrobiotas daudzveidību, pamatojoties uz šiem OTU.Þe Šenona un Simpsona indeksi neliecināja par atšķirību starp A grupu (normāli ar CT ūdens ekstraktu) un B grupu (normāli bez CT ūdens ekstrakta) (2. attēls (a)).Þir norādīts, ka pelēm bez cefiksīma apstrādes CT ūdens ekstraktam, iespējams, nebija papildu labvēlīgas vai kaitīgas ietekmes uz zarnu mikrobiotas daudzveidību. Tomēr daudzveidība modeļu grupā (C) uzrādīja samazināšanās tendenci, salīdzinot ar normālām grupām.ÞPelēm, kas tika ārstētas ar lielu un vidēju CT ūdens ekstraktu devu, bija daudzveidības atjaunošanās pazīmes, turpretim pelēm, kuras tika ārstētas ar zemas devas CT ūdens ekstraktu, šāda parādība netika novērota (2. attēls (a)). Tikmēr PCoA atklāja, ka parastajām grupām (A un B) un zarnu trakta traucējumu grupām, kurām tika ievadīti lielas devas (D) un vidējas devas (E) CT ūdens ekstrakti, bija mazāki attālumi starp paraugiem nekā modeļu grupā un mazas devas CT ūdens ekstrakta piedevas grupa (F) (attēls 2(b)).ÞŠie rezultāti liecināja, ka CT ūdens ekstrakts varētu palīdzētuzlabot zarnu mikrobiotas daudzveidībupelēm ar zarnu trakta traucējumiem.

3.3. Izmaiņas zarnu mikrobiotas sastāvā, kas apstrādāta ar CT ūdens ekstraktu.

ÞDažādās grupās tika salīdzināti mikrobiotas sastāva profili. Patvēruma līmenī proteobaktēriju relatīvais daudzums modeļu grupā bija augstāks nekā citās grupās (3. attēls (a)).ÞProteobaktēriju skaita palielināšanās liecināja, ka cefiksīms mainīja modeļu peļu mikrobiomu un ka CT ūdens ekstrakts varētu dot labumu zarnu mikrobiotai, jo palielināta proteobaktēriju izplatība ir nesakārtotas zarnu floras centra marķieris [43–45]. Turklāt ģints līmenī Lactobacillus relatīvais daudzums modeļu grupā samazinājās, salīdzinot ar normālu un lielu devu grupām; tomēr tas palielinājās, salīdzinot ar vidējo un zemo devu grupu (3. attēls (b)).ÞŠie rezultāti liecināja, ka lielas devas CT ūdens ekstrakts var veicināt dažu Lactobacillus ģints baktēriju augšanu.

Atšķirīgā mikrobiota starp pētītajām grupām tika tālāk noteikta saskaņā ar LEfSe analīzi.Þanalīze parādīja, ka pēc apstrādes ar cefiksīmu ievērojami palielinājās Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriales un Chloroflexi relatīvais daudzums, savukārt Lactobacillus, Eubacterium{0}}nodatum{1}}cardial Pseudonocardiales relatīvais daudzums, , un Christensenellaceae_R-7_grupa ievērojami samazinājās, salīdzinot ar normālu grupu (4. attēls (a)). Pārsteidzoši, kad modeļu grupa tika papildināta ar lielas devas CT ūdens ekstraktu, Muribaculaceae, Lactobacillus, Kineosporiaceae, Eubacterium nodatum grupas un Pedobacter relatīvais daudzums tika ievērojami palielināts, salīdzinot ar modeļu grupā. Tikmēr Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostridium_9 un Candidatus Stoquefichus relatīvais daudzums ievērojami samazinājās, salīdzinot ar modeļu grupā (4. attēls (b)).

3.4. Zarnu mikrobiotas funkcijas, kas saistītas ar apstrādi ar CT ūdens ekstraktu.

Mēs izmantojām PICRUSt2 programmatūru, lai prognozētu zarnu mikrobiotas vielmaiņas ceļus, un parastā grupa tika izmantota kā atsauce, lai analizētu izmaiņas citās grupās. Apstrādājot ar cefiksīmu, palielinājās etilbenzola sadalīšanās relatīvais daudzums, sideroforu grupas neribosomālo peptīdu biosintēze un ksenobiotiku metabolisms pa citohroma P450 ceļiem; pēc apstrādes ar augstas un vidējas devas CT ūdens ekstraktiem to relatīvais daudzums atgriezās normālā līmenī. Tikmēr ciānaminoskābju metabolisma ceļa relatīvais daudzums cefiksīma ārstēšanas laikā samazinājās; tomēr tas palielinājās pēc apstrādes ar lielas devas CT ūdens ekstraktu. Turklāt kopumā izmaiņas dažādos metabolītu ceļos pēc ārstēšanas ar cefiksīmu bija nozīmīgas, salīdzinot ar izmaiņām parastajā grupā; tomēr CT ūdens ekstrakta pievienošana spēja novērst pārmērīgas izmaiņas (5. attēls).

4. Diskusija

Resnās zarnas morfoloģiju var mainīt augšana, gremošana un uzsūkšanās, imūnregulācija un zarnu bojājumu labošana [46–50].Þe V/C attiecība var vispusīgi atspoguļot zarnu trakta gremošanas stāvokli un ir tieši proporcionāla zarnu trakta gremošanas un absorbcijas spējai [51, 52]. Šajā pētījumā bārkstiņu un padziļinājumu biopsija un statistikas dati parādīja, ka lielas devas ūdens ekstrakts var daļēji uzlabot bojāto morfoloģiju resnās zarnas iekšienē.

Lai izpētītu, kā ūdens ekstrakts maina zarnu morfoloģiju un ietekmē zarnu mikrobiotu, mēs strādājām atpakaļ no izmaiņām zarnu florā. Mēs noskaidrojām, ka proteobaktēriju, nesakārtotas zarnu floras marķiera, relatīvais daudzums, ārstējot ar cefiksīmu, palielinājās, salīdzinot ar to, kas netika ārstēts ar cefiksīmu.ÞCitu centrmezglu marķieru, Bacteroidetes un Firmicutes, relatīvajam daudzumam nebija būtisku izmaiņu, lai gan

cilvēku zarnās dominē grupas; Tika konstatēts, ka Bacteroidetes/Firmicutes attiecība ir samazināta cilvēkiem ar aptaukošanos, salīdzinot ar novājinātiem cilvēkiem, un tika konstatēts, ka šī attiecība palielinās līdz ar svara zudumu cilvēkiem, kuri ievēro divu veidu mazkaloriju diētu [38, 41, 43–45, 48, 53, 54]. Tikmēr Turicibacter, kas ir saistīta ar aptaukošanos [55], modeļu grupā bija ievērojami paaugstināts salīdzinājumā ar citām grupām. Proti, zarnu mikrobiotas daudzveidība modeļu pelēm tika uzlabota, pievienojot CT ūdens ekstraktu. Mēs novērojām dažas specifiskas zarnu baktērijas pelēm ar dažādu ārstēšanu; piemēram, Lactobacillus un Muribaculaceae bija divas galvenās baktēriju ģints, kas palielinājās grupā, kas tika ārstēta ar lielas devas CT ūdens ekstraktu, salīdzinot ar tiem, kas bija modeļu grupā (4. attēls). Nesenie pētījumi liecina, ka CT ūdens ekstraktu polisaharīdiem ir ievērojams daudzums

dažu pienskābes baktēriju augšanu, kas varētu labvēlīgi ietekmēt saimniekorganisma veselību [43]. Paralēli Muribaculaceae ir probiotiski organismi, kas saistīti ar ilgmūžību [57].These ierosināja, ka mehānisms, ar kuru CT ūdens ekstrakts uzlabo zarnu mikrobiotu, var būt probiotisko organismu augšanas veicināšana vai aizsardzība. Vēl viena baktērija, kas ir vērts atzīmēt, bija baktērija YE57. Lai gan lielas devas CT ūdens ekstrakts veicināja baktērijas YE57 relatīvo pārpilnību šajā pētījumā (4. attēls), iepriekšējos pētījumos ir konstatēts, ka normālā zarnā tās daudzums bija lielāks nekā zarnās, kas apstrādātas ar augstas koncentrācijas zāļu tējas atlikumiem. [58] un ka tā daudzums tika samazināts pēc iejaukšanās ar Bacillus licheniformis kombinācijā ar XOS (ksilooligosaharīdiem) [59].Þmums, šīs baktērijas loma zarnu mikrobiotā ir pelnījusi turpmāku izpēti. Turklāt salīdzinoši nelielais paraugu skaits šajā pētījumā var izraisīt kļūdaini pozitīvu un viltus negatīvu rezultātu, un turpmākais pētījums ar lielākiem paraugiem tiek ieteikts, lai apstiprinātu identificētos baktēriju marķierus.

CT ūdens ekstrakta sastāvs var būt svarīgs tā ietekmei uz sastāvu un funkcionālajām izmaiņām zarnu mikrobiotā pelēm ar zarnu traucējumiem. PHG ir plaši izplatīti aktīvie komponenti, kas atrodami CD un CT, un ehinakozīds tika identificēts kā galvenais PHG CT [60]. Pēdējo desmitgažu laikā ehinakozīdam piemīt daudzas farmakoloģiskas aktivitātes, piemēram, pretnovecošanās un neiroprotektīva iedarbība, sirds funkcijas uzlabošana, hiperlipidēmijas un hiperglikēmijas samazināšana, kā arī aptaukošanās izraisīta diabēta un metaboliskā sindroma profilakse [53, 61–65] . Mēs atklājām izmaiņas zarnu mikrobiotas vielmaiņas ceļos.ÞCefiksīma apstrāde noveda pie baktēriju bagātināšanas, kas saistītas ar etilbenzola noārdīšanos un sideroforu grupas neribosomālo peptīdu biosintēzi, savukārt apstrāde ar augstas un vidējas devas CT ūdens ekstraktu varēja mazināt šīs izmaiņas, norādot, ka šis ekstrakts mazināja ar baktēriju kopienu saistītos. šīm funkcijām. Turklāt palielināta baktēriju bagātināšana, kas saistīta ar ciānaminoskābes metabolisma ceļu, apstrādājot ar lielas devas ūdens ekstraktu, un tā samazinātā bagātināšanās modeļu pelēm liecināja, ka CT ūdens ekstrakts var veicināt ciānaminoskābes metabolismu.ÞIzmaiņas attiecīgajos metabolītos var nodrošināt šim ūdens ekstraktam farmakoloģiskas aktivitātes.

Lai gan mehānisms, ar kuru CT ūdens ekstrakts maina zarnu mikrobiotas sastāvu un funkciju, ir sarežģīts, ir dažas norādes, lai spekulētu par iespējamo mehānismu. Ir ziņots, ka gan pienskābes baktērijas, gan CT ūdens ekstrakti var antagonizēt oksidatīvo stresu. Oksidatīvais stress, kas rodas iekaisuma laikā, ir izplatīts faktors, kas saasina zarnu darbības traucējumus, spēcīgi samazinot zarnu mikrobu daudzveidību un veicinot specifisku baktēriju pieaugumu (4). Gluži pretēji, reaktīvās skābekļa sugas veicina arī baktēriju grupu selektīvu augšanu, izmantojot nitrātu un tetrationātu elpošanu [66–68]; piemēram, baktērijas no Enterobacteriaceae dzimtas var strauji augt zarnu floras sastāva izmaiņu rezultātā oksidatīvos apstākļos iekaisuma laikā [69, 70]. Lielākajai daļai dzīvo organismu attīsta enzīmu aizsardzību, neenzimātisku antioksidantu aizsardzību un labošanas mehānismus, lai attīrītu skābekļa radikāļus [71]. Tomēr šīs dabiskās antioksidantu sistēmas parasti nav pietiekamas, lai novērstu oksidatīvos bojājumus dzīvos organismos. Vairāki papildu sintētiskie antioksidanti, tostarp butilēts hidroksianizols un butilēts hidroksitoluols, ir plaši izmantoti, lai samazinātu oksidēšanos, taču to drošība ir apšaubīta [72, 73]. Tāpēc pētnieki ir pievērsušies drošāku un dabiskāku antioksidantu atrašanai, kas iegūti no dabā sastopamām vielām. Sakarā ar gan polisaharīdu, gan pienskābes baktēriju spēju novērst oksidatīvo stresu, precīza CT ūdens ekstraktu antioksidanta mehānisma noteikšanai zarnu mikrobiotā ir nepieciešama turpmāka izmeklēšana nākotnē.

Noslēgumā mēs atklājām, ka CT ūdens ekstrakts spējauzlabot zarnu mikrobiotupelēm ar zarnu traucējumiem, veicinot daudzveidību,regulē vielmaiņas izmaiņas, un zarnu mikrobiotas struktūras pārveidošana, un šie rezultāti var sniegt atsauci saistītu zāļu izstrādei nākotnē.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA ZARNU MIKROBIOTU STRUKTŪRAS REMODELĒŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%