Rīsu proteīna hidrolizātu antioksidantu, balinošo un pretnovecošanās īpašību novērtēšana

Kontaktpersona:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hui-Ju Chen 1,2, Fan-Jhen Dai 2, Cheng-You Chen 3, Siao-Ling Fan 2, Ji-Hong Zheng 4, Yu-Chun Huang 2, Chi-Fai Chau 1, Yung-Sheng Lin 3, 4,5* un Čin-Šuh Čen 1,*

Abstract:Augu izcelsmes olbaltumvielu hidrolizātiem ir potenciāls pielietojums uzturā. Rīsu proteīna hidrolizāti (RPH), kas ir lielisks proteīnu avots, ir piesaistījuši uzmanību kosmētikas līdzekļu izstrādei. Tomēr daži pētījumi ir ziņojuši par iespējamo RPH analīzes pielietojumu, un šajā pētījumā tie tika pārbaudītiantioksidantsādas novecošanās enzīmu aktivitātes un inhibējošās aktivitātes. Rezultāti liecināja, ka kopējā fenola un flavonoīdu koncentrācija bija 2.06 ± 0,13 mg gallskābes ekvivalenta/g RPH un 25,96 ± 0,52 µg kvercetīna ekvivalenta/g RPHs, attiecīgi. RPH uzrādīja no devas atkarīgu aktivitāti brīvo radikāļu attīrīšanai no 1,1-difenil-2-pikrilhidrazila [pusmaksimālās inhibējošās koncentrācijas (IC50)=42.58 ± 2,1 mg/g RPHs]un 2 ,20-azinobis (3-etilbenzotiazolīns-6-sulfonskābe) (IC50=2.11 ± 0,88 mg/g RPHs), no devas atkarīga samazināšanas spēja (6,95 ± 1,40) mg C vitamīna ekvivalenta/g RPH) un skābekļa radikāļu absorbcijas spēja (473 µmol Trolox ekvivalents/g RPH). RPH šķīduma koncentrācija, kas nepieciešama, lai panāktu 50 procentu hialuronidāzes inhibīciju untirozināzeaktivitātes tika noteiktas attiecīgi 8,91 un 107,6 mg/ml. Šis pētījums parādīja, ka RPH irantioksidants, antihialuronidāzes un antitirozināzes aktivitātes nākotnes kosmētikā.

Atslēgvārdi:rīsu proteīna hidrolizāts;antioksidants; hialuronidāze;tirozināze; kosmētikas

cistanchebalināšanaefektsuz ādas, laiantioksidācija

1. Ievads

Ultravioletā starojuma iedarbība ir atbildīga par fotonovecošanos (vai ārēju novecošanos); pretstatītās, reaktīvās skābekļa sugas, kas rodas šūnu metabolismā un bioloģisko funkciju pasliktināšanās, ir atbildīgas par iekšējo novecošanos [1, 2]. Pārstrādāti pārtikas produkti bieži satur dabiskusantioksidantipiemēram, katehīni, askorbīnskābe, tokoferoli, rozmarīnskābe un dažādu augu fenola ekstrakti. Dabisko antioksidantu pētījumos tagad tiek ņemta vērā netradicionāla izcelsme. Dabiski iegūtiantioksidantiir vairāk vēlami nekā ķīmiski ražotiantioksidantijo ir ziņots, ka daži sintētiskie antioksidanti ir kancerogēni [3]. Rīsi (Oryza sativa) ir galvenais uztura pamatelements cilvēkiem visā pasaulē, īpaši tiem, kas dzīvo Āzijā. Ikgadējā rīsu produkcija pasaulē ir aptuveni 741 miljons tonnu [4]. Tiek ziņots, ka Āzijas valstīs rīsi ir avots 75% no enerģijas patēriņa vairāk nekā 2 miljardiem cilvēku [5]. Plašās rīsu ražošanas rezultātā tiek iegūts atbilstošs blakusproduktu daudzums. Rīsu ražošanas procesa pārpalikums satur lielāko daļu graudu proteīna (~60–85 procenti), bet tiek izmests vai izmantots dzīvnieku barošanai [6–8]. Tiek ziņots, ka peptīdi, kas iegūti no dažādiem olbaltumvielu hidrolizātiem, darbojas kā potenciālsantioksidanti[9]. Tāpēc no pārtikas olbaltumvielu hidrolizātiem var iegūt dabiskos un netoksiskos antioksidantus. Daudzi zinātnieki ir izmantojuši ar lipīdiem bagātus modeļus un ziņojuši par proteīnu hidrolizātiem, kā arī piena, zeīna un sojas proteīna peptīdiem, lai tiem būtu būtiskas antioksidantu īpašības, tostarp brīvo radikāļu attīrīšana, pārtikas un lipīdu peroksidācijas in vitro inhibīcija un pārejas metālu helātu veidošanās [10– 12].

Hialuronskābe (HA) palīdz atjaunot ādu, jo tā palielina viskozitāti, satur mitrumu un padara ārpusšūnu šķidrumu mazāk caurlaidīgu. Pateicoties lieliskajai ūdens aiztures spējai, HA palielina ādas jauneklību, mitrināšanu un gludumu, kā arī samazina grumbu pakāpi [13,14]. Diemžēl HA līmenis ādā dabiski samazinās līdz ar vecumu. Hialuronidāze ir enzīms, kas iznīcina HA, izraisot ādas izturības, elastības un mitruma zudumu, kas savukārt noved pie ādas novecošanās. Līdz ar to grumbas var ārstēt, inhibējot hialuronidāzi un uzturot HA saturu ādā [15,16]. Melanīnu ražojošais enzīmstirozināzevitāli veicina melanīna ražošanas procesa ātrumu ierobežojošo posmu. Tāpēc pigmentācijas traucējumus parasti ārstē, un ādas mirdzēšana tiek panākta, inhibējot vai samazinot regulēšanutirozināzeaktivitāte [17,18].

Vairākos pētījumos ir atklāts, ka graudu proteīna hidrolizātiem un peptīdiem, ko var iegūt no tiem, ir antioksidants, antihipertensīvs un pretvēža iedarbība [19,20]. Pārtikas izcelsmes peptīdu un proteīnu pozitīvā ietekme uz cilvēku veselību tiek pakāpeniski atzīta [21]. Patērētāji arvien vairāk pieprasa, lai kosmētikas un veselības aprūpes nozares izmantotu dabiskus bioaktīvos savienojumus. Rīsu proteīna hidrolizāti (RPH) ir piesaistījuši uzmanību kā lielisks olbaltumvielu avots. Tomēr daži pētījumi ir ziņojuši par RPH raksturojumu un funkcionālo analīzi. Tāpēc šajā pētījumā tika novērtēta antioksidanta aktivitāte un hialuronidāze untirozināze-RPH inhibējošās aktivitātes.

2. Rezultāti un diskusija

2.1. Kopējā fenola koncentrācija (TPC) un kopējais flavonoīdu saturs (TFC)

Standarts TPC testā bija vairāku koncentrāciju gallskābe. Lielāka absorbcija norādīja uz augstāku TPC. RPH paraugu TPC tika iegūts, ievadot RPH paraugu optiskās absorbcijas vērtības gallskābes kalibrēšanas līknē. Attēlojot RPH koncentrāciju pret fenola koncentrāciju (1.a attēls), tika iegūts vidējais TPC 2.06 ± 0.13 mg GAE/g RPHs. TFC 25,96 ± 0,52 µg QE/gRPHs tika iegūts, veicot līdzīgu procedūru (1.b attēls). 1.c attēlā ir sniegta papildu saistība ar RPH paraugu TPC un TFC. Tas atklāj, ka attiecības starp TPC un TFC var izteikt kā y=0.0121x plus 0,0659, kur x un y ir attiecīgi TPC un TFC.

RPH TPC ietvēra fenola aminoskābju un peptīdu fenola savienojumu koncentrācijas. Olbaltumvielu un fenola savienojumu mijiedarbība parasti ietver kovalentu un nekovalentu saiti. Fermentatīvās hidrolīzes laikā izdalās fenola savienojumi. Īpaši fermenti var visvairāk iznīcināt proteīna-polifenola kompleksus; tā rezultātā tiek atbrīvots lielāks skaits fenola savienojumu un peptīdu ar fenola grupām, piemēram, tirozīns [22]. Ir ziņots par spēcīgu korelāciju starp kopējo polifenolu saturu graudos un to bioloģisko aktivitāti. Ir labi zināms, ka polifenoliem ir spēcīga antioksidanta iedarbība [23]. Lai gan terpēni [24] vai terpēni [25] rīsos atrodami mazākā daudzumā, tie arī varētu veicināt antioksidantu darbību.

2.2. Antioksidantu darbība

2.2.1. DPPH brīvo radikāļu radikāļu attīrīšanas darbība

2. attēlā parādīta DPPH brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitāte RPH šķīdumā. Tika atklāts, ka augstāka šķīduma koncentrācija rada lielāku aktivitāti. Pusmaksimālā inhibējošā koncentrācija (IC50), kas ir ekstrakta koncentrācija, kurai var noņemt pusi no visiem DPPH brīvajiem radikāļiem, bija 42,58 ± 2,1 mg/ml rīsu peptīdu.

2.2.2. ABTS brīvo radikāļu attīrīšanas darbība

RPHs ABTS brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitāte, kas parādīta 3. attēlā, bija augstāka, ja tika izmantota lielāka ekstrakta koncentrācija. IC50 bija 2,11 ± 0,88 mg/ml rīsu peptīdu. Šis rezultāts norādīja, ka RPH bija spēcīga ABTS brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitāte. Sēru saturošās aminoskābes, tostarp Met un Cys, un hidrofobās aminoskābes, tostarp Ala, Val, Ile, Leu, Met, Cys, Tyr, Phe, Try un Pro, varētu būt svarīgi faktori attiecībā uz ABTS brīvo radikāļu. tīrīšanas darbība.

Šajā pētījumā ABTS brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitātes IC50 vērtība bija zemāka nekā DPPH brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitāte, kas atbilst Jatropha curcas L. sēklu čaumalas un kodola [28] un jujube augļu sēklu un mizu mīkstuma [29] rezultātiem. Šis atradums atbilst arī ziņojumam par rīsu kliju proteīna hidrolizātiem ar attiecīgi 43,98–66,25 µmoL Trolox ekvivalentu/g parauga un 403,28–430,12 µmoL Trolox ekvivalentu/g parauga DPPH brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitātei un ABTS brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitātei [27].

Viens no iespējamiem iemesliem ir atšķirība šķīdībā starp DPPH brīvo radikāļu (eļļā šķīstošs) un ABTS brīvo radikāļu (eļļā/ūdenī šķīstošs) [30,31]. Rīsu kliju proteīna hidrolizātu antioksidantu potenciālu ietekmēja tā molekulmasas profils, aminoskābju sastāvs un hidrofobitāte [32].

2.2.3. Samazināšanas jauda

RPH samazināšanas spējas testa rezultāti ir parādīti 4. attēlā. Redukcijas spēja palielinājās līdz ar RPH koncentrāciju. Samazināšanas spēja bija 6, 95 ± 1, 40 mg VCE / g RPH, kas norāda, ka RPH ir efektīvs antioksidants.

2.2.4. Skābekļa radikālas absorbcijas spēja (ORAC)

ORAC testam ir priekšrocības salīdzinājumā ar citām antioksidantu aktivitātes noteikšanas metodēm, tostarp izmantotajiem reaģentiem ir peroksīda radikāļi ar līdzīgu reakcijas mehānismu un redokspotenciālu pret fizioloģiskiem oksidētājiem; kopējais lādiņš un protonēšanas stāvoklis, ar kāduantioksidantireakcijas līdzinās cilvēka ķermeņa reakcijai [33]. ORAC metodei ir arī bioloģiska nozīme attiecībā uz antioksidantu efektivitāti cilvēka organismā. 5. attēlā ir attēloti RPH un Trolox standarta ORAC analīzes rezultāti dažādās koncentrācijās. ORAC tika iegūts no kalibrēšanas līknes regresijas vienādojuma, kas saista neto AUC ar Trolox koncentrāciju. Rezultāti liecināja, ka RPH bija ORAC 473 µmol TE/g RPHs.

Antioksidantu peptīdus vai aminoskābes var iegūt fermentatīvās proteīnu hidrolīzes rezultātā, kā rezultātā tie ir ļoti aktīvi pret oksidētājiem [34]. Metāla jonu helātu veidošanās, lipīdu peroksidācijas inhibīcija un bioloģiski aktīvo peptīdu brīvo radikāļu noņemšana ir atbildīga par to antioksidantu aktivitāti. Brīvos radikāļus var dzēst un oksidatīvo stresu mazinošo proteīnu un enzīmu ekspresiju regulēt ar antioksidantu peptīdiem. Tiek ziņots, ka olbaltumvielu hidrolizātu un peptīdu antioksidantu efektivitāte ir atkarīga no aminoskābju secības un peptīda lieluma, ko ietekmē hidrolīzes apstākļi, proteīna avots un proteāzes veids [35]. Saskaņā ar Adebiyi et al. [36], lielāko sagremojamo rīsu kliju proteīnu var sadalīt mazākos gabaliņos ar subtilizīnu, kā rezultātā palielinās proteīna raža un saturs. Hidrolizāta TPC un antioksidantu aktivitāti var ietekmēt fermentu specifika. Tāpēc peptīda antioksidantu aktivitāti var ietekmēt proteīna avota īpašības, fermenta specifika un hidrolīzes līmenis [37].

Ir daudz ziņojumu, kas izmanto proteāzes (piemēram, Alcalase, komerciāls no Bacillus sugas iegūtas paiknetilisina A nosaukums), lai hidrolizētu augu izcelsmes proteīnus, lai iegūtu antioksidantu peptīdus. Šajā sakarā sojas proteīns ir viens no visvairāk ziņotajiem proteīniem [38]. Turklāt tiek konstatēta arī rīsu kliju proteīna alkalāzes hidrolīze. Optimālos apstākļos lipīgo rīsu kliju alkalasehidrolīze radīja proteīna hidrolizātus ar IC50 vērtību 0,87 ± 0,02 mg/mL DPPH brīvo radikāļu attapšanā [39]. Mūsu pētījumā RPH IC50 vērtība bija 42,58 ± 2,1 mg/ml. Lai gan IC50 vērtība DPPH brīvo radikāļu attapšanā šajā pētījumā nebija tik efektīva kā no rīsu kliju proteīna, ABTS brīvo radikāļu attapšana (IC50=2.11 mg/ml) bija efektīvāka nekā sojas proteīna hidrolizāti, kas iegūti ar Alkalāzes hidrolīzi ( IC50=2,93 mg/ml) [40].

2.3. Hialuronidāzes inhibējošā darbība

Proteolītiskais enzīms hialuronidāze ir atrodams dermā un katalizē HA noārdīšanos ekstracelulārajā matricā [41]. Šajā pētījumā miecskābe tika izmantota kā pozitīva kontrole salīdzināšanas nolūkos. 6. attēlā redzams, ka miecskābei bija lielāka hialuronidāzes aktivitātes inhibīcija; IC50 bija 0,14 mg/ml, līdzīgi kā Nishida et al. (0,121 mg/ml; 71,1 mM) [42]. Turpretim RPH šķīdumam tika aprēķināts IC50 8,91 mg/ml. Šis RPH šķīduma rezultāts atbilda mūsu iepriekšējai IC50 vērtībai, 7,61 mg/ml [43]. Proteīni, polisaharīdi un augu izcelsmes un sintētiskie savienojumi ir viens no savienojumiem, kuros ir hialuronidāzes inhibitori. Šie inhibitori palīdz uzturēt HA sintēzes un noārdīšanās līdzsvaru [44]. Zema HA koncentrācija ādā izraisa sausumu un grumbas. Tāpēc hialuronidāzes aktivitātes kavēšana ir ceļš, pa kuru var uzlabot ādas morfoloģiju un aizkavēt tās novecošanos.

2.4. Tirozināzi inhibējošā aktivitāte

Olbaltumvielu hidrolizātiem no dabīgiem avotiem ir potenciāls inhibēttirozināzes aktivitāte. Tirozināzes inhibīcijas testu in vitro parasti izmanto, lai novērtētu, kā ādas balināšanas līdzekļi tieši ietekmē tirozināzes aktivitāti [45]. Piedaloties melanīna sintēzes ātruma ierobežošanas solī, tirozināze katalizē L-tirozīna hidroksilēšanu par L-DOPA un pēc tam oksidē pēdējo par o-dopahinonu. Ja ir vēlams novērst melanīna biosintēzi, L-tirozināzes aktivitātes kavēšana var būt izšķiroša. Šeit,tirozināzetika izmantots, lai noteiktu RPH antitirozināzes aktivitāti. Kā parādīts 7. attēlā, koncentrācija107,6 mg/ml sasniedza 50% tirozināzes aktivitātes inhibīciju. Askorbīnskābei bija augsta tirozināzi inhibējoša aktivitāte (IC50=0,098 mg/ml), kas bija līdzīga 0,102 mg/ml, ko Seo et al. ziņots [46].

Rīsu kliju proteīna hidrolizātu saturs bija ievērojami augststirozināze-inhibējošā aktivitāte [47,48]. RPH šķīduma tirozināzi inhibējošā aktivitāte var rasties peptīdu aminoskābju profilu dēļ. Schurink et al. aprakstīja, ka efektīvatirozināze-inhibējošie peptīdi sastāv no arginīna atlikumiem un fenilalanīna [49]. Tirozināzi inhibējošo aktivitāti var uzlabot hidrofobās aminoskābju atliekas (piemēram, alanīns), un alanīns var traucēt melanīna ražošanu [50]. Turklāt Zhang et al. arī ziņoja, ka rīsu proteīna hidrolizāts var samazināt melanīna saturu un tirozināzes aktivitāti UVB inducēto šūnu modelī [51].

cistanche kultūrisms

2.5. Aminoskābju profili un RPH MW

Rīsu proteīna saturs pēc cietes atdalīšanas šajā pētījumā bija 23,56 svara procenti, un proteāzes hidrolizētā parauga hidrolīzes pakāpe bija 9,36 procenti. 1. tabulā ir detalizēti aprakstīts aminoskābju sastāvs RPH. Paraugā katrs 100 g saturēja 5,18 g aminoskābju. Attiecībā uz aminoskābju komponentiem RPH bija richin alanīns, leicīns, arginīns, glutamīnskābe un asparagīnskābe. Katrs 100 g parauga kopā saturēja 1,73 g hidrofobās aminoskābes (alanīns, valīns, leicīns, izoleicīns, prolīns, fenilalanīns un cisteīns). Šis rezultāts pilnībā atšķīrās no mūsu iepriekšējā ziņojuma [43] amilāzes šķīdumā un tā apstrādes temperatūrā cietes noņemšanai. Hidrofobo aminoskābju saturs bija 1,90 reizes lielāks nekā mūsu iepriekšējā ziņojumā. Zemāka apstrādes temperatūra (60 ◦C) šajā pētījumā var novērst proteīnu denaturāciju lielos daudzumos, tādējādi labāk saglabājot aminoskābju aktivitāti. Turklāt līdzīgs secinājums ir iegūts arī no citām sēnīšu amilāzes un glikoamilāzes tosaharizācijas cietes balto rīsu klijās [52].

Pētījumi ir atklājuši, ka hidrofobās aminoskābes ir līdzīgasantioksidantipaaugstinot lipīdu bāzes šķīdību proteīnu hidrolizātos un peptīdos no dažādiem proteīna avotiem, tādējādi veicinot mijiedarbību ar brīvajiem radikāļiem [38,53]. Par dažām aminoskābēm ziņoja Chen et al. [54] vispār būtantioksidanti; pieminētās skābes bija triptofāns, cisteīns, metionīns, tirozīns un histidīns. Šajā pētījumā aromātiskās aminoskābes (fenilalanīns, tirozīns un triptofāns) saturēja 0,53 g/100 g RPH. Tāpēc šīs peptīdu izcelsmes aminoskābes, iespējams, bija atbildīgas par RPH antioksidantu aktivitāti.

Turklāt olbaltumvielām, kas ir hidrolizētas īsākos peptīdos, ir atšķirīgs MW sadalījums, un dažas hidrofobās grupas, kas salocītas pilnīgu dabisko olbaltumvielu molekulu iekšpusē, parasti tiek pakļautas ūdens fāzei. Tas ir saistīts ar proteīnu molekulu strukturālo pārkārtošanos un līdz ar to arī ar proteīna funkcionālajām īpašībām [55,56]. Tricīna-SDS-PAGE dati liecināja, ka RPH MW bija diapazonā no 5 līdz 35 kDa (8.a attēls).

8.b attēlā ir attēlots dažādu MW relatīvais saturs RPH. Kopumā 45,24 procenti no visa proteīna bija galvenajā joslā (MW ≈ 2,4 kDa). Līdzīgi rezultāti tika iegūti attiecībā uz rīsu kliju proteīna hidrolizātu peptīdu. Augstākā antioksidanta aktivitāte, ko ieguva Thamnarathip et al. [37] bija peptīdiem ar MW=6–50 kDa. Turklāt pastāv saikne starp proteīna hidrolizātu funkciju un MV sadalījumu un aminoskābju sastāvu [57]. Tas izskaidro RPH antioksidantu aktivitāti, kas novērota šajā pētījumā.

2.6. Šūnu toksicitātes tests

Turpmākiem lietojumiem ir nepieciešama zema šūnu toksicitāte. Lai novērtētu RPH citotoksicitāti un bioloģisko saderību, ar MTT metodi tika mērīta neapstrādātu 264.7 šūnu dzīvotspēja RPH šķīdumā. Kā parādīts 9. attēlā, šūnu dzīvotspēja bija virs 100 procentiem, 24 un 48 stundas apstrādājot ar 25–2000 µg/ml RPH. Rezultāti liecina par ļoti zemu RPH citotoksicitāti. Tāpēc RPH var potenciāli izmantot kā kosmētiku ar ļoti zemu citotoksicitāti.

3. Materiāli un metodes

3.1. Reaģenti

Dzelzs(III) hlorīds, 2,20-azinobis(3-etilbenzotiazolīns-6-sulfonskābe) (ABTS), trolokss(6-hidroksi-2,5 ,7,8-tetrametilhromāns-2-karbonskābe), l-3,4-dihidroksifenilalanīns(L-DOPA), 1,1-difenil-2- pikrilhidrazils (DPPH) un trihloretiķskābe tika iegūti no Alfa Aesar (Tewksbury, MA, ASV). 2,20-azobis(2-metilpropionamidīna) dihidrohlorīds (AAPH), Folīna-Čokalteu fenola reaģents, gallskābe, askorbīnskābe, sēnestirozināze, un fluoresceīna nātrijs tika iegūts no Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ASV). Nātrija karbonāts tika iegūts no Riedel-de Haën (Seelze, Vācija). Visbeidzot, kālija fericianīds, nātrija hidrogēnfosfāts un nātrija dihidrogēnfosfāts tika iegūti no Showa Chemical (Tokija, Japāna).

3.2. RPH sagatavošana

RPH tika sagatavoti, kā aprakstīts iepriekš, izņemot to, ka sēnīšu amilāze tika pieņemta, lai saharificētu cieti rīsu miltos, izvairoties no aminoskābju bojājumiem, ko izraisa bakterilamilāzes hidrolīze augstās temperatūrās [43, 58]. Simts gramus rīsu miltu iemērc 1000 ml destilēta ūdens, kas satur 0,5 procentus sēnīšu amilāzes (Genencor, NY, ASV); pēc tam maisījumu karsēja 24 stundas līdz 60 ◦C ( pH 4,2), pēc tam ļāva atdzist līdz istabas temperatūrai. Centrifugēšana tika veikta 10 minūtes ar ātrumu 1968 × g, lai noņemtu atlikušo supernatantu. Pēc tam, kad nešķīstošajai daļai tika pievienots 20-kārtīgs ūdens un 2 ml 0,1% hidrolītiskās proteāzes (Healthmate, Changhua, Taivāna), šķīdumu sakrata un inkubēja 4 stundas 55 ◦C temperatūrā. Lai uzturētu šķīduma pH optimālā līmenī, tika izmantota pH-stat metode, un pēc tam tika veikta 85 ◦C karsēšana 10 minūšu forenzīma inaktivācijai. Atlikušo nešķīstošo frakciju noņēma, centrifugējot 15 minūtes ar ātrumu 3075 × g. Supernatantam tika veikta liofilizācija, kas pirms lietošanas tika uzglabāta –20 ◦C temperatūrā.

3.3. RPH antioksidantu aktivitātes

3.3.1. Kopējā fenola koncentrācija (TPC)

RPH TPC noteikšanai tika izmantota Folina-Čokaltē metode [59]. Pirmkārt, 200 µL Folina-Čokalteu fenola reaģenta (0,3 M) vienmērīgi sajauca 5-minūtes kratīšanas laikā ar 200 µL RPH šķīduma un šim maisījumam pievienoja 400 µL dejonizēta (DI) ūdens un 200 µL 10 procentu (w/v) nātrija karbonāta šķīduma. Jauktais šķīdums tika inkubēts 60 minūtes tumsā istabas temperatūrā. Pēc tam to centrifugēja 15 minūtes ar ātrumu 3000 apgr./min. Mērīšanai izmantoja 100 µL supernatanta. Lai noteiktu gallskābes ekvivalenta (GAE) TPC (vienība: mg) uz gramu sausa RPH parauga (vienība: mg GAE/g RPH), optiskās absorbcijas dati tika ievadīti standarta līknē, kas attēlo gallskābi. Absorbcija tika iegūta pie 700 nm, izmantojot EpochMicroplate spektrofotometru (BioTek, VT, ASV).

3.3.2. Kopējais flavonoīdu saturs (TFC)

TFC tika iegūts pēc Wathoni et al pieejas. ar nelielām modifikācijām [60]. Vispirms tika sajaukti 500 µL katrs paraugs un 2% (w/v) alumīnija hlorīda šķīdums. Reakcijas šķīdumu rūpīgi sajauca un atstāja 10 minūtes, un tika novērtēta absorbcija pie 415 nm. Rezultāts ir norādīts kvercetīna ekvivalenta (QE) mikrogramos uz gramu sausa RPH parauga (µg QE/g RPHs).

cistanche kultūrisms

3.3.3. DPPH brīvo radikāļu noņemšanas darbība

Vispirms tika sajaukts 198 µM DPPH etanola šķīdums (50 µL) un RPH šķīdums vai DI ūdens (0,5 µL; attiecīgi paraugs un kontrole) un pēc tam ļauts nostāvēties 30 minūtes tumsā istabas temperatūrā. Pēc tam tika iegūta šķīduma absorbcija pie 517 nm. Relatīvā attīrīšanas aktivitāte tika aprēķināta, nosakot absorbcijas starpību starp paraugu un kontroli. Augsto DPPH brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitāti atspoguļoja zemā optiskā absorbcija. RPH šķīduma DPPH brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitātes novērtējumā izmantotais standarts bija C vitamīns [61–63].

3.3.4. ABTS brīvo radikāļu attīrīšanas darbība

Pieeja, par kuru ziņo Wu et al. tika izmantots, lai novērtētu RPH šķīduma antioksidantu aktivitāti [64]. Vispirms 7 mM ABTS izejas šķīdums (250 µL) tika reaģēts ar 2,45 mM kālija persulfātu (250 µL), lai iegūtu ABTS brīvo radikāļu katjonu (ABTS• plus ), maisījums tika saglabāts. 16 stundas 4 ◦C temperatūrā tumsā pirms lietošanas. Pēc līdzsvarošanas tumsā istabas temperatūrā, tika izmantots 0,1 M fosfātu buferšķīdums (PBS; pH 7,4), lai šķīdumu atšķaidītu līdz 0,70 ± 0,02 absorbcijai pie 734 nm. Pēc tam 180 µL atšķaidīta ABTS šķīduma pievienoja 20 µL Trolox (pozitīvā kontrole) vai RPH šķīdumu (paraugs). Pēc tam maisījums tika pakļauts 10 minūšu inkubācijai istabas temperatūrā. Šis pētījums noteica optisko absorbciju pie 734 nm; zemāka absorbcija atbilda lielākai ABTS brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitātei. Standarts, ko izmantoja, lai novērtētu RPHsolution ABTS brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitāti, bija antioksidants Trolox.

3.3.5. Samazināšanas jauda

Lai noteiktu RPHsolution kopējo antioksidantu aktivitāti, tika izmantots dzelzs reducējošo antioksidantu jaudas tests. Kā ziņo Lin et al. [29], RPH šķīdums (200 µL) tika vienmērīgi sajaukts ar 1 procentu (w/v) K3Fe(CN)6 un 0,2 M PBS buferšķīdumu (pH 6,6; katrs 100 µL). .20 minūtes maisījuma karsēšanai tika izmantota 50 ◦C ūdens vanna; pēc maisījuma izņemšanas no vannas to ātri atdzesēja 3 minūtes. Pēc tam tika pievienota 10% (w/v) trihloretiķskābe (100 µL) un 10- min centrifugēšana pie 3000 apgr./min. Tam sekoja supernatanta ekstrakcija (400 µL) un tā vienmērīga sajaukšana ar 0. 1 procents (w/v) FeCl3 (100 µL) un DI ūdens (400 µL). Fe4[Fe(CN)6]3 tika iegūts, 10-minūtē reaģējot šim maisījumam tumsā. Pēc tam lielāka optiskā absorbcija (mērīta pie 700 nm) norādīja uz lielāku redukcijas spēju. Standarta C vitamīns tika izmantots, lai noteiktu C vitamīna ekvivalenta (VCE) saturu uz gramu RPH.

3.3.6. Skābekļa radikālas absorbcijas spēja (ORAC)

Šis pētījums ieguva ORAC, modificējot iepriekš ziņoto metodi [65]. Pēc RPH parauga izšķīdināšanas destilētā ūdenī RPH šķīdums (50 µL) tika sajaukts ar fluoresceīnu (10 µM) 96- iedobes mikrotitrēšanas plāksnē. Šķīdums tika inkubēts 15-minūtes 37 ◦C temperatūrā, kam sekoja 50 µL AAPH (500 mM) pievienošana. Ik pēc 5 minūtēm un kopā 120 minūtes tika reģistrēta fluorescence (attiecīgi λex un λem=485 un 528 nm). RPH antioksidanta spēja tika atklāta no fluorescences samazināšanās kinētikas, aprēķinot laukumu zem līknes (AUC). ). Aprēķinot RPH ORAC, standarts bija 15–250 µM Trolox. ORAC ir norādīts kā Trolox ekvivalenta (TE) mikromols sausa RPH parauga gramos (µmol TE/g RPHs).

3.4. Hialuronidāzes inhibējošā darbība

Hialuronidāzes inhibīcijas tests tika veikts, izmantojot {{0}}iedobes mikroplati un iepriekš aprakstīto metodi ar nelielām izmaiņām [40]. N-acetilglikozamīns tika atbrīvots, hialuronidāzei reaģējot ar HA substrātu. Jebkura inhibitora klātbūtnē N-acetilglikozamīna izdalīšanās tika samazināta, un šī izdalīšanās tika noteikta, iegūstot 600-nm absorbciju. HA tika izgulsnēts ar skābu albumīna šķīdumu, kas sastāv no 0,1 M acetāta buferšķīduma (pH 3,9) un liellopu seruma albumīna (1 mg/ml). Parauga šķīdums un 5 mg/ml hialuronidāze tika inkubēti 20-minūtē 37 ◦C temperatūrā. Inkubācijas maisījumam pēc tam pievienoja HA (1{{20}}0 µL; 5,0 mg/ml 0,1 M acetāta buferšķīdumā). Tika veikta turpmāka inkubācija 37 ◦C 40 minūtes. Lai apturētu fermentatīvo reakciju, tika pievienots 0,1 ml 0,4 M sārmaina borāta šķīdums.

3.5. Tirozināzi inhibējošā aktivitāte

Šajā pētījumā tika novērtēta RPH antitirozināzes aktivitāte, izmantojot iepriekš ziņoto protokolu ar modifikācijām [66]. Enzīmu šķīdumu (135 U/ml) sagatavoja, izšķīdinot tirozināzi 20 mM fosfāta buferšķīdumā (pH 6,8). Turklāt DIūdens tika izmantots 1, 25 mM L-DOPA šķīduma pagatavošanai. Pēc tam 40 µL dažādu koncentrāciju RPH paraugu šķīdumu sajauca ar 40 µL tirozināzes šķīduma un 120 µL L-DOPA šķīduma. 30 minūtes šis maisījums tika turēts 37 ◦C temperatūrā, lai pārbaudītu RPH inhibīciju.tirozināzeaktivitāte. Lai iegūtu 475-nm absorbciju, tika izmantots spektrofotometrs (FLUOstar Omega MicroplateReader, BMG Labtech GmbH, Vācija). Visi mērījumi tika veikti trīs reizes. Atbilstošās grupas absorbcija, kadtirozināzenebija klāt tika atņemts. Fermentu inhibīcijas ātrums tika noteikts kā

3.6. RPH raksturojums

3.6.1. Aminoskābju profili

Šis pētījums atklāja RPH aminoskābju sastāvu. Pirmkārt, 24 stundas un 115 ◦ C temperatūrā paraugu hidrolizēšanai evakuētās noslēgtās mēģenēs tika izmantota 4 M metānsulfonskābe. Divas Waters 510 šķīdinātāju ievadīšanas sistēmas un aminoskābju analizators (L 8900; Hitachi, Tokija, Japāna) tika izmantotas aminoskābju derivatizētai atdalīšanai uz aSpherisorb ODS2 kolonnas, kuras izmērs ir 25 m. × 64,6 mm. Šajā pētījumā tika izmantoti šādi šķīdinātāji: (a) nātrija acetāts (0,14 M) un trietilamīns (850 µL/L; pH 5,6) un (b) 60 procenti acetonitrila, kura gradients bija 0 procenti 2 minūtes; 0–42 procenti 15,5 minūtēm (izliekta līkne); un 100 procenti 4 minūtēm. Paraugu dublikāti tika ņemti aminoskābju profilu mērīšanai pie 254 nm [67,68].

3.6.2. Olbaltumvielu molekulmasa (MW).

Saskaņā ar Šēgera metodi [69] un reducējošos apstākļos šajā pētījumā tika iegūts MW sadalījums, izmantojot tricīna – nātrija dodecilsulfāta (SDS) – poliakrilamīdgela elektroforēzi (PAGE) ar nelielām modifikācijām. Parauga buferšķīdums (30 g/L SDS, 0.375 MTris-HCl, 0.125 g/l Coomassie Brilliant Blue G-250 un 75 g/ Liofilizētā parauga izkliedēšanai tika izmantots L glicerīns; pH 7), pirms iekraušanas centrifugējot. Kopā 20 µL 2-merkaptoetanola tika pievienoti 1 ml tricine-SDS-PAGE parauga. Paraugu karsēja 100 ◦C temperatūrā 90 sekundes. Izmantojot mikrošļirci, parauga iedobē tika ievietots katrs paraugs un nekrāsots proteīna standarta plaša diapazons (Bio-Rad Laboratories, Vācija). Pēc tam tika veikta elektroforēze - vispirms ar konstantu 30 mV, līdz viss paraugs bija sakraušanas gēlā, un pēc tam līdz pabeigšanai ar konstantu 100 mV. Pēc tam gēla krāsošanai tika uzklāts 0,02% Coomassie Brilliant Blue R-250 šķīdums. Gelu absolūtā fona atkrāsošana tika veikta, kratot želejas 10 procentu etiķskābē nakti. Visbeidzot, gēla attēls tika analizēts, lai identificētu proteīnu joslas joslās; šī analīze tika veikta ImageJ (USNational Institutes of Health, Bethesda, MD, ASV). Standarta marķieri tika izmantoti, lai iegūtu kalibrēšanas līkni, pēc kuras tika novērtēts MW. Īsumā, pirmais solis bija noteikt katras joslas migrācijas garumu (Rf) no atdalošā gēla augšdaļas. Šis otrais solis bija kalibrēšanas līknes aprēķināšana, izmantojot Rf un log (MW) standarta marķieri ar noteiktu MW. MW noteikšana tika veikta, izmantojot proteīna Rf joslas RPH.

3.7. Citotoksicitātes tests

Neapstrādātas 264.7 šūnas tika kultivētas ar augstu glikozes saturu Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), kas satur 10 procentus liellopu augļa seruma (FBS), 4,5 g/l glikozes, 1% antibiotiku šķīdumu (100 vienības/). ml penicilīna un 100 µg/mL streptomicīna), 4 mM L-glutamīna un 1,5 g/nātrija bikarbonāta pie 37 ◦C un 5 procentiem CO2. Neapstrādātu 264.7 šūnu toksicitāte attiecībā uz RPHs tika mērīta ar 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolija bromīda (MTT) proliferācijas testa metodi . Apmēram 1 × 104 šūnas katrā iedobē tika izliktas 96-iedobju plāksnēs. Pēc 24 stundām šūnām tika pievienotas dažādas RPH koncentrācijas (0–2000 µg/mL). Pēc 24 un 48 h inkubācijas pievienoja 100 µL MTT šķīduma (0,5 mg/ml). Pārbaudot mikroskopā, tika novēroti zili formazankristāli. DMEM tika noņemts un katrai iedobei pievienoja 100 µL dimetilsulfoksīda (DMSO). Absorbcija tika mērīta, izmantojot mikrotitra plates lasītāju. Pēc tam šūnu dzīvotspēja (procentos) tika aprēķināta kā [A570 (apstrādātas šūnas) - A570 (fons)] / [A570 (neapstrādātas šūnas) - A570 (fons)] × 100 procenti [70].

3.8. Statistiskā analīze

Ziņojumā par katru hidrolizāta paraugu bija vidējā vērtība no trim neatkarīgiem atkārtotiem eksperimentiem un noteikšanām. Rezultāti, kas izteikti vidējā ± standarta novirzē (SD), tika analizēti ar vienvirziena ANOVA un Dankana post hoc testu, izmantojot StatisticalAnalysis System (versija 20.0; SPSS, Armonk, NY, ASV). Vērtības p < 0,05="" tika="" uzskatītas="" par="" statistiski="">

4. Secinājumi

Šajā pētījumā tika pārbaudītas RPH funkcijas. Eksperimentālie rezultāti atklāja, ka RPH satur fenola savienojumus un flavonoīdus, un tiem bija virkne antioksidantu aktivitāšu, piemēram, DPPH un ABTS attīrīšanas aktivitātes, samazināšanas spēja un ORAC. Turklāt RPH efektīvi inhibētirozināzeun hialuronidāzes aktivitātes. Proteāze bija kritisks faktors, kas ietekmēja RPH MW modeļus. RPH analīze liecina par to potenciālu izmantot kā sastāvdaļu kosmētikā.

cistanche kultūrisms

Atsauces

1. Ičihaši, M.; Ando, ​​H.; Jošida, M.; Nikijs, Y.; Matsui, M. Ādas fotonovecošanās. Pretnovecošanās med. 2009, 6, 46–59. [CrossRef]

2. Kims, J.-S.; Kims, D.; Kims, H.-J.; Jang, A. Ēzeļa ādas želatīna hidrolizātu aizsardzības ietekme uz UVB izraisītu cilvēka ādas fibroblastu fotonovecošanos. Process. Biochem. 2018, 67, 118–126. [CrossRef]

3. Karočo, M.; Ferreira, IC Pārskats par antioksidantiem, prooksidantiem un ar tiem saistītajām pretrunām: dabiskie un sintētiskie savienojumi, skrīninga un analīzes metodoloģijas un nākotnes perspektīvas. Food Chem. Toksikols. 2013, 51, 15.–25. [CrossRef]

4. Guo, X.; Džans, Dž.; Ma, Y.; Tian, ​​S. Rīsu atlikumu proteīnu ierobežotas hidrolīzes optimizācija un produktu funkcionālo īpašību raksturojums. J. Food Proc. Saglabāt. 2013, 37, 245–253. [CrossRef]

5. Park, H.-Y.; Lī, K.-W.; Choi, H.-D. Rīsu kliju sastāvdaļas: imūnmodulējošas un terapeitiskas darbības. Pārtikas funkcija. 2017, 8935–943. [CrossRef] [PubMed]

6. Džou, K.; Canning, C.; Sun, S. Mikrobu proteāžu un ultrafiltrācijas rīsu proteīnu hidrolizātu ietekme uz brīvajiem radikāļiem un gaļas lipīdu oksidāciju. LWT 2013, 50, 331–335. [CrossRef]

7. Piu', LD; Tassoni, A.; Serrazaneti, DI; Ferri, M.; Babini, E.; Tagliazucchi, D.; Džanoti, A. Cietes nozares šķidrā blakusprodukta izmantošana bioaktīvo peptīdu ražošanai no rīsu hidrolizētiem proteīniem. Food Chem. 2014, 155., 199.–206. [CrossRef]

8. Feri, M.; Grēns-Hēdfelds, J.; Brecs, K.; Giljons, F.; Mišelīni, E.; Calaretta, MM; Lamborghini, M.; Gruarin, N.; Roda, A.;Kraft, A.; un citi. Peptīdu frakcijas, kas iegūtas no rīsu blakusproduktiem, izmantojot videi draudzīgu procesu, demonstrējot ar veselību saistītās bioloģiskās aktivitātes. PLOS ONE 2017, 12, e0170954. [CrossRef]

9. Wen, C.; Džans, Dž.; Džans, H.; Duans, Y.; Ma, H. No augu proteīniem iegūti antioksidantu peptīdi: izolācija, identifikācija, darbības mehānisms un pielietojums pārtikas sistēmās: pārskats. Trends Food Sci. Tehn. 2020, 105., 308.–322. [CrossRef]

10. Felans, M.; Aherne, A.; Ficdžeralds, RJ; O'Braiens, NM No kazeīna iegūti bioaktīvie peptīdi: bioloģiskie efekti, rūpnieciskais lietojums, drošības aspekti un normatīvais statuss. Int. Dairy J. 2009, 19, 643–654. [CrossRef]

11. Udenigve, CC; Aluko, RE No pārtikas olbaltumvielām iegūti bioaktīvie peptīdi: ražošana, apstrāde un iespējamie ieguvumi veselībai. J.Food Sci. 2012, 77, 11.–24. [CrossRef] [PubMed]

12. Fardets, A.; Rock, E. Piena, jogurta, raudzēta piena un siera antioksidantu potenciāls in vitro un in vivo: pierādījumu pārskats. Nutr. Res. Rev. 2018, 31, 52–70. [CrossRef]

13. Līčs, JB; Katrīna, AB; Čārlzs, WPJ; Christine, ES Fotocrosslinked hialuronskābes hidrogēli: dabīgas, bioloģiski noārdāmas audu inženierijas sastatnes. Biotehnoloģija. Bioeng. 2003, 82, 578–589. [CrossRef]

14. Jegasotijs, SM; Zabolotniaia, V.; Bielfeldt, S. Jaunas aktuālas nanohialuronskābes efektivitāte cilvēkiem. Dž.Klins. Aesthet.Dermatol. 2014, 7., 27.–29.

15. Ndlovu, G.; Fouche, G.; Tselanjane, M.; Kordjē, V.; Steenkamp, ​​V. Četru Dienvidāfrikas ārstniecības augu anti-novecošanās potenciāla noteikšana in vitro. BMC papildinājums. Altern. Med. 2013, 13, 304. [CrossRef]

16. Jiratchayamaethasakul, C.; Dings, Y.; Hvangs, O.; Im, S.-T.; Jang, Y.; Myung, S.‑W.; Lī, Dž. M.; Kims, H.-S.; Ko, S.-C.; Lee, S.-H. In vitro skrīnings par elastāzes, kolagenāzes, hialuronidāzes un tirozināzes inhibējošo un antioksidantu darbību 22 halofītu augu ekstraktiem jauniem kosmētiskiem līdzekļiem. Zivis. Aquat. Sci. 2020, 23, 1.–9. [CrossRef]

17. Kangs, M.; Park, S.-H.; Ak, SW; Lī, DA; Yoo, JA; Nho, YH; Lī, S.; Han, BS; Čo, JY; Lee, J. Resorcinola anti-melanogenic efektus veicina cAMP signālu nomākšana un p38 MAPK signālu aktivizēšana. Biosci. Biotehnoloģija. Biochem.2018, 82, 1188–1196. [CrossRef]

18. Čatatikuns, M.; Jamauči, T.; Jamasaki, K.; Aiba, S.; Chiabchalard, A. Croton roxburghii un Crotonsublyratus lapu antimelanogēnā iedarbība -MSH stimulētās B16F10 šūnās. J. Tradīts. Papildināt. Med. 2019, 9, 66–72. [CrossRef] [PubMed]

19. Rizzello, CG; Nionelli, L.; Koda, R.; Gobbetti, M. Vēža profilaktiskā peptīda lunasīna sintēze ar pienskābes baktērijām Skābes fermentācijas laikā. Nutr. Vēzis 2012, 64, 111–120. [CrossRef] [PubMed]

20. Rizzello, CG; Tagliazucchi, D.; Babini, E.; Rutella, GS; Saa, DLT; Gianotti, A. Bioaktīvie peptīdi no augu pārtikas matricām: pētniecības tendences un jaunas biotehnoloģijas sintēzei un reģenerācijai. J. Funkcija. Foods 2016, 27, 549–569. [CrossRef]

21. Koskueta, ER; Campos, DA; Osorio, H.; Nerli, BB; Pintado, M. Enzīmu sojas proteīna hidrolīze: instruments biofunkcionālu pārtikas sastāvdaļu ražošanai. Food Chem. X 2019, 1, 100006. [CrossRef]

22. Aydemir, LY; Yemenicioglu, A. Vai ar olbaltumvielām saistītie fenola antioksidanti pākšaugos ir neredzēti aisberga sastāvdaļa? J. Augs. Biochem.Physiol. 2013, 1., 1.–3. [CrossRef]

23. Huanga, Šveice; Ng, LT Dažu komerciālo rīsu šķirņu polifenolu satura un bioaktīvo sastāvdaļu kvantitatīva noteikšana Taivānā. J. Food Compos. Anal. 2012, 26, 122–127. [CrossRef]

24. Jošitomi, K.; Taniguči, S.; Tanaka, K.; Uji, Y.; Akimitsu, K.; Gomi, K. Rīsu terpēna sintāze 24 (OsTPS24) kodē jasmonātu reaģējošu monoterpēna sintāzi, kas ražo antibakteriālu terpēnu pret rīsu patogēnu. J. Augs. Fiziol. 2016, 191 120–126. [CrossRef]

25. Kamolsukyeunyong, W.; Sukhakets, V.; Pitija, K.; Thorngkham, P.; Mahatheeranont, S.; Toojinda, T.; Vanavichit, A. Rice Seskviterpēnam ir svarīga loma antiksenozē pret brūno plantopper rīsos. Plants 2021, 10, 1049. [CrossRef][PubMed]

26. Liu, Y.; Van, Z.; Li, H.; Liangs, M.; Yang, L. Rīsu proteīna antioksidanta aktivitāte in vitro, ko ietekmē sārma pakāpe un kuņģa-zarnu trakta proteāzes gremošana. J. Sci. Pārtikas lauksaimniecības. 2016, 96, 4940–4950. [CrossRef] [PubMed]

27. Phongthai, S.; D'Amiko, S.; Šēnlehners, R.; Homthawornchoo, W.; Rawdkuen, S. Rīsu kliju proteīna hidrolizātu frakcionēšana un antioksidantu īpašības, ko stimulē kuņģa-zarnu trakta gremošana in vitro. Food Chem. 2018, 240., 156.–164. [CrossRef][PubMed]

28. Huangs, S.-L.; Van, V.-H.; Zhong, X.-Y.; Lin, C.-T.; Lin, W.-S.; Čangs, M.-Y.; Lin, Y.-S. Jatropha curcas L. sēklu čaumalas un kodolu ekstraktu antioksidanta īpašības. Appl. Sci. 2020, 10, 3279. [CrossRef]

29. Lin, Y.-S.; Lin, W.-S.; Tungs, J.-W.; Cheng, Y.-C.; Čangs, M.-Y.; Chen, C.-Y.; Huangs, S.-L. Jujube augļu sēklu un mizas mīkstuma antioksidantu spējas. Appl. Sci. 2020, 10, 6007. [CrossRef]

30. Šahi, Z.; Sayyed-Alangi, SZ; Najafian, L. Enzīmu tipa un procesa laika ietekme uz hidrolīzes pakāpi, elektroforēzes joslām un hidrolizēto proteīnu antioksidanta īpašībām, kas iegūti no attaukotā Bunium persicum Bioss. nospiediet kūku. Heliyon 2020, 6, e03365. [CrossRef] [PubMed]

31. Sje, H.; Huangs, Dž.; Woo, MW; Hu, J.; Sjons, H.; Zhao, Q. Aukstā un karstā enzīmu dezaktivācijas ietekme uz rīsu nogulšņu proteīna hidrolizātu strukturālajām un funkcionālajām īpašībām. Food Chem. 2021, 345, 128784. [CrossRef]

32. Rani, S.; Pūda, K.; Pal, GK Rīsu proteīna hidrolizātu un peptīdu izpēte, īpaši atsaucoties uz antioksidantu potenciālu: skaitļošanas metodes bioloģiskās aktivitātes noteikšanai. Trends Food Sci. Tehn. 2018, 80., 61.–70. [CrossRef]

33. Bisbijs, RH; Brūka, R.; Navaratnam, S. Antioksidantu oksidācijas potenciāla ietekme skābekļa radikāļu absorbcijas spējas (ORAC) testā. Food Chem. 2008, 108, 1002–1007. [CrossRef]

34. Eliass, RJ; Kellerbija, SS; Decker, E. Proteīnu un peptīdu antioksidanta aktivitāte. Krit. Rev. Food Sci. Nutr. 2008, 48, 430–441.[CrossRef] [PubMed]

35. Mans, Y.; Li-Čans, E.; Jiang, B. (Eds.) Bioaktīvie proteīni un peptīdi kā funkcionāli pārtikas produkti un uztura produkti; Wiley-Blackwell: Hoboken, Ņūdžersija, ASV, 2010; 29.–42.lpp.

36. Adebiyi, AP; Adebiyi, AO; Jamašita, Dž.; Ogava, T.; Muramoto, K. No rīsu kliju proteīna hidrolizātiem iegūto antioksidantu peptīdu attīrīšana un raksturošana. Eiro. Food Res. Tehn. 2008, 228, 553–563. [CrossRef]

37. Thamnarathip, P.; Jangchud, K.; Nitisinprasert, S.; Vardhanabhuti, B. Peptīda molekulmasas identifikācija no rīsu kliju proteīna hidrolizāta ar augstu antioksidantu aktivitāti. J. Cereal Sci. 2016, 69., 329.–335. [CrossRef]

38. Tacias-Paskacio, VG; Morelons-Sterlings, R.; Siārs, E.‑H.; Tavano, O.; Berenguer-Murcia, Á.; Fernandez-Lafuente, R. Alcalasein izmantošana bioaktīvo peptīdu ražošanā: pārskats. Int. J. Biol. Macromol. 2020, 165, 2143–2196. [CrossRef] [PubMed]

39. Sarringkarin, W.; Laokuldilok, T. Lipīga rīsu kliju proteīna hidrolizāta ar antioksidatīvām īpašībām ražošanas apstākļu optimizācija. CMU J. Nat. Sci. 2017, 16, 1.–18. [CrossRef]

40. Džans, Q.; Tongs, X.; Qi, B.; Van, Z.; Li, Y.; Sui, X.; Jiang, L. Alkalāzes hidrolizēta sojas hidrolizāta antioksidantu aktivitātes izmaiņas simulētā kuņģa-zarnu trakta gremošanu un transepiteliālo transportu. J. Funkcija. Foods 2018, 42, 298–305. [CrossRef]

41. Tu, PTB; Tawata, S. Divu Alpinia zerumbet šķirņu ēterisko eļļu antioksidanti, pretnovecošanās un pretmelanogēnās īpašības. Molecules 2015, 20, 16723–16740. [CrossRef]

42. Nišida, Y.; Sugahara, S.; Vada, K.; Toyohisa, D.; Tanaka, T.; Ono, M.; Yasuda, S. Scilla scilloides sīpoliņu etilacetāta ekstrakta inhibējošā iedarbība uz lipoksigenāzes un hialuronidāzes aktivitātēm. Pharm. Biol. 2014, 52, 1351–1357. [CrossRef]

43. Čens, H.-J.; Dai, F.‑J.; Fan, S.‑L.; Huang, Y.-C.; Chau, C.-F.; Lin, Y.-S.; Chen, C.-S. Rīsu (Oryza sativa L.) proteīna hidrolizāta hialuronidāzes inhibīcijas kinētika. Appl. Sci. 2020, 10, 9087. [CrossRef]

45. Girišs, K.; Kemparaju, K. Burvju līme hialuronāna un tās dzēšgumijas hialuronidāze: bioloģiskais pārskats. Life Sci. 2007, 80,1921–1943. [CrossRef] [PubMed]

45. Zolgadri, S.; Bahrami, A.; Khan, MTH; Munozs-Munozs, J.; Garsija-Molina, F.; Garsija-Kanovs, F.; Saboury, AA Visaptverošs pārskats par tirozināzes inhibitoriem. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Seo, EJ; Hong, ES; Čoi, MH; Kims, KS; Lee, SJ Rhamnus yoshinoi ekstraktu antioksidants un ādu balinošs efekts. Korejiešu Dž. Food Sci. Tehn. 2010, 42, 750–754.

47. Očija, A.; Tanaka, S.; Tanaka, T.; Taniguchi, M. Rīsu kliju proteīns kā spēcīgs antimelanogēnu peptīdu avots ar tirozināzes inhibējošo aktivitāti. J. Nat. Prod. 2016, 79, 2545–2551. [CrossRef] [PubMed]

48. Kubglomsongs, S.; Theerakulkait, C.; Niedrs, RL; Jans, L.; Maiers, CS; Stīvenss, JF. Tirozināzes inhibitoru un vara helātu veidojošo peptīdu izolēšana un identificēšana no hidrolizēta rīsu klijām iegūta albumīna. J. Agric. Food Chem. 2018, 66, 8346–8354.[CrossRef]

49. Šurinks, M.; van Berkels, WJ; Vičers, H.; Boeriu, CG Jauni peptīdi ar tirozināzes inhibējošo aktivitāti. Peptides 2007, 28,485–495. [CrossRef]

50. Išikava, M.; Kawase, I.; Ishii, F. Aminoskābju kombinācija samazina pigmentāciju B16F0 melanomas šūnās. Biol. Pharm.Bull. 2007, 30, 677–681. [CrossRef] [PubMed]

51. Džans, R.; Vejs, Y.; Li, M.; Cai, M.; Gu, R.; Ma, Y.; Čens, L.; Vangs, J. Rīsu proteīna hidrolizāta un tā raksturīgo peptīdu Leu-Leu-Lys, Leu-Pro-Lys un piroGlu-Lys melanoģenēzes ietekme uz UVB izraisītām cilvēka epidermas melanocītu šūnām. FoodFunt. 2020, 11, 8757–8767. [CrossRef]

52. Van, Y.; Cai, D.; Viņš, M.; Van, Z.; Qin, P.; Tan, T. Atklāta fermentatīva l-pienskābes ražošana, izmantojot balto rīsu klijas, vienlaikus veicot saharizāciju un fermentāciju. Bioresurss. Tehn. 2015, 198, 664–672. [CrossRef] [PubMed]

53. Pāns, M.; Dzjana, TS; Pan, JL Rapšu proteīna hidrolizātu antioksidanta iedarbība. Pārtikas bioprocess. Tehn. 2009, 4, 1144–1152.[CrossRef]

54. Čens, HM; Muramoto, K.; Jamauči, F.; Nokihara, K. Antioksidanta aktivitāte izstrādātiem peptīdiem, kuru pamatā ir antioksidatīvais peptīds, kas izolēts no sojas pupu proteīna sagremojumiem. J. Agric. Food Chem. 1996, 44, 2619–2623. [CrossRef]

55. Liu, Q.; Kongs, B.; Xiong, YL; Xia, X. Cūku plazmas proteīna hidrolizāta antioksidanta aktivitāte un funkcionālās īpašības, ko ietekmē hidrolīzes pakāpe. Food Chem. 2010, 118., 403.–410. [CrossRef]

57. Lemess, A.; Sala, L.; Rūdas, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Pārskats par jaunākajiem sasniegumiem šifrētu bioaktīvo peptīdu jomā no olbaltumvielām bagātiem atkritumiem. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef] [PubMed]

57. Van, J.-S.; Žao, M.-M.; Zhao, Q.-Z.; Dzjans, Y.-M. Kviešu lipekļa papaīna hidrolizātu antioksidanta īpašības dažādās oksidācijas sistēmās. Food Chem. 2007, 101, 1658–1663. [CrossRef]

58. Gao, M.-T.; Kaneko, M.; Hirata, M.; Toorisaka, E.; Hano, T. Rīsu kliju kā barības vielu avota izmantošana fermentatīvai pienskābes ražošanai. Bioresurss. Tehn. 2008, 99, 3659–3664. [CrossRef] [PubMed]

59. Huang, WY; Lin, YR; Ho, RF; Liu, HY; Lin, YS Ūdens šķīdumu ietekme uz zaļās tējas lapu ekstrakciju. Sci. World J. 2013, 2013, 368350. [CrossRef]

60. Vatoni, N.; Šans, CY; Shan, WY; Rostinavati, T.; Indradi, RB; Prativi, R.; Muchtaridi, M. Indonēzijas mangostāna (Garcinia mangostana L.) mizas pektīna raksturojums un antioksidanta aktivitāte. Heliyon 2019, 5, e02299. [CrossRef]

61. Tsai, C.-C.; Čans, K.-F.; Huang, W.-Y.; Lin, J.-S.; Čans, P.; Liu, H.-Y.; Lin, Y.-S. Lactobacillus rhamnosus SpentCulture Supernatanta pielietojumi kosmētikas antioksidācijas, balināšanas un mitruma saglabāšanas lietojumos. Molecules 2013, 18, 14161–14171.[CrossRef]

62. Huang, W.-Y.; Lī, P.-C.; Hsu, J.-C.; Lin, Y.-R.; Čens, H.-J.; Lin, Y.-S. Ūdens kvalitātes ietekme uz Yerba Mate ekstrakta pulveru izšķīšanu. Sci. World J. 2014, 2014, 1.–6. [CrossRef] [PubMed]

63. Čans, K.-F.; Wu, C.-T.; Huang, W.-Y.; Lin, W.-S.; Wu, H.-W.; Huangs, T.-K.; Čangs, M.-Y.; Lin, Y.-S. Antioksidācija un melanoģenēze Dažādu Dendrobium tosaense ekstraktu inhibīcija. Molecules 2018, 23, 1810. [CrossRef] [PubMed]64. Wu, C.-T.; Agrawal, DC; Huang, W.-Y.; Hsu, H.-C.; Yang, S.-J.; Huangs, S.‑L.; Lin, Y.-S. Ar hidrotermālo metodi iegūto izlietoto kafijas malto ekstraktu funkcionalitātes analīze. J. Chem. 2019, 2019, 1.–8. [CrossRef]

65. Dorta, E.; Rodrigess-Rodrigess, EM; Džimeness-Kvezada, A.; Fuentess-Lemuss, E.; Speiskis, H.; Lissi, E.; López-Alarcón, C. Skābekļa radikālas absorbcijas spējas (ORAC) testa izmantošana, lai prognozētu mango (Mangifera indica L.) blakusproduktu spēju kavēt gaļas olbaltumvielu oksidāciju. Pārtikas anal. Metodes 2016, 10, 330–338. [CrossRef]

66. Lin, Y.-S.; Čens, H.-J.; Huangs, J.-P.; Lī, P.-C.; Tsai, C.-R.; Hsu, T.-F.; Huang, W.-Y. Tirozināzes inhibējošās aktivitātes kinētika, izmantojot Vitis vinifera lapu ekstraktus. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 5232680. [CrossRef] [PubMed]

67. Bidlingmeijere, BA; Koena, SA; Tarvin, TL Ātrā aminoskābju analīze, izmantojot pirmskolonnas derivatizāciju. J. Chromatogr. BBiomed. Sci. Appl. 1984, 336, 93–104. [CrossRef]

68. Asai, TT; Oikava, F.; Jošikava, K.; Inoue, N.; Sato, K. No pārtikas iegūti kolagēna peptīdi, prolil-hidroksiprolīns (Pro-Hyp) un hidroksiprolilglicīns (Hyp-Gly) uzlabo primārās kultivētās peles ādas fibroblastu augšanu, izmantojot liellopu augļa serumu, kas brīvs no hidroksiprolila peptīda. Int. J. Mol. Sci. 2019, 21, 229. [CrossRef]

69. Schägger, H. Tricine–SDS–PAGE. Nat. Protok. 2006, 1, 16–22. [CrossRef]

70. Diao, J.; Čī, Z.; Guo, Z.; Zhang, L. Mung pupiņu proteīna hidrolizāts modulē imūnreakciju, izmantojot NF-kB ceļu inlipopolisaharīdu stimulētos RAW 264.7 makrofāgos. J. Food Sci. 2019, 84, 2652–2657.[CrossRef]