Polisaharīdu ekstrakcija, fizikāli ķīmiskās īpašības, pretnovecošanās un antioksidanta iedarbība no rūpniecisko kaņepju atlikumiem, 2. daļa

2.8. Pretnovecošanās aktivitātes pētījums

2.8.1. Šūnu dzīvotspēja

In vitro citotoksicitātes eksperimentus bieži izmanto, lai novērtētu pārbaudīto paraugu toksicitāti [37]. IHRP ietekme uz HDF un HEK šūnu dzīvotspēju, kas bija parasti izmantotās epidermas šūnu līnijas, ir parādīta 5. attēlā. IHRP gandrīz nebija citotoksicitātes pret HDF un HEK. Turklāt IHRP varētu veicināt šūnu proliferāciju no 100 līdz 800 µg/ml. Lai nodrošinātu, ka parauga koncentrācija neietekmē šūnu dzīvotspēju, turpmākajos eksperimentos mēs izvēlējāmies IHRP koncentrāciju zem 400 µg / ml.

Cistanche glikozīds var arī palielināt SOD aktivitāti sirds un aknu audos un būtiski samazināt lipofuscīna un MDA saturu katrā audā, efektīvi attīrot dažādus reaktīvos skābekļa radikāļus (OH-, H2O₂ utt.) un aizsargājot no izraisītiem DNS bojājumiem. ar OH-radikāļiem. Cistanche feniletanoīda glikozīdiem ir spēcīga brīvo radikāļu attīrīšanas spēja, augstāka reducējošā spēja nekā C vitamīnam, tie uzlabo SOD aktivitāti spermas suspensijā, samazina MDA saturu un zināmā mērā aizsargā spermas membrānas darbību. Cistanche polisaharīdi var uzlabot SOD un GSH-Px aktivitāti eksperimentāli novecojošu D-galaktozes izraisītu peļu eritrocītos un plaušu audos, kā arī samazināt MDA un kolagēna saturu plaušās un plazmā, kā arī palielināt elastīna saturu. laba attīrošā iedarbība uz DPPH, pagarina hipoksijas laiku novecojošām pelēm, uzlabo SOD aktivitāti serumā un aizkavē plaušu fizioloģisko deģenerāciju eksperimentāli novecojošām pelēm Ar šūnu morfoloģisko deģenerāciju eksperimenti ir parādījuši, ka Cistanche ir labas antioksidanta spējas un tas var būt zāles ādas novecošanās slimību profilaksei un ārstēšanai. Tajā pašā laikā ehinakozīdam Cistančā ir ievērojama spēja attīrīt DPPH brīvos radikāļus un novērst reaktīvās skābekļa sugas, novērst brīvo radikāļu izraisītu kolagēna noārdīšanos, un tam ir arī laba timīna brīvo radikāļu anjonu bojājumu labošanas ietekme.

Noklikšķiniet uz Cistanches Herba Antioksidantiem

【Lai iegūtu plašāku informāciju:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

2.8.2. HDF šūnu skrāpējuma tests

Skrāpējuma tests ir in vitro metode, ko plaši izmanto, lai novērtētu šūnu un molekulāro mehānismu ieguldījumu šūnu proliferācijā un migrācijā [38]. HDF skrāpējumu dzīšanas stāvokļa attēli ir parādīti 6. attēlā. Dažādu koncentrāciju IHRP bija labvēlīgi šūnu skrāpējumu dziedēšanai salīdzinājumā ar kontroli. Turklāt, ja IHRP koncentrācija bija no 50 līdz 200 µg/mL, IHRP var ievērojami veicināt šūnu skrāpējumu dzīšanu. HDF skrāpējumu dzīšanas ātrums pēc 24 stundām bija attiecīgi 64,51 ± 3,69 procenti (p < 0,01), 58,03 ± 3,90 procenti (p < 0,05) un 66,21 ± 6,60 procenti (p < 0,01), kad IHRP koncentrācija bija 50, 100 un 200 µg/mL, kā parādīts 6. tabulā. Turklāt IHRP dziedinošais efekts bija ļoti tuvu pozitīvās kontroles TGF- (62,29 ± 4,69 procenti, p < 0,01). Skrāpējumu testa rezultāti liecināja, ka IHRP var paātrināt šūnu skrāpējumu dzīšanu un veicināt šūnu proliferāciju.

2.8.3. HDF gēnu ekspresijas qRT-PCR analīze

Ir veikti vairāki pētījumi, lai novērtētu dažādu augu pretnovecošanās potenciālu [39,40]. HDF pretnovecošanās gēnu relatīvā kvantitatīvā noteikšana ir parādīta 7. attēlā. Kā parādīts attēlā, TGF-, Vc un HA tika izmantoti kā pozitīvā kontrole. AQP-3 relatīvās kvantitatīvās noteikšanas secība bija HA > TGF- > IHRP > Vc. COL1A1 relatīvās kvantitatīvās noteikšanas secība bija TGF-> Vc> HA> IHRPs. COL3A1 relatīvās kvantitatīvās noteikšanas secība bija Vc > TGF- > HA > IHRPs. ELASTIN relatīvās kvantitatīvās noteikšanas secība bija TGF-> Vc> HA> IHRPs. MMP-1 relatīvās kvantitatīvās noteikšanas secība bija IHRPs > HA > Vc > TGF-. Tāpēc, salīdzinot ar pozitīvo kontroli, IHRP gandrīz nebija pozitīvas ietekmes uz AQP-3, COL1A1, COL3A1 un ELASTIN ekspresiju. Tomēr IHRP ievērojami veicināja MMP izpausmi-1. MMP-1 galvenokārt ģenerē keratinocīti, un to galvenokārt izmanto ādas kolagēna šķiedru sadalīšanai un fragmentācijai [41]. Rezumējot, IHRP varētu veicināt HDF proliferāciju un ar novecošanos saistītu gēnu ekspresiju, norādot uz IHRP pretnovecošanās un ādas atjaunošanas potenciālu.

3. Materiāli un metodes

3.1. Materiāli un reaģenti

IHR nodrošināja Yunnan Hempmon Pharmaceuticals Co., Ltd. (Kunminga, Ķīna). Fenolu, naftolu, sērskābi, karbazolu, Coomassie blue G-250, fosforskābi, etanolu, hloroformu un monosaharīdu kontroli piegādāja Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Šanhaja, Ķīna). Galakturonskābe, glikuronskābe, guluronskābe un arbutīns tika iegādātas no Sigma-Aldrich Co., Ltd. (St. Louis, MO, ASV). Cilvēka dermas fibroblasts (HDF), cilvēka epidermas keratinocīti (HEK) un pilnīga šūnu barotne tika iegādāta no Sciencell Co., Ltd. (Carlsbad, CA, ASV). 12-iedobju plāksnes un 96-iedobju plāksnes piedāvāja Corning Co., Ltd. (Corning, NY, ASV). CCK-8 šūnu dzīvotspējas noteikšanas komplekts tika nopirkts no DOJINDO Biology Co., Ltd. (Tokija, Japāna), un citus noteikšanas komplektus piedāvāja Takara Co., Ltd. (Takara, Japāna).

3.2. IHRP ekstrakcijas optimizācija

3.2.1. Dažādu ekstrakcijas metožu salīdzinājums

Perkolācijas ekstrakcija: 100 g IHR tika pievienots 2000 ml dejonizēta ūdens. Ekstrakcija tika veikta ar plūsmas ātrumu 150 ± 50 ml / h pēc 2 stundām. Karsēšanas ekstrakcija: 100 g IHR pievienoja 2000 ml dejonizēta ūdens. Ekstrakcija tika veikta 98 ​​◦C 1 stundu un process tika atkārtots divas reizes. Ekstrakcija ar ultraskaņu: 100 g IHR izšķīdināja 2000 ml dejonizēta ūdens. Ekstrakcija tika veikta 0,5 stundas 60 ◦ C temperatūrā un process tika atkārtots divas reizes.

Filtrāti tika koncentrēti, izmantojot vakuuma rotācijas iztvaicētāju. Pēc tam šķīdumu žāvē ar vakuuma žāvētāju. Polisaharīdu saturs tika noteikts, lai izvēlētos piemērotu metodi.

3.2.2. Viena faktora eksperimenti

Lai iegūtu IHRP, noteiktam daudzumam dejonizēta ūdens tika pievienots 100 g IHR. Ekstrakcijas temperatūra (40, 60, 80 un 98 ± 2 ◦C), cietās vielas un šķidruma attiecība (1:6, 1:8, 1:10 un 1:15), ekstrakcijas laiks (0,5, 1,0, 1,5 un 2 h), pH (3, 5, 7, 9 un 11) un vairākas secīgas ekstrakcijas (1, 2, 3, 4) tika pētītas atsevišķi, lai novērtētu atsevišķu faktoru ietekmi uz IHRP ekstrakciju.

3.2.3. Ortogonāls eksperimentālais dizains

Ekstrakcijas apstākļi tika vēl vairāk optimizēti, izmantojot ortogonālu eksperimentālo dizainu. Kā parādīts 7. tabulā, četri atlasītie mainīgie bija ekstrakcijas temperatūra (60, 80 un 98 ± 2 ◦C), RS/L (1:6, 1:8 un 1:10), secīgo ekstrakciju skaits (1 , 2 un 3) un pH (4, 7 un 10). Ortogonālie eksperimenti tika sadalīti 9 grupās. Polisaharīdu svars tika uzskatīts par mērķi, lai novērtētu ekstrakcijas apstākļus.

3.3. IHRPs alkohola nokrišņu apstākļu ekrāns

Ekstrakcijas šķīdums tika iegūts optimālā stāvoklī saskaņā ar 3.2 un tika pievienots 400 ml etanola. Eksperimenti tika veikti, pamatojoties uz dažādiem spirta pievienošanas ātrumiem, maisīšanas metodi un dzesēšanas ātrumu 8. tabulā. Nogulsnes tika iegūtas pēc centrifugēšanas un žāvēšanas. Pēc tam tika iegūts svars un polisaharīdu saturs, lai noteiktu piemērotus spirta nogulsnēšanas apstākļus.

3.4. Polisaharīdu iznākuma un IHRP ķīmiskā sastāva noteikšana

Olbaltumvielu saturs tika aprēķināts, pamatojoties uz Bredforda metodi, un kā standarts tika izmantots liellopu seruma albumīns (BSA) [42]. Kopējais cukura saturs IHRP tika iegūts pēc fenola sulfāta metodes, un glikoze tika izmantota kā standarts [43]. Uronskābes saturs tika iegūts ar karbazola-sērskābes metodi [44]. Polisaharīdu iznākums tika iegūts ar (1) vienādojumu.

kur YP attiecas uz polisaharīdu iznākumu, mA attiecas uz IHRP svaru un mB apzīmē IHR svaru, ko izmanto polisaharīdu ekstrakcijai.

3.5. IHRP attīrīšana

Pirmkārt, 100 g neapstrādātu IHRP tika sagatavoti optimālajā stāvoklī, kas noteikts 3.2. un 3.3. sadaļā. Neapstrādāti IHRP tika tālāk attīrīti ar dažādām metodēm.

Aktivētās ogles adsorbcija: 10 g neapstrādātu IHRP pievienoja 200 ml dejonizēta ūdens. Aktīvā ogle ar 1% , 2% , 4% un 8% IHRP svara tika sajaukta ar šķīdumu, attiecīgi. Pēc tam šķīdumu 1 stundu maisīja 60 ◦ C temperatūrā un filtrēja. Pēc mazgāšanas ar dejonizētu ūdeni filtrāts tika koncentrēts un žāvēts.

Membrānas filtrēšana: 10 g neapstrādātu IHRP pievienoja 500 ml dejonizēta ūdens. Pēc tam šķīdumu nepārtraukti filtrēja ar membrānām ar dažādu molekulmasu (30, 000 Da, 10, 000 Da, 1000 Da un 500 Da). Filtrāts un retentāts tika savākti un žāvēti. Visbeidzot, tika iegūti IHRP ar dažādu molekulmasu.

Savage metode: 1 g neapstrādātu IHRP tika pievienots 100 ml dejonizēta ūdens. Pēc tam šķīdumu sajauca ar Sevage reaģentu (n-butanols: hloroforms=1: 5 (v/v)). Maisījumu maisīja 15 minūtes un pārnesa uz dalāmo piltuvi stratifikācijai. Iepriekš minētā procedūra tika atkārtota 5 reizes. Pēc tam gan organiskā, gan ūdens fāze tika žāvēta.

Kolonnas hromatogrāfija: 10 g vāji bāzes anjonu apmaiņas sveķus uz 2 stundām iegremdēja dejonizētā ūdenī, pēc tam ievietoja stikla kolonnā (2 × 30 cm). 10 g neapstrādātu IHRP pievienoja 200 ml dejonizēta ūdens. Pēc tam šķīdumu lēnām izlaida cauri sveķu slānim. Kolonna tika izskalota ar 100 ml 30 procentu etanola. Eluents tika koncentrēts un žāvēts.

3.6. Monosaharīdu sastāva analīze

Monosaharīdu sastāva tests tika veikts pēc iepriekšējās metodes ar nelielām modifikācijām [45]; 5 mg IHRP tika hidrolizēti ar 1 ml trifluoretiķskābes (TFA, 2 M) 6 stundas 105 ◦C temperatūrā. Pēc tam šķīdumu žāvē slāpekļa atmosfērā. Žāvētais hidrolizāts tika pievienots 5 ml dejonizēta ūdens pēc tam, kad TFA tika noņemts ar metanolu. Pēc tam 0,5 mL 0,3 M NaOH šķīduma un 1 ml 0,5 M 1-fenil-3-metil-5- hidrolizātam tika pievienots pirazolona (PMP) metanola šķīdums. Iegūtais šķīdums tika turēts ūdens vannā 2 stundas 70 ◦C atvasināšanai. Pēc tam neitralizācijai pievienoja 0,5 ml HCl šķīduma (0,3 M). Šķīdums tika sajaukts ar 1 ml hloroforma HPLC analīzei. Kā atsauces tika izmantoti vairāki monosaharīdi. Hromatogrāfiskie apstākļi: kustīgā fāze A (82 procenti): 0,1 M KH2PO4 šķīdums. Kustīgā fāze B (18 procenti): acetonitrils. Kolonna: C18 (5 µm, 4,6 × 250 mm). Injekcijas tilpums: 10 µL. Plūsmas ātrums: 1,0 ml/min. Noteikšanas viļņa garums: 245 nm. Kolonnas temperatūra: 30 ◦C.

3.7. Furjē transformācijas infrasarkanā spektroskopija (FT-IR)

Paraugus FT-IR analīzei sagatavoja, sajaucot 5 mg IHRP ar 125 mg KBr. Paraugu FT-IR spektri tika iegūti no 4000 līdz 500 cm−1.

3.8. Antioksidantu aktivitātes pētījums

3.8.1. DPPH radikālas noņemšanas darbība

IHRP DPPH brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitāte tika novērtēta, pamatojoties uz ziņoto metodi ar dažām modifikācijām [46]. Īsāk sakot, 2 ml parauga šķīduma (0.2, 0.4, 0.6, 0.8 un 1.0 mg/ ml) tika sajaukts ar 2 ml DPPH šķīduma (0,1 mM). Maisījums tika turēts 30 minūtes tumsā, un pēc tam tika iegūta absorbcija (Abs) pie 517 nm. DPPH attīrīšanas ātrums tika novērtēts ar šādu vienādojumu (vienādojums (2)), un tika saskaitīta 50 procentu efektīvā koncentrācija (EC50).

kur RSD apzīmē brīvo radikāļu noņemšanas ātrumu, Ai attiecas uz reakcijas sistēmas Abs (DPPH ar paraugu), Aj ir parauga fona Abs (šķīdinātājs ar paraugu), un A0 ir Abs. negatīvās kontroles (DPPH ar šķīdinātāju).

3.8.2. ABTS radikālas attīrīšanas darbība

IHRP ABTS attīrīšanas aktivitāte tika novērtēta, pamatojoties uz iepriekšējo metodi [47]. Īsāk sakot, kālija persulfāta šķīdums (2, 45 mM) tika sajaukts ar ABTS šķīdumu (7 mM) tumsā 12 stundas. Iegūtais ABTS šķīdums tika atšķaidīts 50 reizes līdz Abs vērtībai 0,70 ± 0.02 pie 734 nm. Pēc tam 1 ml parauga šķīduma (0.2, 0.4, 0,6, 0,8 un 1,0 mg/ml) tika pievienots 4 ml ABTS šķīduma. Maisījumu strauji sakrata 1 minūti un ievietoja tumsā 6 minūtes. Pēc tam Abs tika mērīts pie 734 nm, un Vc tika izmantots kā pozitīva kontrole. ABTS attīrīšanas ātrums tika aprēķināts ar (2) vienādojumu.

3.9. Pretnovecošanās aktivitātes pētījums

3.9.1. Šūnu kultūra

Cilvēka dermas fibroblasti (HDF) un cilvēka epidermas keratinocīti (HEK) tika iegādāti no ScienCell Co., Ltd. Šūnas tika kultivētas ar DMEM barotni, kas satur 10 procentus FBS. Kultivēšanas apstākļi bija 37 ◦C ar 5 procentiem CO2.

3.9.2. Šūnu dzīvotspēja

Šūnu skaitīšanas komplekta-8 (CCK-8) tests tika veikts, lai noteiktu IHRP citotoksicitāti pret HDF un HEK šūnām. Šūnas tika kultivētas 96-iedobju plāksnēs ar koncentrāciju 2 × 104 šūnas/iedobē 48 stundas. Pēc tam pievienoja 100 µL svaigas barotnes, kas satur paraugus, un iedobes inkubēja 24 stundas. Pēc tam iedobēm pievienoja CCK-8 šķīdumu saskaņā ar testa komplektu instrukcijām un plāksni inkubēja 2 stundas. Abs pie 450 nm tika iegūts, lai aprēķinātu šūnu dzīvotspēju.

3.9.3. Scratch Assay

HDF tika kultivēts 37 ◦C ar 5 procentiem CO2. Pēc tam šūnas tika iesētas 12-iedobes plāksnē ar koncentrāciju 1 × 105 šūnas/iedobē. Pēc 48 stundu inkubācijas šļirces adata uz HDF šūnu slāņa izveidoja skrāpējumu. Šūnu fragmenti tika notīrīti ar PBS un tika pievienoti paraugi ar dažādu koncentrāciju. Pēc tam pēc 24 stundām tika novērota šūnu slāņa skrāpējumu dzīšana, lai novērtētu IHRP ietekmi uz HDF proliferāciju. Iegūtie attēli tika kvantificēti ar Image J programmatūru [48]. Kā pozitīvā kontrole tika izmantots transformējošais augšanas faktors (TGF-). Dziedināšanas ātrums tika aprēķināts saskaņā ar (3) vienādojumu.

kur A1 apzīmē sākotnējo skrāpējumu zonu un A2 attiecas uz galīgo skrāpējuma zonu.

3.9.4. Kvantitatīvā RT-PCR (qRT-PCR) analīze

Pēc tam šūnas tika iesētas 12-iedobju plāksnēs ar koncentrāciju 1 × 105 šūnas/iedobē. Pēc 48 stundu inkubācijas paraugi tika sajaukti un kultivēti vēl 24 stundas. Kopējā RNS tika ekstrahēta un cDNS tika sintezēta. Akvaporīna gēna (AQP-3), kolagēna gēna (COL1A1 un COL3A1), elastīna gēna (ELASTIN) un matricas metaloproteināzes (MMP-1) qRT-PCR analīzes tika veiktas, izmantojot reāllaika datus. PCR sistēma (Applied Biosystems Life Technologies, Inc., ABI StepOnePlus). Relatīvā kvantitatīva noteikšana tika veikta ar salīdzinošo CT metodi (2-∆∆Ct metode). Kā pozitīvā kontrole tika izmantota hialuronskābe (HA), Vc un TGF-.

3.10. Statistiskā analīze

Rezultāti tika parādīti kā vidējais ± SD (n {{0}}). Statistisko nozīmīgumu veica ANOVA. Vērtības p < 0,05 tika uzskatītas par statistiski nozīmīgām.

4. Secinājumi

Šajā darbā polisaharīdu ekstrakcija no IHR tika optimizēta ar viena faktora eksperimentiem un ortogonālu eksperimentālo dizainu. Optimālie karsēšanas ekstrakcijas apstākļi bija ekstrakcijas temperatūra 98 ◦C, cietās vielas un šķidruma attiecība 1:10, ekstrakcijas laiks 1 h, secīgu ekstrakciju skaits 2 un pH 4. Ekstrakcijas attiecība un polisaharīdu saturs šajos apstākļos bija attiecīgi 2{{40}},12 procenti un 12,35 procenti. Turklāt piemēroti spirta nokrišņu apstākļi bija sūknēšana ar 2 l/h, nepārtraukta maisīšana un ledus ūdens vanna 4 stundas. Neapstrādāti IHRP tika tālāk attīrīti ar kolonnas hromatogrāfiju, un attīrīto IHRP polisaharīdu/olbaltumvielu saturs bija 34,44 procenti un 1,61 procents. IHRP monosaharīdu sastāvs bija: fukoze (1,33 procenti), arabinoze (19,60 procenti), ramnoze (10,41 procenti), galaktoze (20,87 procenti), glikoze (27,42 procenti), ksiloze (4,23 procenti), riboze (3,12 procenti). skābe (6,22 procenti), guluronskābe (0,28 procenti) un glikuronskābe (2,37 procenti). FT-IR parādīja IHRP polisaharīdu skeletu. Turklāt ABTS un DPPH radikāļu EC50 vērtības bija 0, 34 un 0, 47 mg / ml, kas liecina par IHRP lielo antioksidantu aktivitāti. IHRP varētu arī veicināt HDF un HEK šūnu proliferāciju un šūnu skrāpējumu dziedināšanu. Turklāt IHRP varētu ievērojami veicināt MMP izpausmi-1. Tāpēc tiek uzskatīts, ka rūpniecisko kaņepju atlikumu polisaharīdus varētu attīstīt kā potenciālus antioksidantus un pretnovecošanās produktus kosmētikai vai funkcionālai pārtikai.

Autora ieguldījums:TC, QZ un BZ izstrādāja eksperimentus. TC un HL (Hang Li) veica eksperimentus un uzrakstīja sākotnējo projektu. TC, HL (Hang Li), HL (Hongning Lv), XL un ML analizēja datus. MT, SH, QZ un BZ pārskatīja manuskriptu. Visi autori ir izlasījuši un piekrituši publicētajai manuskripta versijai.

Finansējums: Šo pētījumu finansēja Yunnan Hempmon Pharmaceuticals Co., Ltd.

Institucionālās pārbaudes padomes paziņojums:Nav piemērojams.

Informētas piekrišanas paziņojums:Nav piemērojams.

Paziņojums par datu pieejamību:Nav piemērojams.

Interešu konflikti:Autori nav paziņojuši par interešu konfliktiem.

Paraugu pieejamība:Savienojumu IHR un IHRP paraugi ir pieejami no autoriem.

Atsauces

1. Kumar, P.; Mahato, DK; Kamle, M.; Bora, R.; Šarma, B.; Pandijs, S.; Tripathi, V.; Jadavs, HS; Devi, S.; Patil, U. Cannabis sativa L. farmakoloģiskās īpašības, terapeitiskais potenciāls un juridiskais statuss: pārskats. Fitotēra. Res. 2021, 35, 6010–6029. [CrossRef] [PubMed]

2. Šojama, Y.; Jagi, M.; Nišioka, I.; Yamauchi, T. Kanabinoīdu skābju biosintēze. Fitoķīmija 1975, 14, 2189–2192. [CrossRef]

3. De Meijers, ED; Van der Kamp, H.; Van Eeuwijk, F. Characterization of Cannabis accessions about cannabinoid content about other plant characters. Euphytica 1992, 62, 187–200. [CrossRef]

4. Lūca, SV; Rērers, S.; Kleigreve, K.; Minceva, M. Pieeja vienlaicīgai kanabidiola izolēšanai un pesticīdu noņemšanai no kaņepju ekstraktiem ar šķidruma-šķidruma hromatogrāfiju. Ind. Crop. Prod. 2020, 155, 112726. [CrossRef]

5. Bonini, SA; Premoli, M.; Tambaro, S.; Kumar, A.; Makarinelli, G.; Piezīme, M.; Mastinu, A. Cannabis sativa: visaptverošs etnofarmakoloģiskais pārskats par ārstniecības augu ar ilgu vēsturi. J. Ethnopharmacol. 2018., 227., 300.–315. [CrossRef] [PubMed]

6. Hartsel, JA; Eades, J.; Hikorijs, B.; Makriyannis, A. Cannabis sativa un kaņepes. In Nutraceuticals; Gupta, RC, Ed.; Academic Press: Boston, MA, ASV, 2016; 53. nodaļa; 735.–754.lpp.

7. Palmieri, S.; Mascini, M.; Olīva, E.; Viteritti, E.; Eugelio, F.; Fanti, F.; Compagnone, D.; Sergi, M. Cannabis sativa Cannabinoid Profile L. Paraugi ar LC-MRM/IDA/EPI analīzes līdzekļiem: jauna pieeja šķirņu klasifikācijai. J. Agric. Food Chem. 2022, 70, 3907–3916. [CrossRef]

8. Atalay, S.; Jarocka-Karpoviča, I.; Skrzydlewska, E. Kanabidiola antioksidējošās un pretiekaisuma īpašības. Antioksidanti 2020, 9, 21. [CrossRef]

9. Small, E. Cannabis sativa (marihuānas, kaņepju) evolūcija un klasifikācija par cilvēku izmantošanu. Bot. Rev. 2015, 81, 189–294. [CrossRef]

10. Mazāra, E.; Karleti, R.; Petrelli, R.; Mustafa, AM; Kaprioli, G.; Fiorini, D.; Skortičīni, S.; Dall'Acqua, S.; Suts, S.; Nunezs, S.; un citi. Kaņepju (Cannabis sativa L.) zaļā ekstrakcija, izmantojot mikroviļņu metodi, lai atgūtu trīs vērtīgas frakcijas (ēteriskā eļļa, fenola savienojumi un kanabinoīdi): centrālais kompozīta dizaina optimizācijas pētījums. J. Sci. Pārtikas lauksaimniecības. 2022, presē. [CrossRef]

11. Tan, MH; Čanga, SL; Liu, JN; Li, H.; Xu, PW; Vanga, PD; Van, XD; Džao, MX; Džao, B.; Vanga, LW; un citi. Kvinojas (Chenopodium quinoa Willd.) sēklu polisaharīdu fizikāli ķīmiskās īpašības, antioksidanta un pretdiabēta iedarbība. Molecules 2020, 25, 3840. [CrossRef]

12. Zhai, FG; Liang, QC; Wu, YY; Liu, JQ; Liu, JW Red žeņšeņa polisaharīds uzrāda pretvēža aktivitāti, izmantojot GPX4 pazeminātas regulēšanas izraisītu ferroptozi. Pharm. Biol. 2022, 60, 909–914. [CrossRef]

13. Džou, X.; Afzals, S.; Wohlmuth, H.; Munks, G.; Līčs, D.; Zems, M.; Li, CG Ingvera un kurkuma ekstraktu sinerģiska pretiekaisuma darbība lipopolisaharīdu un gamma interferona izraisītu proinflammatorisku mediatoru inhibēšanā. Molecules 2022, 27, 3877. [CrossRef] [PubMed]

14. Zou, YF; Li, CY; Fu, YP; Dzjana, QX; Pengs, X; Li, LX; Dziesma, X.; Džao, XH; Li, YP; Čens, XF; un citi. Dažādu Angelica sinensis (Oliv.) Diels sakņu daļu polisaharīdu sākotnējās struktūras un zarnu pretiekaisuma un antioksidatīvās aktivitātes salīdzinājums. J. Ethnopharmacol. 2022, 295, 115446. [CrossRef] [PubMed]

15. Huangs, Z.; Zong, MH; Lou, WY Millettia speciosa Champ polisaharīda sagatavošana, strukturālā izskaidrošana un imūnmodulējošā aktivitāte. Ind. Crop. Prod. 2022, 182, 114889. [CrossRef]

16. Cao, WY; Vanga, CX; Mayhesumu, X.; Pan, L.; Dangs, Y.; Yili, A.; Abuduvaili, A.; Mansur, S. Brassica rapa L. polisaharīdu izolēšana, strukturālā izskaidrošana, antioksidanta un hipoglikēmiskā aktivitāte. Molecules 2022, 27, 3002. [CrossRef] [PubMed]

17. Panggabean, JA; Adiguna, SP; Rahmavati, SI; Ahmadi, P.; Zainuddin, EN; Baju, A.; Putra, MY uz aļģēm balstītu sulfātu polisaharīdu pretvīrusu aktivitātes. Molecules 2022, 27, 1178. [CrossRef]

18. Baeva, E.; Blaha, R.; Lavrova, E.; Sušickis, L.; Kopikova, J.; Jablonskis, I.; Kloucek, P.; Synytsya, A. Polisaharīdi no Basidiocarps of Cultivating Mushroom Pleurotus ostreatus: izolācija un struktūras raksturojums. Molecules 2019, 24, 2740. [CrossRef]

19. Sju, JQ; Džans, JL; Dziedāja, YM; Wei, YN; Čens, XY; Vanga, YX; Xue, HK Polisaharīdi no medicīnas un pārtikas homoloģijas materiāliem: pārskats par to ieguvi, attīrīšanu, struktūru un bioloģiskajām aktivitātēm. Molecules 2022, 27, 3215. [CrossRef]

20. Haustveits, G.; Wold, JK Daži zemas molekulmasas ogļhidrāti, kas atrodas Cannabis sativa L. Carbohydr. Res. 1973, 29, 325–329. [CrossRef]

21. Hillestad, A.; Volds, JK; Paulsen, BS Ūdenī šķīstošo glikoproteīnu strukturālie pētījumi no Cannabis sativa L. Carbohydr. Res. 1977, 57, 135–144. [CrossRef]

22. Groce, JW; Jones, LA Kaņepju ogļhidrātu un ciklīta saturs. J. Agric. Food Chem. 1973, 21, 211–214. [PubMed]

23. Veņs, Z.-S.; Sjue, R.; Du, M.; Tangs, Z.; Xiang, X.-W.; Džens, B.; Qu, Y.-L. Kaņepju sēklu polisaharīdi aizsargā zarnu epitēlija šūnas no ūdeņraža peroksīda izraisīta oksidatīvā stresa. Int. J. Biol. Macromol. 2019, 135., 203.–211. [PubMed]

24. Bao-yao, BY-gW; Jie, TJ-wL Ūdenī šķīstošo polisaharīdu ekstrakcija un attīrīšana no kaņepju sēklām. Food Sci. Tehn. 2004, 6, 157–161.

25. Guo, L.; Kongs, N.; Džans, X.; Ma, H. Multimode ultraskaņas ekstrakcija polisaharīdu no maca (Lepidium meyenii): optimizācija, attīrīšana, un in vitro imūnregulācijas darbību. Ultraskaņa. Sonochem. 2022, 88, 106062. [CrossRef]

26. Či, YZ; Li, YP; Džans, GL; Gao, YQ; Jā, H.; Gao, J.; Wang, P. Ekstrakcijas metožu ietekme uz Enteromorpha prolifera polisaharīdu īpašībām un to pielietojamība dzelzs helātu veidošanā. Ogļhidrāti. Polim. 2018, 181., 616.–623. [CrossRef] [PubMed]

27. Ši, MJ; Vejs, X.; Sju, Dž.; Čens, BJ; Džao, DY; Cui, S.; Zhou, T. Karboksimetilēti degradēti polisaharīdi no Enteromorpha prolifera: sagatavošana un in vitro antioksidanta aktivitāte. Food Chem. 2017, 215, 76–83.

28. Ren, CJ; Džans, Y.; Cui, WZ; Lu, GB; Vanga, YW; Gao, HJ; Huangs, L.; Mu, ZM Zīdkoka lapu polisaharīda ekstrakts uzlabo glikozes metabolismu aknās un insulīna signālu pārnešanu žurkām ar 2. tipa cukura diabētu, ko izraisa augsta tauku satura diēta un streptozotocīns. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 951–959.

29. Wu, JW; Li, P.; Tao, DB; Džao, HT; Saule, RY; Ma, FM; Zhang, BQ Šķīduma plazmas procesa ar ūdeņraža peroksīdu ietekme uz Auricularia auricula polisaharīda noārdīšanos un antioksidantu aktivitāti. Int. J. Biol. Macromol. 2018, 117., 1299.–1304.

30. Ventilators, SH; Li, JN; Bai, BQ Kvinojas (Chenopodium quinoa Willd.) sēklu polisaharīdu attīrīšana, struktūras noskaidrošana un imunitāti uzlabojoša darbība in vivo. Biosci. Biotehnoloģija. Biochem. 2019, 83, 2334–2344.

31. Saule, YJ; Hou, ST; Dziesmas.; Džans, B.; Ai, CQ; Čens, XF; Liu, N. Skābās, ūdens un sārmainās ekstrakcijas ietekme uz Laminaria japonica polisaharīdu strukturālajām iezīmēm, antioksidantu aktivitātēm. Int. J. Biol. Macromol. 2018, 112, 985–995.

32. Patels, MK; Tanna, B.; Mišra, A.; Jha, B. No psyllium (P. ovata) lapām ekstrahēta polisaharīda fizikāli ķīmiskais raksturojums, antioksidanta un antiproliferatīvās aktivitātes. Int. J. Biol. Macromol. 2018, 118, 976–987. [PubMed]

33. Palmieri, S.; Fanti, F.; Olīva, E.; Viteritti, E.; Sergi, M.; Pepe, A.; Compagnone, D. Ķīmiskais raksturojums un antioksidantu aktivitātes novērtējums no dažādām Abruco reģiona Cannabis sativa L. šķirnēm. Nat. Prod. Res. 2022, 1.–5. [CrossRef] [PubMed]

34. Li, H.; Zhao, Q.-S.; Čans, S.‑L.; Čangs, T.‑R.; Tan, M.-H.; Zhao, B. Kanabidiola pilna spektra eļļas/2,6-di-Ometil- -ciklodekstrīna iekļaušanas kompleksa izstrāde ar uzlabotu šķīdību ūdenī, bioaktivitāti un termisko stabilitāti. J. Mol. Liq. 2022, 347, 118318.

35. Čens, L.; Jans, V.; Gao, C.; Liao, X.; Jans, Dž.; Yang, B. Kanabidiola kompleksi, ko mediē savienoti ciklodekstrīnu dimēri ar augstu šķīdību, in vitro antioksidantu aktivitāti un citotoksicitāti. J. Mol. Liq. 2022, 345, 117017.

36. Russo, C.; Lavorgna, M.; Nugnes, R.; Orlo, E.; Isidori, M. Kanabidiola un tā propilanaloga kanabidivarīna pretmikrobu, antiradikālo un citotoksisko aktivitāšu salīdzinošais novērtējums. Sci. Rep. 2021, 11, 22494.

37. Hatuns, B.; Baišja, P.; Ramteķe, A.; Maji, TK Pētījums par strukturāli modificēta kurkumīna kompleksu veidošanos ar hidroksipropil-beta-ciklodekstrīnu un tā ietekmi uz pretvēža aktivitāti. Jauns J. Chem. 2020, 44, 4887–4897.

38. Bobadilla, AVP; Arevalo, J.; Sarro, E.; Bērns, HM; Maini, PK; Kararo, T.; Baloko, S.; Mesegērs, A.; Alarcon, T. In vitro šūnu migrācijas kvantitatīvas noteikšanas metode skrāpējumiem. JR Soc. Interfeiss 2019, 16, 20180709. [CrossRef]

39. Salem, MA; Radvana, RA; Mostafa, ES; Alseekh, S.; Fērnija, AR; Ezzat, SM Izmantojot uz UPLC/MS balstītu nemērķtiecīgu metabolomikas pieeju, lai novērtētu atlasīto augu antioksidantu spēju un pretnovecošanās potenciālu. RSC Adv. 2020, 10, 31511–31524.

40. Kampa, M.; Barons, E. Atsevišķu botānisko līdzekļu pretnovecošanās ietekme: zinātniskie pierādījumi un pašreizējās tendences. Kosmētika 2018, 5, 54.

41. Freitasa-Rodrigeza, S.; Folgueras, AR; Lopez-Otin, C. Matricas metaloproteināžu loma novecošanā: audu remodelēšana un tālāk. Biochim. Biophys. Acta Mol. Cell Res. 2017., 1864., 2015.–2025.

42. Bradford, MM. Ātra un jutīga metode proteīna mikrogramu daudzuma noteikšanai, izmantojot proteīnakrāsu saistīšanas principu. Anal. Biochem. 1976, 72, 248–254. [PubMed]

43. Dibuā, M.; Žils, KA; Hamiltons, JK; Rebers, PA; Smith, F. Kolorimetriskā metode cukuru un saistīto vielu noteikšanai. Anal. Chem. 1956, 28, 350–356. [CrossRef]

44. Bitter, T.; Muir, HM Modificētas uronskābes karbazola reakcija. Anal. Biochem. 1962, 4, 330–334. [CrossRef]

45. Dai, J.; Vu, Y.; Čena, SW; Žu, S.; Iņ, HP; Vangs, M.; Tang, JA Polisaharīdu cukura sastāva noteikšana no Dunaliella salina ar modificētu RP-HPLC metodi pirmskolonnas atvasināšanai ar 1-fenil-3-metil-5-pirazolonu. Ogļhidrāti. Polim. 2010, 82, 629–635.

46. ​​Gao, J.; Džans, T.; Jin, ZY; Xu, XM; Vangs, Dž. Zha, XQ; Chen, HQ Lilium lancifolium Thunb polisaharīda struktūras raksturojums, fizikāli ķīmiskās īpašības un antioksidanta aktivitāte. Food Chem. 2015, 169., 430.–438.

47. Sjao, H.; Fu, X.; Cao, C.; Li, C.; Čens, C.; Huang, Q. Sargassum pallidum polisaharīdu sulfātu modifikācijas, raksturojums, antioksidantu un hipoglikēmiskās aktivitātes. Int. J. Biol. Macromol. 2018, 121, 407–414.

48. Allaw, M.; Mankoni, M.; Arofu, M.; Marongiu, F.; Porceddu, M.; Bačeta, G.; Ušahs, I.; Rached, RA; Rajha, HN; Marūns, RG; un citi. Hypericum Scruglii ekstrakta ekstrakcija, raksturojums un iekļaušana ad hoc formulētās fosfolipīdu pūslīšos, kas paredzētas ar oksidatīvo stresu saistītu ādas slimību ārstēšanai. Farmācija 2020, 12, 1010.

【Lai iegūtu plašāku informāciju:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】