FGIN-1-27 ir sintētisks mitohondriju diazepāma saistīšanās inhibitors (MDR)agonists, kam ir pro-apoptotiska, prettrauksmes un steroidogēna aktivitātedažādos pētījumos. Šeit mēs ziņojam parvispirmslaiku, anti-melanogēno efektivitātinoFGIN-1-27in vitrounin vivo. FGIN{0}}inhibēta bazālā un - melanocītu stimulējošais hormons ( -MSH)-, 1-oleoil-2-acetil-sn-glicerīns (OAG)-un endotelīna-1 (ET-1) izraisīta melanoģenēze bez šūnu toksicitātes.Sēņu tirozināzes aktivitātes tests parādīja, ka FGIN-1-27 tieši neinhibējatirozināzes aktivitāte, kas liecina, ka FGIN-1-27 nebija tiešs tirozināzes inhibitors. Lai gan tas nevarēja modulēt katalītisko aktivitātisēņu tirozināzein vitro, FGIN-1-27 pazemināja izteiksmes līmeņusgalvenie proteīni, kas darbojas melanoģenēzē. FGIN-1-27 spēlēja šīs funkcijasnomācot PKA/CREB, PKC- , un MAPK ceļi. Kad tas ir inaktivēts, tassamazināja MITF, tirozināzes, TRP-1 un TRP-2 ekspresiju un inhibējatirozināzes aktivitāte,beidzotkavē melanoģenēzi. Laikāin vivoeksperimenti,FGIN{0}} inhibēja zebrafish ķermeņa pigmentācijuun samazināta UVB izraisītā iedarbībahiperpigmentācija jūrascūciņu ādā, bet ne melanocītu skaita samazināšanās.Mūsuatklājumiemnorādīja, ka FGIN-1-27 neuzrādīja citotoksicitāti un inhibējamelanoģenēze abāsin vitrounin vivomodeļiem. Tas var izrādīties diezgan noderīgs kā adrošāks ādas balināšanas līdzeklis.

Saskaņā ar attiecīgiem pētījumiem,cistancheir izplatīts augs, kas pazīstams kā "brīnumaugs, kas pagarina mūžu". Tās galvenā sastāvdaļa ir cistanozīds, kam ir dažādi efekti, piemēram,antioksidants, pretiekaisuma, un imūnās funkcijas veicināšana. Mehānisms starp cistanche unādas balināšanaslēpjas cistanche glikozīdu antioksidanta iedarbībā.Melanīnscilvēka ādā rodas tirozīna oksidācijas rezultātā, ko katalizētirozināze, un oksidācijas reakcijā ir nepieciešama skābekļa līdzdalība, tāpēc skābekļa brīvie radikāļi organismā kļūst par svarīgu faktoru, kas ietekmē melanīna ražošanu. Cistanche satur cistanozīdu, kas ir antioksidants un var samazināt brīvo radikāļu veidošanos organismā, tādējādikavē melanīna ražošanu.

Noklikšķiniet uz Cistanche Tubulosa

Plašāka informācija: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

IEVADS

Melanoģenēze ir vissvarīgākā melanocītu funkcija ādā. Ir noskaidroti vairāki būtiski faktori, kas saistīti ar melanoģenēzi (Raposo un Marks, 2007; Noguchi et al., 2014). Galvenais enzīms, kas regulē melanoģenēzi, ir tirozināze, un tas iedarbojas ar ar tirozināzi saistīto proteīnu 1 (TRP1) un ar tirozināzi saistīto proteīnu 2 (TRP2), lai veicinātu melanīna sintēzi (Zhu et al., 2015). Vēl viens svarīgs pigmentācijā iesaistīts faktors ir ar mikroftalmiju saistītais transkripcijas faktors (MITF), kas ne tikai regulē melanocītu proliferāciju un izdzīvošanu, bet arī regulē tirozināzes, TRP1 un TRP2 ekspresiju (Kawasaki et al., 2008; Levy and Fisher, 2011). ). Vides stimuliem, piemēram, ultravioletajam (UV) starojumam, ir izšķiroša nozīme melanoģenēzē (Abdel-Naser et al., 2003). UV starojuma ietekmē aktivētie keratinocīti un melanocīti ražo melanocītus stimulējošu hormonu (-MSH), diacilglicerīnu (DAG) un endotelīnu-1 (ET-1) (D'Mello et al., 2016; Bae Harboe and Park, 2012). Ja melanocītus stimulējošais hormons (-MSH) saistās ar melanokortīna-1 receptoru (MC1R) melanocītos, tas var paaugstināt cikliskā adenozīna monofosfāta (cAMP) intracelulāro līmeni un aktivizēt proteīnkināzi A (PKA)/(CREB). ) ceļš, visbeidzot veicinot melanoģenēzi (Corre et al., 2004; Rzepka et al., 2016). Diacilglicerīns (DAG) ir būtisks proteīna kināzes C- (PKC-) aktivizēšanai melanocītos, kas palielina tirozināzes aktivitāti un izraisa pigmentāciju (Kim et al., 2006; Kawaguchi et al., 2012; Yuan and Jin, 2018). ). 1-Oleoil-2- acetil-sn-glicerīns (OAG) ir sintētisks, membrānu caurlaidīgs DAG analogs, kas ir plaši izmantots kā PKC- farmakoloģisks aktivators (Rainbow et al., 2011). Endotelīns -1 (ET- 1) inducē melanoģenēzi melanocītos, aktivizējot mitogēnu aktivētās proteīnkināzes (MAPK) ceļu (Park et al., 2015; Regazzetti et al., 2015).

Melanīnam ir svarīga loma ādas aizsardzībā pret ultravioletā starojuma kaitīgo ietekmi, piemēram, ādas vēzi un novecošanos (Slominski et al., 2004). Tomēr pārmērīga melanīna ražošana un patoloģiska uzkrāšanās izraisa ādas estētiskas problēmas, piemēram, melasmu, vasaras raibumus un tumšus plankumus (Jadotte un Schwartz, 2010). Vairāki aktīvie balinošie savienojumi, tostarp kojskābe un arbutīns, jau ir apstiprināti kā kosmētikas piedevas (Kim et al., 2008). Bet ir ziņots, ka arbutīnam ir citotoksiska iedarbība un kojskābe var izraisīt vēzi (Singh et al., 2016). Tādējādi vissvarīgākā ir efektīvāku un drošāku ādas balināšanas līdzekļu atklāšana.

Mitohondriju diazepāma saistošo inhibitoru receptoriem (MDR) ir galvenā loma lipīdu un steroīdu sintēzes regulēšanā, un tas ir plaši izplatīts perifēros audos, tostarp ādā (Alho et al., 1993). Mūsu iepriekšējos pētījumos diazepāms, viens MDR agonists, regulēja pigmentāciju, izmantojot PKA / CREB ceļu (Lv et al., 2019). Turklāt jaunākie atklājumi liecināja, ka MDR aktivizēšana nedaudz palielināja jaunu melanocītu skaitu zebrafish (Allen et al., 2020). Salīdzinot ar diazepāmu, FGIN-1-27 (N,N-diheksil-2-(4-fluorfenil)indola-3- acetamīds) uzrāda salīdzinoši augstāku afinitāti un specifiskumu pret MDR (Frīmena). un Young, 2000). FGIN-1–27 ir demonstrējusi proapoptotisku un steroidogēnu aktivitāti (Lacapère un Papadopoulos, 2003). Nesen tika ziņots, ka FGIN{13}} radīja prettrauksmes un pretpanikas efektus in vivo (Lima-Maximino et al., 2018). Tomēr nav ziņots par FGIN-1-27 ietekmi uz pigmentāciju in vitro un in vivo.

MATERIĀLI UN METODES

Materiāli

FGIN-1-27(N,N-diheksil-2-(4-fluorfenil)indola-3-acetamīds), OAG (1-oleoil-2-acetil-sn -glicerīns) un antivielas pret PKC- (1:200), p-PKA cat (fosfo T197)(1:200), PKA cat (1:500), p-CREB (1:200), CREB(1:200), p-ERK(1:200), ERK (1:200), p-p38 (1:200), p38 (1:200), p-JNK (1:200),un JNK (1:200) tika iegūti no Santa Cruz Biotechnology(CA, ASV). Tirozināze no sēnēm, -MSH, ET-1 (endotelīns-1) un PTU (N-feniltiourīnviela)no Aladdinas (Šanhaja, Ķīna). Antivielas prettirozināze (1:1,000), TRP-1(1:1,000), TRP-2 (1:1,000), MITF(1:2000), un -aktīns (1:3, 000) tika iegūts no Abcam(Kembridža, Lielbritānija). Masson-Fontana melanīna krāsošanas šķīdumstika iegādāts no SenBeiJia Biological Technology (Nanjing,Ķīna). RT-qPCR komplekti tika iegādāti no Takara BiomedicalTehnoloģija (Pekina, Ķīna). Šūnu līzes buferis un BCA proteīnstestu komplekts tika iegūts no Beyotime Biotechnology (Šanhaja,Ķīna).

Šūnu kultūra

Šūnu dzīvotspējas tests

SK-MEL-2 šūnu dzīvotspēja un HEM tika mērīta, izmantojot MTT testu (Zhou et al., 2014). SK-MEL-2 šūnas un HEM tika izklātas attiecīgi 96-iedobju plāksnēs ar blīvumu 2 × 104 šūnas vienā iedobē. FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4, 8, 16 μM) tika uzklāts uz SK-MEL-2 šūnām un HEM 48 stundas. MTT šķīdumu (20 μL) pievienoja katrai 96-iedobes plāksnes iedobei vēl 4 stundas. Pēc šķīduma noņemšanas katrai iedobei pievienoja DMSO (200 μL) un absorbciju pārbaudīja pie 570 nm, izmantojot mikroplates spektrofotometru (BioTek Instruments).

Melanīna tests

SK-MEL-2 šūnas un HEM tika izklātas attiecīgi 6-iedobju plāksnēs ar koncentrāciju 5×105 šūnas katrā iedobē. Pēc 24 stundu inkubācijas 37 grādu temperatūrā FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4 μM) tika uzklāts uz SK-MEL-2 šūnām un HEM. Šūnas inkubēja vēl 48 stundas, mazgā ar PBS, kam sekoja līze ar šūnu līzes buferšķīdumu 20 minūtes 4 ° C temperatūrā, un lizātus centrifugēja ar ātrumu 13, 000 apgr./min 10 minūtes 4 ° C temperatūrā. Kopējais melanīns šūnu granulās tika izšķīdināts 100 μL NaOH šķīdumā (1 mol/L, kas satur 10 procentus DMSO) 80 ° C temperatūrā 1 stundu (Lv et al., 2015). Optiskā absorbcija tika mērīta pie 405 nm, izmantojot mikroplates spektrofotometru (BioTek Instruments).

Tirozināzes aktivitātes tests

Šūnu tirozināzes aktivitāte tika veikta, kā aprakstīts iepriekš (Lv et al., 2020). SK-MEL-2 šūnas tika inkubētas ar dažādām FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4 μM) vai OAG (200 μM) koncentrācijām 12 vai 48 stundas un pēc tam lizētas. ar šūnu līzes buferi. Šūnu lizāti tika centrifugēti ar ātrumu 13, 000 apgr./min 10 minūtes 4 °C temperatūrā, lai iegūtu supernatantu tirozināzes aktivitātes noteikšanai. Olbaltumvielu koncentrācijas tika noteiktas ar BCA komplektu ar liellopu seruma albumīnu (BSA) kā standartu. 100 μL PBS (0,1 M, pH 6,5), kas satur 30 ug proteīnu, sajauc ar 100 μL L-DOPA (0,1 procents) un pēc tam inkubēja 37 grādu temperatūrā. C 1 stundu. Optiskā absorbcija tika mērīta pie 475 nm, izmantojot mikroplates spektrofotometru (BioTek Instruments).

FGIN{{0}} tiešā ietekme uz tirozināzes aktivitāti tika veikta saskaņā ar iepriekšējo metodi (Tomita et al., 2010; Lv et al., 2020). 100 μL PBS (0,1 M, pH 6,5), kas satur dažādas FGIN-1-27 koncentrācijas, sajauc ar sēņu tirozināzi (10 vienības) un 50 μL L-tirozīna (0,05 procenti) un pēc tam inkubēja 37 grādu temperatūrā 10 minūtes. Optiskā absorbcija tika mērīta pie 475 nm, izmantojot mikroplates spektrofotometru (BioTek Instruments).

Masson-Fontana amonija sudraba krāsošana

Lai noteiktu melanīna pigmentu, SK-MEL-2 šūnas tika uzliktas uz 6-iedobes plāksnes, kas satur 13- mm stikla segstikliņus 20 ml barotnes (10). procenti liellopu augļa seruma) katrā iedobē. 48 stundas pēc ievadīšanas šūnas 20 minūtes fiksēja ar formalīnu (10 procenti neitrāli buferēts).

Šūnas un ādas priekšmetstikliņi tika iekrāsoti saskaņā ar Masson-Fontana amonija sudraba krāsošanas metodi (Lee et al., 2013). Šūnas un ādas priekšmetstikliņus 16 stundas istabas temperatūrā inkubēja ar Masson-Fontana melanīna krāsošanas šķīdumu. Pēc tam šūnas un ādas priekšmetstikliņus 3 reizes noskaloja destilētā ūdenī un 7 minūtes inkubēja ar hipo šķīdumu. Pēc rūpīgas mazgāšanas destilētā ūdenī šūnas un ādas priekšmetstikliņi tika iekrāsoti ar neitrālu sarkanu traipu 7 minūtes. Šūnas un ādas priekšmetstikliņi tika novēroti, izmantojot Nikon Ti{6}U mikroskopu.

S{0}} imūnhistoķīmija

S-100 imūnhistoķīmija tika veikta, kā aprakstīts iepriekš (Lee et al., 2013). Priekšmetstikliņi tika bloķēti ar 5% BSA 1 stundu istabas temperatūrā un pēc tam inkubēti anti-S-100 primārajā antivielā (Dako, Carpentaria, CA), kas atšķaidīts bloķēšanas šķīdumā, nakti 4 °C temperatūrā. Nākamajā dienā priekšmetstikliņi tika mazgāti ar TBST 4 reizes un inkubēti ar sekundāro antivielu (Dako, Carpentaria, CA). Pēc tam priekšmetstikliņus apstrādāja ar aminoetilkarbazolu, lai izstrādātu sekcijas. Ādas priekšmetstikliņi tika novēroti, izmantojot Nikon Ti{8}}U mikroskopu.

Reversās transkripcijas kvantitatīvā PCR (RT-qPCR)

RT-qPCR tika veikts, kā aprakstīts iepriekš (Lv et al., 2020). Īsumā, SK-MEL-2 šūnu kopējā RNS tika ekstrahēta, izmantojot TRIzol reaģentu, un kvantitatīvi noteikta spektrofotometriski. Vienpavediena cDNS tika sintezēta, izmantojot SuperScript II reverso transkriptāzi saskaņā ar ražotāja norādījumiem. SYBR-Green kvantitatīvā PCR analīze tika veikta ar ABI PRISM secību noteikšanas sistēmu (Applied Biosystems) un iepriekš apstiprinātām primeru komplektiem. Visi paraugi tika palaisti trīs eksemplāros. Sliekšņa cikli tika ievietoti amplifikācijas līknes logaritmiskajā daļā, un rezultāti tika normalizēti uz GAPDH. Reižu starpība starp diviem paraugiem tika noteikta ar delta-delta Cq metodi. Mitf gēna praimeru sekvences ir 5′-AGAGCAGGGCAGAGAGTGAGTG-3′, 5′-AACTTGATT CCAGGCTGATGATGTC-3′.

Western Blot analīze

Olbaltumvielu suspensija tika iegūta saskaņā ar iepriekš minēto metodi. Ekstrahētie intracelulārie proteīni (30 ug) tika atdalīti ar SDS-PAGE (10 procenti) un pēc tam pārnesti uz polivinilidēna L fluorīda (PVDF) membrānu, ievērojot slapjā pārneses standarta protokolu. Membrāna tika bloķēta, izmantojot 2,5% BSA istabas temperatūrā 1 stundu, nakti pakļāva atbilstošām primārajām antivielām 4 ° C temperatūrā un 4 reizes mazgāja ar TBST. Membrānas tika pakļautas HRP iezīmētai kazas anti-trušu IgG (1:1,000) vai kazas anti-peles IgG (1:1,000) istabas temperatūrā 1 stundu un mazgātas ar TBST 4 reizes (Liao et al., 2017). Pēc tam membrānas tika vizualizētas, izmantojot daudzfunkcionālu hemiluminiscences attēlveidošanas sistēmu (Tanon 4600). Iekšējās kontroles no tā paša blota tika pārbaudītas ar antiaktīnu.

Uz fenotipu balstīta melanīna satura novērtēšana un noteikšana zebrafish

Pieaugušas zebrazivis tika turētas tvertnē ar šādiem nosacījumiem: 28,5 grādi ar 14/10 h gaismas/tumsas ciklu. Embriji tika iegūti no dabiskā nārsta, kas tika izraisīts no rīta, ieslēdzot gaismu. Embriju savākšana tika pabeigta 30 minūšu laikā. Uz fenotipu balstītā novērtēšana tika veikta, kā aprakstīts iepriekš (Choi et al., 2007). Īsumā, sinhronizētie embriji tika savākti un kārtoti ar pipeti (3-4 embriji vienā iedobē 96-iedobju plāksnēs, kas satur 200 ul embriju barotnes). FGIN-1-27 un PTU tika izšķīdināti 0,1% DMSO, pēc tam pievienoti embrija barotnei no 35 līdz 60 stundām (25 stundu iedarbība). Stereomikroskopā tika novērota ietekme uz zebrafish melanoģenēzi.

UVB izraisītas hiperpigmentācijas jūrascūciņas modelis

Astoņas brūnas jūrascūciņas (6 nedēļas, aptuveni 300 g) tika iegūtas no Laboratorijas dzīvnieku zinātnes institūta (Pekina, Ķīna). Jūrascūciņas tika izmitinātas atsevišķi telpā ar kontrolētu temperatūru standarta laboratorijas apstākļos ar 12 h gaismas/12 h tumsas ciklu (gaisma ieslēgta no plkst. 9:00 līdz plkst. 9:00 PM) ar nemainīga temperatūra (23 ± 3 grādi) un mitrums (50 ± 10 procenti). Katra dzīvnieka muguras atsevišķas zonas (1 cm diametrālais aplis) tika pakļautas 500 mJ/cm2 UVB (Sigma SH-4, Šanhaja, Ķīna) vienu reizi dienā 1 nedēļu (Fujimoto et al., 1988; Lee et al., 2013). Pēc tam nesējs (PEG400/EtOH 7:3) un FGIN-1-27 (1 procents) tika ievadīts hiperpigmentētajās zonās (20 ul šķīduma uz apli) divas reizes dienā 3 nedēļas. Pigmentācijas pakāpe tika mērīta ar spektrofotometru (YS3010, 3nh, Shenzhen, Ķīna). ΔL vērtība tika noteikta saskaņā ar L vērtību, kas izmērīta ar spektrofotometru, šādi: ΔL L (katrā mērītā dienā)-L (0. dienā). Visas dzīvnieku procedūras šim pētījumam tika veiktas saskaņā ar "NIH laboratorijas dzīvnieku kopšanas un lietošanas rokasgrāmatu", un tās apstiprināja Čandžou universitātes dzīvnieku kopšanas un lietošanas komiteja.

Statistiskā analīze

REZULTĀTI

FGIN-1-27 inhibēta -MSH, OAG vai ET-1-inducēta melanīna sintēze SK-MEL-2 šūnās

Pirms FGIN-1-27 (1. A attēls) ietekmes uz pigmentāciju izpētes tika veikts šūnu dzīvotspējas tests, lai pārbaudītu FGIN-1-27 ietekmi uz SK-MEL-2 šūnu augšanu. Kā parādīts 1.B attēlā, FGIN-1-27 neietekmēja SK-MEL- 2 šūnu augšanu devu diapazonā no 1 līdz 16 μM pēc 48 stundām. Melanīna satura pārbaudē FGIN-1-27 inhibēja bazālo melanoģenēzi (1. C attēls). -MSH ir intracelulāras cAMP pacēlājs, kas būtiski inducē melanoģenēzi (Rzepka et al., 2016; Corre et al., 2004; Lee et al., 2013). FGIN-1-27 inhibēja arī -MSH izraisīto melanīna sintēzi (1. C attēls). Konsekventi, Masson-Fontana amonjaka sudraba krāsošana liecināja, ka FGIN-1-27 ievērojami samazināja melanīna koncentrāciju SK-MEL-2 šūnās ar vai bez -MSH (1. D attēls). Turklāt OAG ir PKC pacēlājs un ET-1 ir MAPK ceļa aktivators, kas abi var veicināt melanīna sintēzi (Kim et al., 2006; Park et al., 2015; Regazzetti et al., 2015). Kā parādīts 1. E un 1. F attēlā, FGIN-1-27 arī ievērojami kavēja OAG vai ET-1-inducēto melanoģenēzi.

FGIN-1-27 nomākta tirozināzes, TRP-1, TRP-2 ekspresija un samazināta šūnu tirozināzes aktivitāte

Melanoģenēzi kontrolē trīs svarīgi enzīmi: tirozināze, TRP-1 un TRP-2 (Zhu et al., 2015). -MSH un ET-1 veicināja melanīna sintēzi, palielinot trīs būtisku melanogēno enzīmu ekspresiju (Regazzetti et al., 2015; Lee et al., 2013). Lai noskaidrotu, vai FGIN-1-27 balinošais efekts ir saistīts ar šo proteīnu ekspresiju, mēs pētījām FGIN-1-27 ietekmi uz tirozināzes, TRP-1 un TRP{10. }}, izmantojot Western blot analīzi. Kā parādīts 2.A attēlā, FGIN-1-27 nomāca tirozināzes, TRP-1 un TRP-2 ekspresiju ar vai bez -MSH. FGIN-1-27 arī konsekventi apvērsa ET-1- inducētās tirozināzes, TRP-1 un TRP-2 ekspresijas pieaugumu (2.B attēls). Atšķirībā no -MSH un ET-1, OAG veicināja melanoģenēzi, tieši palielinot šūnu tirozināzes aktivitāti (D'Mello et al., 2016). Kā parādīts 2.C un 2.D attēlā, FGIN-1-27 apstrāde 12 stundas kavēja OAG izraisīto šūnu tirozināzes aktivitātes pieaugumu un neietekmēja tirozināzes ekspresiju. Turklāt tika veikts sēņu tirozināzes aktivitātes tests, lai pārbaudītu FGIN-1-27 tiešo ietekmi uz tirozināzes aktivitāti. Kā parādīts 2. E attēlā, FGIN-1-27 neietekmēja sēņu tirozināzes enzīmu aktivitātes. Šie rezultāti liecināja, ka FGIN-1-27 nomāca tirozināzes, TRP-1 un TRP-2 ekspresiju un samazināja šūnu tirozināzes aktivitāti, taču tam nebija tiešas ietekmes uz tirozināzes enzīmu aktivitāti.

FGIN-1-27 Samazināta MITF izteiksme

MITF ir galvenais transkripcijas faktors, kas izraisa tirozināzes, TRP-1 un TRP-2 ekspresiju (Kawasaki et al., 2008; Levy and Fisher, 2011). Kā parādīts 3.A attēlā, FGIN-1-27 inhibēja MITF transkripciju. Mēs arī izmērījām MITF ekspresiju pēc tam, kad SK-MEL-2 šūnas tika apstrādātas ar -MSH FGIN-1-27 klātbūtnē vai bez tās. Kā parādīts 3B attēlā, -MSH ievērojami veicināja MITF ekspresiju. Interesanti, ka MITF ekspresija ievērojami samazinājās FGIN-1-27 klātbūtnē. FGIN-1-27 arī konsekventi nomāca ET-1-inducēto MITF ekspresijas pieaugumu (3.C attēls). Šie rezultāti liecināja, ka FGIN{16}} kavē MITF ekspresiju.

FGIN-1-27 Samazināja PKC- , p-PKA Cat, p-CREB, p-p38 un p-ERK ekspresiju

PKA, PKC un MAPK ir kritiski transdukcijas ceļi melanoģenēzē (D'Mello et al., 2016). Otrais kurjers cAMP varētu aktivizēt PKA, kas fosforilē CREB, visbeidzot veicinot MITF ekspresiju (Corre et al., 2004; Rzepka et al., 2016). PKC- -atkarīgais ceļš regulē melanoģenēzi, aktivizējot tirozināzi (Kim et al., 2006; Kawaguchi et al., 2012; Yuan un Jin, 2018). Tika ziņots, ka MAPK, tostarp p38, ekstracelulārā signāla regulētā proteīnkināze (ERK) un c-jun N-terminālā kināze (JNK), regulē pigmentāciju (Zhou et al., 2014). Lai labāk izprastu FGIN-1-27 melanoģenēzes regulēšanas molekulāros mehānismus, mēs izmērījām pigmentācijā iesaistītos transdukcijas ceļus. Kā parādīts 4. attēlā, FGIN-1-27 ievērojami samazināja PKC-, p-PKA cat, p-CREB, p-p38 un p-ERK ekspresiju.

FGIN-1-27 inhibēta melanoģenēze cilvēka melanocītos

FGIN-1-27 melanoģenēzes inhibīcija tika novērtēta cilvēka epidermas melanocītos (HEM). Kā parādīts papildu attēlā S1, FGIN-1-27 pēc 48 stundām devas diapazonā no 1 līdz 16 μM neietekmēja HEM augšanu. Kā parādīts 5.A attēlā, FGIN-1-27 ievērojami kavēja melanoģenēzi HEM. Western blot analīze liecināja, ka FGIN-1-27 samazināja tirozināzes, TRP-1 un TRP-2 ekspresijas līmeni HEM (5.B attēls). Kā parādīts S2 papildu attēlā, FGIN- 1-27 apstrāde 12 stundas kavēja OAG izraisītu šūnu tirozināzes aktivitātes pieaugumu HEM. Turklāt mēs izmērījām MITF ekspresiju pēc HEM, kas tika apstrādāts ar -MSH FGIN-1-27 klātbūtnē vai bez tās. Kā parādīts 5.C attēlā, MITF ekspresija ievērojami samazinājās FGIN-1-27 klātbūtnē. Turklāt, tāpat kā SK-MEL-2 šūnās, PKC-, PKA un MAPK iesaistīšanās FGIN-1-27-mediētā anti-melanogēnā tika apstiprināta arī HEM (attēls 5D).

Plašāka informācija: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501