Piecu komponentu noteikšana Rehmannia Glutinosa un HPLC pirkstu nospiedumu noteikšana

Abstract:Piecu komponentu satura noteikšanas metodeRehmannia glutinosa, proti,rehmannozīds D, leonurīns,ehinakozīds,cistanchesīds Aunverbascosidetika izveidots, un Rehmannia glutinosa augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijas (HPLC) pirkstu nospiedums tika izveidots, lai nodrošinātu zinātnisku pamatojumu Rehmannia glutinosa kvalitātes kontrolei. Tika izmantota kolonna Shiseido CAPCELL PAK C18 ar acetonitrila -0,1% skudrskābes šķīdumu kā kustīgo fāzi, gradienta eluēšana, kolonnas temperatūra 30 grādi, mainīga viļņa garuma noteikšana un plūsmas ātrums 1,0 ml/min. Rehmannia glutinosa HPLC pirkstu nospiedumu analizēja ar "Ķīniešu medicīnas hromatogrāfiskā pirkstu nospiedumu līdzības novērtēšanas sistēma (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), precizitātes testa, atkārtojamības testa un stabilitātes testa RSD bija 0,12%–1,58%, un vidējais parauga atgūšanas rādītājs bija 96,5%. ~98,6%; noteiktais Rehmannia glutinosa HPLC pirkstu nospiedums identificēja 23 kopīgus maksimumus, un līdzība starp Rehmannia glutinosa paraugu un kontroles pirkstu nospiedumu bija 0,904~0,950. Rezultāti liecina, ka izveidotā satura noteikšanas metode un HPLC pirkstu nospiedums ir piemēroti Rehmannia glutinosa kvalitātes novērtēšanai un neapstrādātas Rehmannia glutinosa un termiski apstrādātas Rehmannia glutinosa identificēšanai ar augstu precizitāti un labu reproducējamību, kā arī var sniegt tehnisku atbalstu kvalitātes kontrolei. Rehmannia glutinosa ārstnieciskie materiāli.

Atslēgvārdi:Rehmannia glutinosa; satura noteikšana; pirkstu nospiedums; kvalitātes novērtējums

JAUNA ZĀĻU CISTANČE AREHINAKOZĪDS,CISTANCHEZĪDS AUNVERBASKOSIDE

Rehmannia glutinosair svaigs vai žāvēts Scrophulariaceae auga Rehmannia glutinosa Libosch sakņu bumbulis. Dažādu apstrādes metožu dēļ to galvenokārt iedala svaigā rehmanijā, neapstrādātā rehmanijā un vārītajā rehmanijā [1-2]. Galvenās ražošanas zonas ir Henaņas, Šaņsji, Šaņsji uc zeme. Tostarp neapstrādātā rehmannia glutinosa attīra siltumu un atdzesē asinis, baro iņ un veicina šķidruma veidošanos, un to galvenokārt izmanto, lai ārstētu karstumu asinīs, siltus toksīnus un plankumus utt.; vārīta rehmannia glutinosa baro asinis un iņ, atjauno esenci un atjauno smadzenes, un to galvenokārt izmanto, lai ārstētu asins deficītu, hlorozi utt. Sirdsklauves, nemiers utt.[1-2]. Abiem ir dažādas īpašības un garšas, taču abi pieder pie aknu un nieru meridiāniem. Rehmannia glutinosa satur sarežģītas ķīmiskas sastāvdaļas, galvenokārt iridoīdus, jonus, feniletanola glikozīdus, flavonoīdus utt. [3-5].

Pēc tam, kad Rehmannia glutinosa ir apstrādāta ar dažādām apstrādes metodēm, ķīmisko komponentu veidi, saturs un proporcijas katrā apstrādātajā produktā ļoti atšķiras, kā rezultātā ievērojami atšķiras tā farmakoloģiskā aktivitāte [6-10]. saskaņā ar

Saistītie pētījumi[11-12] liecina, ka Rehmannia glutinosa pārejot no "neapstrādāta" uz "vārītu", ķīmisko komponentu, piemēram, katalpola, māteres, stahiozes un aminoskābju saturs ievērojami samazinājās, un saturs. fruktozes, 5-hidroksimetilfurfurola utt. saturs tika ievērojami palielināts. Patlaban neapstrādātas un termiski apstrādātas rehmannia glutinosa kvalitātes kontrole galvenokārt izmanto katalpola un rehmanniādes D saturu kā novērtēšanas rādītājus. Novērtēšanas sistēmas rādītāji ir salīdzinoši vieni, tādēļ ir grūti vispusīgi kontrolēt rehmannia glutinosa kvalitāti. Turklāt pētījumi ir parādījuši, ka rehmannia glutinosa D saturs mainās pirms un pēc apstrādes. Tas ir mazs, un tam ir vāja specifika, raksturojot sastāva izmaiņas pēc apstrādes un apstrādes pakāpi [12-13].

Tāpēc, lai vispusīgāk novērtētu Rehmannia glutinosa kvalitāti, šis pētījums noteica attiecības starp rehmanniādu D un Yimu Rehmannia glutinosa.

Piecu kopīgu komponentu, tostarp glikozīda, ehinaceasīda, cistanheozīda A un verbaskozīda satura noteikšanas metodes un Rehmannia glutinosa HPLC pirkstu nospiedumu noteikšana, lai analizētu Rehmannia glutinosa galveno komponentu saturu no dažādām ražošanas apgabaliem un pirms un pēc apstrādes, lai sniegtu informāciju Rehmannia glutinosa kvalitātes kontrolei. Tehniskais atbalsts.

Instrumenti, reaģenti un testa zāles

Agilent 1260 augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfs (detektors ir diožu bloks); mainīga diapazona elektroniskie analītiskie svari (METTLER TOLEDO); digitālais ultraskaņas tīrītājs (Shanghai Ultrasonic Instrument Factory, KH-500DE). Metanols (Sinopharm Group) ir analītiski tīrs; acetonitrils (Merck) ir hromatogrāfiskas kvalitātes; ūdens ir Watsons ūdens pudelēs. Rehmannia glutinosa D atsauces viela (sērijas numurs RFSD8401909016, tīrība 98,0%), leonurus glikozīda standartviela (partijas numurs RFS-Y22002208010, tīrība 98,0%) un cistanchesīds A standartviela (partija). numurs RFS-R05002009014, tīrība 96,0%), visi tika iegādāti no Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; ehinakozīda atsauces viela (sērijas numurs 111670-201907, tīrība 91,8%) un verbaskozīda atsauces viela (sērijas numurs 11530-201914, tīrība 95,2%) tika iegādātas no Ķīnas Pārtikas un zāļu inspekcijas institūtiem. Rehmannia paraugi (SX1 ~ SX4, HN1 un HN2) tika savākti no dažādiem ražošanas apgabaliem (skatīt 1. tabulu), no kuriem SX4 un HN2 tika tvaicēti attiecīgi ar SX1 un HN1, un SX2 un SX3 tika savākti no viena un tā paša ražošanas apgabala. Gansu provinces Narkotiku kontroles institūta galvenā ķīniešu medicīnas speciāliste Song Pingshun identificēja visus paraugus kā autentiskus.

1. tabula Informācija par Semen Rehmanniae paraugiem

2.1. Hromatogrāfiskie apstākļi

Tika izmantota kolonna Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 mm × 4,6 mm, 5 μm), kā kustīgā fāze A tika izmantots acetonitrils un kā kustīgā fāze B tika izmantots 0,1% skudrskābes šķīdums. Gradienta eluēšanas apstākļi bija: 0-3 min, 1%A; 3-9 min, 1%A→5%A; 9-24 min, 5%A→35%A; 24-35 min, 35%A→65%A; 35-40 min, 65%A→90%A. Mainīga viļņa garuma noteikšana (0-24 min, 203 nm; 24-40 min, 330 nm). Injekcijas tilpums bija 15 μL standartšķīduma un 20 μL parauga šķīduma.

2.2. Šķīduma sagatavošana

2.2.1. Standartšķīduma sagatavošana

Paņemiet atbilstošu daudzumu iepriekšminēto piecu standartvielu, pievienojiet 70% metanola, lai sagatavotu jauktu standartšķīdumu ar masas koncentrāciju 0,4 mg/ml.

2.2.2 Testa šķīduma sagatavošana

Nosver apmēram 1.0 g Rehmannia pulvera (izsists caur 2. sietu), precīzi nosver, ievieto koniskajā kolbā ar aizbāzni, precīzi pievieno 25 ml 70% metanola, noslēdz, nosver, apstrādā ar ultraskaņu (jauda 300). W, frekvence 50 kHz) 30 minūtes, ļauj atdzist līdz istabas temperatūrai, vēlreiz nosver, zaudēto masu papildina ar 70% metanolu, filtrē un ņem filtrātu, lai iegūtu.

2.3. Metodiskā izpēte

2.3.1. Specifiskuma izpēte

Ņem jaukto standartšķīdumu saskaņā ar "2.2.1" un testa šķīdumu (paraugs SX1) ar "2.2.2" un injicē un mēra saskaņā ar hromatogrāfijas apstākļiem saskaņā ar "2.1". Rezultāti liecina, ka Rehmannia parauga hromatogramma parāda hromatogrāfisko maksimumu ar tādu pašu aiztures laiku kā Rehmannia glutinosa D, Leonurin, Echinacoside, Cistanche deserticola A un Verbascoside atsauces standartiem (sk. 1. attēlu), norādot, ka šai metodei ir spēcīga specifika.

2.3.2. Lineāro attiecību izpēte

Sajauktajam standartšķīdumam pievieno 70 % metanolu, atšķaida attiecīgi 5 reizes, 10 reizes, 25 reizes, 50 reizes, 100 reizes un 250 reizes un injicē un mēra saskaņā ar hromatogrāfijas nosacījumiem saskaņā ar "2.1". Standarta līknes tika uzzīmētas ar katras atsauces masas koncentrāciju kā horizontālo asi (x) un atbilstošo hromatogrāfiskās pīķa laukumu kā vertikālo asi (y). Rezultāti ir parādīti 2. tabulā, norādot, ka katram komponentam ir laba lineārā attiecība attiecīgajā masas koncentrācijas diapazonā.

1.rehmanniozīds D; 2. leonurīds; 3. ehinakozīds; 4. kastanozīds A;5. akteozīds

1. attēls Specifiskuma izpētes hromatogrammas

2. tabula Semen Rehmanniae 5 komponentu lineārā attiecība

2.3.3. Precīza izmeklēšana

Paņemiet testa šķīdumu (paraugu SX1) saskaņā ar "2.2.2" un veiciet injekcijas testu saskaņā ar hromatogrāfijas apstākļiem saskaņā ar "2.1". Injicējiet paraugu 6 reizes nepārtraukti, pierakstiet katra komponenta pīķa laukumu un aprēķiniet rehmannia glutinosa D, māteszāles glikozīda, ehinācijas glikozīda, cistanche glikozīda A un verbaskozīda pīķa laukuma RSD testa paraugā, lai tas būtu 0. Attiecīgi 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48% un 0.82%, kas norāda, ka instrumentam ir laba precizitāte.

2.3.4. Atkārtojamības pētījums

Seši viena un tā paša Rehmannia saknes parauga (SX1) paraugi tika sagatavoti paralēli saskaņā ar metodi "2.2.2" un ievadīti un noteikti saskaņā ar hromatogrāfijas apstākļiem "2.1". Rehmannia saknes glikozīda D, māteszāles glikozīda, ehinācijas glikozīda, cistanche glikozīda A un verbaskozīda satura RSD sešos paraugos bija 0,46%, 0,69%, 1,42%, {{ 12}},48% un 1,58% attiecīgi, norādot, ka metodei ir laba atkārtojamība.

2.3.5. Stabilitātes pētījums

Paņemiet testa šķīdumu (paraugu SX1) zem "2.2.2" un injicējiet un izmēriet saskaņā ar hromatogrāfijas apstākļiem saskaņā ar "2.1" 0 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 1{{ 15}} h, 12 h, 18 h un 24 h. Rehmannia glutinosa D, māteres glikozīda, ehinakozīda, cistanche glikozīda A un verbaskozīda pīķu apgabalu RSD bija 0,94%, 1.04%, 0,73%. , attiecīgi 0,83% un 0,71%, kas norāda, ka testa šķīdumam ir laba stabilitāte 24 stundu laikā.

2.3.6. Parauga atkopšanas ātrums

{{0}},5 g Rehmannia saknes parauga (SX1) ar zināmu 5 komponentu saturu tika precīzi nosvērts koniskajā kolbā ar aizbāzni, pievienoja 6 paralēlas porcijas un pievienoja 5 noteiktas koncentrācijas standartšķīdumus. attiecīgi. Paraugi tika sagatavoti saskaņā ar metodi, kas aprakstīta sadaļā "2.2.2", un paraugi tika injicēti un izmērīti saskaņā ar hromatogrāfijas apstākļiem saskaņā ar "2.1". Reģenerācijas ātrums tika aprēķināts, un rezultāti ir parādīti 3. tabulā. Katra komponenta vidējais parauga atgūšanas ātrums bija 96,5% ~ 98,6%, un RSD bija 0,73% ~ 1,52%, kas norāda, ka metodei ir laba precizitāte.