Gao-Zi-Yao uzlabo mācīšanos un atmiņas funkcijas vecām spontānām žurkām ar hipertensiju 2. daļa

Eksperimentālie dzīvnieki

Divpadsmit mēnešus veci un astoņas nedēļas veci spontāni hipertensijas žurku tēviņi (SHR) tika iegādāti no Nanjing Animal Model Center.

Pastāv cieša saikne starp 8-nedēļu veciem vīriešiem un atmiņu. Šajā periodā vīrišķā radījuma smadzenes strauji attīstās, un sakari starp tās neironiem pamazām palielinās, kas savukārt ietekmē atmiņas attīstību.

Pētījumi liecina, ka vīriešu kārtas radījumu atmiņa ar vecumu turpina uzlaboties. Tas ne tikai būtiski ietekmē viņu izdzīvošanu un vairošanos, bet arī palīdz viņiem labāk pielāgoties videi un tikt galā ar jauniem izaicinājumiem.

Tāpēc mums aktīvi jāmudina jaunie vīrieši piedalīties dažādās labvēlīgās aktivitātēs, piemēram, mīklu risināšanā, jaunu prasmju apgūšanā un jaunu jomu izpētē. Šīs aktivitātes stimulē viņu smadzenes, ļaujot tām ātrāk attīstīties un uzlabot atmiņas spējas.

Tajā pašā laikā mums vajadzētu arī nodrošināt piemērotu vidi un atmosfēru jauniem vīriešu dzimuma radījumiem. Liekot viņiem justies droši un tuvu, var veicināt viņu smadzeņu attīstību un uzlabot atmiņu.

Īsāk sakot, mums jādara viss iespējamais, lai palīdzētu jauniem tēviņiem uzlabot atmiņu, lai viņi kļūtu gudrāki, pārliecinātāki un spējīgāki radījumi. Tas veicina ne tikai viņu personīgo attīstību, bet arī visas sugas labklājību un izdzīvošanu. Var redzēt, ka mums ir jāuzlabo atmiņa, un Cistanche deserticola var ievērojami uzlabot atmiņu, jo Cistanche deserticola piemīt antioksidanta, pretiekaisuma un pretnovecošanās iedarbība, kas var palīdzēt samazināt oksidatīvās un iekaisuma reakcijas smadzenēs, tādējādi aizsargājot nervu sistēmas veselība. Turklāt Cistanche deserticola var arī veicināt nervu šūnu augšanu un atjaunošanos, tādējādi uzlabojot neironu tīklu savienojamību un darbību. Šie efekti var palīdzēt uzlabot atmiņu, mācīšanos un domāšanas ātrumu, kā arī var novērst kognitīvo disfunkciju un neirodeģeneratīvo slimību attīstību.

Noklikšķiniet uz zināt papildinājumus, lai uzlabotu atmiņu

Šajā modelī hipertensija sāk attīstīties līdz 4 mēnešu vecumam, ar hipertensiju saistītām izmaiņām smadzeņu mikrovaskulārā parādīšanos līdz 6 mēnešu vecumam [37].

Žurkas tika izmitinātas optimālos apstākļos ar standarta higiēnu, turētas 25 grādu temperatūrā ar 12/12 gaismas/tumsas ciklu un barotas ar standarta žurku ēdienu un ūdeni ad libitum.

Visas procedūras apstiprināja un veica saskaņā ar SoochowUniversity izstrādātajām dzīvnieku kopšanas un izmantošanas vadlīnijām, kas atbilst mūsu iepriekšējam ziņojumam[35].

Eksperimenti tika veikti saskaņā ar Nacionālo veselības institūtu vadlīnijām laboratorijas dzīvnieku izmantošanai (NIH, publikācijas numurs 85–23, pārskatīts 1996. gadā). Par šo pētījumu ziņo ARRIVE vadlīnijas.

Astoņas nedēļas vecs SHR tika izmantots novecošanas kontrolei (SHR-Young, n{3}}). Divpadsmit mēnešus vecas žurkas tika apstrādātas ar Gao-Zi-Yao vai bez tā ar destilētu ūdeni (vecā SHR-C, n=10), ar mazu devu (vecā SHR-L, n=10), ar vidēju devu. (Old SHR-M, n=10), liela deva (Old SHR-H, n=10) ar kuņģa barošanu.

Zemas, vidējas un lielas Gao-Zi-Yao devas ir vienādas ar 1/2-, 1-, trīskāršas devas klīniskai lietošanai pacientam, ko aprēķina atkarībā no ķermeņa virsmas laukuma. Gao-Zi-Yao pirms uzklāšanas tika izšķīdināts 5 ml destilēta ūdens un 4 nedēļas tika ievadīts vienreizēji piena produktos.

Asinsspiedienu un sirdsdarbības ātrumu katru nedēļu uzraudzīja ar astes aproces metodi, un katru nedēļu tika uzraudzīts arī ķermeņa svars, kā norādīts mūsu iepriekšējā novērojumā [35].

Pēc 4 nedēļām tika veikts Morisa ūdens labirinta eksperiments, un žurkas tika nogalinātas anestēzijā ar nātrija pentobarbitālu (50 mg/kg ip), hipokampa audi tika savākti turpmākai analīzei. Visus eksperimentālos protokolus apstiprināja Soochow universitātes ētikas licencēšanas komiteja.

Morisa ūdens labirinta eksperiments

Morisa ūdens labirinta eksperiments (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Šanhaja, Ķīna) tika veikts, kā aprakstīts iepriekš ar dažām modifikācijām [38]. Pārbaude tika plānota 6 dienām, no 1. līdz 5. dienai bija paredzēts apmācības periods, bet 6. diena bija testēšanas rezultātiem.

Žurkas tika apmācītas 2 min pienu, kā latentuma laiku reģistrējot uzkāpšanas laiku uz platformas. 6. dienā platforma tika noņemta. Žurkas tika ievietotas tālākajā attāluma kvadrantā, un peldēšanas trajektorija tika reģistrēta 2 minūtes.

Programmatūra aprēķināja mācīšanās un atmiņas funkcijas parametrus.

NO un iekaisuma faktoru līmeņa noteikšana serumā ar ELISA

NO (kataloga Nr.: S0023), IL-1 (kataloga numurs: A301BH80153), IL-2 (kataloga numurs: A31038348), IL-6 (kataloga numurs: A30681042) līmenis serumā. unTNF- (kataloga numurs: A38280855) tika mērīti, izmantojot komerciāli pieejamus ELISA komplektus (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai enzīmu izpēte. Šanhaja, Ķīna). Visas darbības tika veiktas saskaņā ar ražotāja norādījumiem.

Nissl krāsošana

Žurku hipokampa audi tika izolēti, fiksēti, iestrādāti parafīnā, pēc tam inkubēti 1% toluidīna zilā krāsošanas šķīdumā 5–10 minūtes istabas temperatūrā. Desmit sekcijas tika izskalotas destilētā ūdenī, iemērc 95% etanolā 5–30 minūtes un dehidrētas 100% etanolā.

Pēc dehidratācijas šķēle tika ievietota ksilolā un pārklāta, izmantojot sveķu barotni. Neironu skaits hipokampu CA1, CA2 un dentate gyrus (DG) reģionos tika novērots un analizēts, izmantojot ImageJ analīzes programmu.

Western blot ar mācīšanos un ar atmiņu saistītiem proteīniem

Western blots mācībām un ar atmiņu saistītajiem proteīniem tika veikts, kā aprakstīts mūsu iepriekšējā ziņojumā ar dažām modifikācijām [39].

Hipokampusa audus homogenizēja ar RIPA buferšķīdumu (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, pH 7,0), kas satur fenilmentānsulfonilfluorīdu (R&D Systems Inc., Mineapolisa, ASV). Homogenāti tika centrifugēti pie 12,000 × g 10 minūtes 4 grādu temperatūrā.

Šūnu proteīni tika atdalīti ar SDS-PAGE un pārnesti uz PVDF membrānām (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Membrānas tika bloķētas 5% beztauku pienā PBS un 0,1% Tween-20istabas temperatūrā.

Pēc tam bloti tika inkubēti ar primāro antivielu: anti-glutamāta receptoru 1 (1:1000, Abcam, Inc., kataloga Nr.: ab183797), AntiNMDAR2B antivielu (1:1000, Abcam, Inc., kataloga Nr.: ab28373), Anti-fosfo. -CaMKII antiviela (1:1000, Abcam, Inc., kataloga Nr.: ab171095), Antiphospho-CREB antiviela (1:1000, Abcam, Inc., kataloga Nr.: 32096) vai anti-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Kataloga Nr.: sc-47724).

Pēc tam membrānas 1 stundu inkubēja ar sekundāro antivielu (HRP-konjugēts anti-trušu Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Kataloga Nr.: ab205718). Pēc tam membrānas trīs reizes mazgāja 15 minūtes, izmantojot TBS-T, lai noņemtu liekās antivielas, pirms inkubēja 1 minūti ar hemiluminiscējošiem reaģentiem (ECL, R&D Systems Inc., Mineapolisa, MN, ASV).

Turklāt imūnreaktīvās joslas tika noteiktas ar elektroforēzes gēla analīzes sistēmu (GL2200 Pro, Crestream Inc. USA). Joslu intensitāte tika analizēta ar Image J programmatūru. Mērķa proteīnu daudzums tika normalizēts ar GAPDH ekspresiju [39].

Statistiskā analīze

Statistikas analīzei tika izmantota programmatūra SPSS 18.{1}}. Dati tiek parādīti kā vidējais ± SEM Grupētie dati tika analizēti, izmantojot vienvirziena dispersijas analīzi, kam sekoja Studenta-Ņūmena-Keula tests. Pvērtība < 0,05 tika uzskatīta par statistiski nozīmīgu iepriekšējā ziņojumā [35].

Rezultāti

Sistoliskais asinsspiediens (SBP), sirdsdarbības ātrums un ķermeņa svars starp jauno SHR un veco SHR

Yong SHR uzrādīja zemāku SBP pirmajās divās nedēļās, salīdzinot ar veco SHR, pēc tam palielinājās līdz nekādas atšķirības starp abām grupām vēlākajās trīs nedēļās (2.A att.).

Gluži pretēji, pirmajās divās nedēļās sirdsdarbības ātrums neatšķīrās starp abām grupām, pēc tam jauno SHR ievērojami palielinājās, salīdzinot ar veco SHR vēlāko trīs nedēļu laikā (2.B att.). Jauns SHR uzrādīja zemāku ķermeņa svaru, salīdzinot ar veco SHR visā novērošanas periodā (2. C att.).

Morisa ūdens labirinta parametri starp jauno SHRun veco SHR

Lai noteiktu no hipokampa atkarīgo mācīšanos un atmiņu, tika veikts Morisa ūdens labirinta eksperiments. Vecā SHR pirmajās četrās dienās uzrādīja ilgāku aizbēgšanas latentumu, salīdzinot ar jauno SHR (3. att.).

Mērķa kvadranta šķērsošanas laiks bija mazāks vecajā SHR nekā jaunajā SHR (3.B att.).

Laika procentuālais daudzums mērķa platformas kvadrantā bija īsāks vecajā SHR, salīdzinot ar jauno SHR (3. att. C). Ceļa garuma procents kvadrantā bija arī īsāks vecajā SHR, salīdzinot ar veco SHR (3. att.). Šie rezultāti liecina, ka vecajam SHR ir kognitīvās funkcijas traucējumi.

Neironu skaits hipokampā starp jauniem SHR un veciem SHR

Neironu skaits dažādās hipokampusa zonās tika skaitīts ar Nissl krāsošanu. Rezultāti parādīja, ka vecā SHR CA1, CA2 un DG reģionos ir mazāks neironu skaits, salīdzinot ar jauniem SHR (4. att.).

Mācīšanās un ar atmiņu saistītas olbaltumvielu izpausmes hipokampā starp jauno SHR un veco SHR

Western blot rezultāti parādīja, ka ar mācībām un atmiņu saistīto proteīnu (GluR1, NMDAR 2B, fosforilētā-CaMK II un fosforilētā-CREB) ekspresija vecajā SHR hipokampā bija zemāka nekā jaunā SHRhipokampā (5. att.).

Gao-Zi-Yao ietekme uz SBP, sirdsdarbības ātrumu un ķermeņa svaru vecajā SHR

Tika analizēta Gao-Zi-Yao ietekme uz SBP. Ārstēšana ar mazu Gao-Zi-Yao devu ievērojami samazināja SBP vecajā SHR no otrās nedēļas līdz ceturtajai nedēļai, salīdzinot ar kontroles veco SHR grupu, vidējas un lielas Gao-Zi-Yao devas ievērojami samazināja SBP vecajā SHR no pirmās nedēļas līdz ceturtā nedēļa, salīdzinot ar kontroles veco SHR (6.A att.). Šie rezultāti liecina, ka Gao-Zi-Yao ir antihipertensīva iedarbība vecajā SHR.

Mēs arī salīdzinājām datus par Gao-Zi-Yaoon sirdsdarbības ātruma un ķermeņa svara ietekmi. Mūsu dati parādīja, ka visā novērošanas periodā nebija būtiskas sirdsdarbības ātruma un ķermeņa svara atšķirības visās grupās (6.B, C att.).

Gao-Zi-Yao ietekme uz NO, IL-1, IL-2 un TNF- līmeni serumā vecajā SHR

Ārstēšana ar vidējām un lielām GAO-ZIYAO devām palielināja NO līmeni serumā, salīdzinot ar līmeni SHR kontroles grupā (7.A att.). Ārstēšana ar visām pārbaudītajām GAO-ZI-YAO devām samazināja IL-1, IL-2 līmeni serumā, salīdzinot ar līmeni SHR kontroles grupā (7.B, C att.); tomēr tikai lielā GAO-ZI-YAO deva nomāca TNF- līmeni serumā (7.D att.).

Šie rezultāti parāda, ka GAO-ZI-YAO varētu regulēt oksidatīvo stresu un iekaisumu.

For more information:1950477648nn@gmail.com