Gajs Dž. M. Kamerons u.c

Akūts nieru bojājums(AKI) var būt letāls, un tas ir labi definēts riska faktors slimības attīstībaihroniskanieresslimība. 2. grupas iedzimtās limfoīdās šūnas (ILC2) ir iedzimtas -2 tipa citokīnu ražotājas un ir kritiski homeostāzes regulatori perifērajos orgānos. Tomēr mūsu zināšanas par to funkcijunieresir salīdzinoši ierobežots. Jaunākie pierādījumi liecina, ka ILC2 skaita palielināšana, sistēmiski ievadot rekombinanto interleikīnu (IL)-25 vai IL-33, aizsargā pret nieru bojājumiem. Lai gan ILC2 var izraisīt, lai aizsargātu pret išēmisku vai ķīmisku vielu izraisītu AKI, ILC2 deficīta vai izsīkuma ietekme uz nieru bojājuma smagumu nav zināma. Pirmkārt, ILC2 fenotips un atrašanās vietanierestika novērtēti homeostatiskos apstākļos.NieresILC2 konstitutīvi izteica augstu IL-5 līmeni un atradās nieru asinsvadu tiešā tuvumā. Lai pārbaudītu ILC2 funkcionālo lomunieres, tika izmantots eksperimentāls nieru išēmijas-reperfūzijas bojājuma (IRI) modelis, un traumas smagums tika novērtēts savvaļas tipa, ILC2-samazināta, ILC2-deficīta un ILC{{4}. }noplicinātas peles. Pārsteidzoši, ka pēc IRI, ja nebija ILC2, nebija atšķirību ar traumām saistīto (Lcn2), iekaisuma (Cxcl1, Cxcl2 un Tnf) vai ārpusšūnu matricas (Col1a1, Fn1) faktoru histopatoloģijā, kolagēna nogulsnēšanās vai mRNS ekspresijā. Šie dati liecina, ka ILC2 neesamība nemaina slimības smagumunieru bojājums, kas liecina par iespējamu atlaišanu. Tāpēc citi 2-tipa mediētas imūno šūnu aktivācijas mehānismi, iespējams, kompensē ILC2 neesamību. Tādējādi ILC2 zudums, visticamāk, nepalielinās AKI jutību vai smagumu.

Atslēgvārdi:ILC2, 2. grupas iedzimta limfoīdā šūna, IL-5, IL-13,nieres, nieru, IRI, išēmijas-reperfūzijas bojājums

Lai iegūtu vairāk informācijas, lūdzu, sazinieties ar:emily.li@wecistanche.com

Cistanche tubulosa novērš nieru slimību, noklikšķiniet šeit, lai iegūtu paraugu

IEVADS

Akūts nieru bojājums(AKI) un ar to saistītajām patoloģijām ir liela ietekme uz cilvēka veselību (1). Biežs AKI cēlonis ir nieru išēmija, kas galvenokārt skar cauruļveida epitēliju, jo šajās šūnās ir augsts mitohondriju blīvums un vielmaiņas aktivitāte (2); pārskatīti Devarajan (3) un Bonventre un Yang (4). Akūta tubulārā nekroze pasliktina atkritumu izvadīšanu, izmaina ūdens un elektrolītu līdzsvara traucējumus un izraisa spēcīgas iekaisuma reakcijas; pārskatīts Bonventre un Yang (4). Neitrofilu un monocītu pieplūdums veicina ievainojumu, tomēr citas iedzimtas imūnās šūnas var veicināt atgriešanos pie homeostāzes (5); pārskatīts Friedewald and Rabb (6). Iedzimtas limfoidās šūnas (ILC) ir nesen šīs ģimenes papildinājums, un tās ir iedalītas 3 grupās, pamatojoties uz transkripcijas faktoriem, kas nepieciešami to attīstībai, un pēc to radītajiem efektorcitokīniem (7). 2. grupas ILC (ILC2) ir spēcīgi 2. tipa citokīnu, galvenokārt interleikīna (IL)-5 un IL-13 (8, 9) ražotāji. Šīs šūnas arī veicina audu atjaunošanos pēc vairāku orgānu apvainojumiem, un tām ir dažādas funkcijas in vivo (10). Piemēram, pēc elpceļu vīrusu infekcijas ar gripas vīrusu ILC2 koordinē elpceļu epitēlija atjaunošanos, ražojot augšanas faktoru amfiregulīnu (AREG) (11). Pavisam nesen ILC2 tika pētīti nieru bojājumu modeļos, tostarp išēmijas-reperfūzijas bojājumu (IRI) un nefrotoksisku ķīmisku vielu izraisītu bojājumu ar doksorubicīnu vai cisplatīnu (12–16). Nieru IRI parasti panāk, īslaicīgi ierobežojot asins plūsmu nierēs uz 20–30 minūtēm, modelējot transplantācijas vai ķirurģiskas iejaukšanās radītu traumu (17–21). Kopumā šie pētījumi liecina, ka rekombinanto peļu citokīnu, kas aktivizē ILC2, proti, IL-25 vai IL-33, ievadīšana in vivo ir pietiekama, lai samazinātu kanāliņu epitēlija šūnu bojājumu smagumu (12–16). Līdzīgi rezultāti ir sasniegti ar ex vivo aktivizēto ILC2 pārnešanu (12, 15). Lai gan ILC2 var mākslīgi izraisīt vairošanos un aizsardzību pret eksperimentāla nieru bojājuma kaitīgajām sekām, ILC{38}deficīta ietekme joprojām nav pilnībā izprotama. Patiešām, citas imūnās šūnas, kurām ir sarežģīta mijiedarbība ar ILC2, piemēram, regulējošām T šūnām (Treg) un alternatīvi aktivizētiem makrofāgiem (AAM; pazīstams arī kā M2), ir būtiskas šim renoprotektīvajam efektam (22–25). Šajā pētījumā mēs centāmies sīkāk raksturot ILC2 nierēs, to atrašanās vietu šajā orgānā un noteikt to funkcionālo lomu IRI, izmantojot funkciju zaudēšanas pieeju. Lūk, mēs to atradāmnieresILC2 konstitutīvi izsaka IL- 5 un galvenokārt atrodas tiešā nieru asinsvadu tuvumā, adventitiā. Turklāt mēs parādām, ka ILC2 samazināšanai, deficītam vai izsīkumam bija minimāla ietekme uz IRI smagumu. Lai gan iepriekš tika pierādīts, ka ILC2 aktivizēšana un ar to saistītā vietējās 2. tipa imunitātes pastiprināšana samazina AKI kaitīgās sekas, mūsu rezultāti atklāj, ka salīdzināmi ievainojumi rodas, ja nav ILC2, kas liecina, ka ILC2 var būt lieki IRI gadījumā, ja cita kompensējoša imūnsistēma. tādas šūnas kā T šūnas.

MATERIĀLI UN METODES

Peles

Astoņas līdz divpadsmit nedēļas veci vīriešu savvaļas tipa (WT; C57BL/6JAusb), transportlīdzeklis (ar fizioloģisko šķīdumu apstrādāts Icosdtr/ plus Cd4cre/ plus ), ILC2-samazināts (Roraflfl/ plus Il7rcre/ plus ), ILC{{ 8}}deficīts (Roraflfl/flfl Il7rcre/ plus ), ILC2- izsmelts (ar difterijas toksoīdu ārstēts [DTx] Icosdtr/ plus Cd4cre/ plus ) un IL-5/IL-13 peles ar diviem reportieriem (Il5venus/ plus Il13td tomato/ plus ) tika iegūtas no Austrālijas Bioresursiem (Moss Vale, Austrālija). Il5td tomatoCre; Rosa26-CAG-RFP reportieru-izsekošanas peles tika iegūtas no Jackson Labs (atsauces nr. 030926 un 007914). Visas peles, kurām tika veikta operācija, tika izmitinātas īpašos, bez patogēniem, fiziskas ierobežošanas 2 apstākļos, individuāli ventilējamos būros. Peles operācijas laikā tika pakļautas normālam istabas gaisam sterilizētā vidē. Pelēm tika atļauts 1 nedēļu aklimatizēties pirms eksperimentu uzsākšanas, un tās tika uzturētas 12-h dienas/nakts ciklā ar piekļuvi standarta laboratorijas ēdienam un ūdenim ad libitum.

Plūsmas citometrija un t-SNE analīze

Nieresun plaušas tika savāktas no reportierpelēm. Vienšūnu suspensijas tika sagatavotas, kā aprakstīts sadaļā "Vienšūnu suspensiju sagatavošana no peles plaušām ar apstrādi ar kolagenāzi D" (Miltenyi Biotec GmbH, 2008; Bergisch Gladbach, Vācija). Šūnas tika bloķētas ar Fc bloku (attīrīts pretpeļu CD16/32; Biolegend, Sandjego, ASV) 30 minūtes un iekrāsotas ar fluorescējoši konjugētām antivielām pret mērķa šūnu virsmas antigēniem (1. papildu tabula). Krāsošanas un mazgāšanas posmi tika veikti ar BSA traipu buferi (BD Biosciences, North Ryde, Austrālija). Paraugi tika iegūti ar plūsmas citometru BD LSR Fortessa X20. Plūsmas citometrijas dati tika analizēti, izmantojot FlowJo v10.5.3 (Tree Star, Ashland, ASV). T-izplatītā stohastiskā kaimiņu iegulšana (t-SNE) tika veikta uz ILC2 (CD45 plus Lineage [TCR [TCR TCR δ CD8 CD4 ]CD11b GR-1 B220 TER-119 CD3 NK-1 .1 ] IL7R plus CD90.2 plus ST2 plus FSClowSSClow vienšūnas). Izmantojot izlases samazināšanas spraudni, notikumu skaits katrā paraugā tika normalizēts, lai vienāds ar mazāko, noapaļots uz leju līdz tuvākajiem 10 notikumiem. Visas populācijas tika apvienotas vienā .fcs failā, savienojot samazinātās izlases populācijas. t-SNE analīze tika veikta savienotajam paraugam, kas satur visu nieru un plaušu paraugu apvienotās populācijas. Šim nolūkam kompensētie kanāli, kas netika izmantoti vārtiem, tika novērtēti ar šādiem t-SNE iestatījumiem: Iteration 1000, Perplexity 20, Eta 224. Histogrammas tika izmantotas, lai parādītu šūnu virsmas antigēnu un citokīnu diferenciālo ekspresiju plaušās unnieres

Imunofluorescence Il5td tomatoCre; Rosa26-CAG-RFP reportieris-izsekošanas peles tika eitanizētas un intrakardiāli perfūzētas ar fosfātu buferšķīdumu (PBS) un pēc tam 4% paraformaldehīdu (PFA) PBS. Nieres tika noņemtas un turētas svaigā 4% PFA 24 stundas 4 ° C temperatūrā un pēc tam mazgātas PBS. Trīs simti mikrometru sekcijas tika sagatavotas, izmantojot vibratomu. Pēc tam audu sekcijas tika inkubētas permeabilizācijas buferšķīdumā (PBS/0,2 procenti Triton X-100/0.3M glicīns), pēc tam bloķēja PBS/0,2 procenti. Triton X- 100/5 procenti ēzeļa serums 4◦C uz nakti. Paraugi vienu reizi tika mazgāti PBS/0,2 procenti Tween-20, pēc tam inkubēti ar primārajām antivielām, kas atšķaidītas PBS/0,2 procenti Tween-20/3 procenti ēzeļa seruma. istabas temperatūrā līdz nākamajai dienai. Pēc tam paraugi tika mazgāti PBS/0,2 procenti Tween-20 30 min, 3–4 reizes, pēc tam inkubēti ar sekundārajām antivielām, kas atšķaidītas PBS/0. 0,2 procenti Tween-20/3 procenti ēzeļa seruma istabas temperatūrā 6–8 stundas. Paraugi tika mazgāti PBS/0,2 procenti Tween-20 1 dienu un pēc tam dehidrēti augošā etanola sērijā (20, 30, 50, 70, 95, 100 procenti), 10 minūtes katrā solī. . Visbeidzot, nieru sekcijas tika notīrītas, mērcējot metilsalicilātā (M-2047; Sigma-Aldrich, Castle Hill, Austrālija), un pēc tam tika uzstādītas svaigā metilsalicilātā uz ieliektas pārklājuma vai kameras. Attēli tika uzņemti ar Nikon A1R lāzera skenēšanas konfokālo ierīci, ieskaitot 405, 488, 561 un 650 lāzera līnijas ierosināšanai un attēlveidošanai ar 16X/0.8 vai 25X1.1, NA Plan Apo liela darba attāluma ūdens iegremdēšanas objektīviem. Z soļi tika iegūti ik pēc 6 µm. Attēli tika apstrādāti ar ImageJ (NIH, Bethesda, MD, ASV) un Bitplane Imaris programmatūru v8 (Andor Technology PLC, Belfāsta, Ziemeļīrija). Alfa gludās muskulatūras aktīna iezīmēto asinsvadu virsmas rekonstrukcijas tika veiktas ar Imaris un pseidokrāsas, pamatojoties uz to raksturīgo arhitektūru un tilpumu, lai vizualizētu lielas artērijas un vēnas. Tika izmantotas šādas antivielas un atšķaidījumi: Living Colors anti-DsRed Rabbit Polyclonal Pan Antibody (1:500; TaKaRa, Mountain View, ASV), kazas poliklonāla anti-alfa-gludo muskuļu aktīna antiviela (1:200; Abcam, Kembridža, Apvienotā Karaliste ), eFluor 660 LYVE1 monoklonālā antiviela (1:300, klons ALY7, eBioscience), Armēnijas kāmja anti-peļu CD3 antiviela (1:100, klons 145-2C11, Biolegend), Alexa Fluor R 488 ēzeļa anti-kazas IgG (H plus L), Alexa Fluor R 555 ēzeļa anti-trušu IgG (H plus L) Alexa Fluor R 647 kazas anti-kāmja IgG (H plus L) krusteniski adsorbēts (1:400, ThermoFisher Scientific).

Vienpusēja išēmijas-reperfūzijas trauma

Ķirurģiskā anestēzija tika ierosināta ar 4% izoflurāna inhalāciju un tika uzturēta ar nepārtrauktu 1–1,5% izoflurāna inhalāciju caur deguna konusu. Visas procedūras laikā peles tika turētas uz ķirurģiskas platformas, kas tika uzturēta 37 ± 1 ◦ C temperatūrā ar digitālu termostatu kontrolētu siltuma paklājiņu. Labās nieres nefrektomija tika veikta visiem dzīvniekiem. Lai izraisītu vienpusēju išēmiju, kreisās nieres asinsvadi tika saspiesti netālu no nieres pedikula uz 29-minūtēm, izmantojot netraumatisku sterilu asinsvadu skavu (Coherent Scientific; Hilton, Austrālija), pieliekot pietiekamu spēku, lai novērstu asins biedru nokļūšanu uz un nonieresbez neatgriezeniskiem kuģu bojājumiem. Vienota un ātra reperfūzijanierestika novērots pēc asinsvadu skavas noņemšanas visām pelēm. Muskuļu un ādas brūces tika aizvērtas, izmantojot 5/{1}} vikrila šuvi (Johnson & Johnson Medical, North Ryde, Austrālija), pēc tam āda tika noslēgta, izmantojot dermālo līmi (Provet, Charlestown, Austrālija), lai aizsargātu brūci un novērst infekciju. Kontroles dzīvniekiem tika veikta fiktīva operācija ar identisku anestēzijas laiku un tika veikta tikai kontralaterāla nefrektomija. Efektīvai pretsāpju mazināšanai peles 30 min pirms operācijas subkutāni saņēma 0,1 mg/kg buprenorfīna un pēc tam 0,05–0,1 mg/kg ik pēc 8–12 stundām, kā prasīts. Dzīvnieki parasti tika atradināti no atsāpināšanas 4 dienas pēc operācijas bez jebkādām sāpju vai diskomforta pazīmēm, kā noteikts pēc sejas īpašībām, izmantojot standarta peles grimases skalu; kā aprakstīts (26). Visas peles izdzīvoja līdz iepriekš noteiktajam beigu punktam.

ILC2 izsīkšana in vivo

ILC2 tika izsmelti Icosdtr/ plus Cd4cre/ plus pelēm, intraperitoneāli ievadot 0,025 mg/kg DTx (Sigma-Aldrich), kā aprakstīts iepriekš (27). DTx tika ievadīts 30 minūtes pirms operācijas un katru dienu pēc tam līdz galapunktam. Lai apstiprinātu ILC2- izsīkumu, naivu dzīvnieku apakškopa saņēma DTx 3 dienas. Kontroles Icosdtr/ plus Cd4cre/ plus pelēm tika ievadīta intraperitoneāla fizioloģiskā šķīduma injekcija.

Histoloģija

Izgrieztsnieresnekavējoties tika sadalīti uz pusēm gareniski cauri pauguram. Puse tika fiksēta 10% buferētā formalīnā, kas satur 4% formaldehīda 24 stundas pirms pagaidu uzglabāšanas 10% etanolā, parafīna iestrādāšanas un sadalīšanas. Četrus mikrometrus gareniski izgrieztas sekcijas tika iekrāsotas ar Periodskābi-Šifa (PAS) un Masona trihromu. Histopatoloģiju kvantitatīvi noteica, vizualizējot kanāliņu paplašināšanos, apoptozi vai ģipša veidošanos, ko veica viens akls pētnieks, izmantojot vispāratzītu daļēji kvantitatīvu metodi (28), ar nelielām izmaiņām, kā aprakstīts (15). No katra dzīvnieka dublētām PAS krāsotām sekcijām tika iegūts vidējais rādītājs. Iepriekš minētās histopatoloģiskās pazīmes ietekmēja 0=0 procentus kanāliņu; 1=1–10 procenti ; 2=11–25 procenti ; 3=26–50 procenti ; 4=51–75 procenti ; 5=76–100 procenti . Kolagēna nogulsnēšanās tika novērtēta, izmantojot Masona trihromu, un kolagēns tika identificēts kā metilzilā saturs starp blakus esošajiem kanāliņiem.

RNS ekstrakcija, reversā transkripcija un qPCR

Puse no vienas nieres tika saglabāta gēnu ekspresijas analīzei. Audus homogenizēja 400 µl PBS, izmantojot TissueLyser LTTM (Qiagen, Chadstone Centre, Austrālija) ar 50 svārstībām sekundē 2 minūtes. Divi simti mikrolitru parauga tika izņemti citām analīzēm. Atlikušajiem 200 µl parauga tika pievienots viens mililitrs TRI reaģenta R (Sigma-Aldrich), kas saņēma papildu 50 svārstības sekundē 1–2 minūtes, līdz tas bija pilnībā homogenizēts. Pēc 5 minūšu inkubācijas istabas temperatūrā un centrifugēšanas pie 12,{10}}xg 10 minūtes, supernatants tika ekstrahēts un maisīts ar 250 µl hloroforma (Sigma-Aldrich). Pēc 10 minūšu inkubācijas istabas temperatūrā un centrifugēšanas pie 12,{16}}xg 15 minūtes, supernatants tika ekstrahēts un virpuļots ar 500 µl 70% izopropanola (Sigma-Aldrich). Paraugu atkārtoti inkubēja 10 minūtes istabas temperatūrā, pēc tam centrifugēja ar ātrumu 12,000xg 10 minūtes. Supernatants tika izmests, neizjaucot ar RNS bagāto granulu. Granulas tika mazgātas divas reizes ar 1 ml 75% RNS kvalitātes etanola (Sigma-Aldrich), centrifugētas ar ātrumu 10, 000xg 5 minūtes un supernatants katru reizi tika izmests. Granulu īsi žāvēja gaisā istabas temperatūrā pirms atkārtotas suspendēšanas 80–100 µl UltraPureTM DNāzes/RNāzes nesaturoša divreiz destilēta ūdens (ddH2O; Thermo-Fisher Scientific) un pēc tam pirms reversās transkripcijas uzglabāja 80 ◦C temperatūrā. . Tieši pirms reversās transkripcijas RNS iznākums tika noteikts ar spektrofotometrisko novērtējumu, izmantojot Nanodrop2000TM (Thermo-Fisher Scientific). Pieci mikrolitri no katra parauga tika atšķaidīti ar ddH2O tā, lai katrā paraugā tiktu ielādēti 1000 ng RNS. Pēc apstrādes ar DNSase (Sigma-Aldrich) cDNS tika ģenerēts, izmantojot M-MLV (Thermo-Fisher Scientific, North Ryde, Austrālija) enzīma standarta darbības procedūras, izmantojot T100TM termisko ciklu (BioRad Laboratories, Gladesville, Austrālija). Izmantojot SYBR balstītu metodoloģiju, qPCR tika veikts, izmantojot CFX384 TouchTM (BioRad Laboratories) saskaņā ar standarta darbības procedūrām. Katrs primer komplekts tika pārbaudīts ar gradientu, lai noteiktu optimālo temperatūru pastiprināšanai (2. papildu tabula). Cikla kvantitatīvā noteikšana tika interpretēta, izmantojot regresiju katram mērķim, gēnu ekspresija tika normalizēta attiecībā pret hipoksantīna-guanīna fosforiboziltransferāzi (Hprt). Kušanas līknes tika novērtētas attiecībā uz praimera dimerizācijas un nespecifiskas amplifikācijas pazīmēm. Uz katras plāksnes katram mērķim tika izmantota vismaz viena negatīva kontrole un bez šablona kontrole, lai nodrošinātu, ka katrā galvenajā maisījumā vai izmantotajā ddH2O nav piesārņojuma.

RT2 profilētāju masīvs

RT² ProfifilerTM PCR masīva peles ārpusšūnu matricas un adhēzijas molekulas (Qiagen) tika veiktas saskaņā ar ražotāja norādījumiem, un dati tika augšupielādēti, pēc tam analizēti, izmantojot tiešsaistes rīku, kas pieejams vietnē https://dataanalysis. qiagen.com/pcr/arrayanalysis.php. Šis masīvs ļauj profilēt 84 gēnus ne vairāk kā 4 paraugos, tāpēc vienādi cDNS daudzumi katram replikātam grupā tika apkopoti no WT pelēm 1., 3. vai 7. dienā pēc IRI un fiktīvi apvienoti no katra replikāta no katra. no šiem laika punktiem. Katram mērķim locījuma izmaiņas pēc IRI tika salīdzinātas ar viltus izteiksmi.

Statistiskā analīze

Visi dati tika analizēti ar Graphpad Prism programmatūras v8.{6}}2, izmantojot neparametriskos nesapārotos t-testus (Mann-Whitney U-test). P < 0,05="" tika="" noteikts="" kā="" slieksnis="" statistiski="" nozīmīgu="" atšķirību="" noteikšanai.="" ∗p="">< 0,05,="" ns="" nav="" nozīmīga.="" visi="" dati="" ir="" izteikti="" kā="" vidējais="" ±="" sem.="" katrā="" analīzē="" katrā="" grupā="" bija="" n="4–8" atkārtojumi,="" un="" rezultāti="" reprezentēja="" vismaz="" divus="" eksperimentus.="" katra="" eksperimenta="" izlases="" lielums="" ir="" aprakstīts="" atbilstošajā="" attēla="">

REZULTĀTI

Nieru ILC2 konstitutīvi ekspresē IL-5 un ir lokalizēti nieru asinsvados homeostatiskos apstākļos

Tika veikta detalizēta nieru ILC2 fenotipa un atrašanās vietas analīze homeostatiskos apstākļos. Nierēs bija ievērojami vairāk ILC2 (CD45 plus Lineage IL- 7R plus CD90.2 plus ST2 plus FSClowSSClow atsevišķas šūnas), salīdzinot ar plaušām, ja to attēlo procentos no kopējā CD45 plus atsevišķām šūnām (1.A attēls; Papildu attēli 1A, B). Nieru un plaušu ILC2 t-SNE analīze parādīja unikālu klasterizāciju, lai gan šīs kopas nebija pilnībā atšķirīgas viena no otras (1.B attēls). Tomēr nieru ILC2 bija ievērojami zemāka CD25 ekspresija, konsekventa ICOS un KLRG1 ekspresija, bet augstāka IL-5 ekspresija, salīdzinot ar plaušu ILC2 (1. C attēls). Nieru ILC2 bija augstāka IL-5 konstitutīvā ekspresija nekā IL-13 (1. D attēls; 1. C, D papildu attēli). Tika noteikts, ka ILC2 ir galvenais IL-5 veidojošais šūnu tips nierēs, un T helper tipa -2 (TH2) šūnu ieguldījums ir niecīgs (1. attēls, 1. E, F papildu attēli). Tāpēc IL-5 tika izmantots kā surogātmarķieris, lai noteiktu ILC2 atrašanās vietu peles nierēs, kā aprakstīts vairākiem perifēriem orgāniem (29–31). Tas tika panākts, izmantojot peles, kas ekspresē ar IL-5 saistītu Cre-rekombināzi, krustojot ar Rosa-tomato ciltsraksta izsekotāju (30, 31). IL-5 plus šūnas (galvenokārt ILC2s) tika atrastas visānieresbet galvenokārt tika lokalizēti galvenajā asinsvadu sistēmā, kā to vizualizēja ar alfa-gludo muskuļu aktīna (-SMA) pozitīvu krāsojumu (2.A attēls; Papildu attēli 2A, B), saskaņā ar mūsu neseno ziņojumu (29). Tika konstatēts, ka ILC2 ir saistīti gan ar starplobulārajiem, gan arkveida nieru asinsvadiem garozā un medulārajos reģionos, kā liecina limfātiskā endotēlija hialuronāna receptoru-1 (LYVE1) ekspresija (2.B attēls). Papildu attēlveidošana parādīja, ka ļoti maz CD3 plus šūnu (galvenokārt TH2 šūnas) veicināja endogēno IL-5 plus signālu (2.C attēls). ILC2 tika identificēti asinsvada adventicijā, izmantojot arteriālās -SMA pseidokrāsainas virsmas rekonstrukcijas.

ILC2 samazināšana, trūkums vai izsīkums nemaina eksperimentālo nieru išēmijas un reperfūzijas traumu smagumu pelēm

Given ILC2s were present in the kidney and localized to the renal vasculature, the impact of ILC2 reduction, deficiency, or depletion on the severity of experimental renal IRI was assessed. This was achieved by using ILC2-reduced (Roraflfl/+Il7rcre/+)-deficient (Roraflfl/flfl Il7rcre/+), and -depleted (DTx-treated Icosdtr/+Cd4cre/+) mice compared to WT and vehicle (saline-treated Icosdtr/+Cd4cre/+) controls. These mice have been previously described as appropriate tools for assessing ILC2 function in vivo in other organs such as the lung (27, 32). Here we show that these tools are also appropriate for assessing ILC2 function in the kidney. Indeed, kidney ILC2s were significantly lower in the ILC2-reduced, -defificient, and -depleted groups compared to WT or saline-treated controls (Figure 3A). Time-course analysis of IRI in wild-type mice identified day 7 as the most appropriate time point for the assessment of injury severity due to the presence of histopathological features of acute tubular necrosis, collagen deposition and increased mRNA expression of extracellular matrix, injury-associated, and inflflammatory factors (Supplementary Figures 3, 4). At day 7, 25/84 extracellular matrix factors were increased >2-reizes, salīdzinot ar viltus kontrolgrupām, savukārt 1/84 un 6/84 tika palielināti attiecīgi 1. un 3. dienā (papildu attēls 4A). IRI izraisīta akūta tubulāra nekroze, ko raksturo paplašināti kanāliņi un ģipša veidošanās, salīdzinot ar fiktīvu kontroli (3.B attēls, papildu attēli 3A, 4B). Tas tika kvantificēts kā cauruļveida traumas rādītājs, un traumas smagums bija līdzīgs visos genotipos (3.C attēls). IRI izraisīja arī kolagēna nogulsnēšanos, ko raksturo metilzilā saturs starp kanāliņiem medulā un garozā, salīdzinot ar fiktīvajām kontrolēm (3D attēls; Papildu attēls 3B). Kolagēna nogulsnēšanos neietekmēja ILC2 trūkums. IRI arī palielināja ar traumām saistītu faktoru, ķemokīnu un iekaisumu veicinošu citokīnu mRNS ekspresiju (3E–J attēli, papildu attēli 4C–K). Ar neitrofilu želatināzi saistīto lipokalīnu (Lcn2; NGAL), kas ir nieru bojājumu biomarķieris (33, 34), palielināja IRI, un to neietekmēja ILC2 samazināšanās, deficīts vai izsīkums (3.E attēls). CXC motīva ķemokīna ligandu 1 (Cxcl1) un Cxcl2 arī ievērojami palielināja IRI visos genotipos (3F, G attēls). Līdzīgi IRI palielināja iekaisumu veicinošo citokīnu audzēja nekrozes faktoru (Tnf), salīdzinot ar viltus kontrolēm (3H attēls). Saskaņā ar redzamo kolagēna nogulsnēšanos ekstracelulārās matricas faktoru kolagēna I tipa alfa 1 ķēdes (Col1a1) un fibronektīna 1 (Fn1) mRNS ekspresiju palielināja IRI visos genotipos (3I, J attēls).

DISKUSIJA

ILC2 ir kritiski audu homeostāzes regulatori, taču to loma nierēs vēl nav pilnībā noskaidrota. Lai gan ILC2 var izraisīt vairošanos un aizsardzību pret eksperimentālu nieru bojājumu kaitīgajām sekām, vēl nav zināms, kas notiek, ja nav šo šūnu. Vispirms mēs pārbaudījām, vai ILC2 skaitļi kā CD45 plus hematopoētisko šūnu proporcija atšķiras plaušās un nierēs. ILC2 veidoja lielāku CD45 plus šūnu daļu nierēs nekā plaušās. t-SNE analīze grupēja ILC2 no abām vietām atšķirīgi, tomēr kopas starp šiem audiem nebija pilnībā atšķirīgas. Bija atšķirības to šūnu virsmas antigēnā un 2. tipa citokīnu ekspresijā, jo nieru ILC2 ekspresēja lielāku IL-5 daudzumu. Patiešām, nieru ILC2 homeostatiskos apstākļos konstitutīvi izteica augstu IL-5 līmeni. ILC2 bija arī galvenais IL-5 avots nierēs, un TH2 šūnu ieguldījums bija niecīgs. Tāpēc IL-5 tika izmantots kā surogātmarķieris, lai noteiktu šo šūnu atrašanās vietu nierēs. ILC2 tika identificēti nierēs un tika lokalizēti gandrīz tikai gar nieru asinsvadu sistēmu. Šajos pētījumos ar IL-5 saistītā Cre-rekombināze tika izmantota kopā ar flox-stop-flox secību augšpus CAG-RFP-WPRE kasetes konstitutīvi izteiktajā ROSA26 lokusā, lai noteiktu ILC2. LYVE1, ko ekspresē nieru limfātiskās endotēlija šūnas, tika izmantots, lai sīkāk noteiktu šo šūnu atrašanās vietu peles nierēs (35). Kā gaidīts, LYVE1 krāsošana tika iestrādāta garozas nieru artēriju saistaudos, bet ne medulā, jo šajā nieres reģionā nav saskatāma limfātiskā tīkla (35–37). Jādomā, ka ILC2 atrodas tuvu asinsvadiem, jo ​​nieru endotēlija šūnas ir galvenais IL-33 avots nierēs (38, 39). Apstiprinot mūsu FACS novērojumus par vienšūnu nieru suspensijām, ILC2 atkal tika konstatēts kā galvenie IL-5 ražotāji nieru audu sekcijās ar minimālu CD3 un T šūnu ieguldījumu. Lai gan šie pētījumi parāda ILC2 atrašanās vietu nierēs, izmantojot reportierpeles, vēl ir jānosaka, vai ILC2 atrodas arī blakus asinsvadiem cilvēka nierēs un vai ILC2 atrašanās vieta tiek mainīta, reaģējot uz nieru bojājumu. Lai gan vairākos ziņojumos ir konstatēts, ka ILC2 skaitļi nav mainījušies nieru bojājumu dēļ, to fenotips un aktivācijas stāvoklis pēc traumas prasa turpmāku skaidrojumu (12–16). Pēc tam mēs raksturojām ILC2 funkcionālo lomu nierēs, izmantojot funkciju zaudēšanas pieeju. Lai to panāktu, mēs izmantojām peles ar samazinātu ILC{48} un deficītu, kā arī peles, kurām pēc DTx ievadīšanas var tikt nosacīti iztukšotas ILC2 (27). Mēs apstiprinājām šo rīku izmantošanu ILC2 iznīcināšanai vai ablācijai nierēs. Tika izvēlēts eksperimentāls IRI modelis, ņemot vērā ILC2 tuvumu nieru asinsvadiem. Lai gan pēc IRI bija acīmredzami redzamas traumas pazīmes, ILC2 samazināšanās, deficīts vai izsīkums nemainīja kopējo nieru histopatoloģiju, kā arī neizraisīja mirstību. Patiešām, IRI izraisīta remodelēšana un kolagēna nogulsnēšanās notika neatkarīgi no ILC2. Lai gan ir iespējams, ka agrāks laika punkts pēc traumas varēja identificēt histopatoloģijas un gēnu ekspresijas atšķirības, mūsu pētījuma laika punkts ļāva novērtēt arī kolagēna nogulsnēšanos, kas ir svarīga remodelācijas iezīme, ko regulē ILC2 (16, 32, 40). –44). Ir arī ticams, ka ILC2 samazināšanās laikā

AKI var kaitēt nieru struktūrai un funkcijai, ja to novērtē vēlākos laika punktos, jo, ja nav ILC2, iespējamas nepareizas labošanas reakcijas. Lai to risinātu, turpmākajos pētījumos būs jāizpēta ILC2 loma AKI progresēšanā līdz hroniskai nieru slimībai (45, 46).

Kopumā šis pētījums parāda, ka ILC2 samazināšanās, trūkums vai izsīkums nemaina eksperimentālās AKI smagumu pelēm. Lai gan iepriekš tika pierādīts, ka ILC2 aktivizēšana un ar to saistītā vietējās 2. tipa imunitātes pastiprināšanās samazina AKI kaitīgās sekas, līdzīgs ievainojums rodas, ja ILC2 ir samazināts, nav vai ir izsmelts, kas liecina par iespējamu atlaišanu un kompensāciju ar citām imūnsistēmas šūnām, piemēram, Treg. , AAM un TH2 šūnām. Šo koncepciju atbalsta pētījumi, izmantojot Rag1 / vai Rag2 / peles, kurām trūkst nobriedušu T un B šūnu, modeļosnieru traumas(13, 15, 47, 48). Vienā pētījumā anti-CD90.2 ievadīšana tika izmantota, lai samazinātu ILC2, tomēr šiem dzīvniekiem bija arī Treg un TH2 šūnu deficīts (15). Šajā modeļa sistēmā, neskatoties uz ILC2 izsīkumu ar anti-CD90.2, kompensācija no T šūnu nodalījuma nav iespējama. Mūsu dati liecina, ka ILC2 zudumam, kad T šūnu nodalījums paliek neskarts, ir minimāla ietekme uz IRI smagumu. Mūsu dati atbalsta koncepciju, ka ILC2 papildus citām imūnsistēmas šūnām, piemēram, Treg un AAM, veicina AKI. Patiešām, Treg izsīkums pasliktināja histopatoloģiju pēc IRI (15). Tāpat makrofāgu polarizācija pret AAM veicina traumu izzušanu (5, 12, 46, 49, 50). Ir nepieciešami turpmāki pētījumi, lai noskaidrotu ILC2 klātbūtnes iemeslu nierēs, tostarp augšupejošas urīnceļu infekcijas un citi nieru apvainojumi, kā arī progresējošashroniska slimība.

ĒTIKAS PAZIŅOJUMS

Visas ķirurģiskās procedūras apstiprināja Ņūkāslas Universitātes Dzīvnieku kopšanas un ētikas komiteja saskaņā ar Austrālijas kodeksu par dzīvnieku aprūpi un izmantošanu zinātniskiem mērķiem. Imunofluorescējošās attēlveidošanas procedūras tika apstiprinātas un veiktas saskaņā ar UCSF Dzīvnieku kopšanas un lietošanas komitejas un laboratorijas dzīvnieku resursu centra vadlīnijām.

AUTORU IEGULDĪJUMI

Prezentētais darbs tapis sadarbībā ar visiem autoriem. GC veica ķirurģisko modeli, plūsmas citometriju, histoloģisko novērtējumu, gēnu ekspresijas analīzi un analizēja datus. KC un ABM veica imunofluorescences eksperimentus. SL palīdzēja ar dzīvnieku uzraudzību un plūsmas citometriju. SJ un AD sniedza klīnisku ieskatu pētījuma plānošanā un ķirurģiskajā tehnikā. ANM izveidoja, piegādāja un konsultēja ILC{0}}deficītu un noplicinātu un Il13td tomātu peles. PF piegādāja un konsultēja par Il5venus reportieru līnijas lietošanu. PF un PH konsultēja eksperimentālo plānošanu. MS izstrādāja, uzraudzīja un veicināja visus pētījumu aspektus. Visi autori piedalījās datu interpretācijā, manuskriptu sagatavošanā un rediģēšanā intelektuālajam saturam.

FINANSĒJUMS

MS atbalsta Austrālijas Pētniecības padomes (ARC) Discovery Early Career Researcher Award (DECRA) stipendija un Nacionālās veselības un medicīnas pētījumu padomes (NHMRC), Hantera Medicīnas pētījumu institūta un Hantera Bērnu pētniecības fonda dotācijas.

ATSAUCES

1. Susantitaphong P, Cruz DN, Cerda J, Abulfaraj M, Alqahtani F, Koulouridis I u.c. AKI sastopamība pasaulē: metaanalīze.Clin J Am Soc Nefrols. (2013) 8:1482–93.

2. Hall AM, Unwin RJ, Parker N, Duchen MR. Daudzfotonu attēlveidošana atklāj atšķirības mitohondriju funkcijās starp nefronu segmentiem.J Am Soc Nephrol. (2009) 20:1293–302.

3. Devarajan P. Atjauninājums par išēmisku akūtu nieru bojājumu mehānismiem.J Am Soc Nefrols. (2006) 17:1503–20. 

4. Bonventre JV, Yang L. Išēmiskas akūtas nieru traumas šūnu patofizioloģija.J Clin Invest.(2011) 121:4210–21. DOI: 10.1172/JCI 45161

5. Lee S, Huen S, Nishio H, Nishio S, Lee HK, Choi BS u.c. Atšķirīgi makrofāgu fenotipi veicina nieru bojājumus un atjaunošanos.J Am Soc Nephrol. (2011) 22:317–26. 

6. Friedewald JJ, Rabb H. Iekaisuma šūnas išēmiskas akūtas nieru mazspējas gadījumā.Kidney Int.(2004) 66:486–91. 

7. Spits H, Artis D, Colonna M, Diefenbach A, Di Santo JP, Eberl G u.c. Iedzimtas limfoīdo šūnas - priekšlikums vienotai nomenklatūrai.NatRev Immunol.(2013) 13:145–9. 

8. Moro K, Yamada T, Tanabe M, Takeuchi T, Ikawa T, Kawamoto H u.c. Iedzimta T(H)2 citokīnu ražošana ar taukaudiem saistītās c-Kit( plus )Sca-1( plus ) limfoīdās šūnas.Daba. (2010) 463:540–4. 

9. Neill DR, Wong SH, Bellosi A, Flynn RJ, Daly M, Lengford TKA u.c. Nuocīti ir jauns iedzimts efektorleukocīts, kas mediē -2 tipa imunitāti.Daba. (2010) 464:1367–70. 

10. Loering S, Cameron GJM, Starkey MR, Hansbro PM. Plaušu attīstība un jaunās lomas 2. tipa imunitātei.J Pathols.(2018) 247:686–96. 

11. Monticelli LA, Sonnenberg GF, Abt MC, Alenghat T, Ziegler CG, Doering TA u.c. Iedzimtas limfoidās šūnas veicina plaušu audu homeostāzi pēc inficēšanās ar gripas vīrusu.Nat Immunol. (2011) 12:1045–54. 

12. Huang Q, Niu Z, Tan J, Yang J, Liu Y, Ma H u.c. IL-25 izraisa iedzimtas limfoidās šūnas un multipotentas 2. tipa cilmes šūnas, kas samazina nieru išēmisku/reperfūzijas bojājumu.J Am Soc Nephrol.(2015) 26:2199–211. 

13. Riedel JH, Becker M, Kopp K, Duster M, Brix SR, Meyer-Schwesinger C u.c. IL-33-mediētā 2. tipa iedzimto limfoīdo šūnu paplašināšanās pasargā no progresējošas glomerulosklerozes.J Am Soc Nephrol.(2017) 28:2068–80. 

14. Stremska ME, Jose S, Sabapathy V, Huang L, Bajwa A, Kinsey GR u.c. IL233, jauns IL-2 un IL-33 hibrīda citokīns, uzlabo nieru bojājumus.J Am Soc Nephrol. (2017) 28:2681–93. 

15. Cao Q, Wang Y, Niu Z, Wang C, Wang R, Zhang Z u.c. Audos dzīvojošo 2. tipa iedzimto limfoīdo šūnu potencēšana ar IL-33, lai novērstu nieru išēmijas un reperfūzijas bojājumus.J Am Soc Nephrol.(2018) 29:961–76. 

16. Sabapathy V, Cheru NT, Corey R, Mohammad S, Sharma R. Jauns hibrīds citokīns IL233 mediē reģenerāciju pēc doksorubicīna izraisītas nefrotoksiskas traumas.Sci Rep. (2019) 9:3215. 

17. Cameron GJM, Jiang SH, Loering S, Deshpande AV, Hansbro PM, Starkey MR. 2. grupas iedzimto limfoīdo šūnu topošais terapeitiskais potenciāls akūtu nieru bojājumu gadījumā.J Pathol. (2019) 2019:5242. 

18. Singh AP, Junemann A, Muthuraman A, Jaggi AS, Singh N, Grover K u.c. Akūtas nieru mazspējas dzīvnieku modeļi.Pharmacol Rep. (2012) 64:31–44. 

19. Ramesh G, Ranganathan P. Mouse modeļi un metodes cilvēka slimību, akūtu nieru bojājumu (AKI) pētīšanai.Metodes Mol Biol.(2014) 1194:421–36. 

20. Skrypnyk NI, Harris RC, de Caestecker MP. Akūtas nieru traumas un pēctraumas fibrozes išēmijas-reperfūzijas modelis pelēm.J VisExp.(2013) 9:78. 

21. Wei Q, Dong Z. Peles išēmiskas akūtas nieru traumas modelis: tehniskas piezīmes un triki.Am J Physiol Renal Physiol.(2012) 303:F1487–94? 

22. Starkey MR, McKenzie ANJ, Belz GT, Hansbro PM. 2. plaušu grupas iedzimtas limfoīdo šūnas: pārsteigumi un izaicinājumi.Gļotādas imunols.(2019) 12:299–311. 

23. Jang HR, Rabb H. Imūnās šūnas eksperimentālā akūtā nieru bojājumā.Nat Rev Nefrols.(2015) 11:88–101. DOI: 10.1038/nrneph.2014.180

24. Turner JE, Becker M, Mittrucker HW, Panzer U. Audu rezidentu limfocīti nierēs.J Am Soc Nephrol.(2018) 29:389–99. 

25. Jang HR, Rabb H. Iedzimta imūnreakcija išēmiska akūta nieru bojājuma gadījumā.Clin Immunol. (2009) 130:41–50. 

26. Langford DJ, Bailey AL, Chanda ML, Clarke SE, Drummond TE, Echols S u.c. Sāpju sejas izteiksmju kodēšana laboratorijas pelē.NatMetodes.(2010) 7:447–9.

27. Oliphant CJ, Hwang YY, Walker JA, Salimi M, Wong SH, Brewer JM u.c. MHCII mediēts dialogs starp 2. grupas iedzimtajām limfoīdajām šūnām un CD4 plus T šūnām pastiprina 2. tipa imunitāti un veicina parazītu helmintu izraidīšanu.Imunitāte. (2014) 41:283–95. 

28. Shih W, Hines WH, Neilson EG. Ciklosporīna A ietekme uz imūnsistēmas izraisīta intersticiāla nefrīta attīstību.Nieres Int. (1988) 33:1113–8.

29. Dahlgren MW, Jones SW, Cautivo KM, Dubinin A, Ortiz-Carpena JF, Farhat S u.c. Adventitālās stromas šūnas nosaka 2. grupas iedzimtās limfoīdo šūnu audu nišas.Imunitāte. (2019) 50:707–22. 

30. Molofsky AB, Nussbaum JC, Liang HE, Van Dyken SJ, Cheng LE, Mohapatra A u.c. Iedzimtas 2. tipa limfoīdās šūnas uztur viscerālo taukaudu eozinofilus un alternatīvi aktivizētos makrofāgus.J Exp Med.(2013) 210:535–49. 

31. Nussbaum JC, Van Dyken SJ, von Moltke J, Cheng LE, Mohapatra A, Molofsky AB u.c. 2. tipa iedzimtās limfoidās šūnas kontrolē eozinofilu homeostāzi.Daba.(2013) 502:245–8. 

32. Donovan C, Starkey MR, Kim RY, Rana BMJ, Barlow JL, Jones B u.c. T/B limfocītu un ILC2 loma eksperimentālā hroniskā obstruktīvā plaušu slimībā.J Leukoc Biol.(2019) 105:143–50. 

33. Mishra J, Ma Q, Prada A, Mitsnefes M, Zahedi K, Yang J u.c. Ar neitrofilu želatināzi saistītā lipokalīna identificēšana kā jauns agrīns urīna biomarķieris išēmiskam nieru bojājumam.J Am Soc Nephrol.(2003) 14:2534–43. 

34. Supavekin S, Zhang W, Kucherlapati R, Kaskel FJ, Moore LC, Devarajan P. Diferenciālā gēnu ekspresija pēc agrīnas nieru išēmijas/reperfūzijas.Kidney Int.(2003) 63:1714–24. 

35. Skorecki K, Chertow GM, Marsden PA, Taal MW, Alan SL, Luyckx V. Nieru anatomija: limfātiskā sistēma. Vietnē:Brenners unRektorsNieru e-grāmata. 10. izd. Amsterdama: Elsevier (2015). lpp. 80–1.

36. Banerji S, Ni J, Wang SX, Clasper S, Su J, Tammi R u.c. LYVE-1, jauns CD44 glikoproteīna homologs, ir limfai specifisks hialuronāna receptors.J Šūna Biol. (1999) 144:789–801. 

37. Lee HW, Qin YX, Kim YM, Park EY, Hwang JS, Huo GH u.c. Limfātiskā endotēlija specifiskā hialuronāna receptora LYVE-1 ekspresija jaunattīstības peles nierēs.ŠūnaAuduRes.(2011) 343:429–44.

38. Shelite TR, Liang Y, Wang H, Mendell NL, Trent BJ, Sun J u.c. IL- 33-atkarīgā endotēlija aktivācija veicina apoptozi un nieru bojājumus orientētām ar tsutsugamushi inficētām pelēm.PLoS Negl Trop Dis.(2016) 10:e0004467.

39. Ferhat M, Robins A, Žirauds S, Sena S, Goujons JM, Točards G u.c. Endogēnais IL-33 veicina nieru išēmijas un reperfūzijas bojājumus kā trauksmi.J Am Soc Nefrols. (2018) 29:1272–88. 

40. Mchedlidze T, Waldner M, Zopf S, Walker J, Rankin A, Schuchmann M u.c. Interleikīna-33-atkarīgās iedzimtās limfoidās šūnas veicina aknu fibrozi.Imunitāte. (2013) 39:357–71. 

41. Moretti S, Renga G, Oikonomou V, Galois C, Pariano M, Iannitti RG u.c. Tuklo šūnu-ILC2-Th9 ceļš veicina plaušu iekaisumu cistiskās fibrozes gadījumā.Nat Commun. (2017) 8:14017. 

42. Hams E, Armstrong ME, Barlow JL, Saunders SP, Schwartz C, Cooke G u.c. IL-25 un 2. tipa iedzimtās limfoidās šūnas izraisa plaušu fibrozi.ProcNatlAkad Sci ASV. (2014) 111:367–72.

43. Wohlfahrt T, Usherenko S, Englbrecht M, Dees C, Weber S, Beyer C u.c. 2. tipa iedzimto limfoīdo šūnu skaits ir palielināts pacientiem ar sistēmisku sklerozi un korelē ar fibrozes izplatību.Ann Rheum Dis.(2016) 75:623–6. 

44. Li D, Guabiraba R, Besnard AG, Komai-Koma M, Jabir MS, Zhang L u.c. IL-33 veicina ST2-atkarīgu plaušu fibrozi, inducējot pelēm alternatīvi aktivētus makrofāgus un iedzimtas limfoīdo šūnas.J Allergy Clin Immunol. (2014) 134:1422–32. 

45. Sharp CN, Doll MA, Megyesi J, Oropilla GB, Beverly LJ, Siskind LJ. Subklīnisks nieru bojājums, ko izraisa atkārtota cisplatīna ievadīšana, izraisa progresējošu hronisku nieru slimību.Am J Physiol Renal Physiol.(2018) 315:F161–72? 

46. ​​Liu J, Kumar S, Dolzhenko E, Alvarado GF, Guo J, Lu C u.c. Pārejas no akūta uz hronisku nieru bojājumu pēc išēmijas / reperfūzijas molekulārais raksturojums.JCI ieskats.(2017) 2:94716. 

47. Li L, Huang L, Sung SJ, Lobo PI, Brown MG, Gregg RK u.c. NKT šūnu aktivācija mediē neitrofilu IFN-gamma veidošanos un nieru išēmijas-reperfūzijas bojājumus.J Immunol.(2007) 178:5899–911.

48. Chan AJ, Alikhan MA, Odobasic D, Gan PY, Khouri MB, Steinmetz OM u.c. Iedzimtie IL-17A ražojošie leikocīti veicina akūtu nieru bojājumu, aktivizējot iekaisuma un Toll līdzīgu receptoru.Esmu J Pathol.(2014) 184:1411–8? 

49. Cao Q, Wang C, Zheng D, Wang Y, Lee VWS, Wang YM u.c. IL-25 inducē M2 makrofāgus un samazina nieru bojājumus proteīnuriskas nieru slimības gadījumā.J Esmu Soc Nefrols. (2011) 22:1229–39.

50. Chung S, Overstreet JM, Li Y, Wang Y, Niu A, Wang S u.c. TGF-beta veicina fibrozi pēc smaga akūta nieru bojājuma, pastiprinot nieru makrofāgu infiltrāciju.JCI ieskats.(2018) 3:123563.