Saimnieka imūnā atbilde uz Clostridioides Difficile virsmas S-slāņa proteīniem (SLP)

Abstract:

Clostridioides difficile, nozokomiāls patogēns, ir jauns zarnu patobionts, kas izraisa ar antibiotikām saistītu caureju. C. difficile infekcija ietver zarnu kolonizāciju un zarnu epitēlija barjeras pārtraukšanu, izraisot iekaisuma/imūnās atbildes reakcijas. Divu galveno eksotoksīnu, TcdA un TcdB, ekspresija ir galvenais C. difficile patogenitātes cēlonis. Baktēriju bagātīgu šūnu sienas proteīnu vai virsmas S-slāņa proteīnu (SLP), piemēram, SlpA, pievienošana saimnieka epitēlija šūnām ir būtiska virulencei. Ir pierādīts, ka šie virsmas komponenti ir ne tikai toksīni, bet arī ļoti imunogēni. Jaunākie pētījumi liecina, ka C. difficile SLP ir svarīga loma baktēriju adhēzijā pie zarnu epitēlija šūnām, ciešu savienojumu pārtraukšanā un saimniekšūnu imūnās atbildes modulēšanā. Šie proteīni varētu kalpot kā jauni mērķi vakcīnām un jauniem terapeitiskiem līdzekļiem. Šajā pārskatā ir apkopota mūsu pašreizējā izpratne par SLP imunoloģisko lomu saimnieka imunitātes inducēšanā un to izmantošanu vakcīnu un jaunu terapeitisko līdzekļu izstrādē, lai apkarotu C. difficile infekciju.

cistanche tubulosa-uzlabo imūnsistēmu

Noklikšķiniet šeit, lai skatītu Cistanche Enhance Immunity produktus

【Jautājiet vairāk】 E-pasts:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Atslēgvārdi:

ar antibiotikām saistīta caureja; šūnu sienas proteīni; terapeitiskie līdzekļi; S-slāņa proteīni; vakcīna

1. Ievads

Clostridioides difficile, toksīnus producējoša anaerobā baktērija, ir svarīgs oportūnistisks un nozokomiāls patobionts zarnās, kas izraisa slimības simptomus veselīga mikrobioma traucējumu rezultātā daudzu faktoru, tostarp antibiotiku lietošanas, ģenētisko, ekspozīcijas, mikrobu, un citi saimniekfaktori [1]. C. difficile selekcija un proliferācija izraisa dzīvībai bīstamu pseidomembranozā kolīta stāvokli [2,3]. Saskaņā ar jaunākajām Slimību kontroles un profilakses centra 2019. gada ziņojuma aplēsēm, C. difficile 2017. gadā izraisīja 223 900 infekcijas un 12 800 nāves gadījumus ar zaudējumiem 1 miljarda ASV dolāru apmērā tikai ASV [4]. Pirmās C. difficile infekcijas (CDI) epizodes ārstēšana tiek panākta ar antibiotikām. Tomēr slimībai ir augsts atkārtošanās līmenis — 20–30% pēc pirmās sākotnējās CDI ārstēšanas un vairāk nekā 50% pēc pirmā recidīva [5]. Tāpēc ir nepieciešama steidzama terapeitiska iejaukšanās, lai cīnītos pret CDI visā pasaulē. Viens no galvenajiem C. difficile patoģenēzes molekulārajiem faktoriem ir divu galveno toksīnu, TcdA un TcdB, ekspresija un sekrēcija, ko kodē gēni, kas atrodas 19.{18}}kb patogenitātes lokusā (PaLoc) C. difficile. genoms [6]. Toksīnu ražošanas regulēšanu un dažādus toksīnu ražošanā iesaistītos transkripcijas faktorus ir plaši pārskatījuši Chandra et al. citur [6].

CDI patoģenēze sākas ar C. difficile sporu norīšanu/dīgšanu veģetatīvās šūnās, kuras dīgst zarnās, kur tās proliferējas un kolonizē zarnu gļotādu [1,6]. Zarnu gļotādas barjera (IMB) ir pirmā iedzimtās aizsardzības līnija pret patobiontiem. Saimnieks IMB sastāv no dažāda veida epitēlija šūnām, kas ir cieši savienotas viena ar otru ar ciešiem savienojumiem un pārklātas ar biezu aizsargājošu gļotu slāni, ko izdala kausa šūnas [1]. IMB pārrāvums ļauj C. difficile pievienoties epitēlija šūnu virsmai, kur tās virulences faktoru izstrāde izraisa bojājumus un C difficile patogenitātes izpausmes [1,6]. Baktēriju šūnu siena daudzām grampozitīvām un negatīvām sugām, tostarp C. difficile, ir saistīta ar bagātīgu proteīnu molekulu slāni, kas ir pakļauts virsmai, ko sauc par virsmas slāņa proteīniem (S-slāņa proteīniem vai SLP), ko galvenokārt veido bagātīgs daudzums. proteīns SlpA, kas sastāv no zemas un lielas molekulmasas domēna, kas ir sakārtoti kā parakristāliski regulārs divdimensiju masīvs, kā redzams ar elektronu mikroskopiju [7]. Citi SLP slāņa šūnu sienas proteīna (Cwp) komponenti ir mazāk bagātīgi un slikti raksturoti, bet tiem arī ir svarīga loma CD patogenitātē. Pēdējos gados SLP pētījumi ir ieguvuši pastiprinātu uzmanību, jo ir pierādīts, ka šiem proteīniem ir galvenā loma virsmas adhēzijā, Toll līdzīgu receptoru aktivizēšanā, citokīnu ražošanas indukcijā un iekaisuma aktivācijā kā daļa no saimnieka imūnās atbildes reakcijas. loma baktērijas augšanā un izdzīvošanā [7–9].

Šajā pārskatā mēs apspriežam saimniekorganisma imūnreakciju pret galvenajiem SlpA komponentiem un citiem mazāk izplatītiem Cwps, ņemot vērā jaunākās zināšanas par C. difficile SLP, un izceļam to potenciālu izmantot kā jaunu vakcīnu un terapeitisko mērķi, kas ir ļoti nozīmīgs CDI patoģenēzē.

cistanche tubulosa-uzlabo imūnsistēmu

2. Uzņēmēja iedzimtas imūnās atbildes pret CDI

Ir pierādīts, ka netoksigēnie C. difficile (NTCD) celmi pēc kolonizācijas dzīvnieku modeļos nodrošina aizsardzību pret patogēnajiem C. difficile celmiem. Astoņdesmito gadu sākumā Vilsons un Šīgrēns ziņoja, ka kāmji, kurus kolonizēja NTCD celms pēc sterilizācijas ar antibiotiku cefoksitīnu, tika aizsargāti, saskaroties ar toksigēno C. difficile (TCD) celmu [10]. Tomēr apstrāde ar citām sugām, piemēram, C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes un ar karstumu nogalinātu netoksigēnu C. difficile NTCD celmu, nespēja aizsargāt pret CDI. Turklāt aizsardzība tika zaudēta, kad kolonizējošo NTCD pirms izaicinājuma sterilizēja, izmantojot ārstēšanu ar vankomicīnu [11]. Šo atklājumu iedrošināti, NTCD-M1 celma sporas ir izmantotas ierobežotam skaitam klīnisku pacientu, kuri cieš no recidivējoša CDI (rCDI), ar ievērojamiem panākumiem (apmēram 50%) [12]. Pašlaik CDI ārstēšanas iespējas ir ierobežotas un lielā mērā ir atkarīgas no antibiotiku, piemēram, vankomicīna, fidaksomicīna un metronidazola, lietošanas [13,14]. Pārmērīga antibiotiku lietošana izraisa veselīga mikrobioma disbiozi un vēl vairāk palīdz tādu patobiontu atlasē kā C. difficile, kas vēlāk var atkārtoties [1,15]. Lai efektīvi apietu šīs problēmas, nekavējoties jāpievērš uzmanība alternatīvām ārstēšanas metodēm. Dažas no šīm ārstēšanas iespējām ietver C. difficile toksīnu neitralizāciju, izmantojot monoklonālas antivielas pret TcdB, piemēram, bezlotoksumaba infūziju, kas novērš toksīnu izraisītus zarnu epitēlija bojājumus [16]. Vēl viena aizraujoša metode ir veselīga mikrobioma atjaunošana, izmantojot fekāliju mikrobiotas transplantāciju (FMT) no veselīga donora tuvāko ģimenes locekļu vidū. FMT ir uzrādījis daudzsološus rezultātus pret atkārtotu CDI ar panākumu līmeni līdz 90% [17,18]. Diemžēl šajos pētījumos netika apskatīta saimnieka imūnās atbildes loma šo pacientu aizsardzībā. Tāpēc var apgalvot, ka dzīvs NTCD izdala dažus antigēnus / šūnu sienas komponentus, kas izraisa spēcīgu imūnreakciju pret toksikogēno TCD. Tāpat FMT aizsardzība ir slikti definēta. Tāpēc izpratne par to, kā FMT ievadīšana izraisa saimnieka reakcijas, varētu palīdzēt identificēt galvenos antigēnus, kas savukārt var palīdzēt labāk izprast imūnreakciju un jaunu vakcīnu izstrādi pret CDI.

Zarnās saimnieka iedzimtā imūnsistēma ir pirmā aizsardzības līnija pret iebrukušo patogēnu, kam ir izšķiroša nozīme spēcīgas saimniekorganisma adaptīvās imūnās atbildes veidošanā un veidošanā [1]. Iedzimtā reakcija galvenokārt sastāv no trim daļām: (i) zarnu epitēlija un gļotādas slāņa (fiziskā barjera), (ii) pretmikrobu peptīdiem, kas ir epitēlija šūnu, Paneth šūnu un dažu zarnu mikrobiotas locekļu ekskrēcijas produkts (ķīmiska). barjera) un (iii) šūnu atbildes reakcijas, piesaistot iedzimtas imūnās šūnas, piemēram, neitrofilus, eozinofilus, makrofāgus, iedzimtas limfoīdo šūnas (ILC) un dendrītiskās šūnas (DC), kas ir organizētas ar vairākiem iedzimtiem signalizācijas ceļiem, lai cīnītos pret iebrūkošo patogēnu [ 1]. Uzņēmējšūnām uz virsmas ir modeļu atpazīšanas receptori (PRR), piemēram, TLR, kas atpazīst noteiktus konservētus baktēriju parakstus uz mikrobiem, ko sauc par patogēniem saistītiem molekulārajiem modeļiem (PAMP). Šie PRR ir pazīstami arī kā nodevas līdzīgi receptori (TLR). Kad TLR atpazīst šos bīstamības signālus (PAMP), saimniekšūna izraisa imūnreakciju. Šajā sakarā ir pierādīts, ka Toll-like Receptor 4 (TLR4) atpazīst C. difficile bīstamības signālus, darbību, kas piedalās saimnieka iekaisuma reakcijas ierosināšanā. Šajā kontekstā ir pierādīts, ka C. difficile SLP mijiedarbojas ar saimnieka TLR-4, savukārt C. difficile flagella mijiedarbojas caur TLR5 [19,20].

cistanche priekšrocības vīriešiem - stiprina imūnsistēmu

3. S-slāņa proteīni (SLP) C. difficile

Pēdējā desmitgadē C. difficile virsmas slāņa (S-slāņa) proteīniem ir pievērsta liela uzmanība. SLP pirmo reizi identificēja Kawata et al. 1984. gadā un veido aptuveni 15% no kopējās šūnu masas [21,22]. SLP ir sastopamas daudzās dažādās prokariotu sugās. Lielākā daļa SLP ir izvietoti šūnu ārējā virsmā kā viens proteīns divdimensiju parakristāliskā masīvā [7]. C. difficile S slānis galvenokārt sastāv no heterodimēriem SlpA proteīniem. SlpA ir heterodimērs, kas sastāv no augstas molekulmasas (HMW) proteīna un zemas molekulmasas (LMW) proteīna, ko kodē viens slpA gēns; LMW SLP veido atklāto augšējo slāni, bet HMW SLP veido apakšējo slāni. LMW SLP ir unikāla C. difficile. C. difficile 630 celmā slpA lokuss ir 36,6 kb reģions, kurā ir 11 slpA paralogi. Turklāt ir vēl 17 paralogi, kas ir izkaisīti visā genomā [23,24]. Šos paralogos gēnus tagad sauc par klostridiju šūnu sienas proteīniem (CwpX), kur X apzīmē identificēto paraloga numuru (X=1–29) un ir aprakstīti 1. tabulā. Tomēr četri iepriekš raksturoti Cwps, kas pazīstami kā SlpA, Cwp66, Cwp84 un CwpV tika nosaukti pirms šīs jaunās nosaukumu piešķiršanas konvencijas pieņemšanas [23]. Visi Cwps ir tipiski proteīni, kas satur N-termināla signāla peptīdu un trīs iespējamos šūnu sienu saistošos domēnus ar ievērojamu līdzību HMW SLP [25, 26]. Dažādi C. difficile celmi ir parādījuši slpA lokusa atšķirības, un ir dokumentēti aptuveni 12 dažādi S-slāņa kasešu veidi. Pārējie 28 Cwps darbojas kā palīgkomponenti, kas ir noenkuroti polimerizētajā parakristāliskajā slānī, kas veido ~ 5–20% no S-slāņa [7].

1. tabula. Clostridium difficile 630 genomos atrasto 29 kausa gēnu iespējamās funkcijas.

1. tabula. Turp.

4. Šūnu sieniņu proteīnu ekspresija un celmu variācijas

Ir ziņots, ka C. difficile celmā 630 ir ekspresēti aptuveni deviņi Cwps kodējoši gēni [25]. Kamēr cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 un cwp25 gēni tiek ekspresēti uz šūnas virsmas normālos augšanas apstākļos [44], cwp66 un cwp5 gēni tika ekspresēti, bet netika atrasti šūnu virsmas ekstraktos. Atsevišķā pētījumā Biazzo et al. analizēti kausi, kas ir izkaisīti visā C. difficile genomā. Viņi novēroja, ka cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 un cwp25 gēni ir izteikti un tiem ir labi konservētas sekvences, turpretim cwp17, cwp26, cwp27, cwp29 un cwp29 gēnu ekspresijas līmeņos bija ievērojamas variācijas. ribotipiem un bija mazāk konservēti [45]. Daudzi slpA lokusa gēni uzrāda ievērojamas atšķirības starp celmiem, īpaši virsmas pakļautajos reģionos. Piemēram, ir pierādīts, ka slpA, cwp66, secA2 un cwp2 ir lielas variācijas slpA lokusā (kas veido 10-kb kaseti); līdz šim ir atrasti 12 atšķirīgi šīs kasetes varianti dažādu genotipu homologas rekombinācijas rezultātā [46]. Saskaņā ar Karjalainen et al., cwp66 uzrāda tikai 33% identitāti starp celmiem [26]. Cwp2 variants ir aizstāts ar 23,8 kb prognozēto S-slāņa glikozilācijas gēnu kopu slpA lokusā [46]. SlpA ir visizplatītākais SLP, kas atrodams C. difficile šūnu virsmas ekstraktos, un tā ir galvenā C. difficile SLP sastāvdaļa. Nobriedis proteīns tiek atšķelts pēc sekrēcijas HMW un LMW olbaltumvielu formās, iedarbojoties proteāzei Cwp84, veidojot heterodimēra kompleksa H/L kompleksu, kas polimerizējas, veidojot S slāni [47] (1. attēls). Cwp84 gēna inaktivācija C. difficile 630∆erm izraisīja S-slāni, kas sastāv tikai no nenobriedušas vienas ķēdes SlpA ar mainītu koloniju morfoloģiju, kas liecina par Cwp84 nozīmīgu lomu nobrieduša S-slāņa veidošanā [32]. Gēna secA2 klātbūtne slpA lokusā ir svarīga SlpA un citu Cwps transportēšanai pa citoplazmas membrānu [48].

1. attēls. C. difficile SLP mediē imūno šūnu adhēziju un aktivāciju. Topošo SlpA peptīdu proteāze Cwp84 sadala LMW un HMW apakšvienībā, kas veido šūnas sienas SLP slāņa nobriedušu SlpA kompleksu [31–33]. SLP mediē adhēziju, izmantojot TLR4, izjauc zarnu epitēlija šūnu ciešo savienojumu un vēl vairāk aktivizē dendrītiskās šūnas/makrofāgus, kas savukārt ražo dažādus citokīnus un kemokīnus, kas izraisa Th1/Th2 indukciju un humorālo reakciju [9,27]. Interleikīns (IL), dendrītiskās šūnas (DC), zemas molekulmasas (LMW), augstas molekulmasas (HMW), nodevām līdzīgs receptors 4 (TLR4).

5. S-slāņa proteīnu funkcijas

SLP ir iesaistītas dažādās funkcijās C. difficile bioloģijā (sk. 1. tabulu), piemēram, šūnu integritāte, transportēšana, poru un enkuru veidošanās, degradācija, saimniekšūnu adhēzija/invāzija, imūnsistēmas izvairīšanās un aizsardzība pret konkurējošiem mikroorganismiem [22]. . Pečineet al. konstatēja antivielas pret Cwp66 antigēna N-gala un C-termināla domēniem ar Clostridium difficile saistītās slimības (CDAD) pacientu serumos [49]. Citā pētījumā Wright et al. atdalīja Cwps, izmantojot 2D-PAGE, un identificēja vairākus Cwps (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19), kas reaģēja ar pacientu serumiem, kas bija inficēti ar C. difficile ribotipa 017 celmu, kas liecina par spēcīgas imūnās atbildes indukciju pret SLP [50]. Nesen Kirks et al. identificēja divus C. difficile celmus, kuriem nebija S-slāņa un kuri nebija jutīgi pret bakteriocīnu, kas veido poras un depolarizē konkurējošās baktēriju šūnas. Tomēr šiem C. difficile celmiem bija ievērojami paaugstināta jutība pret lizocīmu un pretmikrobu peptīdu LL-37 un kāmja infekcijas modelī CDI slimības simptomi neizraisīja [51]. Nesenā pētījumā tika pētīta no trim toksikogēniem celmiem (RT126, RT001, RT084) izolēta SlpA ietekme uz saspringto savienojumu (TJ) proteīnu ekspresiju un pro-iekaisuma citokīnu indukciju cilvēka resnās zarnas karcinomas šūnu līnijā HT-29 . Ārstēšana ar SlpA ievērojami samazināja claudīnu saimes un JAM-A saspringto savienojumu proteīnu ekspresijas līmeni (1. attēls) [9]. Turklāt SlpA proteīns palielināja TLR-4 ekspresijas līmeni un inducēja TNF-, IL-1 un IL-8 sekrēciju. Šie rezultāti parāda, ka SlpA proteīna mediētā patoģenēze un inducētās iekaisuma reakcijas zarnās [9]. Tāpēc ir pamatoti apgalvot, ka SLP ir būtiskas C. difficile patogenitātei un imūnreakcijām.

cistanche tubulosa-uzlabo imūnsistēmu

6. Imūnās atbildes reakcija uz SLP

Nesenie pētījumi ir norādījuši uz SlpA svarīgo lomu ne tikai baktēriju izdzīvošanā un augšanā, bet arī saimnieka imūnās atbildes veidošanā. Uz imūnproteomu balstītas pieejas ir pierādījušas anti-SLP antivielu klātbūtni sešu ar C. difficile ribotipu 017 inficētu pacientu serumā, kas liecina, ka SLP proteīni ir imūndominanti un tiek ekspresēti infekcijas laikā [50]. Pētījums, ko vadīja Bruxelles et al. uzrādīja paaugstinātu anti-SlpA antivielu līmeni CDI pacientiem, salīdzinot ar veseliem pacientiem [52]. Citā pētījumā Negm et al. konstatēja IgG antivielas serumos no kopumā 327 indivīdiem ar CDI pret SLP ekstraktiem no dažādiem C. difficile celmiem [53]. Papildus SlpA otrā visizplatītākā proteīna Cwp66 eksponētais C-gala domēns ir ļoti mainīgs, savukārt N-gala domēns ir labi konservēts. Ir pierādīts, ka Cwp66 un Cwp84 mainīgie C-gala domēni ir imunogēni cilvēkiem [49, 54]. Turklāt CDI pacientiem vidējais kopējais anti-Cwp66 un anti-Cwp84 līmenis bija zemāks nekā veselās kontroles grupā, kas liecina par antivielu aizsargājošo raksturu. Tāpēc SLP, īpaši SlpA, un citiem komponentiem ir svarīga loma imūnās aizsardzībā, un tie ir potenciāli mērķi imūnterapijas un vakcīnu izstrādei, kā aprakstīts turpmākajās sadaļās.

7. SLP mediē C. difficile adhēziju

C. difficile ierosina infekciju, pieķeroties zarnu epitēlija šūnām, izraisot kolonizāciju. Šajā sakarā baktēriju SLP, piemēram, SlpA un Cwp66, ir izšķiroša loma adhēzijā. Ir ziņots, ka SLP, īpaši SlpA, variācijas izolētos C. difficile celmos uzrādīja izmaiņas adhēzijā [55]. Ir pierādīts, ka SLP saistās ar dažādām šūnu līnijām, piemēram, cilvēka Hep-2 un Vero šūnu kuņģa-zarnu trakta šūnu līnijām un daudzām ekstracelulārās matricas olbaltumvielām. Turklāt ārstēšana ar anti-HMW-SLP antivielām kavēja C. difficile adhēziju. Turklāt saimniekšūnu iepriekšēja apstrāde ar attīrītām SlpA apakšvienībām vai anti-SlpA antivielām arī novērsa C. difficile adhēziju [55]. Lielākais SlpA proteīnu saimes homologs ir CwpV proteīns, kas tiek izteikts fāzes mainīgā veidā. Atsevišķā pētījumā tika parādīts, ka CwpV proteīna C-gala atkārtotais domēns mediē C. difficile agregāciju. Turklāt šis domēns atšķiras starp celmiem, un ir identificēti pieci antigēniski atšķirīgi atkārtošanās veidi [40].

Ir pierādīts, ka citam imunogēnam proteīnam ar nosaukumu Cwp66 ir adhēzijas īpašības. Attīrīts Cwp66 un antivielas pret N-gala un C-gala domēniem inhibēja C. difficile pieķeršanos kultivētām Vero šūnām, kas liecina par Cwp66 adhēzijas īpašībām [29].

8. Iekaisuma reakciju izraisīšana

Bianco et al. parādīja SLP lomu iekaisuma procesā. Šajā pētījumā SLP no hipervirulentiem un epidēmijas (H/E) vai ne-H/E C. difficile celmiem tika attīrīti un pētīti cilvēka monocītos un no monocītiem iegūtās dendritiskajās šūnās (MDDC) imūnmodulējošo citokīnu [interleikīna] indukcijas izteiksmē. (IL)-1, IL-6 un IL- 10] [56]. Pētījums parādīja, ka SLP ne tikai izraisīja MDDC nobriešanu ar pastiprinātu antigēnu prezentācijas aktivitāti, bet arī izraisīja augsta līmeņa IL-10 sekrēciju. Tomēr netika konstatētas būtiskas atšķirības monocītu un MDDC aktivācijā ar SLP preparātiem no H/E un ne-H/E celmiem, kas liecina, ka SLP neveicina paaugstinātu slimības smagumu [56]. Citā pētījumā Ausiello et al. ekstrahēja SLP no klīniskā izolāta C253 un parādīja, ka SLP inducēja paaugstināta līmeņa IL-1 un IL-6 pro-iekaisuma citokīnu sekrēciju miera stāvoklī esošajos monocītos un izraisīja cilvēka MDDC nobriešanu un pastiprinātu T proliferāciju. šūnas [57]. Turklāt šie ārstētie MDDC izdalīja arī paaugstinātu IL-10 un IL-12p70 daudzumu un izraisīja jauktu Th1/Th2 imūnreakciju. TLR-4 spēlēja svarīgu lomu DC aktivizēšanā ar SLP starpniecību. Tika pierādīts, ka SLP nevarēja aktivizēt DC, kas izolētas no TLR4-mutantu C3H/HeJ pelēm, un nespēja izraisīt sekojošu Th imūnreakciju, kas liecina, ka SLP aktivizē iedzimto un adaptīvo imunitāti, ko mediē TLR4 receptors [19]. Citā pētījumā makrofāgos tika pierādīts, ka SLP no C. difficile izraisīja klīrensa reakciju pro-iekaisuma citokīnu un ķemokīnu sekrēcijas izteiksmē ar palielinātu makrofāgu migrāciju un fagocitotisko aktivitāti [58]. Ārstēšana ar p38 inhibitoru mainīja šīs reakcijas, kas liecina par signalizācijas molekulu lomu SLP mediētās reakcijās [58]. Pavisam nesen veikts pētījums ziņoja par C. difficile SLP izraisītu iekaisuma aktivāciju atkarībā no devas. Turklāt tika pierādīts, ka ar holesterīnu bagātie mikrodomēni (lipīdu plosti) uz šūnu membrānām palīdzēja SLP saistīties ar šūnu membrānu. Tas tika balstīts uz fluorescences mikroskopiju, kurā tika parādīts, ka metil- -ciklodekstrīna (M CD) apstrāde, kas samazina holesterīna līmeni membrānā, samazina SLP saistīšanos, kas liecina, ka SLP piesaista lipīdu plostus, kas ir būtiski C. difficile kolonizācijai un iekaisuma procesa aktivizēšanai [59] ]. Šie pētījumi apgalvo, ka C. difficile SLP var aktivizēt iedzimtās un adaptīvās imūnās atbildes, kuras daļēji mediē TLR4, kas liecina par SLP nozīmīgu lomu imūnās atbildes ierosināšanā. Tāpēc šie rezultāti liecina arī par SLP potenciālu kā vakcīnas kandidātiem pret CDI.

9. Antivielu atbildes reakcija pret CDI

Vairāki imunoloģiskie pētījumi liecina, ka C. difficile infekcija un iznākums ir atkarīgi no saimnieka imūnās atbildes intensitātes, kas ir galvenais CDI patogenitātes faktors. Tādējādi nespēja izstrādāt spēcīgu antivielu reakciju var būt prognoze par slimības smagumu un atkārtošanos [60]. Šajā sakarā antivielu līmenis pret galvenajiem toksīniem ir korelēts ar slimības atkārtošanos un smagumu [61,62]. Antivielas pret C. difficile virsmas komponentiem ir ziņots arī iepriekšējos pētījumos CDI pacientu serumā [63]. Drudy et al. novērtēja humorālās imūnās atbildes pret C. difficile SLP ekstraktiem 146 pacientu grupā, kurā bija 55 pacienti ar C. difficile saistītu caureju (CDAD), 34 pacienti ar asimptomātiskiem nesējiem un 57 kontroles subjekti [64]. Pētījumā tika izolēta augstas un zemas MW frakciju ekstrakcija no SLP, kas galvenokārt saturēja bagātīgu proteīnu SlpA. Viņi izmērīja seruma antivielas, izmantojot ar enzīmu saistītu imūnsorbcijas testu (ELISA) šajā grupā, un neatrada būtiskas atšķirības seruma IgM, IgA vai IgG antivielu līmeņos. Interesanti, ka pacientiem ar atkārtotām CDAD epizodēm bija ievērojami zemāks IgM-anti-SLP līmenis nekā pacientiem ar atsevišķām epizodēm. Pētījumā secināts, ka ir jāveic turpmāki pētījumi, lai noteiktu specifiskas anti-SLP antivielu atbildes reakcijas un aizsardzības pētījumi, izmantojot C. difficile SLP [64].

Pasīvā un aktīvā imunizācija, izmantojot izolētus HMW un LMW SLP ekstraktus, ir uzrādījusi iepriecinošus rezultātus, uzlabojot izdzīvošanas rādītājus nāvējošu kāmju izaicinājumu modeļos. O'Braiens u.c. demonstrēja anti-SLP antivielu aizsargājošo reakciju uz C. difficile infekciju kāmjiem, kur dzīvildze bija ievērojami ilgāka ar anti-SLP ārstētajām grupām, salīdzinot ar kontroles grupām [65]. Tika pierādīts, ka antiseruma aizsargājošais efekts izpaužas, pastiprinot C. difficile fagocitozi [65]. Eidhin et al., izmantojot aktīvo imunizāciju, Zelta Sīrijas kāmju un BALB/c peļu modeļos pārbaudīja neapstrādātu SLP ekstraktu, kas satur ekvimolāru daudzumu SlpA komponenta LMW un HMW peptīdus kā vakcīnu ar dažādiem sistēmiskiem un gļotādas adjuvantiem. Pētījumā tika ziņots par mērenu vai vāju antivielu stimulāciju dažādos režīmos, un peļu modeļi uzrādīja spēcīgāku antivielu reakciju uz SLP, salīdzinot ar kāmjiem [66]. Citā pētījumā Brunet al. pārbaudīja divu peptīdu adjuvanta aktivitāti in vivo, kas sastāv no toksīna A (TxA (C314)) receptoru saistošā domēna un SLP-36 kDa fragmenta no C. difficile celma C253 pret fibronektīnu saistošo proteīnu A (FnbpA). ), aizsargājošs vakcīnas antigēns pret Staphylococcus aureus [67]. Viņi novērtēja reakciju, izmantojot intranazālos un subkutānos ceļus, un konstatēja, ka abi fragmenti uzlaboja cirkulējošā anti-FnbpA IgG un IgA veidošanos. Viņi secināja, ka šie fragmenti, ja tos izmanto kā adjuvantus, atšķirīgi ietekmē un polarizē imūnsistēmu [67]. Citā pētījumā Shirvan et al. ģenerēja un ekspresēja specifiskas rekombinantās antivielas pret SLP, piemēram, Cwp66 un SlpA no C. difficile 630 proteīniem, izmantojot fāgu displeju, un parādīja, ka šīs rekombinantās antivielas reaģēja uz SLP un to komponentiem celmam raksturīgā veidā ar augstu specifiskumu [68].

Imūnās atbildes reakcija un aizsardzība kāmja modelī, izmantojot Cwp84 proteāzi kā antigēnu, ir novērtēta ar vairākiem imunizācijas ceļiem [69]. Pētījumā tika atklāti atšķirīgi antivielu titri, pamatojoties uz imunizācijas ceļiem. Vislabākā aizsardzība tika novērota, izmantojot rektālo imunizācijas ceļu. Turklāt imunizētās kāmju grupas izraisīja par 26% vājāku un lēnāku C. difficile zarnu kolonizāciju pēc C. difficile inficēšanās ar ievērojami augstāku izdzīvošanas līmeni (par 33% lielāku) nekā neimunizētajām grupām [69].

cistanche augu paaugstinošā imūnsistēma

10. Uz SLP balstīta anti-C. difficile terapija

Īpašas uz antivielām balstītas terapijas C. difficile neitralizācijai var būt efektīva stratēģija. Kandalaft et al. izmantoja viena domēna antivielas, lai mērķētu uz SLP [70]. Grupa sagatavoja SLP-specifisku viena domēna antivielu (VHH) paneli no C. difficile hipervirulentā celma QCD-32g58 (ribotips 027). Viņu rezultāti parādīja, ka vairāki VHH ir saistīti ar QCD-32g58 epitopiem, kas atrodas SLP LMW apakšvienībā ar augstu afinitāti. Turklāt viņi ziņoja, ka šiem VHH bija saistīšanās specifika ar 001 un 027 ribotipiem, un šo VHH antivielu apakškopa bija plaši krusteniski reaģējoša pret 012, 017, 023 un 078 ribotipiem. Tika pierādīts, ka šie VHH inhibē C. difficile QCD-32g58 kustīgumu in vitro [70].

Vēl viena precīza antibakteriāla līdzekļa Av-CD291.2 izstrāde, ko veica Kirk et al. ir ziņots, ka īpaši nogalina C. difficile un novērš kolonizāciju pelēm [51]. Ir pierādīts, ka Av-CD291.2 iznīcina dažādus C. difficile izolātus, pamatojoties uz SLP sekvenču klātbūtni C. difficile celmos. Autori apgalvo, ka ir identificējuši SLP nulles mutantus, kas satur punktveida mutāciju slpA gēnā, kas ir rezistenti pret Av-CD291.2 aģentiem. Šiem mutantiem bija arī sporulācijas defekti, taču tie spēja kolonizēt zarnu traktu, neskatoties uz virulences pavājināšanos kāmja modelī [51]. Turklāt viņi izveidoja Avidocin-CD paneli, kas nogalina dažādus C. difficile celmus no SLP secības atkarīgā veidā, kas liecina par šo uz SLP balstīto antibakteriālo līdzekļu svarīgu lomu CDI novēršanā [51].

11. Nobeiguma piezīmes un kritiski neatbildētie jautājumi

Saimnieks attīsta spēcīgu specifisku imūnreakciju pret C. difficile toksīniem un virsmas komponentiem. Ir pierādīts, ka SLP ir nozīme šūnu adhēzijā, dažādu citokīnu indukcijā, aktivizējot TLR4, un gan iedzimtās, gan humorālās imūnās atbildes aktivizēšanā. Tomēr ir nepieciešami pētījumi par T-šūnu reakciju aktivizēšanu ar SLP, lai turpinātu izdalīt CD4 un CD8 šūnu lomu. Pamatojoties uz humorālās reakcijas aktivizēšanu, šīs neitralizējošās antivielas pret toksīniem un virsmas komponentiem var novērst CDI klīniskās pazīmes. Pētījumi, kuros izmantota aktīva vai pasīva imunizācija pret SLP, ir parādījuši daudzsološus rezultātus, kas liecina, ka stratēģiju var tālāk attīstīt jaunās terapijas līdzekļos pret CDI patogenitāti. Liela uzmanība ir pievērsta SlpA kā vakcīnas kandidātam; tomēr, ņemot vērā lielo SlpA secību mainīgumu starp celmiem, vakcīna var nebūt efektīva pret visiem ribotipiem. Tāpēc, lai apietu šo problēmu, var būt nepieciešamas uz epitopiem balstītas vakcīnas. Šajā sakarā viena domēna antivielas (VHH) pret SLP ir dzīvotspējīgas iespējas, kas ar augstu specifiskumu saistās ar C. difficile LMW-SLP apakšvienību un ir pierādīts, ka tās kavē C. difficile celmu kustīgumu. Pašlaik izpratne par SLP un to paralogu mehānisko lomu CDI patoģenēzē, adhēzijā un T-šūnu reakcijā joprojām ir sākotnējā stadijā un lielākoties joprojām nav izpētīta. Ir nepieciešami turpmāki pētījumi, lai izdalītu SLP molekulārās funkcijas un specifiskās imūnās atbildes, lai palīdzētu veicināt jaunu vakcīnu/zāļu mērķu un terapijas līdzekļu strauju attīstību C. difficile infekciju apkarošanai.

Atsauces

1. Čandra, H.; Šarma, KK; Tuovinens, OH; Saule, X.; Shukla, P. Pathobionts: Izdzīvošanas mehānismi, paplašināšanās un mijiedarbība ar saimniekorganismu, koncentrējoties uz Clostridioides difficile. Gut Microbes 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Lawson, PA; Citrons, DM; Tyrrell, KL; Finegold, SM Clostridium difficile pārklasificēšana par Clostridioides difficile (Hall un O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Orens, A.; Garrity, GM Paziņojums par izmaiņām taksonomiskajā atzinumā, kas iepriekš publicēts ārpus IJSEM. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Slimību kontroles un profilakses centri. Antibiotiku rezistences draudi Amerikas Savienotajās Valstīs, 2019. 2019. Pieejams tiešsaistē: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (aplūkots 2022. gada 8. septembrī).

5. Vairogs, K.; Araujo-Kastillo, RV; Theethira, TG; Alonso, CD; Kelly, CP Atkārtota Clostridium difficile infekcija: no kolonizācijas līdz ārstēšanai. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Čandra, H.; Sorg, JA; Hasets, dīdžejs; Sun, X. Clostridioides difficile patoģenēzes regulējošie transkripcijas faktori, koncentrējoties uz toksīnu regulēšanu. Krit. Rev. Microbiol. 2022. [CrossRef]

7. Lanzoni-Manguči, P.; Banerji, O.; Vilsons, Dž.; Barvinska-Sendra, A.; Kirks, JA; Vaza, F.; O'Beirne, S.; Baslē, A.; El Omari, K.; Vāgners, A.; un citi. S-slāņa uzbūve un montāža C. difficile. Nat. Commun. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Mori, N.; Takahashi, T. Clostridium difficile virsmas slāņa proteīnu raksturojums un imunoloģiskās lomas. Ann. Lab. Med. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Noori, M.; Azimirads, M.; Eslami, G.; Looha, MA; Jadegars, A.; Ghalavands, Z.; Zali, MR Virsmas slāņa proteīns A no hipervirulentiem Clostridioides difficile ribotipiem izraisa būtiskas izmaiņas saspringto savienojumu gēnu ekspresijā un iekaisuma reakciju cilvēka zarnu epitēlija šūnās. BMC Microbiol. 2022, 22, 259. [CrossRef]

10. Vilsons, KH; Sheagren, JN Antagonisms toxigenic Clostridium difficile ar nontoxigenic C. difficile. J. Inficēt. Dis. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Boriello, SP; Barclay, FE Kāmju aizsardzība pret Clostridium difficile ileokolītu, iepriekš veicot kolonizāciju ar nepatogēniem celmiem. J. Med. Microbiol. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Seal, D.; Borriello, SP; Bārklijs, F.; Velčs, A.; Paipers, M.; Bonnycastle, M. Recidivējošas Clostridium difficile caurejas ārstēšana, ievadot netoksigēnu celmu. Eiro. Dž.Klins. Microbiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Džonsons, S.; Lavergne, V.; Skiners, AM; Gonzales-Luna, AJ; Gerijs, KW; Kellija, CP; Wilcox, MH Amerikas Infekcijas slimību biedrības (IDSA) un Amerikas Veselības aprūpes epidemioloģijas biedrības (SHEA) klīniskās prakses vadlīnijas: 2021. gada mērķtiecīgi atjauninātas vadlīnijas par Clostridioides difficile infekcijas pārvaldību pieaugušajiem. Clin. Inficējiet. Dis. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. van Prehn, J.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Hristeja, A.; Gērijs, B.; Krutova, M.; Norēns, T.; Allerbergers, F.; Coia, JE; un citi. Eiropas Klīniskās mikrobioloģijas un infekcijas slimību biedrība: 2021. gada atjauninājums Clostridioides difficile infekcijas ārstēšanai pieaugušajiem. Clin. Microbiol. Inficējiet. 2021, 27 (2. pielikums), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Vardakas, KZ; Polyzos, KA; Patuni, K.; Rafailidis, PI; Samonis, G.; Falagas, ME Ārstēšanas neveiksme un Clostridium difficile infekcijas atkārtošanās pēc ārstēšanas ar vankomicīnu vai metronidazolu: sistemātisks pierādījumu pārskats. Int. J. Antimikrobi. Aģenti 2012, 40, 1.–8. [CrossRef]

16. Navaļkele, BD; Chopra, T. Bezlotoxumab: topoša monoklonālo antivielu terapija atkārtotas Clostridium difficile infekcijas profilaksei. Bioloģija 2018, 12, 11.–21. [CrossRef]

17. Li, YT; Cai, HF; Vanga, ZH; Sju, Dž.; Fang, JY Sistemātisks pārskats ar metaanalīzi: fekālo mikrobiotas transplantācijas ilgtermiņa rezultāti Clostridium difficile infekcijas gadījumā. Aliment. Pharmacol. Tur. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Kuraiši, MN; Vidlaks, M.; Bhala, N.; Mūrs, D.; Cena, M.; Šarma, N.; Iqbal, TH Sistemātisks pārskats ar metaanalīzi: Fekālo mikrobiotas transplantācijas efektivitāte atkārtotas un ugunsizturīgas Clostridium difficile infekcijas ārstēšanai. Aliment. Pharmacol. Tur. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Raiens, A.; Linčs, M.; Smits, SM; Amu, S.; Nels, HJ; McCoy, CE; Dowling, JK; Draper, E.; O'Reilijs, V.; Makartijs, C.; un citi. TLR4 loma Clostridium difficile infekcijā un virsmas slāņa proteīnu atpazīšanā. PLoS Patogs. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Batah, J.; Denēva-Larazē, C.; Džolivota, PA; Kūne, S.; Kolinons, A.; Marvo, JC; Kansau, I. Clostridium difficile flagellas galvenokārt aktivizē ar TLR5-saistīto NF-κB ceļu epitēlija šūnās. Anaerobe 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Kavata, T.; Takeoka, A.; Takumi, K.; Masuda, K. Parasta masīva demonstrēšana un provizoriskais raksturojums Clostridium difficile šūnu sieniņā. FEMS Microbiol. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Sāra, M.; Sleytr, UB S-Layer proteīni. J. Bacteriol. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Fagans, RP; Janoir, C.; Kolinons, A.; Mastrantonio, P.; Pokstona, IR; Fairweather, NF Piedāvātā nomenklatūra Clostridium difficile šūnu sienas proteīniem. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Monots, M.; Boursaux-Eude, C.; Tibonjē, M.; Vallenē, D.; Mošers, I.; Medigue, C.; Mārtins-Verštrēte, I.; Dupuy, B. Clostridium difficile celma 630 genoma secības reanotācija. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Kalabi, E.; Ward, S.; Wren, B.; Pakstons, T.; Paniko, M.; Moriss, H.; Dell, A.; Dugans, G.; Fairweather, N. Clostridium difficile virsmas slāņa proteīnu molekulārais raksturojums. Mol. Microbiol. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

27. Karjalainens, T.; Valigora-Dupjē, AJ; Cerquetti, M.; Spigaglia, P.; Magdžioni, A.; Mauri, P.; Mastrantonio, P. Clostridium difficile virsmas noenkurotus proteīnus kodējošo gēnu molekulārā un genoma analīze. Inficējiet. Immun. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Gribas, SE; Kandela, T.; Šo, HA; Sīgers, Z.; Mesnage, S.; Fagans, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile virsmas proteīni ir piestiprināti pie šūnu sienas, izmantojot CWB2 motīvus, kas atpazīst anjonu polimēru PSII. Mol. Microbiol. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Bredšovs, VJ; Kirbijs, Dž. M.; Roberts, AK; Šone, CC; Acharya, KR Cwp2 no Clostridium difficile uzrāda paplašinātu trīs domēnu kroku un šūnu adhēziju in vitro. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

29. Waligora, AJ; Hennekīns, C.; Mulanijs, P.; Bourlioux, P.; Kolinons, A.; Karjalainens, T. Clostridium difficile šūnu virsmas proteīna ar adhezīvām īpašībām raksturojums. Inficējiet. Immun. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Džou, Q.; Rao, F.; Čens, Z.; Čens, Y.; Džans, K.; Džans, Dž.; Guans, Z.; Viņš, Y.; Yu, W.; Cui, G.; un citi. Gēns cwp66 ietekmē Clostridioides difficile šūnu adhēziju, stresa toleranci un rezistenci pret antibiotikām. Microbiol. Spectr. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Dang, TH; de la Riva, L.; Fagans, RP; Storck, EM; Dziedēt, WP; Janoir, C.; Fairweather, NF; Tate, EW Virsmas slāņa bioģenēzes ķīmiskās zondes Clostridium difficile. ACS Chem. Biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Kērbijs, Dž. M.; Aherns, H.; Roberts, AK; Kumar, V.; Frīmens, Z.; Ačarja, KR; Shone, CC Cwp84, ar virsmu saistīta cisteīna proteāze, spēlē lomu Clostridium difficile virsmas slāņa nobriešanā. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Pečinē, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, ar virsmu saistīts Clostridium difficile proteīns, ir cisteīna proteāze ar noārdošu aktivitāti uz ārpusšūnu matricas proteīniem. J. Bacteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Usenik, A.; Renko, M.; Miheliˇc, M.; Lindiˇc, N.; Borišeks, J.; Perdihs, A.; Pretnārs, G.; Millers, U.; Turk, D. CWB2 šūnu sienas enkurošanas moduli atklāj Clostridium difficile šūnu sienas proteīnu Cwp8 un Cwp6 kristāla struktūras. Struktūra 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Eddy, SR Vietējās sekvences saskaņošanas varbūtības modelis, kas vienkāršo statistiskā nozīmīguma novērtēšanu. PLoS Comput. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Luo, Y.; Frejs, EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoehels, ģenerāldirektorāts; Heinsa, Kalifornija; Finlay, BB; Strynadka, NC Enteropatogēnā Escherichia coli intimīna-receptoru kompleksa kristāliskā struktūra. Daba 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. de la Riva, L.; Willing, SE; Teits, EW; Fairweather, NF Cisteīna proteāžu Cwp84 un Cwp13 lomas Clostridium difficile šūnu sienas bioģenēzē. J. Bacteriol. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38. Mayer, BJ SH3 domēni: Sarežģītība mērenībā. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

39. Sipeki, S.; Koprivanacz, K.; Takács, T.; Kurilla, A.; Lāslo, L.; Vas, V.; Buday, L. SH2 un SH3 domēnu jaunās lomas lipīdu saistīšanā. Cells 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Reinoldss, CB; Emersons, JE; de la Riva, L.; Fagans, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile šūnu sienas proteīns CwpV ir antigēniski mainīgs starp celmiem, bet uzrāda konservatīvu agregāciju veicinošu funkciju. PLoS Patogs. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Bredšovs, VJ; Kirbijs, Dž. M.; Roberts, AK; Šone, CC; Acharya, KR Clostridium difficile Cwp19 glikozīdu hidrolāzes domēna molekulārā struktūra. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Žu, D.; Buloks, Dž.; Viņš, Y.; Sun, X. Cwp22, jauns peptidoglikānu šķērssaistošais enzīms, spēlē pleiotropu lomu Clostridioides difficile. Vide. Microbiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Soms, RD; Kogils, P.; Eberhards, RY; Edijs, SR; Mistrijs, J.; Mičels, AL; Poters, SC; Punta, M.; Kureši, M.; Sangradora-Vegasa, A.; un citi. Pfam proteīnu ģimeņu datu bāze: ceļā uz ilgtspējīgāku nākotni. Nucleic Acids Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Raits, A.; Pagaidi, R.; Begums, S.; Crossett, B.; Nagy, J.; Brauns, K.; Fairweather, N. Clostridium difficile šūnu virsmas proteīnu proteomiskā analīze. Proteomics 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Biazzo, M.; Cioncada, R.; Fiaski, L.; Teds, V.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Pica, M.; Baroki, MA; Skārselli, M.; Galeotti, CL Cwp loku daudzveidība Clostridium difficile klīniskajos izolātos. J. Med. Microbiol. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Dingls, KE; Didelots, X.; Ansari, MA; Eira, DW; Vona, A.; Grifits, D.; Ip, CL; Batijs, EM; Golubčiks, T.; Boudens, R.; un citi. Clostridium difficile S slāņa un jauna glikozilācijas gēnu klastera rekombinācijas maiņa, ko atklāj liela mēroga visa genoma sekvencēšana. J. Inficēt. Dis. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Fagans, RP; Albesa-Jové, D.; Qazi, O.; Svergun, DI; Brauns, KA; Fairweather, NF Strukturāls ieskats Clostridium difficile S-slāņa molekulārajā organizācijā. Mol. Microbiol. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Fagans, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile ir divas paralēlas un būtiskas Sec sekrēcijas sistēmas. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Péchiné, S.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmee, M.; Collignon, A. Clostridium difficile virsmas proteīnu imunoloģiskās īpašības. J. Med. Microbiol. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Raits, A.; Drudijs, D.; Keins, L.; Brauns, K.; Fairweather, NF Clostridium difficile imūnreaktīvās šūnu sienas olbaltumvielas, kas identificētas ar cilvēka serumiem. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Kirks, JA; Gebharts, D.; Baklijs, AM; Loks, S.; Šolls, D.; Douce, GR; Govoni, GR; Fagan, RP Jauna precizitātes pretmikrobu līdzekļu klase no jauna definē Clostridium difficile S-slāņa lomu virulences un dzīvotspējas nodrošināšanā. Sci. Tulk. Med. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Bruxelles, JF; Mizrahi, A.; Hojs, S.; Kolinons, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. Clostridium difficile virsmas slāņa prekursora imunogēnās īpašības un vakcinācijas testi dzīvnieku modeļos. Anaerobe 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Negm, OH; Hameds, MR; Dilnots, EM; Šone, CC; Māršalovska, I.; Linčs, M.; Loscher, CE; Edvards, LJ; Tighe, PJ; Vilkoksa, MH; un citi. Humorālās imūnās atbildes profilēšana uz Clostridium difficile specifiskiem antigēniem, izmantojot olbaltumvielu mikroarray analīzi. Clin. Vakcīna Immunol. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Péchiné, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Clostridium difficile virsmas proteīnu mainīgums un specifiska seruma antivielu reakcija pacientiem ar Clostridium difficile saistītu slimību. Dž.Klins. Microbiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Merigana, MM; Venugopals, A.; Roksass, JL; Anwar, F.; Mallozzi, MJ; Roxas, BA; Gerding, DN; Višvanatāna, VK; Vedantam, G. Virsmas slāņa proteīns A (SlpA) ir galvenais Clostridium difficile saimniekšūnu adhēzijas veicinātājs. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Bianco, M.; Fēdele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Barbanti, F.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Virsmas slāņa proteīnu imūnmodulējošās aktivitātes, kas iegūtas no epidēmijas un hipervirulentiem Clostridium difficile celmiem. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Cerquetti, M.; Fēdele, G.; Spensjēri, F.; Palaco, R.; Nasso, M.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. Clostridium difficile virsmas slāņa proteīni inducē iekaisuma un regulējošos citokīnus cilvēka monocītos un dendritiskajās šūnās. Mikrobi inficē. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Kolinss, LE; Linčs, M.; Māršalovska, I.; Kristeks, M.; Rochfort, K.; O'Konels, M.; Vējš, H.; Ķellehers, D.; Loscher, CE Virsmas slāņa proteīni, kas izolēti no Clostridium difficile, izraisa klīrensa reakcijas makrofāgos. Mikrobi inficē. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Čens, Y.; Huangs, K.; Čens, LK; Wu, HY; Hsu, CY; Tsai, YS; Ko, WC; Tsai, PJ membrānas holesterīns ir ļoti svarīgs Clostridium difficile virsmas slāņa proteīnu saistīšanai un iekaisuma procesa aktivizēšanai. Priekšpuse. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Vai mēs varam identificēt pacientus ar augstu atkārtotas Clostridium difficile infekcijas risku? Clin. Microbiol. Inficējiet. 2012, 18 (6. pielikums), 21.–27. [CrossRef]

61. Volts, M.; Norēns, T.; Ljungh, A.; Åkerlund, T. IgG antivielu atbildes reakcija pret toksīniem A un B pacientiem ar Clostridium difficile infekciju. Clin. Vakcīna Immunol. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Leav, BA; Blērs, B.; Lenijs, M.; Knaubers, M.; Reilijs, C.; Lovs, I.; Gerding, DN; Kellija, CP; Katčars, K.; Baksters, R.; un citi. Seruma antitoksīna B antiviela korelē ar aizsardzību pret atkārtotu Clostridium difficile infekciju (CDI). Vaccine 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Pantosti, A.; Cerquetti, M.; Vīti, F.; Ortiši, G.; Mastrantonio, P. Immunoblot analīze seruma imūnglobulīna G reakcijai uz Clostridium difficile virsmas proteīniem pacientiem ar ar antibiotikām saistītu caureju. Dž.Klins. Microbiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Drudijs, D.; Kalabi, E.; Keins, L.; Sougioultzis, S.; Kellija, E.; Fērvēters, N.; Kelly, CP Cilvēka antivielu reakcija uz virsmas slāņa proteīniem Clostridium difficile infekcijas gadījumā. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. O'Braiens, Dž.B.; Makkeibs, MS; Athié-Morales, V.; McDonald, GS; DB, NE; Kelleher, DP Pasīvā kāmju imunizācija pret Clostridium difficile infekciju, izmantojot antivielas pret virsmas slāņa proteīniem. FEMS Microbiol. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, NE; O'Braiens, Dž.B. Makkeibs, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Aktīva kāmju imunizācija pret Clostridium difficile infekciju, izmantojot virsmas slāņa proteīnu. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Brūns, P.; Skarpa, M.; Grillo, A.; Palu, G.; Mengoli, C.; Zekoni, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 un SLP-36kDa uzlabo imūnreakciju pret vienlaikus ievadītu antigēnu. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Širvana, AN; Aitken, R. Rekombinanto antivielu izolēšana, kas vērstas pret Clostridium difficile virsmas proteīniem. Braz. J. Microbiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Péchiné, S.; Denēva, C.; Le Monjē, A.; Hojs, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Kāmju imunizācija pret Clostridium difficile infekciju, izmantojot Cwp84 proteāzi kā antigēnu. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Kandalaft, H.; Husaks, G.; Obrijs, A.; van Fāsens, H.; Guans, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; Makenzijs, R.; Logans, SM; Tanha, J. Virsmas slāņa proteīnu mērķēšana ar viena domēna antivielām: potenciāla terapeitiskā pieeja pret ar Clostridium difficile saistīto slimību. Appl. Microbiol. Biotehnoloģija. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]