Uz ūdeņraža peroksīdu reaģējošu EST, kas iesaistīti feniletanoīdu glikozīdu biosintēzē Cistanche Salsa šūnu kultūrā

Kontaktpersona: Odrija Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pasts:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Abstrakts
Ūdeņraža peroksīds ir efektīvs abiotisks ierosinātājs, kas augos var izraisīt sekundāro metabolītu biosintēzi. Mēs parādām, ka sāli izturīga ārstniecības auga šūnu suspensijas kultūrāCistanchesalsa, bioaktīvo komponentu ražošanafeniletanoīdsglikozīdi(PeGs) palielinājās pēc H2O2 apstrādes. Lai identificētu gēnus, kas saistīti ar PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēzi ietekmēja H2O2, mēs izveidojām H2O2 reaģējošu gēnu slāpēšanas subtraktīvās hibridizācijas bibliotēku, izmantojotCistanchesalsašūnu līniju un identificēja 105 izteiktas sekvences tagus (EST) un 85 gēnus. EST bibliotēkas funkcionālās anotācijas un gēnu ontoloģijas analīzes parādīja gēnus, kas saistīti ar dažādām stresa reakcijām, sekundāro metabolītu biosintēzi un transkripcijas regulēšanu. Starp tiem mēs identificējām divus gēnus, kas saistīti ar PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēzes ceļš (4-kumarāta koenzīma A ligāze un cinnamāta 4-hidroksilāze) un divi WRKY tipa transkripcijas faktori. Atlasīto gēnu ekspresijas pēc H2O2 apstrādes tika analizētas ar RT-qPCR. Agrīna palielināta PeG transkripcija(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēzes ceļa gēni pēc apstrādes atklāja, ka H2O2 inducēja PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze, regulējot tās galvenos gēnus.
Papildu atslēgvārdi: cinnamāts-4-hidroksilāze, 4-kumarāta koenzīma A ligāze, nomākta subtraktīvā hibridizācija.Cistanchesalsa. feniletanoīdsglikozīdi.

Ievads

Cistanchesalsair daudzgadīgs augu parazīts uz Haloxylos ammodendrun saknes, un tas aug tuksneša apgabalā Ķīnas rietumos. Gadsimtiem,Cistanchesugas ir izmantotas kā tradicionālās augu izcelsmes zāles (Wang et al. 2012). Bioaktīvie komponenti irfeniletanoīdsglikozīdi(PeG), kam ir ievērojama ietekme uz reaktīvo skābekļa sugu (ROS) klīrensu, aizsardzību pret radiāciju, imunitātes uzlabošanu un pretnovecošanos (Nan et al. 2013). Mietiņi(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze iekšāCistanchetiek iniciēts no fenilalanīna (1. att. papildinājums) un sintezētā kofeīnskābe tiek tālāk glikozilēta, veidojot dažādus PeG(feniletanoīdsglikozīdi)(Wang et al. 2012). Trīs galvenie PeG(feniletanoīdsglikozīdi), ehinakozīds, akteozīds un 2'-acetilakteozīds tiek uzskatīti par visaktīvākajiem komponentiemCistanche(Kobayashi et al. 1984). Lai uzlabotu to saturuCistanchešūnu kultūrā, ir pārbaudīti dažādi izsaucēji, tostarp hitozāns, putrescīns, Ag plus un osmotiskais stress (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu and Cheng 2008). Tomēr gēni, kas iesaistīti PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze iekšāCistanche, galvenokārt fenilalanīna metabolisma ceļa gēni, ir reti identificēti. Cistanche deserticola nesen tika identificēts tikai gēns, kas kodē fenilalanīna amonjaka liāzi (PAL) (Hu et al. 2011). Citi gēni, kas kodē, piemēram, cinnamāta-4-hidroksilāzi (C4H), kas varētu katalizēt cinnamāta pārvēršanos par kumarskābi, un 4-kumarāta koenzīma A ligāzi (4CL), kas ir būtisks lignīna un flavanoīdu gēns. biosintēzes, nav atrastasCistanche.
Mēs izmantojām šūnu kultūruCistanchesalsapētīt PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze un saistīto gēnu ekspresija. Mēs arī pētījām efektīva H2O2 izraisītāja ietekmi uz PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze. Turklāt, lai atrastu agrīnus reaģējošus gēnus, kas iesaistīti PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēzi, mēs veicām supresijas subtraktīvo hibridizāciju (SSH), lai izveidotu H2O2-reaģējošu gēnu cDNS bibliotēku.

1. attēls. Relatīvā gēnu ekspresija, kas noteikta ar RT-qPCR pēc apstrādes ar H2O2. CsWRKY1 - WRKY transkripcijas faktors (Contig07), CsC4H1 - cinnamāts 4-hidroksilāze (Contig09), Cs4CL1 - 4-kumarāts: ligāze (Contig03), CsHSP1 - karstuma šoka proteīns 70 kDa (Contig 01) un CsSOD1 - superoksīda dismutāze (Contig16). Šūnas tika apstrādātas ar 80 ug dm-3 H2O2 šķidrā vidē 2 stundas, un ekspresijas tika salīdzinātas ar kontroli, kas apstrādāta ar ūdeni. Nozīmē plus - trīs bioloģisko atkārtojumu SD; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

materiāli un metodes

CS2001 šūnu līnija tika izveidota no ziedlapiņāmCistanchesalsa(CA Mey.) Beks savākts Neimenggu provincē un subkultūrēts. Kultivēšanas metode bija līdzīga iepriekš publicētajam protokolam (Liu et al. 2007). Parasti subkultūrai tika izmantota cietā Murashige un Skoog (1962; MS) barotne, bet PeG - šķidrā barotne.(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze (tā bija modificēta MS barotne, kas papildināta ar 30 g dm-3 glikozes un 20 mg dm-3 indola-3-etiķskābi). H2O2 apstrādei 5.0 ± 0,2 g šūnu ātras augšanas periodā, parasti 20 līdz 30 dienas pēc subkultivēšanas cietā barotnē, tika inokulētas 50 cm3 šķidrā barotnē 250 cm3 Erlenmeijera kolbā. un kultivē tumsā ar vai bez dažādām H2O2 koncentrācijām. PeG(feniletanoīdsglikozīdi)saturs pēc 10 d indukcijas ar H2O2 tika analizēts pēc iepriekš publicētas metodes (Liu et al. 2007), kuras pamatā ir reversās fāzes augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija ar metanola gradienta eluēšanu.

Šūnas 2 stundas pēc H2O2 apstrādes tika savāktas no barotnes ar filtrpapīru, izmantojot Büchner piltuvi, un pēc tam tās tika sasaldētas šķidrā slāpeklī un samaltas pulverī. Katrs 2 g šūnu pulvera tika lizēts, izmantojot maisījumu, kurā bija 1 cm3 2-merkaptoetanola, 1 cm3 200 g dm{{10}} sarkozila, un 8 cm3 GTC buferšķīduma (5 M guanidīnija izotiocianāts, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiourīnviela un 10 mM ditiotreitola). Pēc tam šūnas 15 minūtes inkubēja uz ledus, pēc tam pievienoja 1/3 tilpuma 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, un šūnas inkubēja uz ledus 15 minūtes un pēc tam centrifugēja pie 15 000 g 15 minūtes. . Supernatants tika pievienots vienādam tilpumam izopropanola, lai nogulsnētu kopējo RNS. Kopējā RNS tika tālāk attīrīta ar RNeasy mini komplektu (Qiagen, Hilden, ASV) saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Messenger RNS tika izolēta no kopējās RNS, izmantojot Oligotex mRNS midi komplektu (Qiagen).

feniletanoīdsglikozīdiiekšāCistancheSalsa

SSH bibliotēka tika ģenerēta no kontroles un 30% H2O2- izraisītiem šūnu paraugiem 2 stundas pēc ierosināšanas, izmantojot PCR atlasīto cDNS atņemšanas komplektu (Clontech, Mountain View, ASV). Bibliotēkas veidošanai produkti tika attīrīti atsevišķi, izmantojot gēla attīrīšanas komplektu (Qiagen), un klonēti pGEM vektorā, izmantojot TA klonēšanas komplektu (Tiangen, Pekina, Ķīna). Plazmīdas no neatkarīgiem kloniem tika izolētas un sekvencētas, izmantojot T7 primer. Visas izteiktās secības tagu (EST) sekvences no bibliotēkas (ar noņemtām vektoru sekvencēm) tika izmantotas kontig montāžai ar CAP3 (//doua.prabi.fr/software/cap3). EST tika grupēti kontigos un viengabalos; tie tika izmantoti homoloģijas meklēšanai, izmantojot BLASTx programmu NCBI (//blast.ncbi. nlm.nih.gov). Pēc tam sekvences tika anotētas, analizētas un klasificētas atbilstoši gēnu ontoloģijas (GO) terminiem, izmantojot Blast2GO (//www. blast2go.com).
Reālā laika kvantitatīvā polimerāzes ķēdes reakcija (RT-qPCR) tika veikta saskaņā ar Bustin et al. (2009). cDNS paraugi tika sintezēti, izmantojot PrimeScript RT reaģentu komplektu (Takara, Dalian, Ķīna) no 0, 5 ug kopējās RNS. RT-qPCR tika veikts, izmantojot SYBR Premix Ex Taq II un ROX plus komplektus (Takara) ABI 7300 reāllaika PCR sistēmā (Applied Biosystems, Foster City, ASV) ar trim tehniskiem atkārtojumiem. Primers tika izstrādāts, izmantojot tiešsaistes Primer3 programmatūru saskaņā ar Takara sniegtajām instrukcijām; šajā pētījumā izmantotie primeri ir uzskaitīti 1. tabulā Suppl. Gēnu ekspresijas tika normalizētas līdz 18S RNS, kuras ekspresija bija stabila visos paraugos.

Rezultāti tika analizēti, izmantojot R versiju 3.1.1, atšķirību nozīmīgums tika pārbaudīts ar Stjudenta t-testu.

Rezultāti

Ūdeņraža peroksīds izraisīja visu trīs galveno PeG biosintēzi(feniletanoīdsglikozīdi)iekšāCistanchesalsasuspensijas šūnas (1. tabula), bet bez acīmredzamas ietekmes uz šūnu augšanu (S2 att.). Ehinakozīda saturs palielinājās jau pēc 10 ug dm-3 H2O2 apstrādes (P < 0.05),="" lielāks="" pieaugums="" tika="" reģistrēts="" pēc="" 20="" ug="" dm="" -3="" h2o2="" apstrāde="" (p="">< 0,01),="" un="" vislielākais="" pieaugums="" bija="" pēc="" 40,="" 80="" un="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2="" apstrādes.="" līdzīgi="" rezultāti="" ir="" parādīti="" akteozīdam,="" taču="" tā="" saturs="" sasniedza="" maksimumu="" pēc="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" apstrādes.="" 2'-acetilakteozīda="" biosintēze="" bija="" mazāk="" jutīga="" pret="" h2o2="" apstrādi;="" ievērojams="" tā="" satura="" pieaugums="" (p="">< 0,05)="" bija="" pie="" h2o2="" koncentrācijas="" virs="" 40="" ug="" dm-3.="" pēc="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" apstrādes="" visu="" trīs="" galveno="" peg="">(feniletanoīdsglikozīdi)ievērojami palielinājās (P < 0.01)="" salīdzinājumā="" ar="" kontroli.="" tāpēc="" šī="" koncentrācija="" tika="" izmantota="" turpmākajos="">
Lai izveidotu bibliotēku, kas bagātināta ar agrīni reaģējošiem gēniem, kurus regulē H2O2, mēs izmantojām cDNS noCistanchesalsasuspensijas šūnas, kas apstrādātas ar 80 ug dm-3 H2O2 2 stundas. Pēc vektora sekvences izslēgšanas 129 rekombinanto klonu vienreizējai sekvencēšanai SSH bibliotēkā tika iegūti 105 tīri EST. Šīs skaidrās EST izmantoja montāžai CAP3, un tika ģenerēti 18 kontigi un 67 singletoni (2. tabula). Tādējādi šajā bibliotēkā tika izolēti 85 gēni. Tīro 105 EST vidējais garums bija 527 bp, kas ir pietiekams uz secību līdzību balstītai funkcionālai klasifikācijai.

feniletanoīdsglikozīdiiekšāCistancheSalsa

Visi 85 bibliotēkā iegūtie gēni tika iegūti ar BLASTx, salīdzinot ar GenBank nedublīgo proteīnu datubāzi, lai noteiktu secību līdzību (E-vērtība mazāka vai vienāda ar 0.001). Divdesmit viens gēns datubāzē neuzrādīja trāpījumus, tie varētu būt specifiskiCistanchesalsa. Rezultāti ar BLASThits tika importēti Blast2GO programmatūrā, lai veiktu turpmākas GO un KEGG ceļu bagātināšanas analīzes. No 64 gēniem ar BLAST trāpījumiem 50 tika anotēti saskaņā ar citu sugu homologu gēnu aprakstu. Anotētie gēni tika nosaukti saskaņā ar BLAST trāpījumu aprakstu. GO analīze (3. att. papildinājums) liecina, ka starp šiem 50 gēniem bija 14 gēni, kas iesaistīti reakcijās uz stimuliem, un vairāk nekā 30 gēni, kas saistīti ar vielmaiņas procesiem (1. un 2. tabula). Starp šiem gēniem, kā paredzēts, tika izolēti divi PeG biosintēzes ceļa gēnu homologi: 4-kumarāta koenzīma A ligāze (nosaukta Cs4CL1: Contig03) un cinnamāta 4-hidroksilāze (nosaukta CsC4H1: Contig14). Turklāt tika veikta RT-qPCR, lai apstiprinātu inducētās gēnu ekspresijas no bibliotēkas pēc H2O2 apstrādes.

Lai apstiprinātu, ka būtiskie gēni, kas identificēti no SSH bibliotēkas, reaģēja uz ārstēšanu ar H2O2, divu PeG ekspresijas.(feniletanoīdsglikozīdi)Ar biosintēzes ceļu saistītie gēni (Cs4CL1, CsC4H1), divi ROS inducēti gēni (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) un viens WRKY ģimenes transkripcijas faktoram līdzīgs gēns (CsWRKY1: Contig 07) tika izmērīti ar RT-qPCR. ar H2O2 (1. att.). CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 un CsWRKY1 izteiksmes tika regulētas attiecīgi vairāk nekā 15-, 3-, 45- un 4- reizes, attiecīgi 2 stundas pēc H2O2 ārstēšana. Pēc H2O2 apstrādes CsHSP1 ekspresija tika mainīta tikai 1, 8 reizes.
CsWRKY1, CsC4H1 un Cs4CL1 izpausmju laika gaita pēc H2O2 apstrādes tika tālāk analizēta ar RT-qPCR (2. att.). CsC4H1 un Cs4CL1 izteiksmes bija ļoti palielinātas (attiecīgi vairāk nekā 80- reizes un 50- reizes) pēc 16-h ārstēšanas un pēc tam pazeminātas pēc 32 stundām. CsWRKY1 ekspresija tika regulēta vairāk nekā 20- reizes pēc 4 stundām un pēc tam samazinājās no 8 stundām (2. attēls).

2. attēls. CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) un Cs4CL1 (C) relatīvā ekspresija dažādos laikos pēc apstrādes ar 80 ug dm-3 H2O2. Izteiksmes tika normalizētas līdz kontrolei; (apstrādāts ar ūdeni). Nozīmē plus - trīs bioloģisko atkārtojumu SD; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Diskusija

Ūdeņraža peroksīds ir labi zināms augu izsaucējs, kam ir dažāda ietekme uz augiem. Tāpat kā ROS, tas var izraisīt ROS attīrīšanas sistēmu, kas sastāv no superoksīda dismutāzes, katalāzes, peroksidāzes utt., un tā kalpo kā pakārtotais sāls, osmotiskā un dehidratācijas signāls.

uzsver (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Tika ierosināts, ka H2O2 veidošanos augos pavada inducēta sekundāro metabolītu biosintēzeCistanchesalsašūnu kultūra. Kā gaidīts, mūsu rezultāti atklāj, ka PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze inCistanche salsašūnu kultūra tika ierosināta pēc H2O2 apstrādes (1. tabula). Trīs galveno PeG saturs(feniletanoīdsglikozīdi)palielinājās pēc H2O2 apstrādes, norādot uz tā galveno lomu PeG biosintēzē. SSH bibliotēkā bagātinātie gēni vēl vairāk liecināja par tā ietekmi uz PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēzes indukcija inCistanche salsa.

Daudzi zināmi H2O2-reaģējoši gēni, piemēram, askorbāta peroksidāze (CISTH069, Karyotou un Donaldson, 2005), h-hinona oksidoreduktāze (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah1 et al.). un slimību rezistences reakcijas gēni (Contig10, Nanda, et al. 2010), tika bagātināti SSH bibliotēkā (3. tabula, 2. tabula, papildinājums). Daži no šiem tipiskajiem ROS reaģējošajiem gēniem ar inducētu ekspresiju pēc H2O2 apstrādes tika vēl vairāk apstiprināti ar RT-qPCR (1. un 2. att.), norādot, ka šeit tika izveidota kvalificēta SSH bibliotēka. Šajā bibliotēkā tika atrasti arī divi PeG biosintēzes ceļa gēni CsC4H1 un Cs4CL1, un šīs divas gēnu ekspresijas izraisīja apstrāde ar H2O2 laika atkarīgā veidā (2. attēls). Tas liecina, ka ārstēšana ar H2O2 izraisīja PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze ģenētiskā līmenī, regulējot PAL ceļa gēnus. Tomēr PAL un citi pakārtotie PeG biosintēzes gēni (Wang et al. 2012) SSH bibliotēkā netika identificēti; tas varētu būt tāpēc, ka bibliotēka nav pietiekami sakārtota. Saistība starp CsC4H1 un Cs4CL1 izraisītajām ekspresijām un palielinātu PeG biosintēzi pēc H2O2 apstrādes ir jānoskaidro, veicot turpmāku analīzi.

Papildus PAL ceļa gēniem, ko inducēja ārstēšana ar H2O2, SSH bibliotēkā tika atrasti divi WRKY ģimenes transkripcijas faktori (CsWRKY1, CsWRKY2) (3. un 2. tabulas papildinājums), un CsWRKY1 izraisīta ekspresija tika apstiprināta ar RT-qPCR. . Tās ekspresija reaģēja uz ārstēšanu ar H2O2 agrāk nekā divu PAL ceļa gēnu, Cs4CL1 un CsC4H1, ekspresija (2. attēls). Iepriekšējos pētījumos rīsos ir novērota dažu WRKY transkripcijas faktoru un PAL ceļa gēnu koekspresija (Gupta et al. 2012). Turklāt PAL gēna ekspresija tiek pastiprināti regulēta OsWRKY03 pārmērīgas ekspresijas mutantā (Liu et al. 2005). Iepriekš minētie divi WRKY ģimenes transkripcijas faktori var būt iesaistīti arī PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze iekšāCistanchesalsa. Interesanti, ka ar dehidratāciju saistīti EST (CISTH067, CISTH064) tika atrasti SSH bibliotēkā, kas var liecināt, ka ārstēšana ar H2O2 bija saistīta ar dehidratāciju reaģējošu gēnu ekspresijuCistanchesalsakā novērots citos augos (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Viens ar giberelīna (GA) signalizāciju saistīts gēns, giberelīna receptoriem līdzīgs gid1b (CISTH092), tika identificēts SSH bibliotēkā, kas nozīmē GA signalizācijas un H2O2 ārstēšanas savienojumuCistanchesalsa, par ko ziņots arī miežiem (Bahin et al. 2011). Tomēr ir vajadzīgi vairāk pētījumu, lai apstiprinātu, vai šie gēni ir saistīti ar PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze. Izņemot iepriekš minētos gēnus, šeit izveidotajā SSH bibliotēkā ir arī gēni ar vai bez BLAST trāpījumiem. Tas uzlabo mūsu izpratni par H2O2 ietekmi uz C. salsa un, pirmkārt, sniedz informāciju par tās gēniem, kas iesaistīti PeG biosintēzē.

Noslēgumā mēs novērtējām H2O2 ietekmi uz PeG(feniletanoīdsglikozīdi)indukcijaCistanchesalsašūnu kultūra. SSH bibliotēka tika izveidota pēc H2O2 apstrādes, un atlasīto gēnu ekspresija tika apstiprināta ar RT-qPCR. Tika identificēti divi ar PeG biosintēzes ceļu saistīti gēni un citi H2O{5}}reaģējoši gēni. Šie atklājumi paplašinās mūsu izpratni par H2O2-inducētajiem PeG(feniletanoīdsglikozīdi)biosintēze iekšāCistanchesalsamolekulārā līmenī, sniedzot informāciju gēnu manipulācijāmCistanchesalsašūnu kultūras, lai uzlabotu PeG(feniletanoīdsglikozīdi)ražošanu.

No: "Uz ūdeņraža peroksīdu reaģējošo EST, kas iesaistīti feniletanoīdu glikozīdu biosintēzē Cistanche salsas šūnu kultūrā, identificēšana"J. CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10,1007/s 10535-015-0541-g

Atsauces

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Šķērsruna starp reaktīvām skābekļa sugām un hormonālajiem signalizācijas ceļiem regulē graudu miegainību miežos. - augu šūnu vide. 34: 980-993, 2011. gads.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie, r P.: Reaktīvās skābekļa formas, ko rada karstuma šoka proteīna (Hsp) inducējošais produkts, veicina Hsp70 veidošanos un Hsp{1} }mediēta aizsargājoša imunitāte Artemia franciscana pret patogēniem vibrioniem. - Izstrādātājs Comp. Immunol. 46: 470-479, 2014. gads.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: NAD(P)H: hinona oksidoreduktāzes 1 ekspresija HeLa šūnās  ūdeņraža peroksīda un augšanas fāzes loma. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001. gads.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: qPCR un RT-qPCR standartizācija. - Ženē. Inž. Biotehnoloģija. Ziņas 29: 40-43, 2009. gads.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Cistanchedeserticola šūnu suspensijas kultūras:feniletanoīdsglikozīdibiosintēze un antioksidanta aktivitāte. - Process Biochem. 40: 3119-3124, 2005. gads.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZfeniletanoīdsglikozīdibiosintēze iekšāCistanchedeserticola šūnu suspensijas kultūras, izmantojot hitozāna elicitoru. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006. gads.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abscisīnskābe mediē ūdeņraža peroksīda veidošanos zemesriekstos, ko izraisa ūdens stress. - Biol. Augu. 57: 555-558, 2013. gads.
Gupta, SK, Ra, i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: viens funkcionāls sprādzienbīstamības gēns Pi54 aktivizē sarežģītu aizsardzības mehānismu rīsos. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012. gads.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: fenilalanīna amonjaka-liāzes gēna molekulārais raksturojums noCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011. gads.
Kar, RK: Augu reakcija uz ūdens stresu: reaktīvo skābekļa sugu loma. - Augu signāla uzvedība 6: 1741-1745, 2011. gads.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Askorbāta peroksidāze, ūdeņraža peroksīda savācējs glioksisomu membrānās. - loka h. Biochem. Biofizija. 434: 248-257, 2005. gads.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukušima, S.: Pētījumi par sastāvdaļāmcistancheir herba. 4. 2 jaunu fenilpropanoīdu glikozīdu, cistanozīda-C un cistanozīda-D, izolācija un struktūras. - Ķīm. Pharm. Bullis. 32: 3880-3885, 1984. gads.

Liu, CZ, Cheng, XY: uzlabošanafeniletanoīdsglikozīdibiosintēze šūnu kultūrāsCistanchedeserticola osmotiskā stresa rezultātā. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: uzlabota uzkrāšanāsfeniletanoīdsglikozīdiar prekursoru ievadīšanu suspensijas kultūrāCistanchesalsa. - Bioķīm. Inž. J. 33: 88-93, 2007. gads.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, rīsu transkripcijas aktivators, kas darbojas aizsardzības signalizācijas ceļā augšpus OsNPR1. - Cell Res. 15: 593-603, 2005. gads.
Murashige, T., Skoog, F.: Pārskatīta barotne ātrai augšanai un biotestiem ar tabakas audu kultūrām. - Fiziol. Augu. 15: 473-497, 1962. gads.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Feniletanolīdsglikozīdiar pretiekaisuma aktivitātēm no kātiemCistanchedeserticola kultivēta Tarimas tuksnesī. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktīvās skābekļa sugas augu un mikroorganismu agrīnās mijiedarbības laikā. - J. Integr. Augu Biol. 52: 195-204, 2010. gads.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: uzlabota ražošanafeniletanoīds glikozīdiar prekursoru barošanu ar šūnu kultūruCistanchedeserticola. - Process Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: uzlabota ražošanafeniletanoīdsglikozīdiautorsCistanchedeserticola šūnas, kas kultivētas iekšējās cilpas gaisa pacelšanas bioreaktorā ar sijāšanas stāvvadu. - Enzīmu mikrobiols. Tehn. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomical and histochemical characterization of in vitro haustorium from roots of Castilleja tenuiflora. - Biol. Augu. 58: 164-168, 2014. gads.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: ūdeņraža peroksīda aklimatizācija uzlabo sāls toleranci, aktivizējot ar aizsardzību saistītos proteīnus Panax žeņšeņs CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014. gads.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 regulē no reaktīvām skābekļa sugām atkarīgu signalizāciju sākotnējās reakcijas uz sāls stresu laikā
rīsos. - 25. augu šūna: 2115-2131, 2013. gads.
Van, T., Džan, XY, Sji, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Tuksneša žeņšeņs": pārskats. - Amer. J. zods. Med. 40: 1123-1141, 2012. gads.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Ūdeņraža peroksīda nogulsnēšanās modelis rīsu lapu apvalkos sāls stresa apstākļos. - Biol. Augu. 50: 469-472, 2006. gads.
Džou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 regulē sausuma stresa reakcijas un zilās gaismas izraisītu zobu atvēršanos, inhibējot reaktīvo skābekļa sugu uzkrāšanos Arabidopsis. - Augu fiziols. 162: 1030-1041, 2013. gads.