lvValoda
Mājas / Zināšanas / Saturs

Zināšanas

Uzlabota Cuscuta Chinensis Lam sēklu polisaharīda antimelanoģenēze un antioksidanta iedarbība pēc fermentatīvās hidrolīzes

Mar 30, 2023

Abstrakts

Cuscuta chinensis polisaharīds (CPS) tika ekstrahēts, izmantojot karstu ūdeni, un fermentatīvi hidrolizēts C. chinensis polisaharīds (ECPS) tika iegūts ar mannanāzes fermentatīvās hidrolīzes procesu. Šī pētījuma mērķis bija izpētīt ECPS un CPS anti-melanogēno aktivitāti B16F10 melanomas šūnās. In vitro antioksidanta aktivitāte tika novērtēta pēc to dzelzs dzelzs reducējošās spējas un DPPH brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitātēm. Polisaharīdu molekulmasas sadalījums tika noteikts, izmantojot SEC-MALLS-RI. CPS tika veiksmīgi fermentatīvi degradēts, izmantojot mannozi, un CPS un ECPS vidējā svērtā molekulmasa bija 434, 6 kDa un 211, 7 kDa. Bioloģiskās aktivitātes testu rezultāti liecināja, ka fermentatīvi hidrolizētajam polisaharīdam bija augstāka anti-melanogēna aktivitāte un antioksidanta iedarbība nekā sākotnējam polisaharīdam. ECPS uzrādīja anti-melanogēnu aktivitāti, samazinot tirozināzes, MITF un TRP-1 ekspresiju bez citotoksiskas iedarbības B16F10 melanomas šūnās. Visbeidzot, ECPS var kļūt par ādas balināšanas līdzekli. Saskaņā ar attiecīgiem pētījumiem,cistancheir izplatīts augs, kas pazīstams kā "brīnumaugs, kas pagarina mūžu". Tās galvenā sastāvdaļa ir cistanozīds, kam ir dažādi efekti, piemēram, antioksidants, pretiekaisuma līdzeklis un imūnās funkcijas veicināšana. Mehānisms starpcistancheunādas balināšanaslēpjas cistanche glikozīdu antioksidanta iedarbībā.Melanīnscilvēka ādā rodas tirozīna oksidācijas rezultātā, ko katalizētirozināze, un oksidācijas reakcijā ir nepieciešama skābekļa līdzdalība, tāpēc skābekļa brīvie radikāļi organismā kļūst par svarīgu faktoru, kas ietekmē melanīna ražošanu. Cistanche satur cistanozīdu, kas ir antioksidants un var samazināt brīvo radikāļu veidošanos organismā, tādējādikavē melanīna ražošanu.

Atslēgvārdi:Cuscuta chinensis polisaharīds; Antimelanogēna aktivitāte; Enzīmu hidrolīzes polisaharīds; Antioksidantu aktivitāte

Ievads 

Melanīns ir L-tirozīna transformācijas galaprodukts, kas ir galvenais matu un ādas krāsas noteicējs, un tam ir būtiska nozīme aizsardzībā pret ultravioletā starojuma radītajiem bojājumiem (1). Tomēr melanīna uzkrāšanās var būt saistīta ar patoloģisku pigmentāciju un izraisīt ādas hiperpigmentāciju, melasmu, saules melanozi un efelīdus (2). Melanīna biosintēze ietver virkni fermentatīvu un oksidatīvu reakciju, un tirozināzei šajā procesā ir svarīga loma (3). Ar tirozināzi saistītais proteīns (TRP-1) veicina DHICA oksidāzes veidošanos melanīna biosintēzes ceļā (4). Ar intracelulāro mikroftalmiju saistītais transkripcijas faktors (MITF) ir svarīga transkripcija

melanīna biosintēzes gēnu regulators. MITF piedalās arī melanocītu pigmentācijas, proliferācijas un diferenciācijas regulēšanā (5). a-MSH-melanokortīna 1 receptoru signalizācija notiek specifiskos melanogēnos enzīmos, tostarp TRP-1; tirozināzi regulē arī MITF (5). Daudziem ādas balināšanas līdzekļiem ir anti-melanogēna iedarbība, regulējot tirozināzes ekspresiju vai inhibējot tirozināzes aktivitāti. Turklāt intracelulārais antioksidantu līmenis un brīvo radikāļu veidošanās ietekmē arī melanīna saturu (6). Tāpēc tirozināzes inhibitorus un antioksidantus bieži izvēlas kā ādas balināšanas līdzekļus. Cuscuta chinensis Lam., ķīniešu valodā saukts par TuSiZi, ir tradicionālā ķīniešu medicīna, ko parasti izmanto kā funkcionālu pārtiku un, kā zināms, uzlabo reproduktīvās sistēmas spējas (7). Pēdējos gados daži ziņojumi liecina par tās lietošanu vasaras raibumu un vitiligo ārstēšanai (8). Citi ziņojumi liecina, ka tas pozitīvi ietekmē ādas aizsardzību (9) un inducē tirozināzes aktivitātes inhibīciju (10).

rou cong rong whitening

Noklikšķiniet uz Rou Cong Rong ieguvumi balināšanai

Jautājiet vairāk:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Polisaharīdi ir galvenās sastāvdaļas no C. chinensis Lam ūdens ekstrakta. sēklas, kurām ir anti-apoptozes (11) un imunoloģiskās aktivitātes (12). Iepriekšējie analīžu rezultāti liecina, ka C. chinensis Lam. polisaharīds sastāv no fruktozes, mannozes, ksilozes un arabinozes; manoze ir galvenā cukura sastāvdaļa (13). Daudzi pētnieki ir pierādījuši, ka polisaharīdu viskozitātei (14), molekulmasas (Mw) sadalījumam (15) un monosaharīdu proporcijai (16) ir liela ietekme uz to bioaktivitāti. Turklāt jaunākie pētījumi ir parādījuši, ka noārdītiem polisaharīdiem ar zemu Mw piemīt augstākas antioksidantu un tirozināzes inhibitoru aktivitātes nekā sākotnējam polisaharīdam (17). Tādējādi zema Mw polisaharīda ražošana no C. chinensis Lam. sēklas ir nepieciešamas, lai uzlabotu to bioloģisko aktivitāti. Starp dažādiem noārdīšanās procesiem galvenās fermentatīvās noārdīšanās priekšrocības ir substrāta specifiskums, augsta selektivitāte un viegli apstākļi, kas rada hidrolizātus ar precīzi definētām struktūrām (18).

Pamatojoties uz šiem farmakoloģiskajiem pētījumiem, mēs pieņēmām, ka C. chinensis polisaharīds (CPS) un fermentatīvi hidrolizēts C. chinensis polisaharīds (ECPS) varētu būt efektīvas botāniskas zāles hiperpigmentācijas uzlabošanai. Mannāzi izmantoja, lai no sēklām iegūtu zemu Mw ECPS. Turklāt tika novērtētas dažādu Mw polisaharīdu anti-melanoģenēzes un antioksidantu aktivitātes, kā arī tika pētīta saistība starp bioaktivitāti un polisaharīdu Mw.

Materiāls un metodes

Reaģenti

Ķimikālijas fermentu un antioksidantu aktivitātēm tika iegādātas no Sigma Co. (ASV). Visi pārējie reaģenti un ķīmiskās vielas tika iegādāti no Aladdin (Ķīna).

CPS un ECPS sagatavošana

Cuscuta chinensis Lam sēklu ārstnieciskos materiālus nodrošināja Guang Dong Feng Chun Pharmaceutical CO., LTD (Ķīna). Apmēram 500 g sauso materiālu tika saberzti pulverī un 24 stundas istabas temperatūrā mērcēti ar 1200 ml 80% etanola, lai noņemtu lipīdus, oligosaharīdus un krāsainus materiālus. Iepriekš apstrādātos paraugus infiltrēja ar audumu, un pēc tam žāvēto atlikumu trīs reizes ekstrahēja ar 3000 ml ūdens 90 grādu temperatūrā. Ūdens ekstrakti tika atdalīti no atlikuma, centrifugējot (4000 g 5 minūtes 22 °C temperatūrā) un pēc tam koncentrēti 70 ° temperatūrā vakuumā; kondensāts tika nogulsnēts ar 60% etanolu 3 grādu temperatūrā 24 stundas. Visbeidzot, nogulsnes tika deproteinētas ar Sevag metodi, dializētas ar 3500 Da membrānu, liofilizētas un pēc tam marķētas ar C. chinensis polisaharīdu (CPS).

Fermentatīvi hidrolizētais C. chinensis polisaharīds (ECPS) tika iegūts hidrolīzē ar mannozi (0,1 procents nātrija acetāta buferšķīdumā) mannozes un substrāta attiecībā 5:1 (v/w) pie 60 grādiem, pH. 4,5 uz 6 stundām. Pēc tam katalīzes reakcija tika pārtraukta verdošā ūdenī 10 minūtes. Reakcijas šķīdumu centrifugēja ar ātrumu 10, 000 g 15 minūtes (4 grādi), un supernatants tika savākts dialīzei 3 grādos 3 dienas ar 3500 Da membrānu, lai noņemtu mazās molekulārās vielas, un tika liofilizēts.

Ogļhidrātu saturs tika pārbaudīts ar fenola sērskābes metodi ar glikozi kā kalibrēšanas līknes standarta vielu.

cistanche tubulosa

SEC-MALLS-RI mērījums

Izmēru izslēgšanas hromatogrāfija (Waters, ASV) apvienojumā ar vairāku leņķu lāzera gaismas izkliedes detektoru (Wyatt, ASV) un refrakcijas indeksa detektoru (Waters, ASV) (SEC-MALLS-RI) tika izmantota, lai noteiktu vidējo svērto molekulmasu. polisaharīdi. SEC-MALLS-RI tika veikts ar Phenomenex Polysep-GFC-Linear kolonnu (8 mm×3{{10}}0 mm); paraugi (2 mg/ml) tika izšķīdināti ar kustīgo fāzi, kas sastāvēja no 0,1 M nātrija hlorīda. Injekcijas tilpums bija 100 ml, un līdzinieks tika iestatīts uz 0,7 ml/min.

Sēņu tirozināzes inhibīcijas tests

Sēņu tirozināzes inhibīcija (19) tika veikta, kā iepriekš ziņots ar modifikācijām. Īsumā, 25 ml kojskābes (pozitīvā kontrole) vai parauga šķīdumi (25 ml 10 mM L-tirozīna, 25 ml 0,5 mM L-DOPA un 875 ml 50 mM fosfāta buferšķīdums (pH 6,5) tika sajaukti. Pēc tam pievienoja 38 ml 2100 U/ml sēņu tirozināzes un samaisa. Pēc 0.{16}}h inkubācijas 37 grādu temperatūrā absorbcija tika mērīta ar mikroplašu lasītāju pie 475 nm (Thermo Fisher, ASV). Tirozināzes aktivitātes inhibīcijas procentuālais daudzums tika aprēķināts pēc šādas formulas: tirozināzes inhibīcijas procents=[(A-kontrole — A-paraugs) / A-kontrole] × 100, kur A-kontrole apzīmē absorbciju pie 475 nm bez paraugs un A-paraugs atspoguļo absorbciju pie 475 nm ar paraugu.

Šūnu kultūras un dzīvotspējas tests

Peles B16F10 melanomas šūnas tika iegādātas no Biochemistry and Cell Biology (Ķīna). Šūnas tika turētas Dulbecco modificētajā ērgļa barotnē (DMEM), kas papildināts ar 10% liellopu augļa serumu (FBS), 100 mg/ml streptomicīna un 100 SV/ml penicilīna 37 grādu temperatūrā mitrā vidē, kas satur 5 procentus CO2. Šūnas tika iesētas uz kultivēšanas plāksnēm un papildinātas ar dažādām paraugu koncentrācijām un a-melanocītu stimulējošu hormonu (a-MSH) 72 stundas, lai izmērītu intracelulāro tirozināzes aktivitāti un kvantitatīvi noteiktu melanīna saturu.

Lai pārbaudītu šūnu dzīvotspēju, tika veikts 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolija bromīda (MTT) tests (20). Īsumā, 96-iedobju plāksnes tika iesētas ar peles B16F10 melanomas šūnām. Katrā iedobē tika pārnests 50 ml tilpums 2 mg / ml MTT pēc apstrādes ar 100 ml dažādu paraugu koncentrāciju 24 stundas. Pēc 4-h inkubācijas reakcija tika pārtraukta un tika pievienots dimetilsulfoksīds, lai izšķīdinātu nešķīstošo iegūto vielu. Absorbcija tika mērīta pie 590 nm ar mikroplašu lasītāju.

Melanīna satura mērīšana

Melanīna satura noteikšana tika veikta ar nedaudz modificētu metodi (21). Pēc mazgāšanas ar ledus PBS melanomas šūnas (2 × 104 šūnas katrā iedobē) tika iesētas 96- iedobes plāksnē un inkubētas 37 grādu temperatūrā 48 stundas. Pēc tam katrai iedobei pievienoja 100 ml NaOH (1 N), lai 30 minūtes izšķīdinātu melanomas šūnas 80 grādos. Lizāts tika centrifugēts pie 15,000 g 15 minūtes (4 grādi). Pēc tam absorbcija tika mērīta ar mikroplašu lasītāju pie 405 nm. Visi eksperimenti tika veikti trīs eksemplāros.

Intracelulārās tirozināzes aktivitātes tests

Intracelulārās tirozināzes aktivitātes tests tika veikts saskaņā ar iepriekšējo literatūru ar nelielām modifikācijām (22). Īsumā, melanomas šūnas tika lizētas ar līzes buferi (1 mM PMSF, 1 procents Triton X-100, 20 mM nātrija fosfāts), sasaldējot-atkausējot. Pēc lizāta centrifugēšanas ar ātrumu 15, 000 g 10 min (4 grādi) olbaltumvielu saturs supernatantā tika noteikts ar bicinhonīnskābes (BCA) testu. Supernatanta proteīns (10 mg) tika pārnests uz 100 ml reakcijas maisījuma (0,1% L-DOPA un 0,1 M fosfāta buferšķīdums). Pēc 60 minūšu inkubācijas 37 grādu temperatūrā tirozināzes aktivitāte tika mērīta ar mikroplašu lasītāju pie 450 nm. Visi eksperimenti tika veikti trīs eksemplāros.

Dzelzs dzelzs samazina jaudu

Dzelzs dzelzs samazināšanas jaudas tests tika veikts saskaņā ar iepriekš publicētu metodi ar nelielām modifikācijām (23). Dažādas paraugu koncentrācijas (2 ml) vai Vc (pozitīvā kontrole) tika sajauktas ar 2 ml kālija fericianīda (1 procents, W/V) un 2 ml fosfāta buferšķīduma (0,2 M, pH 6,8). Pēc inkubācijas 50 grādos 30 minūtes, reakcijas maisījumā tika pārnests 2 ml trihloretiķskābes (10 procenti, W/V) un centrifugēts pie 4000 g 15 minūtes (22 grādi). Supernatants (2 ml) tika sajaukts ar maisījumu, kas satur 2 ml destilēta ūdens un 0,4 ml FeCl3 (0,1 procents, W/V). Pēc 10 minūšu inkubācijas 37 grādu temperatūrā absorbcija tika mērīta ar mikroplašu lasītāju pie 700 nm.

DPPH radikāļu attīrīšanas aktivitātes tests

DPPH attīrīšanas aktivitātes tests tika veikts, kā ziņots iepriekš ar dažām modifikācijām (24). Īsumā, 2 ml parauga tika pievienoti 2 ml 0,1 mM DPPH šķīduma un maisīja vorteksā. Pēc 30 minūšu inkubācijas tumsā absorbcija tika mērīta ar mikroplašu lasītāju pie 517 nm.

Olbaltumvielu ekspresijas analīze ar Western blot

cistanche supplement whitening

Pēc apstrādes ar dažādu koncentrāciju ECPS 72 stundas, šūnas tika mazgātas ar PBS un lizētas RIPA buferšķīdumā (150 mM NaCl 50 mM pH 8.0 Tris-HCl , 0,5 procenti nātrija deoksiholāta, 1,0 procenti nediētiskā P-40 un 0,1 procenti nātrija dodecilsulfāta). Pēc centrifugēšanas pie 10,000 g 25 minūtes (4 grādi) tika savākts lizātu supernatants. Olbaltumvielas tika pakļautas 12% SDS-PAGE un pēc tam pārnestas uz polivinilidēna difluorīda membrānu. Bloķēšana tika veikta Tris buferētā fizioloģiskā šķīdumā ar Tween-20 un 2% vājpiena pulveri (TBST), un pēc tam inkubēja 12 stundas 4 grādu temperatūrā. Galvenās izmantotās antivielas bija: anti-aktīns (1:5000), anti-TRP-1 (1:500), anti-tirozināze (1:500) un anti-MITF (1:1000). Primārās antivielas tika noņemtas, un membrānas divas reizes notīrīja ar TBST. Pēc tam membrānas ar mārrutku peroksidāzi konjugētu sekundāro antivielu (Santa Cruz, ASV) inkubēja 60 minūtes istabas temperatūrā. Olbaltumvielu joslas atkal tika mazgātas ar TBST un vizualizētas ar ECL komplektu (Amersham Pharmacia Biotech, ASV), izmantojot UVP attēlveidošanas sistēmu (UVP, ASV).

Statistiskā analīze

Visi rezultāti tiek ziņots kā vidējie ± SD, un eksperimenti tika atkārtoti trīs reizes. Salīdzinājumi starp grupām tika novērtēti, izmantojot ANOVA, kam sekoja Daneta tests. Atsevišķi salīdzinājumi starp divām grupām tika veikti ar Stjudenta t-testu. Visas statistiskās analīzes tika veiktas, izmantojot SPSS programmatūru (versija 16.0). Po0.05 parasti tika uzskatīts par statistiski nozīmīgu.

Rezultāti

Mw un kopējie ECPS un CPS polisaharīdi

Kopējais ECPS un CPS polisaharīdu saturs, ko mēra ar fenola-sērskābes testu, bija attiecīgi 89,17 un 90,26 procenti. Tikmēr ECPS un CPS Mw mērīja ar SEC-MALLS-RI. ECPS Mw bija 211,7 kDa, kas bija mazāks nekā CPS (434,6 kDa). 1.A attēlā parādīta relatīvā intensitāte (RI) ECPS un CPS; pēc mannozes fermentatīvās hidrolīzes ECPS maksimālais aiztures laiks bija garāks nekā CPS. Kā parādīts 1B attēlā, polisaharīdu diferenciālās svara daļas tika attēlotas kā paraugu molārās masas funkcija. Polisaharīdu molārās masas sadalījums būtiski mainījās fermentatīvās hidrolīzes rezultātā. ECPS diferenciālā svara daļa zemā Mw reģionā palielinājās, kas liecināja, ka CPS tika fermentatīvi sadalīts zema Mw polisaharīdā.

rou cong rong benefits

Polisaharīdu antioksidanta darbība

ECPS un CPS DPPH brīvo radikāļu attīrīšanas spējas ir parādītas 2A attēlā. Polisaharīdu paraugu un Vc brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitātes uzrādīja no devas atkarīgu aktivitāti. Pašreizējā pētījumā CPS brīvo radikāļu attīrīšanas spēja bija zemāka nekā ECPS. Tomēr abiem bija mazāks brīvo radikāļu attīrīšanas efekts nekā pozitīvajam paraugam. ECPS un CPS IC50 vērtības bija attiecīgi 0,39 un 0,51 mg/ml. Kā parādīts 2.B attēlā, kopējo antioksidantu aktivitāti var novērtēt, pārbaudot dzelzs dzelzs reducējošo spēju. Koncentrācijas svārstījās no 0,1 līdz 1 mg/ml; gan polisaharīdu paraugi, gan Vc uzrādīja antioksidantu aktivitāti no devas atkarīgā veidā. Turklāt ECPS absorbcijas vērtība vienmēr bija augstāka nekā CPS tajā pašā koncentrācijā.

ECPS un CPS ietekme uz sēņu tirozināzes aktivitāti un šūnu dzīvotspēju

Kā parādīts 2.C attēlā, polisaharīdu tirozināzes inhibējošā aktivitāte (0.1B1 mg/ml) uzrādīja no devas atkarīgu saistību. Turklāt ECPS inhibējošā iedarbība vienmēr bija augstāka nekā CPS tādā pašā koncentrācijā. MTT tests tika veikts, lai novērtētu ECPS un CPS citotoksisko iedarbību B16F10 melanomas šūnās. Kā parādīts 2.D attēlā, nebija būtisku izmaiņu B16F10 šūnu dzīvotspējā ar dažādām ECPS un CPS koncentrācijām (0B320 mg/ml). Pamatojoties uz šiem rezultātiem, mēs izmantojām šos koncentrācijas diapazonus

turpmāka izpēte.

cistanche for sale

ECPS un CPS ietekme uz intracelulāro tirozināzes aktivitāti un melanīna saturu

Lai salīdzinātu ECPS un CPS ietekmi uz intracelulārās tirozināzes un melanoģenēzes aktivitāti B16F10 melanomas šūnu modelī, ECPS un CPS inhibējošo spēju uz melanīna saturu un tirozināzes aktivitāti a-MSH stimulētajā B16F1{{ Tika pārbaudītas 16}} šūnas. Kā parādīts 3. attēlā, B16F10 šūnu melanīna saturs un tirozināzes aktivitāte bija ievērojami palielināta, salīdzinot ar nestimulētajām B16F10 šūnām (Po 0.01). Koncentrācijā 40 mg/mL (ECPS) un 160 mg/ml (CPS) melanīna satura palielināšanos var mazināt atkarībā no devas (Po0,01 un Po0,05). Līdzīgi apstrāde ar ECPS (40 mg/ml) un CPS (160 mg/ml) nomāca B16F10 šūnu tirozināzes aktivitāti (Po 0,01 un Po0,05). Turklāt ECPS uzrādīja augstāku tirozināzes inhibējošo aktivitāti uz melanoģenēzi nekā CPS. ECPS (160 un 320 mg/ml) radīja pretmelanoģenēzes efektu, kas ir salīdzināms ar pozitīvo kontroli (Kojic acid), ko plaši izmanto kā ādu balinošu bioaktīvu savienojumu.

how to take rou cong rong

ECPS ietekme uz tirozināzes, MITF un TRP{0}} proteīna līmeni B16F10 šūnās

Kā parādīts 4. attēlā, ECPS būtiski samazināja tirozināzes, MITF un TRP-1 proteīna ekspresijas līmeni B16F10 šūnās atkarībā no devas (Po0.05 un Po0. 01). Šie rezultāti liecina, ka ECPS inhibēja tirozināzes ekspresiju, samazinot TRP-1 un MITF proteīnu ekspresiju.

Diskusija

C. chinensis dabīgie polisaharīdi ir saņēmuši uzmanību, jo tie labi ietekmē tirozināzes inhibīciju, brīvo radikāļu attīrīšanu un ādas aizsardzību (25–27). Tomēr maz pētījumu ir vērsti uz polisaharīdu fermentatīvās modifikācijas antimelanoģenēzes aktivitāti. Iepriekšējie pētījumi ir parādījuši, ka fermentatīvās hidrolīzes procesā noārdītajiem polisaharīdiem ir izcila brīvo radikāļu attīrīšanas iedarbība (28). Turklāt polisaharīdu bioloģiskās aktivitātes ir cieši saistītas ar to Mw sadalījumu. Teorētiski zema Mw polisaharīdi ir aktīvāki nekā augsta Mw polisaharīdi, jo tiem ir augsta iespiešanās īpašība šūnu membrānās (29, 30). Tomēr ECPS antimelanoģenēzes ietekme uz B16F10 šūnām vēl nebija pētīta. Zema Mw polisaharīds tika pagatavots ar fermentatīvu hidrolīzi ar mannozi.

Oksidatīvais stress var radīt pārmērīgu brīvo radikāļu veidošanos un izraisīt oksidatīvus bojājumus. Iepriekšējie pētījumi ir pierādījuši, ka ādas slimības ir cieši saistītas ar brīvo radikāļu uzkrāšanos (31). Turklāt pārmērīgiem brīvajiem radikāļiem ir būtiska nozīme melanomas šūnu melanoģenēzes un melanocītu augšanas nomākšanā (32). Tirozināze ir daudzfunkcionāls oksidētājs, kas satur bronzu un ir ļoti svarīgs melanīna biosintēzes veicināšanā (33). Tomēr ādas pigmentācija un dažādas ādas slimības ir cieši saistītas ar melanīna uzkrāšanos un rada nopietnu estētisku problēmu (34).

Aktīvās sastāvdaļas ar antioksidantu un antitirozināzi spēj aizsargāt ādu un kavēt melanoģenēzi (35). Mūsu rezultāti ir parādījuši, ka mazākam enzīmi modificēto polisaharīdu Mw bija augstākas antioksidantu un antitirozināzes aktivitātes nekā sākotnējiem polisaharīdiem in vitro. Uzlabojums ir saistīts ar lielāku virsmas laukumu un labāku šķīdību ūdenī, kas atbilda iepriekšējam pētījumam (17), kas parādīja, ka noārdītajam Sargassum fusiforme polisaharīdam ir augstāka antitirozināzes aktivitāte un antioksidanta aktivitāte nekā sākotnējam polisaharīdam.

cistanche reddit whitening

Normāli melanocīti atrodas ādas epidermas un dermas krustojumā un rada melanīnu, kas tiek pārnests uz keratinocītiem (36). Šajā pētījumā tika izmantotas peles B16F10 melanomas šūnas, jo tām ir melanogēni mehānismi, ir zināms, ka tām ir intracelulāra tirozināze un tās var radīt melanīnu, kas ir saistīts ar a-MSH stimulāciju un melanoģenēzi (37). Tirozināzes aktivitāte, melanīna saturs un šūnu dzīvotspēja bija in vitro testi, ko šajā pētījumā izmantoja, lai pārbaudītu antimelanoģenēzi. CPS un ECPS uzrādīja no devas atkarīgu inhibējošu iedarbību uz tirozināzes aktivitāti un melanīna sintēzi B16F10 šūnās. ECPS uzrādīja spēcīgāku anti-melanīna sintēzi un anti-tirozināzes efektu.
Ar tirozināzi saistītajam proteīnam-1 (TRP-1) un tirozināzei ir būtiska nozīme melanīna biosintēzes un melanoģenēzes ceļos (38). MITF ir tirozināzes gēna šūnu transkripcijas faktors, kas piedalās melanoģenēzē. Parasti TRP-1 un tirozināzes aktivizēšana uzlabo MITF proteīna ekspresiju un izraisa melanīna sintēzes palielināšanos (39). Tādējādi ādas balināšanas līdzekļiem var būt īpašība inhibēt signālu ceļu, kas saistīts ar TYP-1 vai tirozināzes aktivāciju. Tāpēc mēs pētījām ECPS ietekmi uz TRP-1, šūnu tirozināzes un MITF proteīnu ekspresiju, lai izpētītu mehānismus, kas ir pamatā tirozināzes aktivitātes un melanoģenēzes inhibīcijai. Western blot testa rezultāti parādīja, ka ECPS nomāca TRP-1, tirozināzes un MITF ekspresiju B16F10 šūnās un nozīmēja, ka ECPS samazināja melanoģenēzi, samazinot tirozināzes, MITF un TRP{12}} ekspresiju. B16F10 melanomas šūnās. Rezultāts tika iegūts no iepriekšējā pētījuma, kas parādīja, ka ūdens ekstrakts no Cuscuta japonica sēklām būtiski inhibēja a-MSH izraisīto melanīna sintēzi un tirozināzes aktivitāti, nomācot p38 MAPK fosforilāciju, inhibējot cAMP līmeni un pēc tam samazinot TRP un MITF ekspresiju (40). .
Rezumējot, fermentatīvi modificētajam polisaharīdam bija labāka antioksidanta un anti-melanogēna iedarbība nekā sākotnējam polisaharīdam. Turklāt šo ECPS anti-melanogēno efektu izraisīja TRP-1, tirozināzes un MITF ekspresijas nomākšana peles B16F10 šūnās. ECPS var izmantot kosmētikas un medicīnas produktu jomā.

Pateicības

Šo darbu atbalstīja Ķīnas Nacionālais dabaszinātņu fonds (granta Nr. 81373640).

Atsauces

1. Railijs PA. Melanoģenēze un melanoma. Pigment Cell Research 2003; 16: 548–552, doi: 10.1034/j.{7}}. 2003.00069.x.
2. Ortonne JP, Bissett DL. Jaunākie ieskati ādas hiperpigmentācijā. J Investig Dermatol Symp Proc 2008; 13: 10–14, doi: 10.1038/jidsymp.2008.7.
3. Arung ET, Kuspradini H, Kusuma IW, Shimizu K, Kondo R. Validation of Eupatorium triplinerve Vahl leaves, a skincare herb from East Kalimantan, Using a Melanin Biosynthesis Assay. J Acupunct Meridian Stud 2012; 5: 87–92, doi: 10.1016/ j.jams.2012.01.003.
4. Kobayashi T, Urabe K, Winder A, Jiménez-Cervantes C, Imokawa G, Brewington T u.c. Ar tirozināzi saistītais proteīns 1 (TRP1) darbojas kā DHICA oksidāze melanīna biosintēzē. EMBO J 1994; 13: 5818–5825.
5. Kostins GE, dzirdes vīdžejs. Cilvēka ādas pigmentācija: melanocīti modulē ādas krāsu, reaģējot uz stresu. FASEB J 2007; 21: 976–994, doi: 10.1096/fj.{7}}rev.
6. Galván I, Alonso-Alvarez C. Intracelulārs antioksidants nosaka melanīna bāzes signāla izpausmi putnam. PLoS One 2008; 3: e3335, doi: 10.1371/journal.pone. 0003335.
7. Yang J, Wang Y, Bao Y, Guo J. Kopējie flavoni no spermas auskultē apvērš testosterona līmeņa samazināšanos un androgēnu receptoru gēna ekspresiju pelēm ar nieru-jaņ deficītu. J Etnopharmacol 2008; 119: 166–171, doi: 10.1016/j.jep.2008.06.027.
8. Donnapee S, Li J, Yang X, Ge AH, Donkor PO, Gao XM u.c. Cuscuta chinensis Lam.: sistemātisks pārskats par svarīgu tradicionālo augu izcelsmes zāļu etnofarmakoloģiju, fitoķīmiju un farmakoloģiju. J Etnopharmacol 2014; 157: 292–308, doi: 10.1016/j.jep.2014.09.032.
9. Nisa M, Akbar S, Tariq M, Hussain Z. Cuscuta chinensis ūdens ekstrakta ietekme uz 7,12-dimetilbenz[a]antracēna izraisītām ādas papilomām un karcinomām pelēm. J Ethnophar macol 1986; 18: 21–31, doi: 10.1016/0378-8741(86)90040-1.
10. Wang TJ, An J, Chen XH, Deng QD, Yang L. Cuscuta chinensis sēklu ietekmes uz melanoģenēzi novērtējums: ūdens un etanola frakciju salīdzinājums in vitro un in vivo. J Etnopharmacol 2014; 154: 240–248, doi: 10.1016/j.jep. 2014.04.016.
11. Sun SL, Guo L, Ren YC, Wang B, Li RH, Qi YS u.c. No Cuscuta chinensis Lam sēklām izolēta polisaharīda antiapoptozes iedarbība uz kardiomiocītiem novecojošām žurkām. Mol Biol Rep 2014; 41: 6117–6124, doi: 10,1007/s11033- 014-3490-1.
12. Wang Z, Fang JN, Ge DL, Li XY. No Cuscuta chinensis Lam sēklām izolēta skābā polisaharīda ķīmiskais raksturojums un imunoloģiskās aktivitātes. Acta Pharmacol Sin 2000; 21: 1136–1140.
13. Yang S, Xu X, Xu H, Xu S, Lin Q, Jia Z u.c. Spermas muskuļu polisaharīdu attīrīšana, raksturojums un bioloģiskā ietekme, kas novērš nieru-jaņ deficītu. Ogļhidrātu polims 2017; 175: 249–256, doi: 10.1016/j.carbpol. 2017.07.077.
14. Katayama S, Nishio T, Nishimura H, Saeki H. Imūnmodulējošās īpašības ļoti viskoza polisaharīda ekstraktam no Gagome aļģēm (Kjellmaniella crassifolia). Augu pārtika Human Nutr 2012; 67: 76–81, doi: 10,1007/s11130-011- 0271-z.
15. Pengzhan Y, Ning L, Xiguang L, Gefei Z, Quanbin Z, Pengcheng L. Antihiperlipidēmiskā iedarbība dažādu molekulmasu sulfātu polisaharīdu no Ulva pertusa (Chlorophyta). Pharmacol Res 2003; 48: 543–549, doi: 10.1016/ S1043-6618(03)00215-9.
16. Jiang Y, Qi X, Gao K, Liu W, Li N, Cheng N u.c. Saistība starp Astragalus polisaharīdu molekulmasu, monosaharīdu sastāvu un imūnbioloģisko aktivitāti. Glycoconj J 2016; 33: 755–761, doi: 10.1007/s10719-016-9669-z.
17. Chen BJ, Shi MJ, Cui S, Hao SX, Hider RC, Zhou T. Uzlabota antioksidanta un anti-tirozīna aktivitāte polisaharīdam no Sargassum fusiforme, sadaloties. Int J Biol Macromol 2016; 92: 715–722, doi: 10.1016/j.ijbiomac. 2016.07.082.
18. McCleary BV. Augu polisaharīdu fermentatīvā modifikācija. Int J Biol Macromol 1986; 8: 349–354, doi: 10.1016/ 0141-8130(86)90054-1.
19. Baurin N, Arnoult E, Scior T, Do QT, Bernard P. Dažu tropu augu provizoriskā skrīnings antitirozināzes aktivitātes noteikšanai. J Etnopharmacol 2002; 82: 155–158, doi: 10.1016/S0378- 8741(02)00174-5.
20. Mosmann T. Ātrā kolorimetriskā pārbaude šūnu augšanai un izdzīvošanai: pielietojums proliferācijas un citotoksicitātes pārbaudēm. J Immunol Methods 1983; 65: 55–63, doi: 10.1016/0022- 1759(83)90303-4.
21. Hosoi J, Abe E, Suda T, Kuroki T. B16 peles melanomas šūnu melanīna sintēzes regulēšana ar 1 alfa, 25-dihidroksi D3 vitamīnu un retīnskābi. Cancer Res 1985; 45: 1474–1478.
22. Wang HM, Chen CY, Wen ZH. Cinnamomum subavenium melanoģenēzes inhibitoru identificēšana ar in vitro un in vivo skrīninga sistēmām, mērķējot uz cilvēka tirozināzi. Exp Dermatol 2011; 20: 242–248, doi: 10.1111/j.{7}}. 2010.01161.x.

23. Berker KI, Güc ¸lü K, Tor I˙, Apak R. Fe (III) samazināšanas antioksidantu kapacitātes testu salīdzinošs novērtējums fenantrolīna, bat-ho-fenantrolīna, tripiridiltriazīna (FRAP) un fericianīda klātbūtnē. reaģenti. Talanta 2007; 72: 1157-1165, doi: 10.1016/j.talanta.2007.01.019.

24. Parejo I, Codina C, Petrakis C, Kefalas P. Ko(II)/EDTA izraisītas luminola hemiluminiscences un DPPH ● (2,2-difenil-1 pikrilhidroksilgrupas) novērtētās attīrīšanas aktivitātes novērtējums ) brīvo radikāļu tests. J Pharmacol Toxicol Methods 2000; 44: 507–512, doi: 10.1016/S1056-8719(01)00110-1.

25. Rout S, Banerjee R. No Punica granatum mizas izolētas polisaharīda frakcijas brīvo radikāļu attīrīšanas, antiglikācijas un tirozināzes inhibīcijas īpašības. Bioresurss
Technol 2007; 98: 3159–3163, doi: 10.1016/j.biortech.2006. 10.011.
26. Yu P un Sun H. Fukoidāna attīrīšana no brūnaļģes polisaharīda un tā inhibējošā kinētika pret tirozināzi. Ogļhidrātu polimēri 2014; 99: 278-283, doi: 10.1016/ j.carbpol.2013.08.033.
27. Wei X, Liu Y, Xiao J, Wang Y. Tējas polisaharīdu un polifenolu aizsargājošā iedarbība uz ādu. J Agric Food Chem 2009; 57: 7757–7762, doi: 10.1021/jf901340f.
28. Xu J, Xu LL, Zhou QW, Hao SX, Zhou T, Xie HJ. Pastiprināta Enteromorpha prolifera polisaharīdu antioksidanta aktivitāte in vitro, izmantojot fermentatīvu noārdīšanos. J Food Biochem 2016; 40: 275–283, doi: 10.1111/jfbc.12218.
29. Zhou J, Hu N, Wu Yl, Pan Yj, Sun CR. Sākotnējie pētījumi par Sargassum fusiforme skābo polisaharīdu ķīmisko raksturojumu un antioksidanta īpašībām. J Zhejiang Univ Sci B 2008; 9: 721–727, doi: 10.1631/jus. B0820025.
30. Wu Q, Zheng C, Ning ZX, Yang B. Mazmolekulāro polisaharīdu modifikācijas no Tremella fuciformis un to antioksidanta aktivitāte in vitro. Int J Mol Sci 2007; 8: 670–679, doi 10.3390/i8070670.
31. Yasui H, Sakurai H. No vecuma atkarīga reaktīvo skābekļa sugu paaudze dzīvu bezspalvu žurku ādā, kas pakļauta UVA gaismai. Exp Dermatol 2003; 12: 655–661, doi: 10.1034/j.1600-0625.2003.00033.x.
32. Yamakoshi J, Otsuka F, Sano A, Tokutake S, Saito M, Kikuchi M u.c. Izgaismojošs efekts uz ultravioletā starojuma izraisītu jūrascūciņu ādas pigmentāciju, iekšķīgi ievadot ar proantocianidīnu bagātu ekstraktu no vīnogu sēklām. Pigment Cell Res 2003; 16: 629–638, doi: 10.1046/j.{9}}. 2003.00093.x.
33. Strothkamp KG, Jolley RL, Mason HS. Sēņu tirozināzes kvartāra struktūra. Biochem Biophys Res Commun 1976; 70: 519–524, doi 10.1016/0006-291X(76)91077-9.
34. Parvez S, Kang M, Chung HS, Bae H. Dabiski sastopami tirozināzes inhibitori: mehānisms un pielietojums ādas veselības, kosmētikas un lauksaimniecības nozarēs. Phytother Res 2007; 21: 805–816, doi: 10.1002/ptr.2184.

35. Perluigi M, De Marko F, ​​Foppoli C, Coccia R, Blarzino C, Luisa Marcante M u.c. Tirozināze aizsargā cilvēka melanocītus no ROS veidojošiem savienojumiem. Biochem Biophys Res Commun 2003; 305: 250–256, doi: 10.1016/S0006- 291X(03)00751-4.

36. Hirobe T. Kā tiek regulēta melanocītu proliferācija un diferenciācija? Pigment Cell Melanoma Res 2011; 24: 462–478, doi: 10,1111/j.{7}}X.2011.00845.x.
37. Buscà R, Ballotti R. Cikliskais AMP ir galvenais vēstnesis ādas pigmentācijas regulēšanā. Pigment Cell Res 2000; 13: 60–69, doi: 10.1034/j.{7}}.2000.130203.x.
38. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Melanīna pigmentācija zīdītāju ādā un tās hormonālā regulēšana. Physiol Rev 2004; 84: 1155–1228, doi: 10.1152/physrev. 00044.2003.
39. Shibahara S, Yasumoto KI, Amae S, Udono T, Watanabe KI, Saito H u.c. Pigmenta šūnu specifiskās gēnu ekspresijas regulēšana ar MITF. Pigment Cell Res 2000; 13: 98-102, doi: 10.1034/j.1600-0749.13.s8.18.x.
40. Jang JY, Kim HN, Kim YR, Choi YH, Kim BW, Shin HK u.c. Cuscuta japonica sēklu ūdens frakcija nomāc melanīna sintēzi, inhibējot p38 mitogēna aktivētu proteīnkināzes signālu ceļu B16F10 šūnās. J Etnopharmacol 2012; 141: 338–344, doi: 10.1016/j.jep. 2012.02.043.
Jums varētu patikt arī