Ehinakozīda un akteozīda ražošanas uzlabošana ar divpakāpju ierosināšanu Cistanche Deserticola šūnu suspensijas kultūrā

lai iegūtu plašāku informāciju:ali.ma@wecistanche.com

Wen-Hao Chen et al

Abstrakts

Atbilstošās koncentrācijās poliamīni veicināja kallusa augšanu unehinakozīdssatursCistanche deserticolasavukārt Ag plus palielināja saturuehinakozīdsunakteozīds. 20-dienu kultivēšanas periodā, kad putrescīns (25 lM) un Ag plus (10 lM) tika pievienots attiecīgi 8. un 16. dienā,ehinakozīdsražošana(1,7 gl–1) unakteozīdsražošanas apjoms (0.4 gl–1) sasniedza maksimumu, kas bija 1.4-reize un 1.5-reize no tiem vienreizējai putrescīna apstrādei, 1.6-reize un 1.{10}}attiecīgi vienā Ag plus ārstēšanā. Eksogēnais putrescīns uzlaboja šūnu dzīvotspēju un antioksidantu enzīmu aktivitāti, tādējādi ievērojami palielinot galīgo biomasu. Ag plus pievienošana ievērojami palielināja H2O2 saturu un fenilalanīna amonjaka-lizāzes aktivitāti, kas izraisīja augstākuehinakozīdsunakteozīdssaturu.

Atslēgvārdiakteozīds,Cistanche deserticola, Ehinakozīds, Elicitor, Suspensijas kultūra

Saīsinājumi

APOX askorbāta peroksidāze

CAT katalāze

H2O2 Ūdeņraža peroksīds

PAL Fenilalanīna amonjaka liāze

PeGs feniletanola glikozīdi

ROS reaktīvās skābekļa sugas

SOD superoksīda dismutāze

Cistanche deserticola

Noklikšķiniet uz Cistanche UK un Cistanche ekstrakta produktiem

Ievads

Cistanche deserticolaYC Ma tiek plaši izmantots tradicionālajā ķīniešu medicīnā. Feniletanoīdu glikozīdi (PeG) ir galvenās bioaktīvās sastāvdaļas šajā augā. Starp PeG,ehinakozīdsunakteozīdsir galvenie komponenti seksuālās potences uzlabošanai, imūnās funkcijas regulēšanai, brīvo radikāļu attīrīšanai un pretnovecošanās īpašībām (Song et al. 2003). Pārmērīgas izmantošanas, sarežģītas audzēšanas un noplicinātas vides dēļ savvaļas Cistanche deserticolaaugi atrodas uz izmiršanas robežas. Augu šūnu kultūra var būt pievilcīga alternatīva šo bioloģiski aktīvo komponentu iegūšanai. Galvenās problēmas, ar kurām saskaras in vitro kultūraCistanche deserticolair zems biomasas un zems PeG saturs. Tika ziņots, ka daudzi provocētāji stimulē PeGsintēzi (Cheng et al. 2005, 2006; Lu un Mei 2003; Ouyang et al. 2003a; Xu et al. 2005), bet diemžēl lielākā daļa izsaucēju samazināja šūnu biomasu.

Pēdējos gados augu šūnu suspensijas kultūrā ir pētīta dažādu izsaucēju kombinācija. Sakarā ar dažādu elicitoru atšķirību, dažādu elicitoru kombinācija var panākt sinerģisku efektu. Elicitorus var pievienot vienlaikus, piemēram, Taxus spp. suspensijas kultūrā. (Yuan et al. 2002) un žeņšeņs (Bae et al. 2006). No otras puses, pievienojot dažādus stimulatorus attiecīgi biomasas augšanas un sekundāro metabolītu ražošanas stadijā, tika panākta maksimālā biomasas un taksola produkcija Taxus baccata suspensijas kultūrā ( Khosroushahiet al. 2006). Tomēr ir pieejami daži ziņojumi par kombinējošo elicitoru izmantošanu šūnu kultūrā Cistanche deserticola.

EhcinakozīdsiekšāCistanche deserticola

Iepriekšējie ziņojumi parCistanche deserticolakoncentrējās uz PeG satura palielināšanu, bet tādi stimulatori kā poliamīni biomasas veicināšanai tika daļēji ignorēti. Poliamīni var veicināt kallusa biomasu, uzlabojot šūnu proliferāciju un atvieglojot šūnu novecošanos (Bais un Ravishankar 2002). Nesen tika ziņots, ka poliamīni ir iesaistīti mijiedarbībā ar etilēnu un abiotisko stresa toleranci, savukārt etilēns un reaktīvās skābekļa sugas (ROS) no abiotiskā stresa izraisīja šūnu novecošanos un nāvi (Cona et al. 2006). No otras puses, oksidatīvais stress, ko izraisīja elicitori, izraisīja ROS, tostarp ūdeņraža peroksīda (H2O2) un superoksīda anjona (O2–) uzkrāšanos, kas, kā ziņots, veicina ieprogrammētu šūnu nāvi un sekundāro metabolītu sintēzi kā signāla molekulas (Yuan et al. 2001). Sju un Dongs, 2005). Piemēram, H2O2 inducēja fenilalanīna amonjaka liāzes (EC 4.3.1.5) gēnu ekspresiju, kas ir galvenais aizsardzības reakcijas un sekundārā metabolisma enzīms (Desikan et al. 1998), kas regulēja PeG veidošanos šūnu kultūrāCistanche deserticola(Cheng et al. 2005; Ouyanget al. 2003a). Ņemot vērā oksidatīvo stresu, daži metālu joni, piemēram, Ni2 plus, Co2 plus, Ag plus, daudzos augos efektīvi veicināja sekundāro metabolītu sintēzi (Zhao et al. 2005). Iespējams, tie var uzlabot PAL aktivitāti un PeG veidošanos. Šajā pētījumā tika izmantoti poliamīni un metālu joni, kā arī šo ierosinātāju kombinācija, lai veicinātu kallusa augšanu,ehinakozīds, unakteozīdssaturs Cistanche deserticola. Papildus tika pētīta arī saistība starp elicitoru un H2O2 saturu, kā arī to ietekme uz PAL un antioksidantu enzīmu darbību.

materiāli un metodes

Augu materiāli

Cistanche deserticolašūnu līnijas tika inducētas no stumbra. Pēc sterilizācijas stublāju sagrieza apmēram 1 cm3 lielos gabalos un kultivēja B5 barotnē (Gamborg et al. 1968), kas satur 5 lM naftalīnetiķskābi (NAA), 9 lM 6-benziladenīna (6-BA), 4 lM 2,4-dihlorfenoksietiķskābe (2,4-D) un 30 g saharozes l–1. Pēc 30 dienām gaiši dzeltenais kalluss tika izņemts un subkultivēts B5 barotnē ar 5 lMNAA, 9 lM 6-BA un 1 lM 2,4-D, un šūnu suspensijas kultūra tika izveidota saskaņā ar metodēm. ofOuyang et al. (2003b).

Kalusa kultūra

Apmēram 1,5 g svaiga kallusa (0,125 g DW) no 20-dienu vecas suspensijas kultūrasCistanche deserticolatika inokulēts 250- ml Erlenmeijera kolbā, kas satur 50 ml B5 barotnes. Pirms autoklāvēšanas B5 barotne tika papildināta ar 5 lM NAA, 9 lM 6-BA, 1 lM 2,4-D un 30 g saharozes l–1 ar pH 5,6. Visi eksperimenti tika veikti ar trīs atkārtojumiem 25 grādu temperatūrā tumsā uz rotācijas kratītāja (110 apgr. min–1) 20 dienas.

ActedosieiekšāCistanche deserticola

Izraisošas procedūras

Vienā ierosināšanas eksperimentā barotnei tika pievienoti filtrēti putrescīna (Put), spermīna (Spm), spermidīna (Spd), sudraba nitrāta un kobalta hlorīda šķīdumi paredzētajās koncentrācijās, lai izpētītu to ietekmi uz oncallus augšanu un PeG saturu. Ar optimālu elicatora veidu un koncentrāciju tika pētīta barošanas laika ietekme. Pēc tam, pamatojoties uz optimālo koncentrāciju un barošanas laiku, tika izstrādāta dažādu ierosinātāju kombinācija, lai uzlabotu PeG ražošanu divpakāpju ierosināšanas eksperimentā. Kalusa kultūra bez izsaucējiem darbojās kā kontrole. Lai izpētītu ierosinātāju darbības mehānismu, kalluss tika izņemts paredzētajā laikā pēc elicitora pievienošanas turpmākai analīzei divu stageelicitācijas eksperimentā.

Bioķīmiskie testi

Paredzētajā laikā pēc elicatora pievienošanas šūnas tika filtrētas un viegli mazgātas ar destilētu ūdeni. Pēc tam šūnu dzīvotspēju noteica ar 2,3,5-trifeniltetrazolija hlorīda krāsošanu pēc Verleysenet al. (2004), Dzīvotspējas indekss ir definēts kā absorbcija, kas mērīta uz gramu svaigu audu. Svaigu šūnu H2O2 saturs tika noteikts pēc Velikova et al. metodes. (2000). Fenilalanīna amonjaka liāzes (PAL) aktivitātes noteikšana (EC 4.3.1.5) tika balstīta uz Koukol un Conn (1961) metodi. Superoksīda dismutāzes (SOD) (EC1.15.1.1), katalāzes (CAT) (EC 1.11.1.6), askorbāta peroksidāzes (APOX) ekstrakcijai un noteikšanai izmantotās metodes bija tādas pašas kā Jebara et al. (2005).

Biomasas, ehinakozīda un akteozīda mērīšana

Lai noteiktu sauso svaru (DW), kaluss tika filtrēts un mazgāts ar destilētu ūdeni un pēc tam liofilizēts līdz nemainīgam svaram, lai reģistrētu sauso svaru.

Sausās šūnas (20 mg) ekstrahēja ar 10 ml 50% (v/v) metanola istabas temperatūrā ultraskaņas režīmā (40 kHz, 160 W) 15 minūtes. Pēc filtrēšanas caur 0,22 lm afiltru 20 l paraugus injicēja HPLC sistēmā (Waters 2695), kas aprīkota ar C18 kolonnu (Diamonsil, 250 mm · 4,6 mm, daļiņu izmērs 5 μm). Mobilā fāze sastāvēja no metanola un 0,05 procentu etiķskābes-ūdens šķīduma (v/v) attiecībā 35:65 (v/v). Plūsmas ātrums bija 1,0 ml min^–1, kolonnas temperatūra bija 30 grādi un UV noteikšanas viļņa garums (Waters 2996) bija 334 nm.

Kalibrēšanas līknesehinakozīdsunakteozīdsbija laba linearitāte diapazonā no {{0}},2–6,4 lg(r=0.9997) un 0,16–4,6 lg (r {{1{{ 24}}}}.9995), attiecīgi. Ehinakozīda un akteozīda (n=5) vidējā atgūstamība bija 98,7 procenti (RSD=1,5 procenti) un 98,2 procenti (RSD=1). .28 procenti ), attiecīgi. Precizitātes un precizitātes eksperimenti uzrādīja labus rezultātus, relatīvā standartnovirze bija mazāka par 2 procentiem. Kvantitatīvās noteikšanas robežas bija attiecīgi 0,04 un 0,06 lg ehinakozīdam un akteozīdam. Ehinakozīda un akteozīda standarti tika iegādāti no NICPBP (Nacionālais farmaceitisko un bioloģisko produktu kontroles institūts, Pekina, Ķīna). Ehinakozīda/akteozīda ražošana=ehinakozīda/akteozīda saturs (mg g–1 DW) x biomasa (g DW l^–1).

Statistiskās analīzes

Visi eksperimenti un noteikšanas tika atkārtotas trīs reizes, un visas vērtības bija trīskāršu vidējās vērtības ± SE. Dati tika iesniegti dispersijas analīzei (vienvirziena ANOVA, Tukey tests), lai noteiktu būtiskas atšķirības, izmantojot SAS versijas 6.12 PROC ANOVA.

Rezultāti

Poliamīnu ietekme uz kallusa augšanu,ehinakozīds, unakteozīdssaturu.

1. tabulā ir parādīta poliamīnu ietekme uz ādas augšanu,ehinakozīds, unakteozīdssatursCistanche deserticola. Put un Spm veicināja kallusa augšanu atbilstošā koncentrācijā. Apmēram 25 lM Put bija visefektīvākā, un biomasa (11,2 g DW l–1) bija 1.{5}}reize no kontroles. Vienlaikus uzlaboti poliamīniehinakozīdssaturu. Kad tika pievienots 25 lM put,ehinakozīdssaturs tika palielināts par 46 procentiem, salīdzinot ar kontroli, bet netika konstatēts būtisks akteozīda satura pieaugums.

Ag plus un Co2 plus ietekme uz kallusa augšanu, ehinakozīdu un akteozīdu saturu

Metālu jonu ietekme uz kallusa augšanu,ehinakozīds, unakteozīdssaturs ir parādīts 2. tabulā. Ehinakozīda un akteozīda saturu ievērojami veicināja Ag plus, kamēr kallusa augšana tika nedaudz kavēta. Kad tika pievienots 10 lM Ag plus,ehinakozīdssaturs unakteozīdssaturs tika palielināts attiecīgi par 73 procentiem un 62 procentiem, salīdzinot ar kontroli. Vienlaikus nebija būtiskas atšķirības biomasā starp Ag plus apstrādi un kontroli. Co2 plus gandrīz neuzrādīja pozitīvu ietekmi uz kallusa augšanu un PeG saturu.

Barošanas laika ietekme uz kallusa augšanu, ehinakozīdu un akteozīdu saturu

Turpmākajiem eksperimentiem tika izvēlēti put (25 lM) un Ag plus (10 lM). Barošanas laika ietekme uz kailu augšanu,ehinakozīds, unakteozīdssaturs ir parādīts 3. tabulā. Kad 8. dienā pievienoja Put (25 lM), tika iegūta maksimālā biomasa (11,8 g DW l–1). Pa to laiku,ehinakozīdssaturs tika paaugstināts līdz 107,2 mg g–1 DWakteozīdssaturs bija gandrīz tāds pats kā kontroles saturam.

Ag plus pievienošana agrāk izraisīja mazāku biomasu. Pievienojot Ag plus (10 lM) 16. dienā, abiehinakozīdssaturs (127,9 mg g–1 DW) unakteozīdssaturs (34,2 mg g–1 DW) sasniedza maksimumu, kas bija attiecīgi 2.{4}}reizes un 1.{6}}reizes no kontroles.

Put un Ag plus kombinētā ietekme uz kailu augšanu, ehinakozīdu un akteozīdu veidošanos

Kā parādīts atsevišķu elecitoru rezultātos, pievienošana agrīnā stadijā uzlaboja biomasu, un Ag plus pievienošana vēlīnā stadijā veicināja ehinakozīda un akteozīda saturu, būtiski nesamazinot biomasu. Tātad tika izstrādāts divu stageelicitācijas protokols. Put (25 lM) un Ag plus (10 lM) tika pievienoti to attiecīgajos optimālajos posmos.

1. attēlā parādīta Putand Ag plus pievienošanas kombinācijas ietekme uz kallusa augšanu,ehinakozīds, unakteozīdsražošanu atšķirībā no kontroles. Kad 8. dienā pievienoja Put (25 lM) un 16. dienā pievienoja Ag plus (10 lM), tika iegūta optimālā biomasa (11,4 g DW l–1), ehinakozīda saturs (152,4 mg g–1 DW) un akteozīda saturs (36,1). mg g–1 DW) tika sasniegti 20. dienā (1. att.). Theehinakozīdsražošanas (1,7 gl–1) unakteozīdsražošanas apjoms (0.4 gl–1) sasniedza attiecīgi 3.3- un 2.1- reizes vairāk nekā kontroles grupā, kas bija augstākas nekā vienreizējas ierosināšanas gadījumā (3. tabula). . Salīdzinot ar ārstēšanu ar vienu elictoru,ehinakozīdsunakteozīdsRažošana, apvienojot ierosinātājus, bija 1.{1}}reize un 1.5-reize no tiem, kas tika apstrādāti ar vienu Put apstrādi, 1.6-reize un 1.{7}}reize no tiem vienā Ag plus apstrādē. , attiecīgi. Ilgstoša kultivēšana samazināja biomasu, ehinakozīdu veidošanos un akteozīdu veidošanos (1. att.)

1. att. Biomasas profili (A),ehinakozīds, unakteozīdsražošana (B) ar/neapvienojot elicitorus suspensijas kultūrāCistanche deserticola. Vertikālās joslas apzīmē trīs atkārtojumu standarta kļūdu. Callus, 0,125 g DW, tika inokulēts 250- ml Erlenmeijera kolbās, kas satur 50 ml B5 barotnes. Put (25 lM) un Ag plus (10 lM) tika pievienoti attiecīgi 8. un 16. dienā. Eksperimenti tika veikti 25 grādu temperatūrā tumsā uz rotācijas kratītāja (110 apgr. min–1) 20 dienas

Put un Ag plus ietekme uz šūnu dzīvotspēju, H2O2 saturu un PAL un antioksidantu enzīmu aktivitātēm

Izprast elicitoru darbības mehānismu uz šūnu augšanu un sekundāro metabolismuCistanche deserticola, šūnu dzīvotspējas, H2O2 satura un PAL un antioksidantu enzīmu aktivitātes izmaiņas pēc Put un Ag plus pievienošanas tika pārbaudītas divpakāpju ierosināšanas kultūrā. Kad Put tika pievienots 8. dienā (0 h 2. attēlā), H2O2 saturs strauji samazinājās, kas bija attiecīgi tikai 48,9 procenti no kontroles 6. stundā, un pakāpeniski atjaunojās līdz kontroles līmenim pēc 24 stundām (att. 2A). Šūnu dzīvotspēja palielinājās līdz 12 stundām un pēc tam nepārtraukti samazinājās, kas bija par 26,9 procentiem un 16,7 procentiem augstāka nekā kontrolgrupā attiecīgi pēc 24 stundām un 48 stundām (2.B att.). SOD un APOX aktivitātes ievērojami palielinājās pēc 6 stundām, un SOD aktivitāte samazinājās līdz līdzīgam kontroles līmenim pēc 24 stundām, kamēr APOX aktivitāte joprojām bija 1 {24}}reize no kontroles (2. att. C, D). Papildinājums neuzrādīja būtisku ietekmi uz CAT aktivitāti (2. E att.). H2O2 satura samazināšanās un antioksidatīvo enzīmu aktivitātes palielināšanās nozīmēja mazāku oksidatīvo bojājumu un saglabāja vairāk šūnu dzīvotspējīgas nekā kontroles.

2. att. H2O2 satura, šūnu dzīvotspējas, APOX, SOD, CAT un PAL aktivitātes izmaiņas pēc pievienošanas 8. dienā suspensijas kultūraiCistanche deserticola. Vertikālās joslas attēlo trīs replikāciju standarta kļūdu

Vienlaikus PAL aktivitāte sasniedza maksimumu 12. stundā un pēc tam pakāpeniski samazinājās līdz līmenim, kas līdzīgs kontrolei pēc 48 stundām (2. att. F).

Šūnas tika nepārtraukti kultivētas pēc Put pievienošanas, un Ag plus tika pievienots barotnei 16. dienā (0 h 3. attēlā). H2O2 saturs strauji palielinājās un saglabāja ievērojami augstāku līmeni nekā kontroles līdz 48 stundām (3.A att.). Tomēr šūnu dzīvotspēja tika ievērojami kavēta un kļuva mazāka (3.B att.). APOX aktivitāte saglabāja nemainīgu līmeni un samazinājās pēc 24 stundām (3. C attēls). SOD un CAT aktivitātes strauji palielinājās pēc 3 stundām un sasniedza maksimumu attiecīgi pēc 12 stundām un 6 stundām, kas bija 1 6-reizi un 10-reizi augstākas nekā kontrolēm, un pēc tam lēnām samazinājās (3D att. , E). PAL aktivitāte palielinājās līdz 2.{19}}kontrolei pēc 24 stundām, kas joprojām bija par 22,5 procentiem augstāka nekā kontroles aktivitāte pēc 48 stundām (3. F. attēls).

3. att. H2O2 satura, šūnu dzīvotspējas, APOX, SOD, CAT un PAL aktivitātes izmaiņas pēc Ag plus pievienošanas 16. dienā suspensijas kultūrāCistanche deserticolaar Put pievienošanu onday 8. Vertikālās joslas attēlo trīs atkārtojumu standarta kļūdu.

Diskusija

Poliamīni un metālu joni uzrādīja dažādu ietekmi uz kallusa augšanu un PeG veidošanosCistanche deserticola. Atbilstošā koncentrācijā poliamīni galvenokārt veicināja kallus augšanu, bet Ag plus veicināja kallu veidošanosehinakozīdsunakteozīdsievērojami. Kad dažādos laikos tika pievienoti gan Putand Ag plus optimālā koncentrācijā, radās daži sinerģiski efekti.

Kalusa augšanai veicināšanas efekts bija atkarīgs no poliamīnu veida, koncentrācijas un barošanas laika. 25 lMPut bija visefektīvākais kallusa augšanai, kad to pievienoja 8. dienā. Elicitors uzrādīja optimālu veicināšanas efektu agrīnā augšanas stadijā. Lai gan tika konstatēts, ka Ag plus un Co2 plus uzlabo sekundāros metabolītus dažādos augos (Zhaoet al. 2005), tikai Ag plus uzrādīja pozitīvu ietekmi uz augu saturu.ehinakozīdsunakteozīds. Tā kā Ag plus varētu kavēt šūnu dzīvotspēju un šūnu proliferāciju, Ag plus pievienošana 16. dienā uzlabojaehinakozīdsunakteozīdsbūtiski nesamazinot biomasu.

Kad augu šūnas tiek pakļautas apstrādei ar elicitoru, tas ierosina signāla pārraidi no plazmas membrānas virsmas un ROS veidošanos, inducē augu aizsardzības reakciju un uzlabo augu sekundāro metabolismu, regulējot galvenos enzīmus, kas katalizē mērķa sekundāro metabolītu biosintēzi (Zhao et al. 2005). Oksi datīvais stress, ko izraisa ārstēšana ar ierosinātājiem, izraisa ROS uzkrāšanos, un to var mazināt ar antioksidantu enzīmiem, tostarp SOD, APX, CAT un POD. Ja oksidatīvie bojājumi pārsniedz antioksidantu enzīmu funkcijas, augu šūnas var nomirt, jo samazinās šūnu dzīvotspēja.

Tiek uzskatīts, ka H2O2, ROS veids, veicina ieprogrammētu šūnu nāvi un regulē sekundāro metabolītu sintēzi, izraisot daudzu aizsardzības gēnu un sekundāro metabolītu biosintētisko gēnu, piemēram, PAL, ekspresiju. Tiek uzskatīts, ka H2O2, ROS veids, veicina ieprogrammētu šūnu nāvi un regulē sekundāro metabolītu sintēzi, izraisot daudzu aizsardzības gēnu un sekundāro metabolītu biosintētisko gēnu, piemēram, PAL, ekspresiju.

Poliamīni uzlaboja abiotiskā stresa toleranci, efektīvi izvadot ROS, aizsargājot nukleīnskābi un membrānu (Alca´zar et al. 2006) un uzlabojot antioksidantu aktivitāti (Tang un Newton 2005). Saskaņā ar Papadakis un Roubelakis-Angelakis (2005) ziņojumu, Put uzrādīja labāku bloķēšanas efektu uz ROS uzkrāšanos nekā Spd un Spm. Kā parādīts mūsu rezultātos, galīgā biomasas ievades apstrāde bija lielāka nekā Spd un Spm apstrādē. Exogenous Put samazināts H2O2 saturs, palielināta antioksidantu enzīmu aktivitāte un šūnu dzīvotspēja efektīvi. Iespējams, augstāka šūnu dzīvotspēja veicināja lielāku proliferāciju un lielāku biomasu. Tad varētu izskaidrot, kāpēc Ag plus pievienošana agrāk izraisīja mazāku Ag biomasu, kā arī uzlabotu H2O2 uzkrāšanos un ievērojami samazinātu šūnu dzīvotspēju. Antioksidantu enzīmu aktivitātes tika uzlabotas, lai mazinātu oksidatīvo stresu, neietekmējot šūnu dzīvotspēju. Ag plus pievienošana arī veicināja PALaktivitāti, kā arī ražošanuehinakozīdsunakteozīdsievērojami. Mehānisms varētu būt saskaņā ar Desiken et al. (1998) un Yuan et al. (2001). H2O2 varētu būt galvenā loma šūnu proliferācijā un PeG ražošanā. Ielieciet palielinātu PAL aktivitāti unehinakozīdssaturs zināmā mērā, iespējams, citā veidā, lai samazinātu H2O2 saturu.

Pēdējos gados lielākā daļa ziņojumu ir vērsti uz viena ierosinātāja ietekmi uz kallusa augšanu un PeG saturuCistanche deserticola. Tomēr daudzi stimulatori nepalielināja kallusa augšanu optimālā koncentrācijā, piemēram, ašitozāns, sēnīšu izraisītājs (Fusarium solani), metiljasmonāts un salicilskābe (Cheng et al. 2006; Lu un Mei2003; Xu et al. 2005). Retzemju elementu maisījums uzlaboja šūnu augšanu un PeG veidošanos, attiecīgi par 26 procentiem un 167 procentiem augstāku nekā kontroles (Ouyanget al. 2003b). Atkārtota ierosināšana ar vienu ierosinātāju arī ievērojami uzlaboja PeG ražošanu (Cheng et al.2005, 2006). Tā ir laba alternatīva, lai iegūtu optimālu biomasu un PeG produkciju, pievienojot dažādus ierosinātājus dažādos posmos. Kad 8. un 16. dienā tika pievienoti attiecīgi 25 lM put un 10 lM Ag plus,ehinakozīdsražošana (1,7 gl–1) un akteozīda ražošana (0, 4 gl–1) sasniedza maksimumu, kas bija augstāka nekā no vienas Put vai Ag plus ierosināšanas, kā arī iepriekšējos ziņojumos.

No: ' Uzlabošanaehinakozīdsunakteozīdsražošana ar divpakāpju ierosināšanu šūnu suspensijas kultūrāCistanche deserticola' autorsWen-Hao Chen et al

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science plus Business Media BV 2007

Atsauces

Alca´zar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Poliamīnu iesaistīšana augu reakcijā uz abiotisko stresu. Biotechnol Lett 28:1867–1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006) Uzlabota ginsenosīda produktivitāte, apvienojot etefonu un metiljasmonātu žeņšeņa (Panax ginseng CA Meyer) nejaušajās sakņu kultūrās. Biotechnol Lett 28:1163–1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002) Poliamīnu loma augu ontoģenēzē un to biotehnoloģijas pielietojums. Augu šūnu audu orgānu kults 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005) Atkārtota ierosināšana uzlabo feniletanoīdu glikozīdu uzkrāšanos šūnu suspensijas kultūrāsCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Feniletanoīdu glikozīdu biosintēzes uzlabošanaCistanche deserticolašūnu suspensijas kultūras ar hitozāna elecitoru. J Biotechnol 121:253–260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Functions of amīnoksidāzes augu attīstībā un aizsardzībā. Trends Plant Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin un ūdeņraža peroksīds gan ierosina ieprogrammētu šūnu nāvi, bet tiem ir atšķirīga ietekme uz aizsardzības gēnu ekspresiju Arabidopsis suspensijas kultūrās. Biochem J 330:115–120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Barības prasības sojas sakņu šūnu suspensijas kultūrām. Exp Cell Res 50:151–158Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Izmaiņas
askorbāta peroksidāzes, katalāzes, gvajakola peroksidāzes un superoksīda dismutāzes aktivitātes parasto pupiņu (Phaseolus vulgaris) mezgliņos sāls stresa apstākļos. J. Plant Physiol. 162:929–936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006) Uzlabota taksola ražošana, kombinējot inducējošus faktorus Taxus baccata suspensijas šūnu kultūrā. Cell Biol Int 30:262–269
Koukol J, Conn EE (1961) Hordeum vulgare fenilalanīna deamināzes aromātisko un īpašību metabolisms. J Biol Chem 236:2692-2698
Lu CT, Mei XG (2003) Feniletanoīdu glikozīdu ražošanas uzlabošana ar sēnīšu izraisītāju šūnu suspensijas kultūrāCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Feniletanoīdu glikozīdu veidošanās, ko veicCistanche deserticolakalluss, kas audzēts uz cietas barotnes. Biotechnol Lett 25:223–225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Retzemju elementu ietekme uz augšanuCistanche deserticolašūnām un feniletanoīdu glikozīdu ražošanai. J Biotechnol 102:129–134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005) Poliamīni kavē NADPH oksidāzes mediētu superoksīda veidošanos, un putrescīns novērš ieprogrammētu šūnu nāvi, ko izraisa poliamīnoksidāzes radītais ūdeņraža peroksīds. Planta 220:826–837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Sasniegumi farmakoloģiskās aktivitātes pētījumos augosCistancheHoffing et Link. Chin Tradit Herbal Drugs 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005) Poliamīni samazina sāls izraisītos oksidatīvos bojājumus, palielinot antioksidantu enzīmu aktivitāti un samazinot lipīdu peroksidāciju Virdžīnijas priedē. Augu augšana Regula 46:31–43
Velikova V, Yordanov I, Edreva A (2000) Oksidatīvais stress un dažas antioksidantu sistēmas skābā lietus apstrādātos bija augu aizsardzības loma eksogēno poliamīnu jomā. Plant Sci 151:59–66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004) Analītisku metožu novērtējums, lai prognozētu dzīvotspēju pēc krioprezervācijas. Augu šūnu audu orgānu kults 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005) O2 - no elicitoru izraisītas oksidatīvās sprādziena ir nepieciešams, lai izraisītu fenilalanīna amonjaka-liāzes aktivāciju un katarantīna sintēzi Catharanthus roseus šūnu kultūrās. Enzyme Microb Technol 36:280–284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Metiljasmonāta un salicilskābes ietekme uz feniletanoīdu glikozīdu sintēzi suspensijas kultūrāsCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402–406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001) Signālu pārvades ceļš oksidatīvai pārrāvumam un taksola ražošanai Taxus Chinensis var suspensijas kultūrās. mairei, ko izraisa Fusarium oxysprum oligosaharīds. Enzyme Microb Technol 29:372–379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Izsaucēju darbības ceļi taksola biosintēzes ceļā un to sinerģiskais efekts. Biochem Eng J 10:77–83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005) Elicitor signāla pārraide, kas izraisa augu sekundāro metabolītu veidošanos. Biotechnol Adv 23:283–333