Mijiedarbība starp polifenolu antioksidantiem kvercetīnu un naringenīnu nosaka to maisījumu atšķirīgo ar redoksu saistīto ķīmisko un bioloģisko uzvedību 3. daļa

Lūdzu sazinietiesoscar.xiao@wecistanche.comlai iegūtu vairāk informācijas

Antioksidantu aktivitāte ar DPPH testu.

Pētīto antioksidantu un to maisījumu antioksidantu aktivitātes noteikšanu veica arspektrofotometriskaistests, izmantojot DPPH radikāli, kā aprakstīts iepriekš13,55. Pirmkārt, DPPH radikāļu izejas šķīdumu atšķaidīja ar metanolu, līdz absorbcija sasniedza 0,9±0,05 pie 515 nm. Otrkārt, antioksidanti un to maisījumi tika atbilstoši atšķaidīti ar 70% etanola, lai sasniegtu koncentrāciju, kas ietilpst testa lineārajā diapazonā355. Pēc tam DPPH šķīdumu (1 ml) sajauca ar atšķaidītajiem paraugiem (30 μL) un pēc 10 minūtēm 37 °C temperatūrā izmērīja absorbciju pie 515 nm. Visas reakcijas tika veiktas 48-iedobju plāksnēs. Absorbcijas mērījumi tika veikti ar TECAN Infinite M200 spektrofotometru (Tecan Group Ltd., Šveice). Parauga antioksidanta aktivitāte tika pārrēķināta līdz stehiometrijas koeficientam ng, kā aprakstīts iepriekš, ar modifikācijām5. Īsumā, pārbaudīto paraugu noņemto radikāļu skaits tika aprēķināts, pamatojoties uz Beer-Lambert likumu un DPPH molāro ekstinkcijas koeficientu pēc mērījumiem, kas veikti pēc 10 minūšu reakcijas starp antioksidanta(-u) šķīdumu un radikāli55. Vērtību n aprēķina kā lineārās attiecības tangensu starp DPPH molu skaitu, kas noņemts ar 1 mlantioksidants(-i)šķīdumi koncentrācijas diapazonā, kur "pamatšķīduma" koncentrācija ir "100 procenti", bet pārējās koncentrācijas ir daļa no 100 procentiem, kā noteikts atšķaidīšanas koeficientos.

Lūdzu, noklikšķiniet šeit, lai uzzinātu vairāk

Antioksidantu aktivitāte ar potenciometrisko titrēšanu un diferenciālo impulsa voltammetriju.

Q un R standarta samazināšanas potenciāli (E) tika mērīti ar potenciometrisko titrēšanu (PT), kā aprakstīts citur5. Īsāk sakot, pētītie savienojumi un titrants (K, [Fe (CN)]) tika izšķīdināti PBS. Attīrīto savienojumu koncentrācija bija 0,3 mg/mL, maisījumi saturēja 0,3 mg/mL katra savienojuma. Mērījumi tika veikti, izmantojot JENCO 6230 N ORP-146C Micro Oxidation-Reduction iekārtu (ASV) ar AglAgCl atsauces elektrodu (RE) un platīna mērīšanas elektrodu. PT tika veiktas pie 37±0,01 grādiem, ko galvenokārt uzturēja Ultra Thermostat (PolvScience, ASV). Analītam tika pievienots vienāds titranta tilpums un tika nolasīts vienmērīgais potenciāls. Rezultātā titrēšanas līknes, E=f(V..), tika analizētas, izmantojot SigmaPlot Version 13.0 programmatūru (Systat Software Inc., Apvienotā Karaliste), pielāgojot sigmoidālos 5-matemātiskos parametrus. modelis uz eksperimentāliem datiem35. Potenciāls ekvivalences punktā (EP pret RE) tika nolasīts tieši no šī modeļa, pamatojoties uz parametru a. Tas ir vienāds ar titranta tilpumu, kas pievienots lēciena punktā. Visbeidzot, tika aprēķinātas EP vērtības pret SHE (standarta samazināšanas potenciāls, EO). RE(c) potenciāla korekcijas termiņš tika noteikts, titrējot redokspārus FeCl.6H, O un Na,S, O3.5H,O, ko raksturo zināmi standarta reducēšanas potenciāli.

Savukārt pētīto savienojumu un to maisījumu antioksidanta jauda (AOP) tika mērīta ar diferenciālo impulsa voltammetriju (DPV), kā parādīts iepriekš ar modifikācijām. Īsumā, mērījumi tika veikti, izmantojot potenciostatu Gamry Reference 60{{10}} (Gamry Instruments, ASV), kas satur trīs elektrodu sistēmu. Stikla oglekļa elektrods (GC, diametrs 1,6 mm), platīna stieple un AgAgCl elektrods (Hydromet SC, Polija) tika izmantoti attiecīgi kā darba (WE), palīgelektrods (AE) un atsauces elektrods (RE)13. Pirms eksperimentiem WE virsma tika pulēta, izmantojot alumīnija oksīda suspensiju （0.05 μm daļiņas, Bīlers, ASV）uz mikro auduma spilventiņiem (MF-1040, BASi, ASV) un pēc tam notīra ar destilētu ūdeni un metanolu. Pētītie savienojumi tika atšķaidīti ar DMSO un nātrija fosfāta buferšķīdumu (pH=7,4±0,1), tāpēc fosfātu buferšķīduma galīgā koncentrācija bija {{30}},1. M izlasē. Buferis kalpoja kā atbalsta elektrolīts. Attīrīto savienojumu koncentrācija bija 3 mM. Maisījumi saturēja 3 mM katra savienojuma. Lai izvadītu elektroķīmiski reaktīvo skābekli, pētītie šķīdumi pirms mērījumiem tika deoksidēti ar argona perkolāciju. DPV voltammogrammas N-.N plus un maisījumiem: ON- un RN plus tika reģistrētas diapazonā -0,2 līdz plus 1,3 V, savukārt Q un R diapazonā -0,2 līdz plus 0,6 V vs.RE. Tika iestatīts potenciālais skenēšanas ātrums 0,1 V.s, impulsa augstums 0,05 V un impulsa laiks 0,1 s pie 25 ± 0,01 grāda.

DPV voltammogrammas tika analizētas, izmantojot SigmaPlot Version 13.{1}} programmatūru (Systat Software Inc., Apvienotā Karaliste). AOP vērtības tika aprēķinātas divos posmos. Aprēķinos tika ņemts vērā ne tikai anoda maksimālais potenciāls un strāva (E,; I,), bet arī iestatītais potenciāls un izmērītā strāva katrā voltammetriskās līknes punktā. Tas ļāva iegūt precīzākas vērtības nekā tās, par kurām ziņots mūsu iepriekšējā darbā3. Pirmkārt, antioksidantu enerģijas (AOE) parametrs tika aprēķināts saskaņā ar Eq. 1:

kur AwE ir WE virsmas laukums (mūsu pētījumā vienāds ar {{0}},162±0,004 cm'), E ir kopas potenciāls pret RE [V], ir korekcijas koeficients, ņemot vērā šķidruma savienojuma esamību starp WE un RE (šeit 0,103 V), I ir izmērītā strāva pret fona strāvu [A], tas ir potenciālais paraugu ņemšanas laiks [dt=0 .5 s].

Otrkārt, AOP, kas izteikta W cm² vienībā, tika aprēķināta, pamatojoties uz vienādojumu 2∶

kur tt; — ir starpība starp oksidācijas maksimuma sākuma laiku (t) un tā beigām (t).

Lai noteiktu Awp, tika veikta cikliskā voltammetrija 1.10-3MK,[Fe(CN).] šķīdumam 0.1 M KCl. Šī vērtība tika aprēķināta, pamatojoties uz Randles-Sevcik vienādojumu82 no anodiskās maksimālās strāvas slīpuma kā skenēšanas ātruma kvadrātsaknes funkciju, I, =f(pi/2). To mēra tāpat kā potenciometriskajā titrācijā. Turklāt šajā darbā oksidācijas procesa termodinamiskais parametrs bija anodiskais maksimālais potenciāls, ko koriģēja šķidruma savienojums starp WE un RE (E.,=E.. plus e), savukārt kinētiskie parametri ietvēra pārnesto lādiņu ( Q) un anodiskā strāva (I,).

Cistanche var uzlabot imunitāti

Šūnu kultūra. Iesniegtajā pētījumā HT29 šūnu līnija (cilvēka resnās zarnasadenokarcinoma) no ATCC tika izmantots kā cilvēka zarnu modelis. Šūnas tika uzturētas McCoy barotnē, kas papildināta arantibiotikas(100 V/mL streptomicīnu un 100 g/L penicilīna) un liellopu augļa serumu (100 ml/L)13. HT29 šūnu līnija tika uzturēta 37 C temperatūrā zem 5 procentiem CO, atmosfērā šūnu inkubatorā (Heal Force)3. Šūnu līnija tika izmantota starp 6. un 11. fragmentiem. Kultivētās šūnas tika pārbaudītas attiecībā uz mikoplazmas piesārņojumu, izmantojot ATCC (ASV) universālo mikoplazmas noteikšanas komplektu.

Citotoksicitātes novērtējums. Lai noteiktu ietekmi attīrītsantioksidanti(Q, N plus, R, N-) un to maisījumi (QN-, RN plus) uz HT29 šūnu augšanu, MTT tests tika izmantots, kā aprakstīts iepriekš3,5. Īsumā, eksponenciāli augošās šūnas tika iesētas 96-iedobes audu kultūras plāksnēs (5 × 10 šūnas katrā iedobē 0,18 ml barotnes) un atstātas nostādināties 24 stundas. pie 37 grādiem zem 5 procentiem CO, pēc tam šūnas 6,24 vai 72 h tika apstrādātas ar 0.02 ml dažādas koncentrācijas tīru antioksidantu vai to maisījumu3,5. Antioksidanti un to maisījumi tika izšķīdināti etanolā (naringenīns, naringīns un maisījumi — 30 procenti (v/v), kvercetīns -40% (v/v), rutīns — 20% (v/v). )). Attīrīto savienojumu galīgās koncentrācijas bija no 10 nM līdz 100 uM. Maisījumi saturēja ekvivalentu katra savienojuma koncentrāciju (10 nM-100 μM）). Galīgā etanola koncentrācija barotnē bija 2% (v/v) rutīnam, 3% (v/v) naringenīnam, naringīnam un maisījumam, kā arī 4% (v/v) kvercetīnam. Pēc 6 un 24 stundu iedarbības barotne tika aspirēta no iedobēm un aizstāta ar 0, 2 ml svaigas barotnes. Šūnas tika inkubētas 37 grādu temperatūrā līdz 72 stundām no kopējā inkubācijas laika 13, 55. Pēc 72 h inkubācijas visām iedobēm pievienoja 0,05 ml MTT šķīduma (4 g/l) un šūnas vēl 4 stundas turēja 37°C13,5 temperatūrā. Pēc tam barotne tika aspirēta no iedobēm un formazāna kristāli tika izšķīdināti 0, 05 ml DMSO. Iegūto šķīdumu absorbcija tika mērīta pie 540 nm ar plākšņu lasītāja TECAN Infinite M200 (Tecan Group Ltd, Šveice) palīdzību15. Apstrāde tika veikta kā četri tehniski atkārtojumi. Tika veikti trīs neatkarīgi katras ārstēšanas atkārtojumi. Izpētīto paraugu ietekme uz HT29 šūnu augšanu tika izteikta procentos no atsevišķu antioksidantu un to maisījumu iedarbībai pakļauto šūnu augšanas kavēšanas, salīdzinot ar kontroles šūnām, kas apstrādātas tikai ar šķīdinātāju, kuru augšana tika uzskatīta par 100 procentiem 13,55

CAA (šūnu antioksidantu aktivitātes) tests. CAA tests (The OxiSelect Cell Biolabs, Inc. USA) tika izmantots, lai novērtētu savienojumu (O, N plus, R, N-) un maisījumu (ON-, RN plus) šūnu antioksidantu aktivitāti HT29 šūnās, kā aprakstīts iepriekš35. Eksponenciāli augošās šūnas tika iesētas 96-iedobes audu kultūras melnās plāksnēs ar caurspīdīgu dibenu fluorescences mērījumiem (3 × 104 šūnas katrā iedobē 0,2 ml barotnes) un tika atstāja nostāvēties 24 stundas 37 grādu temperatūrā zem 5 procentiem CO,i3,55. Visi antioksidanti tika izšķīdināti 10% etanola. Pēc tam šūnas tika apstrādātas ar 50{{50}} reizes atšķaidītu 2',7'-dihlorfluoresceīna diacetāta (005 ml) šķīdumu. ar komplektu un vienāda apjoma dažādu koncentrāciju antioksidantu paraugus 1, 3 vai 6 stundas. Attīrīto savienojumu galīgās koncentrācijas bija no 1 līdz 1 00 uM. Maisījumos bija līdzvērtīga katra savienojuma koncentrācija (1-100uM). Kontroles šūnas tika apstrādātas tikai ar 10 % etanola (v/v). Galīgā etanola koncentrācija barotnē bija 5 procenti (v/v). Visas apstrādes tika veiktas trīs tehniskos atkārtojumos un tika veikti trīs neatkarīgi eksperimenti. Turpmākās darbības tika veiktas saskaņā ar ražotāja ieteikumiem (https://www.cellbiolabs.com). Aprēķini tika veikti, kā aprakstīts iepriekš, Genotoksiskā iedarbība. Lai noteiktu atsevišķu antioksidantu (O, N plus, RN-) un to maisījumu (ON-, RN plus) genotoksisko iedarbību HT29 šūnās, tika izmantota komētas testa procedūra, kā aprakstīts iepriekš. Eksponenciāli augošās HT29 šūnas tika iesētas 24-iedobes audu kultūras plāksnēs (10 grāda šūnas katrā iedobē 1,8 ml barotnes) un ļāva nostādināties 24 stundas 37 grādu temperatūrā zem 5 procentiem CO. 55, Pēc tam šūnas 24 stundas apstrādāja ar 0, 2 ml dažādu antioksidantu koncentrāciju atsevišķi vai maisījumos. Attīrīto savienojumu galīgās koncentrācijas bija no 1 līdz 100 uM. Maisījumos bija līdzvērtīga katra savienojuma koncentrācija (1-100 uM). Galīgā etanola koncentrācija barotnē bija 3 procenti (v/v). Šūnas, ko izmantoja kā negatīvas kontroles, apstrādāja tikai ar šķīdinātāju. Pēc apstrādes laika barotne tika aspirēta no iedobēm un šūnas tika mazgātas ar 0, 5 ml PBS. Pēc tam šūnas tika atdalītas, izmantojot 0,2 ml tripsīna šķīduma (0,5 g/l)55. Tripsīna aktivitāte tika apturēta, katrai iedobei pievienojot 1,8 ml pilnīgas augšanas barotnes. Šūnas tika atkārtoti suspendētas, saskaitītas un alikvotas 1,5 ml mēģenēs (30 × 103 ³ šūnas katrā mēģenē). Šūnu suspensija tika centrifugēta (100 x g, 5 min, 4 grādi). Šūnu granulas nomazgāja ar 1 ml PBS un vēlreiz centrifugēja (100 x g, 5 min, 4 grādi ） 5). Pēc tam PBS tika izmests un šūnas tika atkārtoti suspendētas 150 μl 0,5 procentu LMP agarozes ūdenī, kas iepriekš bija sagatavots. uzsildīts līdz 42 grādiem C un 40 μL šī maisījuma tika novietoti kā divi plankumi uz mikroskopa priekšmetstikliņa, kas iepriekš pārklāts ar 1% normālās kušanas temperatūras agarozi (NMP agarozi). Priekšmetstikliņi tika pārklāti ar pārklājošām plāksnēm. Agarozi ļāva nostiprināt novietojot mikroskopa priekšmetstikliņus uz ledusaukstas paplātes vismaz uz 5 minūtēm5. Katrai testējamo vielu koncentrācijai tika sagatavoti trīs priekšmetstikliņi ar diviem atkārtojumiem. Pēc nakti lizēšanas sārmainā buferšķīdumā (2,5 M NaCl, 0,1 M EDTA) ,0,01 M Tris, 1 procents Triton X100, pH 10), priekšmetstikliņi tika ievietoti Bio-Rad Sub-Cell GT elektroforēzes platformā (UK), pārklāta ar aukstu elektroforēzes buferi (0,3 M NaOH, 1 mM EDTA, pH 13) un Pirms elektroforēzes hromatīnam ļāva atritināties 25 minūtes. Elektroforēze tika veikta 26 V un 300 mA (0,75 V/cm) 30 minūtes tumsā pie 4-8 grādu. Pēc šīs darbības priekšmetstikliņus vispirms nomazgāja, izmantojot PBS un pēc tam ūdeni. Pēc tam DNS 20 minūtes iekrāsoja ar SybrGreen TE buferšķīdumā (0,1 M Trizma-Base, 1 mM EDTA, pH 7,5). Pēc krāsošanas priekšmetstikliņus 5 minūtes mazgāja ar destilētu ūdeni. DNS "komētas" tika analizētas ar fluorescences mikroskopu (Zeiss ImagerZ2, ASV) kopā ar datorizētu priekšmetstikliņu skenēšanas sistēmu (Metafer4, Vācija). Komētas analīze ietvēra 200 secīgu kodolu skaitīšanu katrā paraugā5. Analizēto paraugu genotoksicitāte tika izteikta kā DNS procentuālā daļa komētas astē. Tika veikti trīs neatkarīgi katras apstrādes atkārtojumi.

Cistanche var uzlabot imunitāti

Globālā DNS metilēšana.

For the determination of global methylation of DNA, a modified comet assay procedure was developed. Methylation sensitive comet assay was performed according to Wentzel's procedure with significant modifications. The cells were seeded in 6-well tissue culture plates(4×105 cells per well in 3.6 mL of medium) and were allowed to settle for 24 h at 37°C under 5%CO,Then, the cells were treated with 0.4 mL, of different concentrations of the tested antioxidants or their mixtures for 24 h at 37C. The final concentrations of individual compounds and solvents were the same as used for genotoxic effect assessment. After incubation time, the medium was aspirated from the wells and the cells were washed with 2 mL of PBS. The cells were detached using 0.4 mL of trypsin solution (0.5 g/L). Then,3.6 mL of medium was added to each well. The cells were re-suspended, counted, and aliquoted into 1.5 mL tubes(30×10 cells per tube). The cell suspension was centrifuged (100×g,5 min, 4°C). The cell pellets were washed with 1 mL of PBS and centrifuged again(100×g 5 min,4℃C）.PBS was discarded and the cell pellet was re-suspended in 100μL of 1%LMP agarose in water pre-warmed to 45 °C. Then,40 μL of this mixture was placed as two spots on a microscope slide pre-coated with 1%normal melting point agarose(NMP agarose)5. The slides were then covered with coverslips and left to set on an ice-cold tray for at least 5 min to solidify agarose5. Each treatment embraced a set of 3 microscope slides. After overnight lysis in a high salt alkaline buffer(2.5 M NaCl, 0.1 M EDTA, 0.01 M Tris,1% Triton X100, pH 10), the slides were washed twice with water>5. Cieši iesaiņotais hromatīns tika attīts, apstrādājot kodolus ar 1,5 mM proteināzes K šķīdumu (0,2 ml uz priekšmetstikliņa)3. Priekšmetstikliņus pārklāja ar paraplēvi, ievietoja plastmasas traukā, kas izklāts ar mitru salveti, atstāja 10 min 37 grādu temperatūrā, pēc tam nomazgā ar ūdeni3. Tādā veidā nukleoīdi tika sagatavoti gremošanai ar restrikcijas endonukleāzēm (Hall un MspI). Abi enzīmi atpazīst vienu un to pašu restrikcijas secību (5'-CCGG-3'), taču tiem ir atšķirīga jutība pret metilētu citozīnu. Tiek uzskatīts, ka HpalI sagremo tikai nemetilētas sekvences. MspI var šķelt nemetilētas sekvences, kā arī pilnībā metilētas sekvences. Tādējādi CpG sekvences DNS metilēšanas relatīvie līmeņi tiek atspoguļoti kā atšķirība starp globālo DNS daudzumu komētas astē, kas novērota ar MspI gremošanu un HpalI sagremotiem nukleoīdiem. Lai radītu atbilstošus apstākļus fermentatīvai šķelšanai.{{20}}. Uz katra komplekta priekšmetstikliņa tika uzklāts 2 ml Tango buferšķīduma, kas atšķaidīts ar molekulārās kvalitātes ūdeni attiecībā 1:9 (v/v). Priekšmetstikliņi tika pārklāti ar paraplēvi, ievietoti plastmasas traukā, kas izklāta ar mitru salveti, un atstāti 1 0 min 37 ° C temperatūrā. Pēc tam bufera pārpalikums tika noņemts. Katrs no trim komplekta priekšmetstikliņiem tika apstrādāts atšķirīgi. Uz pirmā (kontroles) priekšmetstikliņa tika uzklāts tikai 0,15 ml atšķaidīta Tango buferšķīduma. Otrā priekšmetstikliņa agarozes iestrādātos kodolus apstrādāja ar 0,15 ml Hola enzīma (0,37 μvienības), savukārt trešajam priekšmetstikliņam tika pievienots tāds pats MspI tilpums (0,26 μvienības). Fermentu šķīdumi tika pagatavoti, izmantojot atšķaidītu Tango buferšķīdumu. Priekšmetstikliņi tika pārklāti ar paraplēvi un ievietoti mitrā plastmasas traukā. Fermentatīvā gremošana tika veikta 45 minūtes 37 grādu temperatūrā. Pēc sagremošanas priekšmetstikliņus divreiz mazgā ar ūdeni. Turpmākie komētas testa posmi, piemēram, elektroforēze un DNS krāsošana, tika veikti, kā aprakstīts sadaļā "Globālā DNS metilēšana". DNS "komētas" tika analizētas ar fluorescences mikroskopu (Zeiss ImagerZ2, ASV) kopā ar datorizētu priekšmetstikliņu skenēšanas sistēmu (Metafer4, Vācija). Komētas analīze tika veikta ar Comet score programmatūras (ASV) palīdzību un ietvēra 100 kodolu skaitīšanu katrā paraugā. Vidējais DNS procents komētas astē bija DNS fragmentācijas rādītājs. Lai aprēķinātu globālo DNSmetilēšana(CpG metilēšanas procenti), tika izmantots šāds vienādojums: procentuālā CpG metilēšana =100—Hpal/MspI × 100, kur Hpal/MspI ir DNS procentuālā attiecība nukleoīda komētas astē, kas sagremota ar HpalII un DNS. procentuālā daļa nukleoīda komētas astē, kas sagremota ar Mspl85. DNS bojājumu artefakti tika uzskaitīti, atņemot DNS procentuālo daudzumu kontroles parauga astē no vērtībām, kas iegūtas paraugiem, kas sagremoti ar restrikcijas enzīmiem. Tika veikti trīs neatkarīgi katra eksperimenta atkārtojumi.

Mikromasīvu analīze.

Genomiskā analīze tika veikta, kā parādīts iepriekš355, HT29 šūnas tika iesētas 24-iedobes audu kultūras plāksnēs (105 šūnas katrā iedobē 1,8 ml barotnes) un ļāva nosēsties 24 stundas 37 Pēc tam šūnas 24 stundas apstrādāja ar 0,2 ml dažādu koncentrāciju antioksidantiem atsevišķi (Q, N-) vai maisījumā (QN-). Pētīto savienojumu galīgās koncentrācijas bija no 1 līdz 10 uM. Maisījums saturēja līdzvērtīgas katra savienojuma koncentrācijas. Šūnas, ko izmantoja kā negatīvas kontroles, apstrādāja tikai ar šķīdinātāju. Galīgā etanola koncentrācija barotnē bija 3 procenti (v/g).RNS izolēšana. reversā transkripcija un reāllaika PCR masīvam, kas sastāv no 84 gēniem, kas iesaistīti antioksidantu reakcijā, kā arī datu analīze tika veikta, kā aprakstīts iepriekš. Tika veikti trīs neatkarīgi katras šūnu apstrādes atkārtojumi.

Statistiskā analīze.

Visas vērtības ir izteiktas kā trīs neatkarīgu eksperimentu vidējās ± SD, ja vien nav norādīts citādi. Antioksidantu aktivitātes noteikšanas statistisko nozīmīgumu bezšūnu sistēmā, izmantojot DPV un DPPH testu, kā arī šūnu modeļos, kas iegūti ar CAA testu, pārbaudīja ar nesapāroto Tūkija testu (p mazāks vai vienāds ar 0.{{ 6}}5). Genotoksicitātes un globālās DNS metilēšanas rezultāti, kas analizēti ar komētu testiem, tika pārbaudīti ar vienvirziena ANOVA ar Dunnett post-hoc testu. Šīs statistiskās analīzes tika veiktas, izmantojot Prism 4.{8}} programmatūras pakotni (GraphPad Software, Inc., ASV). Gēnu ekspresijas izmaiņu statistiskā nozīme starp paraugiem un kontrolēm tika novērtēta arī ar nesapāroto Studenta t-testu katram interesējošajam gēnam, izmantojot GenGlobe datu analīzes centru (Qiagen, ASV). Statistiskā nozīmīguma līmenis tika iestatīts uz p Mazāks vai vienāds ar 0,05.

Šis raksts ir izvilkts nowww.nature.com/scientificreports