Kloto deficīts pastiprina hipoksijas izraisītu IFN ekspresiju / ar RIG-I regulēšanu nierēs
Mar 25, 2022
Abstrakts Hipoksija ir izplatīts ceļš uz beigu stadijas progresēšanunieru slimība.Retīnskābes inducējamais gēns I (RIG-I) kodē RNS helikāzi, kas atpazīst vīrusus, tostarp SARS-CoV2, kas ir atbildīgs par interferona (IFN)-a/ ražošanu, lai novērstu vīrusu infekcijas izplatīšanos. Nesen RIG-l aktivācija tika konstatēta hipoksiskos apstākļos, un tika pierādīts, ka kloto deficīts pastiprina RIG-I aktivāciju peles smadzenēs. Tomēr šo funkciju loma nieru iekaisumā joprojām ir nenotverama. Šeit in vitro pētījumam RIG-I un IFN-a / ekspresija tika pārbaudīta normālām žurkāmnieres(NRK)-52E šūnas, kas inkubētas hipoksijas apstākļos (1 procents O2). Pēc tam siRNS, kas vērsta uz RIG-I vai kodētu siRNS, tika transficēta NRK52E šūnās, lai pārbaudītu RIG-I un IFN-a / ß ekspresiju hipoksijas apstākļos. Mēs arī pētījām RIG-I un IFN-a / ekspresijas līmeņus 33 cilvēkosnieresbiopsijas paraugi, kuriem diagnosticēta lgA nefropātija. In Vivo pētījumā mēs izraisījām nieru hipoksiju, saspiežot nieru artēriju uz 10 minūtēm savvaļas tipa pelēm (WT pelēm) un Klotho-knockout pelēm (KIT/pelēm). Inkubācija hipoksiskos apstākļos palielināja RIG-lI un IFN-a / ekspresiju NRK52E šūnās. To regulēšana tika kavēta NRK52E šūnās, kas tika transficētas ar siRNS, kas vērstas uz RIG-I. Pacientiem ar IgA nefropātiju nieru biopsijas paraugu imūnhistoķīmiskā krāsošana atklāja, ka RIG-I ekspresija korelē ar IFN-a/ ekspresiju (r=0.57,P).<0.001, and="" r=""><0.001, respectively).="" the="" expression="" levels="" of="" rig-i="" and="" ifn-a/β="" were="" upregulated="" in="">niereshipoksiskām WT pelēm, un hipoksiskām pelēm tika novērota turpmāka regulēšana. Šie atklājumi liecina, ka hipoksija izraisa IFN-a / ekspresiju, paaugstinot RIG-I regulēšanu un ka kloto deficīts pastiprina šo hipoksijas izraisīto ekspresijunieres.
Atslēgvārdi:nieru slimība; nieru šūnas; nieru aizstāšana; nieru bojājumi; nieres
CISTANČE UZLABOS NIeru/NIeru FUNKCIJU
IevadsHronisksnieru slimība(CKD) 2017. gadā visā pasaulē skāra 697,5 miljonus cilvēku [1], tāpēc tā ir plaši atzīta par nopietnu veselības problēmu. Lai aizkavētu HNS progresēšanu, klīniskā vidē tiek izmantoti renīna-angiotenzīna-aldosterona sistēmas (RAAS) inhibitori [2,3]. Tomēr to labvēlīgā ietekme ir ierobežota, un daudziem pacientiem galu galā nepieciešama nieru aizstājterapija[4]. Patoloģiski hronisks iekaisums un intersticiāla fibroze ir kopīgas HNS pazīmes neatkarīgi no primārās slimības [5]. Lai gan transformējošajam augšanas faktoram (TGF)- 1 ir galvenā loma intersticiālās fibrozes attīstībā [6-8], iepriekšējie pētījumi parādīja, ka iekaisuma šūnu infiltrācija ir atbildīga par TGF veidošanos{{12} } [9]. Šie atklājumi liecina, ka iekaisums ir intersticiālās fibrozes augšējais notikums un ka iekaisums ir HNS terapeitiskais mērķis.
Hipoksija ir stāvoklis, kad nepietiekams skābekļa daudzums nonāk audos. Kā šūnu reakcija uz hipoksiju, hipoksijas izraisītiem faktoriem (HIF) ir svarīga loma audu bojājumu novēršanā [10-12]. Tomēr smaga hipoksija izraisa akūtas asinsvadu slimības, piemēram, insultu [13], stenokardiju [14] un perifēro artēriju slimību [15]. Pēdējā laikā tiek ziņots, ka arī hroniska hipoksija, piemēram, miega apnoja, veicina dažādu slimību attīstību [16]. Attiecībā uznieresTiek ziņots, ka hipoksija pastiprinās līdz ar HNS stadijas progresēšanu, un pašlaik to uzskata par izplatītu patofizioloģiju, kas noved pie beigu stadijasnieru slimība[17]. Kā minēts iepriekš, iekaisums tiek uzskatīts par augšupejošu notikumu, tāpēc mehānisms, ar kuru hipoksija izraisa iekaisumu, ir jānoskaidro molekulārā līmenī. Iekaisumam raksturīgas sāpes, karstums, apsārtums, pietūkums un funkciju zudums[18]. Tomēr tā pamatā darbojas, lai novērstu sākotnējo šūnu bojājumu cēloni un iztīrītu nekrotiskās šūnas un bojātos audus. Jebkurā gadījumā iekaisums nav specifiska reakcija, un tiek uzskatīts, ka iedzimtā imunitāte galvenokārt piedalās sākotnējā iekaisuma procesā, ražojot interferonu (IFN)- / [19]. Starp faktoriem, kas saistīti ar iedzimtu imunitāti, ar retinoīnskābi inducējams gēns I (RIG-I) ir atbildīgs par imūnreakciju pret vīrusu infekcijām[20. Jo īpaši jaunākie pētījumi ir parādījuši, ka hipoksija paaugstina RIG-I ekspresiju smadzenēs un aknās, kā rezultātā rodas IFN- / [21,22]. Tomēr hipoksijas loma RIG-I mediētajā IFN-/B ekspresijānierespaliek nenotverams.
Pirmo reizi Klotho tika ziņots kā proteīns pret novecošanos [23]. Patiešām, pelēm, kurām ir kloto deficīts, ir saīsināts dzīves ilgums, ko papildina fenotipi, kas atgādina cilvēka novecošanos. Turpretim kloto transgēnām pelēm ir pagarināts dzīves ilgums [24]. Attiecībā uz renoprotektīvo iedarbību ir konstatēts, ka kloto deficīts pastiprina nieru bojājumus nieru slimību eksperimentālajos modeļos, savukārt kloto pārmērīga ekspresija vai kloto proteīna ievadīšana to uzlabo [25]. Kloto proteīns pastāv trīs formās: membrānas, izdalītā un intracelulārā koto. Starp tiem ziņots, ka intracelulārais klots nomāc RIG-I ekspresiju kopā ar iekaisumu [26], palielinot iespēju, ka kloto deficīts pastiprina hipoksijas izraisītu RIG-I un IFN-/in regulēšanu.nieres.Šie atklājumi lika mums izvirzīt hipotēzi, ka RIG-I un IFN-/ ekspresija palielinājās hipoksiskos apstākļos nieru kanāliņu šūnu līnijā un ka to hipoksijas izraisītā regulēšana tika pastiprināta pelēm ar kloto-nokautu (KI-7). pelēm). Šajā pētījumā mēs parādām, ka normālām žurkām hipoksija pārregulē RIG-I, kā arī IFN-a /nieresšūnas (NRK-52E) un peles nieres. Mēs arī parādām, ka RIG-I ir atbildīgs par hipoksijas izraisītu IFN-c/B regulēšanu.nieresparaugos no pacientiem, kuriem diagnosticēta IgA nefropātija, tika konstatēts, ka RIG-I ekspresija ir pozitīvi korelēta ar IFN- / . Visbeidzot, hipoksijas izraisīta RIG-I un IFN- / regulēšana tika pastiprināta KI-/-pelēm. Šie atklājumi liecina, ka kloto deficīts pastiprina hipoksijas izraisītu IFN-/ ekspresiju, paaugstinot RIG-Inieres.
CISTANČE UZLABOS NIeru/NIeru mazspēju
Materiāli un metodes DzīvniekiC57BL/6J savvaļas tipa (WT) peļu tēviņi (vecumā 8 nedēļas un sver 20-25 g) tika iegūti no Charles River Laboratories Japan (Jokohama, Japāna). Peļu tēviņi (6 nedēļu vecumā un sver aptuveni 15 g) tika iegādāti no CLEA Japan, Inc. Peles tika izmitinātas Hirosimas Universitātes (Hirosima, Japāna) Laboratorijas dzīvnieku zinātnes institūtā, kā aprakstīts iepriekš [27]. Visus eksperimentus apstiprināja Hirosimas Universitātes Institucionālā dzīvnieku aprūpes un izmantošanas komiteja (atļaujas numuri: A19-158 un 2019-156), un tika veiktas saskaņā ar Nacionālo veselības institūtu (NIH) vadlīnijām par laboratorijas dzīvnieku izmantošanu. WT un KI-'peles tika sadalītas kontroles grupā vai hipoksijas grupā (n=5katrā grupā). Hipoksiskie stāvokļi tika izraisīti, saspiežot kreiso nieru artēriju uz 10} minūti vispārējā anestēzijā (0,3 mg/kg medetomidīna, 4 mg/kg midazolāma un 5 mg/kg butorfanola)[28]. Kontroles grupas pelēm tika veikta fiktīva operācija, kas bija tāda pati kā pelēm hipoksijas grupā, izņemot artēriju nosiešanas trūkumu. Pēc 10 minūšu hipoksijas peles tika eitanāzētas ar sirds punkciju unnierestika novāktas. Hipoksija nonierestika apstiprināts ar Western blot metodi eritropoetīna ekspresijai (S1 attēls).
Šūnu kultūraParasta žurkanieres(NRK)-52E šūnas tika iegādātas no American Type Culture Col. lection (Manasas, VA, ASV). NRK-52E šūnas tika kultivētas RPMI-1640barotnē, kas satur 10 procentus augļa. liellopu serums (FBS) (Nichirei Bioscience, Tokija, Japāna) un penicilīns/streptomicīns (Nacalai Tesque, Kioto, Japāna). Šīs clls tika iesētas 10 cm kultūras trauciņos. Pēc audzēšanas līdz subkonfluencei šūnas tika inkubētas 1% O2Modulārā inkubatora kamerā (MIC 101; Billups-Rothenberg, Sandjego, CA, ASV) 30, 60, 90 un 120 minūtes, tika sagatavoti un pakļauti visu šūnu lizāti. uz Western blot analīzi. NRK-52E šūnu hipoksija tika apstiprināta ar Western blot metodi HIF-1 ekspresijai (S2 att.).
RIG-I siRNS transfekcijaNRK52E šūnas tika transficētas ar 20 nM siRNS, kuras mērķauditorija bija RIG-I (RSS311418: Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ASV) vai negatīvās kontroles siRNS (4390843; Applied Biosystems, Waltham, MA, ASV), izmantojot Lipofectamine 2000 Reaergent The Transfection. , saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Pēc 43-45 h dažas no šīm šūnām tika inkubētas hipoksiskos apstākļos (1 procents O) 30 minūtes, lai novērtētu RIG-I. Pārējās šūnas tika nomainītas uz svaigu barotni. Pēc 24 stundām šīs šūnas 60 un 120 minūtes inkubēja hipoksiskā šķīdumā (1 procents O2), lai apstiprinātu IFN-a/ . Tika sagatavoti veselu šūnu lizāti un pakļauti Western blot analīzei.
Western blot analīzeParaugu ņemšana un Western blotēšana tika veikta saskaņā ar iepriekš aprakstītajām metodēm[29]. Trušu monoklonālā anti-RIG-I antiviela (#3743S; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, ASV), trušu poliklonālā anti-IFN- 11 antiviela (bs-7023R; Bioss Anti-bodies, Woburn, MA, ASV), trušu poliklonālā anti-IFN-antiviela (GTX37658; GeneTex, Irvine, CA, ASV), truša monoklonālā anti-RIG-I antiviela (=700366; Invitrogen, Karlsbāda, Kalifornija, ASV), truša poliklonāla antiviela anti-IFN- 2 antiviela (ab193055; Abcam, Kembridža, Apvienotā Karaliste), trušu poliklonāla anti-IFN-antiviela (PA5-20390; Invitrogen), žurku monoklonāla antiviela pret cilvēka kloto (KO603; TransGenic, Fukuoka) , Japāna), tika izmantotas peles monoklonālās anti- -aktīna antivielas (A5316; Sigma-Aldrich, Sentluisas, MO, ASV) un peles monoklonālās anti- -tubulīna antivielas (T9026; Sigma-Aldrich). kā primārās antivielas. Kā sekundārās antivielas tika izmantots ar mārrutku peroksidāzi konjugēts kazas anti-trušu imūnglobulīns G (Dako, Glostrup, Dānija) un kazas anti-peļu imūnglobulīns G (Dako). Signālu noteikšanai tika izmantota SuperSignal West Dura un Pico sistēma (Thermo Fisher Scientific). Katras joslas intensitāte tika mērīta ar ImageJ programmatūru (versija 1.47y; Nacionālie veselības institūti, Bethesda, MD, ASV) un normalizēta līdz aktīna vai tubulīna līmenim.
CISTANCHE UZLABOS NIERU/NIeru SLIMĪBU
Peļu nieru audu imūnhistoķīmiskā analīzeImūnhistoķīmiskā krāsošana tika veikta saskaņā ar iepriekš aprakstītajām metodēm [27]. Kā primārās antivielas tika izmantotas šādas zāles: truša monoklonālā anti-RIG-I antiviela (#700366; Invitrogen), truša poliklonālā anti-IFN- 2 antiviela (ab193055; Abcam), truša poliklonālā anti-IFN-antiviela ( PA5-20390; Invitrogen) un žurku monoklonālās anti-cilvēka kloto antivielas (KO603; TransGenic).RIG-I-, IFN-a/ - un klotopozitīvās zonas tika kvantificētas kā vidējais rādītājs no 20 nejauši atlasītiem laukiem ar ImageJ programmatūra.
Klīnisko paraugu ņemšana un ētikas paziņojumsNieru paraugi tika iegūti ar nieru biopsiju Hirosimas Universitātes slimnīcā no 2014. gada augusta līdz 2016. gada novembrim no 33 pacientiem, kuriem tika diagnosticēta IgA nefropātija. Šajā pētījumā tika ievēroti Helsinku deklarācijā ietvertie principi, un to apstiprināja Hirosimas Universitātes Ētikas komiteja (E-1718). Informēta piekrišana tika iegūta atteikšanās veidā vietnē (httns:/inzounaika). Hirosimas-uaciplresearchl atteikties.html).
Cilvēka nieru audu imūnhistoķīmiskā analīzeImūnkrāsošana tika veikta saskaņā ar iepriekš aprakstītajām metodēm [27]. Tika izmantotas šādas primārās antivielas: truša monodonāla anti-RIG-I antiviela (#700366; Invitrogen), peles monoklonālā anti-IFN antiviela (sc-373757; Santa Cruz Biotechnology, Dalasa, Teksasa, ASV) un trusis. poliklonālās anti-IFN-antivielas (PA5-20390; Invitrogen), RIG-I un IFN-a/-pozitīvās zonas tika kvantificētas kā piecu nejauši atlasītu lauku vidējais lielums, izmantojot Image] programmatūru.
Statistiskā analīzeRezultāti tiek parādīti kā vidējā ±standarta novirze (SD). Korelācijas tika aprēķinātas, izmantojot vienfaktoru regresijas analīzi. Vairākiem salīdzinājumiem mēs izmantojām vienvirziena dispersijas analīzi (ANOVA), kam sekoja Stjudenta t-tests ar Bonferroni korekciju. Atšķirības starp abām grupām tika analizētas ar Stjudenta t-testu.P<0.05 was="" considered="" as="" statistically="">
Rezultāti:Hipoksija pārregulē RIG-I un IFN-a / nieru epitēlija šūnu žurku šūnu līnijāLai noteiktu hipoksijas ietekmi uz RIG-I un IFN-a/ ekspresiju in vitro, mēs veicām šo proteīnu Western blot analīzi NRK-52E šūnās, kas kultivētas hipoksiskos apstākļos. RIG-I proteīna līmenis sasniedza maksimumu 30 minūtēs un pēc tam pakāpeniski pazeminājās NRK-52E šūnās hipoksiskās stimulācijas ietekmē (1.A attēls). IFN-/ß līmenis NRK paaugstinājās un sasniedza maksimumu attiecīgi 120 un 60 minūtēs. -52E šūnas ar hipoksisku stimulāciju (Eig 1Band1C). RIG-I iznīcināšana samazina IFN-a/ ekspresiju NRK52E šūnās ar hipoksiju Lai novērtētu, vai RIG-I piedalās IFN-/ ekspresijā hipoksijas apstākļos, mēs pētījām to ekspresiju NRK-52E šūnās, kas transficētas ar RIG-I siRNS vai negatīvs
kontrolēt siRNS. Pirmkārt, mēs apstiprinājām RIG-siRNA notriekšanas efektu NRK-52E šūnās. RIG-I Western blotting atklāja, ka RIG-I siRNS samazina RIG-I ekspresiju NRK-52E šūnās ar vai bez hipoksiskas stimulācijas (Eig 2A). Tālāk mēs pētījām hipoksijas izraisītās RIG regulēšanas lomu. -I IFN-/B ekspresijā NRK{10}}E šūnās, izmantojot RIG-I siRNS vai negatīvo kontroli. RIG-siRNS nomāca IFN- / ekspresiju NRK-52Ešūnās (Eig2Band2C).
RIG-I korelē ar IFN-/ ekspresijas līmeņiem IgA nefropātijas cilvēka nieru paraugosMēs pārbaudījām, vai RIG-I ekspresijas līmenis ir saistīts ar IFN-a/ nieru biopsijas paraugos, kas iegūti no pacientiem ar IgA nefropātiju (n=33). Šo pacientu detalizētas klīniskās īpašības ir parādītas S1 tabulā. RIG-I un IFN-/ imūnhistoķīmiskā krāsošana atklāja to ekspresiju glomerulos un nieru kanāliņos (3.A attēls) un parādīja, ka RIG-I ir pozitīvi korelē ar IFN-o/ (r=0.57,P).<0.001, and="" r=""><0.001, respectively)(eig="">
Hipoksija nemaina kloto ekspresijas līmeni WT un K1-/ pelēmLai noteiktu hipoksiskās stimulācijas ietekmi uz kloto ekspresiju in vivo, mēs pētījām tās ekspresiju WT un K-/pelēm ar vai bez 10 minūšu hipoksiskas stimulācijas. Western blotēšana un imūnhistoķīmiskā krāsošana atklāja, ka kloto ekspresija neatšķīrās starp WT pelēm ar hipoksiju un bez tās un ka kloto ekspresija netika novērota KIT/pelēm neatkarīgi no hipoksiskās stimulācijas esamības vai neesamības (Eig 4Aand4B). WT pelēm klotho. proteīns tika iekrāsots cauruļveida šūnu citoplazmā (4B attēls).RIG-I ekspresija tiek pastiprināta hipoksiskos apstākļos K ~ pelēm.Tiek ziņots, ka intracelulārais klots piešķir spēju nomākt RIG-I izraisītu iekaisumu, tāpēc mēs pārbaudījām RIG-I ekspresijas līmeni un lokalizāciju hipoksijas gadījumā.nieresWT un Kl−/− pelēm. Western blotēšana atklāja, ka RIG-I ekspresija palielinājās WT pelēm ar hipoksisku stimulāciju un ka tā tika pastiprināta Kl - / - pelēm (5A attēls). Imūnhistoķīmija parādīja, ka RIG-I pozitīvais laukums palielinājās Kl-/- pelēm, kas bija līdzīgs Western blotēšanas rezultātiem (5.B attēls).
IFN- tiek pārregulēts hipoksijas apstākļos KI--pelēmLai noteiktu hipoksijas ietekmi uz-a ekspresiju wvo, mēs pārbaudījām tās ekspresijas līmeni un lokalizāciju hipoksiskajās WT un KI pelēs. Western blotēšana atklāja, ka IFN ekspresija palielinājās WT pelēm ar hipoksisku stimulāciju un ka pelēm tā tika vēl vairāk regulēta (6.A attēls). Imūnhistoķīmiskā krāsošana arī atklāja, ka IFN- -pozitīvā zona galvenokārt tika novērota cauruļveida šūnās un ka IFN ekspresijas līmenis uzrādīja tādu pašu tendenci kā Western blotēšanas gadījumā (6.B attēls).
IFN- ir palielināts hipoksijas apstākļos K1T-/pelēmPapildus IFN-c mēs pārbaudījām IFN-Bin hipoksiskā WT un peļu ekspresijas līmeni un lokalizāciju. No Western blotēšanas rezultātiem IFN ekspresija palielinājās WT pelēm ar hipoksisku stimulāciju, bet tālāka palielināšanās tika novērota KIT / pelēm (7.A attēls). Kvantitatīvi nosakot IFN- -pozitīvo apgabalu, IFN ekspresijas līmenis palielinājās KI-/-pelēm, salīdzinot ar līmeni WT' pelēm (7.B attēls).
novērots Kl-/- pelēm neatkarīgi no hipoksiskas stimulācijas klātbūtnes. Mēs parādījām, ka nieru hipoksija palielināja RIG-I un IFN- / ekspresiju un ka to ekspresija tika vēl vairāk pastiprināta Kl - / - pelēm. Šie atklājumi liecināja, ka kloto deficīts pastiprināja hipoksijas izraisīto RIG-I ekspresiju, kā rezultātā tika paaugstināts IFN- / . Mēs noskaidrojām, ka hipoksija izraisīja RIG-I un IFN- / ekspresiju gan in vitro, gan in vivo pētījumos. Lai pielāgotos hipoksiskiem apstākļiem, HIF tiek stabilizēts un darbojas kā transkripcijas faktors [30]. Iepriekšējā pētījumā tika ziņots, ka RIG-I ir iesaistīts HIF inducējamās molekulās. Tomēr mēs nevarējām noteikt, ka RIG-I ir HIF pakārtots efektors. Papildus vīrusu infekcijai hipoksijas apstākļos palielinās RIG-I ekspresija [31]. Lai gan iepriekšējie pētījumi ziņoja, ka hipoksija ietekmē cauruļveida epitēlija šūnas, endotēlija šūnas, pericītus, fibroblastus, iekaisuma šūnas un cilmes šūnas nierēs [32, 33], mēs parādām, ka RIG-I regulēšana galvenokārt tika novērota cauruļveida epitēlija šūnās pelēm. ar hipoksisku stimulāciju, kā arī pacientiem ar IgA nefropātiju. Tā kā nieru kanāliņi tiek uzskatīti par transuretrālo patogēnu iekļūšanas vietu [34], RIG-I var būt izšķiroša loma tubulāro epitēlija šūnu imūnreakcijā hipoksijas apstākļos. Iedzimto imūnreakciju aktivizē ne tikai mikroorganismi, bet arī trauksmes signāli no bojātām, ievainotām vai stresa situācijām [35]. Šajā pētījumā mēs parādījām, ka hipoksijas izraisītā RIG-I ekspresija piedalījās IFN- / ražošanā nieru kanāliņu žurku šūnu līnijā. Iesniegtie dati liecina, ka RIG-I ekspresija darbojas kā citozola iedzimta imūnsistēma, reaģējot uz hipoksisku stresu, kā arī vīrusu infekciju. Iepriekšējie pētījumi aprakstīja, ka hipoksija pastiprinās HNS attīstības laikā neatkarīgi no primārās slimības un ka hipoksija veicina nieru bojājumu progresēšanu [17]. Klīniskā pētījumā, izmantojot no asins skābekļa līmeņa atkarīgu magnētiskās rezonanses attēlveidošanu, nieru hipoksija ne tikai pastiprinājās HNS progresēšanas laikā, bet arī paredzēja šādu progresēšanu [36]. Tādējādi hipoksija pašlaik tiek uzskatīta par parasto ceļu uz beigu stadijas progresēšanunieru slimība, tāpēc hipoksijas izraisītam iekaisumam jābūt terapeitiskam mērķim, lai nomāktu CKD progresēšanu.
Mēs parādījām, ka hipoksija izraisa IFN- / ražošanu, kas tiek klasificēti kā 1. tipa interferoni. 1. tipa interferoni pamatā darbojas, lai kavētu vīrusa replikāciju [37] un pretotos hipoksijas izraisītai imūnsupresijai [21,22]. Tomēr līdz šim veiktie pētījumi liecina, ka 1. tipa interferoni izraisa dabisko slepkavas šūnu aktivāciju, kam ir svarīga loma ne tikai vīrusu inficēto šūnu izņemšanā, bet arī audu bojājumos [38]. Faktiski iepriekšējie pētījumi ziņoja, ka RIG-I veicina iekaisumu dažādos orgānos, piemēram, plaušās [39],nieres[40] un nervu sistēma [21]. Šajā pētījumā mēs arī parādījām, ka hipoksijas izraisīta RIG-I regulēšana ir atbildīga par IFN- / veidošanos. Tādējādi 1. tipa interferoni var darboties, lai aizsargātu pret infekciju hipoksijas stāvoklī, taču tie būtu kaitīgi neinficētos apstākļos. Turklāt iepriekšējā pētījumā tika ziņots, ka papildus 1. tipa interferoniem RIG-I ir iesaistīts dažādu citokīnu, piemēram, IL-1, IL- 6 un TNF- ražošanā [41]. Tā kā šie citokīni izraisa audu bojājumus, hipoksijas izraisīta RIG-I regulēšana var piedalīties CKD progresēšanā. Mēs parādījām, ka kloto deficīts uzlabo hipoksijas izraisīto RIG-I ekspresiju, ko papildina IFN- / . Tiek ziņots, ka Kloto ekspresija samazinās līdz ar novecošanu un CKD progresēšanu [42, 43]. Tāpēc RIG-I ekspresija var būt vairāk regulēta gados vecākiem cilvēkiem un HNS pacientiem hipoksijas apstākļos, izraisot IFN- / veidošanos. Kā minēts iepriekš, klots pastāv trīs formās - membrānas, sekrēta un intracelulāra klots, un pēdējais ir atbildīgs par RIG-I mediētās iekaisuma citokīnu ražošanas nomākšanu [26]. Runājot par lokalizāciju, mēs parādījām, ka kloto ekspresija galvenokārt notiek nieru kanāliņu šūnās, un ir pierādījumi, ka RIG-I ekspresija galvenokārt tiek pastiprināta nieru kanāliņu šūnās hipoksijas apstākļos. Šie atklājumi liecina, ka pazemināts kloto ekspresijas līmenis veicina pastiprinātu RIG-I mediētu 1. tipa interferonu ražošanu hipoksiskos apstākļos.
CISTANČE UZLABOS NIERU/NIERES SĀPES
Kopumā mēs parādījām, ka hipoksiskās stimulācijas izraisītā RIG-I un IFN- / peles nierēs un žurku šūnu līnijā nieru kanāliņu šūnās un ka RIG-I bija iesaistīts hipoksijas izraisītā IFN- / in vitro eksperimentu regulēšanā. Nieru biopsijas paraugos no pacientiem ar IgA nefropātiju RIG-I ekspresija korelēja ar IFN- / . Visbeidzot, hipoksijas izraisītā RIG-I ekspresija tika pastiprināta pelēm ar kloto-nokautu, kā arī IFN- / . RIG-I mediētā 1. tipa interferona ekspresija palielinājās hipoksijas apstākļos, un tika novērota turpmāka augšupregulācija kloto pazemināšanās stāvoklī. Saskaņā ar klīniskajiem pētījumiem hipoksija pastiprinās progresējošā HNS stadijā [36] un liecina par ilgstošu HNS progresēšanu [36]. Turklāt kloto ekspresija samazinās, samazinoties nieru funkcijai, un kloto ekspresijas samazināšanās ir saistīta ar nieru bojājumu [44]. Šajā pētījumā mēs parādām, ka kloto deficīts pastiprina hipoksijas izraisīto IFN- / ekspresiju, paaugstinot RIG-I nierēs, un ka RIG-I ekspresija ir saistīta ar IFN- / faktiskajiem pacientiem ar IgA nefropātiju. Apkopojot šos atklājumus, HNS progresēšanas laikā tiek veicināta gan hipoksija, gan kloto samazināšanās, un tāpēc HNS pacientiem tiek pastiprināta iedzimtas imunitātes aktivizēšana.
