NAD(P)(H) kvantitatīvās noteikšanas rezultātu metaanalīze uzrāda mainīgumu zīdītāju audos
Jun 01, 2023
Nikotīnamīda adenīna dinukleotīdam (NAD plus) ir svarīga loma enerģijas metabolismā un signālu ceļos, kas kontrolē svarīgas šūnu funkcijas. Thepalielināta interese par NAD plus metabolismuunNAD plus pastiprinošas terapijasir pastiprinājis nepieciešamību pēc precīzas NAD plus kvantitatīvās noteikšanas. Lai pārbaudītu publicētos NAD (P) (H) pasākumus zīdītāju audos, mēs veicām aesošo datu metaanalīze. Meklējot Ovid MEDLINE datubāzē, tika identificēti raksti ar NAD(P)(H) kvantitatīvās noteikšanas rezultātiem, kas iegūti no zīdītāju audiem, kas publicēti no 1961. līdz 2021. gadam. Mēs pārbaudījām 4890 ierakstus un ieguvām kvantitatīvos datus, kā arīkvantitatīvās noteikšanas metodes, pirmsanalītiskie nosacījumi un priekšmeta raksturojums. Ekstrahētās fizioloģiskās NAD(P)(H) koncentrācijasdažādi audino pelēm, žurkām un cilvēkiem, atklāja svarīgu metožu un iekšējo metožu mainīgumu, kas attiecās uz jaunākajām publikācijām. Tas izceļ relatīvi vājo potenciālu NAD(P)(H) kvantitatīvo datu savstarpējās eksperimentālās analīzes veikšanai un NAD(P)(H) kvantitatīvās noteikšanas metožu standartizācijas nozīmi unpirmsanalītiskās procedūraspar turpmāko preklīnisko unklīniskie pētījumi.
Noklikšķiniet šeit, lai iegūtu Cistanche antioksidācijas īpašības un pretnovecošanās produktus
Nikotinamīda adenīna dinukleotīdam ir divējāda loma kā areducēšana-oksidācija (redokss)koenzīms, tā oksidētajā (NAD(P) plus ) unreducētās (NAD(P)H) formas, un kā akosubstrāts (NAD(P) plus ) fermentiem, kas iesaistīti deacilācijā1, mono- un poli-ADP-ribosilēšana 2, 3 un uz adenīna bāzes veidotu otro sūtni 4–7. Te NAD (P) plus / NAD (P) H attiecība ir svarīgs intracelulārā redoks stāvokļa rādītājs, un tam ir izšķiroša loma galveno vielmaiņas ceļu regulēšanā8, 9. Piemēram, NAD plus ir būtisks glikolīzei kopā ar trikarbonskābes (TCA) ciklu, lai nodrošinātu reducējošus ekvivalentus adenozīna trifosfāta (ATP) veidošanās laikā, kas ir galvenais šūnas enerģijas avots8,9. Ja NAD plus ir ierobežots, to var arī reģenerēt no NADH, fermentējot piruvātu, lai ražotu laktātu zīdītāju šūnās, tādējādi saglabājot šūnu redoksu līdzsvaru25. NAD plus un NADH var arī tikt fosforilēti attiecīgi par NADP un NADPH, izmantojot NAD plus kināzes (NADK)10,11. NADPH ir būtisks reduktīvai biosintēzei, signālu pārraidei, šūnu antioksidantu reakcijām un jo īpaši glutationa samazināšanai12–14. Citozolā NADP plus tiek reducēts par NADPH, izmantojot glikozes-6-fosfāta dehidrogenāzi un 6-fosfoglikonāta dehidrogenāzi pentozes fosfāta ceļā (PPP), kā arī citas reakcijas13. Tā kā mitohondrijās NADPH veidošanos uztur dažādas reakcijas, tostarp tās, kas atkarīgas no nikotīnamīda nukleotīdu transhidrogenāzes (NNT) un izocitrāta dehidrogenāzes (IDH2) enzīma aktivitātes15. Rezultātā ir pierādīts, ka NAD(P)(H) statuss ietekmē šūnu signālu pārraidi un vielmaiņu, enerģijas homeostāzi, mitohondriju bioģenēzi, oksidatīvā stresa reakcijas un DNS uzturēšanu un remontu 16–18. Turklāt, kopš progresējušas ar vecumu saistītas slimības, piemēram, aptaukošanās19, bezalkoholiska taukainu aknu slimība20,21, neirodeģenerācija22, mitohondriju23 un sirds-asinsvadu slimības, kā arī muskuļu atrofija vai distrofija25, ir saistītas ar NAD plus ar to saistīto metabolītu izmaiņām. kuru mērķis ir uzturēt NAD plus homeostāzi, pašlaik tiek pētīta.
Papildus parastajām redokspārejām NADP plus var tikt patērēts, apmainot tās nikotīnamīda grupu ar nikotīnskābi reakcijā, ko katalizē cADPR sintāzes, piemēram, CD38, veidojot otro kurjeru NAADP, kas ir iesaistīts kalcija mobilizēšanā, hormonu sekrēcijā un imūnās šūnās. izplatība6,7,26. NAD plus var arī tikt patērēts, ja tas darbojas kā kopsubstrāts, veidojot nikotīnamīdu (NAM), ko var izmantot kā substrātu, lai reģenerētu NAD plus, izmantojot NAM glābšanas ceļu. NAM var arī metilēt, veidojot 1-metil-NAM (meNAM), ko var tālāk oksidēt par noārdīšanās produktiem N1-metil-2-piridona-5-karboksamīdu (2py) un N1-metil-4-piridona-3-karboksamīds (4py). Galu galā metilētie katabolīti var tikt izvadīti no organisma ar urīnu27,28. Te NAD plus baseinu var arī samazināt, patērējot NADP plus, izmantojot bāzes apmaiņas reakciju, lai izveidotu otro kurjeru NAADP14. Tāpēc, lai uzturētu NAD plus kopumu, ir nepieciešama biosintēze, izmantojot Preisa-Handlera ceļu (sākot ar parasto B3 vitamīna molekulu niacīnu (NA; nikotīnskābe)), de novo biosintēzes ceļu (sākot ar aminoskābi triptofānu (Trp)). vai reģenerācija no NAM pārvēršanas, izmantojot glābšanas ceļu uz NMN, tad uz NAD plus. Visbeidzot, glābšanas ceļš ir svarīgs arī NAD plus biosintēzei no nikotīnamīda ribosīda (NR), kas ir alternatīva B3 vitamīna forma, kas atrodama pārtikā, pēc tam, kad tas ir fosforilēts ar nikotīnamīda ribosīda kināzi līdz NMN un pēc tam pārvēršoties par NAD plus, izmantojot glābšanas ceļu. .
Tāpēc NAD plus metabolīta dinamikas izpratne ir kļuvusi būtiska, un galu galā ir nepieciešama stingra metabolītu kvantitatīva noteikšana, lai labāk izprastu NAD plus metabolītu ietekmi normālas fizioloģijas laikā vai ar slimības progresēšanu vai veselīgu novecošanu. Skaidrs priekšstats par šīm izmaiņām ir būtisks, lai saistītu NAD un metabolomu izmaiņas ar pakārtotām fermentatīvām vai redoksreakcijām, kurām ir atslēga audu fenotipu izmaiņām. Ņemot vērā iepriekš ziņoto ievērojamo kvantitatīvo datu daudzumu par NAD un metabolītiem zīdītājiem, tostarp arvien vairāk ziņojumu par cilvēkiem, ir svarīgi un savlaicīgi apkopot šīs izmaiņas veselības un slimību laikā. Daudzos pētījumos ir pētītas NAD un metaboloma sastāvdaļas grauzējiem un cilvēkiem dažādos vielmaiņas stāvokļos, vecumā un slimībās, tomēr paļaujas uz dažādām paraugu sagatavošanas vai kvantitatīvās noteikšanas metodēm. Paraugu sagatavošana ir svarīga metabolītiem, kas iesaistīti redoksreakcijās iespējamās sadalīšanās un savstarpējās pārvēršanās dēļ noteiktos apstākļos29,30. Tiek uzskatīts, ka kvantitatīvai noteikšanai šķidruma hromatogrāfija, kas savienota ar masas spektrometriju (LC–MS) un magnētiskās rezonanses spektrometriju (MRS), ir jutīga un specifiska metode31–33, savukārt enzīmu cikla testi ir visizplatītākie. Kvantitatīvās LC–MS metodes prasa visaptverošu kvalitātes kontroles iekļaušanu atsevišķiem izmērītajiem metabolītiem un paraugu kopējai matricas iedarbībai, kas izskaidro dažādas masas spektrometriskās reakcijas konkrētai analizējamai vielai, mērot dažādos šķīdumos. Bez šīm kontrolēm LC–MS labākajā gadījumā ir daļēji kvantitatīvs. Šajā pētījumā mēs identificējām ievērojamas NAD (P) (H) pasākumu atšķirības pētījumos ar grauzējiem un cilvēkiem, uzsverot vajadzību pēc atbilstošām ziņošanas metodēm un standartizētiem paraugu apstrādes un analītiskajiem protokoliem. Kopumā ir nepieciešamas salīdzināmas NAD(P)(H) datu kopas visos pētījumos, lai jēgpilni interpretētu esošos un turpmākos datus NAD un bioloģijas jomā.
Rezultāti
Kopējo kvantitatīvās noteikšanas metožu metaanalīze, kā arī pētītās sugas, dzimums un audi.
Vēsturiski NAD (P) (H) kvantitatīvai noteikšanai izmantotās agrīnās metodes balstījās uz šo metabolītu spektrofotometriskajām vai fluorometriskajām īpašībām34, 35. Pavisam nesen, lai atšķirtu NAD (P) (H) koenzīmu līmeņus, biežāk tiek izmantotas enzīmu cikla metodes, kas saistītas ar spektrofotometrisko vai fluorometrisko noteikšanu. Pieaugošā nepieciešamība pēc augstas jutības un izšķirtspējas šo koenzīmu kvantitatīvā noteikšanā, kā arī nepieciešamība izmērīt citus ar NAD plus saistītus metabolītus, izraisīja augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijas (HPLC) un LC–MS metožu izmantošanu. No šīm pieejām LC-MS ir kļuvusi par vēlamo metodi, jo masas spektrometrija apvienojumā ar šķidruma hromatogrāfiju ļauj specifiski identificēt eluētos savienojumus, kā arī papildu priekšrocības, iekļaujot NAD(P)(H) izotopu metabolītus kā iekšējo kāpuma kvalitāti. vadīklas. Neskatoties uz priekšrocībām salīdzinājumā ar klasiskajiem spektrofotometriskajiem vai fluorometriskajiem testiem, HPLC un LC-MS joprojām ir dārgi un laikietilpīgi, kas izskaidro, kāpēc jaunākajos pētījumos joprojām pastāv enzīmu cikla testi.
Izmantojot sistemātisku pieeju, no 241 piemērotā pētījuma (2. papildu materiāls) turpmākai analīzei tika atlasīti 205 pētījumi, kas ietvēra NAD(P)(H) koncentrācijas kvantitatīvo metaanalīzi peles, žurkas un cilvēka audos. No šiem pētījumiem 46,7 procenti izmantoja enzīmu cikla testus, no kuriem ietvēra kolorimetrisko (40,9 procenti) vai fluorometrisko (5,8 procenti) noteikšanu, savukārt 17,8 procenti izmantoja HPLC metodes (kopā ar UV vai fluorescences detektoriem) un 13,2 procenti izmantoja LC–MS testus ( 1.a att.). Lielākā daļa pētījumu neietvēra detalizētu metabolītu ekstrakcijas procedūru aprakstu. Tomēr parasti izmantotās ekstrakcijas procedūras ietvēra vai nu ekstrakcijas buferus ar vai bez virsmaktīvām vielām (Triton®, Tris, Dodeciltrimetilamonija bromīds), vai polāriem organiskiem šķīdinātājiem, piemēram, acetonitrilu, metanolu, etanolu vai hloroformu. Iepriekšējie pētījumi ir parādījuši, ka enzīmu inaktivācija un optimālie pH un temperatūras apstākļi bija efektīvi, lai saglabātu dažādu NAD (P) (H) formu stabilitāti30, 39, 40. Kad tika atklāts, paraugi tika apstrādāti zemas temperatūras apstākļos, un iekļautajos pētījumos netika pieminētas redoksu piedevas. Redoksreakcijas ierobežoja fermentu inaktivācija paraugos pirms NAD(P)(H) metabolītu mērījumiem, parasti izgulsnējot ar šķīdinātājiem, piemēram, etanolu, metanolu, acetonitrilu vai perhlorskābi (PCA). Tomēr PCA izmantošana bija reta, jo reducētās formas (ti, NADH un NADPH) bija skābes labilās, kā arī bija nepieciešams veikt papildu neitralizācijas posmu. No pētījumiem, kas ziņoja par PCA izmantošanu metabolītu ekstrakcijas laikā (5,4 procenti), 3,7 procenti ziņoja tikai par NAD(P) plus rezultātiem vai izmantoja otru ekstrakcijas metodi bez skābes pareizai NAD(P)H kvantitatīvai noteikšanai. Tikai 1,7 procenti pētījumu ziņoja par NADH, kopējo NAD(H) un/vai NAD plus /NADH rezultātiem, izmantojot tikai PCA ekstrakciju. Šo pētījumu iespējamo novirzi nevarēja analizēt ierobežoto datu dēļ.
Vidējo fizioloģisko NAD(P)(H) līmeņu salīdzinājumi audos grauzējiem un cilvēkiem.
Lai palīdzētu noteikt paredzamos vidējos fizioloģiskos NAD(P)(H) līmeņus visbiežāk pētītajiem peles, žurkas un cilvēka audiem, mēs apkopojām datus no visām kontroles un savvaļas tipa grupām no katra iekļautā pētījuma (2. papildmateriāls). ). Konkrēti, mēs reģistrējām vidējos NAD (P) (H) līmeņus, kas normalizēti pēc audu svara vai, asiņu gadījumā, tilpuma. Dati no pētījumiem, kas normalizēja metabolītu līmeni līdz olbaltumvielu saturam, tika iekļauti mūsu apkopotajā datu kopā (2. papildu materiāls), bet netika izmantoti turpmākai analīzei, ņemot vērā zemo ziņoto rezultātu skaitu. Turklāt, ja iespējams, mēs aprēķinājām NAD(P) plus /NAD(P)H attiecības kā redoksstāvokļa atspoguļojumu, kā arī kopējos NAD(P)(H) līmeņus (NAD(P) plus plus NAD (P)(H)), kas ir izplatīti ziņošanas rezultāti NAD(P)(H) labojumiem. Iegūtie dati ietvēra arī sugas, celmus, vecumu, dzimumu, kvantitatīvās noteikšanas metodi, diētu un barošanas grafiku, parauga veidu, paraugu ņemšanas metodi un ražas novākšanas laiku (pirmsnāves vai pēcnāves).
NAD(H) datu metaanalīze identificēja NAD plus un NADH vidējās fizioloģiskās koncentrācijas peles (2.a, b att., 1.a, b. papildu attēls) un žurkas (papildu 2.a, b att.) audos no dzīvniekiem. jaunāki par 14 mēnešiem pelēm un 18 mēnešiem žurkām. Ekstrahētais fizioloģiskās NAD plus / NADH attiecības vērtību diapazons un kopējais NAD (H) līmenis (NAD plus plus NADH) tika attēlots pelēm (2.c, d) un žurkām (papildu attēls 2c, d). Atšķirībā no pētījumiem ar pelēm, lielākā daļa ziņoto datu par žurkām neietvēra dzīvnieku vecumu; tomēr mēs izvēlējāmies iekļaut šos datus ar nosacījumu, ka pētījumā viņu grupas netika klasificētas kā vecas. No visievērojamāk pētītajiem audiem šī metaanalīze parāda, ka vidējais NAD plus līmenis aknām (596 nmol/g, n=26) ir augstāks nekā visiem citiem audiem pelēm, bet pārsteidzoši skeleta muskuļiem (162,8 nmol). /g, n=9) uzrāda vienu no zemākajām vidējām vērtībām uz gramu audu (2.a attēls). Šie rezultāti var nozīmēt samazinātu NAD un metabolītu ekstrakcijas efektivitāti muskuļu ļoti šķiedru rakstura dēļ vai arī to, ka muskuļu NAD un metabolismā ir būtiskas atšķirības, salīdzinot ar citiem ļoti vielmaiņas audiem, piemēram, aknām un nierēm.
Neraugoties uz dažiem kvantitatīviem novecošanas pētījumiem, NAD plus līmenis no vecām pelēm vidēji bija samazināts aknās, muskuļos un tīklenes pigmentētajā epitēlijā (RPE), salīdzinot ar to jaunajām grupām un salīdzinājumā ar vidējo rādītāju visiem pētījumiem, kas veikti ar jaunākām pelēm. vecāki par 14 mēnešiem (papildu 3. attēls). NADH un NAD plus / NADH attiecības metaanalīze veciem dzīvniekiem nebija iespējama, jo tikai vienā no šiem kvantitatīvajiem pētījumiem tika veikti šie mērījumi.
Šie dati parāda kvantitatīvu NAD(H) datu trūkumu novecojošiem dzīvniekiem.
Datiem, kas iegūti no pētījumiem, kuros izmantoja veselus cilvēkus, vecuma diapazoni pētījumos ļoti atšķīrās (no 15 līdz 92,3 gadiem), un vairumā gadījumu dati netika stratificēti šajos vecumos. Visbiežāk izmērītie cilvēka audi ietvēra skeleta muskuļus un asins komponentus to savākšanas mazāk invazīvā rakstura dēļ (3.a–d attēls). Rezultāti no citiem cilvēka audiem (n= 1–2) ir parādīti 4. papildu attēlā. Šī analīze uzrādīja vidējo NAD plus koncentrāciju 44,62 nmol/ml (n=23) asinīs ar līdzīgu Sarkano asins šūnu NAD plus koncentrācijas ir 46,96 nmol/ml (n=7) (3.a attēls; 1. papildu tabula). Tomēr NAD plus līmenis asins plazmā bija ievērojami zemāks ar vidējo 0,37 nmol/ml (n=8) (3.a attēls). Vidējais NAD plus līmenis, kas konstatēts cilvēka skeleta muskuļos, bija 191,9 (n=4) nmol/g mitros muskuļu preparātos pretstatā 1713 (n=3) nmol/g liofilizētos preparātos, zemā temperatūrā. dehidratācijas process, kas, iespējams, koncentrē metabolītus (3.a attēls). Biežāk pētītajos audos NADH mērījumiem vidējais līmenis cilvēka sarkanajās asins šūnās, plazmā un liofilizētajos skeleta muskuļos bija 1,75 nmol/ml (n =7), 0,39 nmol/ml. (n=8) un attiecīgi 136,8 nmol/g (n=6) (3.b att.). Atbilstošās vidējās NAD plus/NADH attiecības bija 23,65 (n=8), 1,57 (n=7) un 12,7 (n=3) (3.c attēls). Interesanti, ka vidējā NAD plus /NADH attiecība sarkanajiem asinsķermenīšiem (23,65) un liofilizētiem skeleta muskuļiem (12,7) (3.c attēls) bija vairākas reizes augstāka nekā lielākajai daļai peļu un žurku audu (2.c attēls un papildu attēls 2c). , kas norāda uz ļoti oksidatīvu redoksu stāvokli ar pieejamo NAD plus pārpilnību šajos cilvēka audos. Muskuļu audu gadījumā tas varētu ietekmēt, ņemot vērā grauzēju pētījumu translācijas potenciālu, kas atklāja NAD plus līmeņa paaugstināšanas priekšrocības muskuļos. Tomēr paaugstināta NAD plus / NADH attiecība muskuļos var būt arī aizkavētas parauga sasaldēšanas procedūru rezultāts klīniskā vidē, kas var izraisīt nefizioloģiskas izmaiņas parauga redox statusā.
Tika apkopoti fizioloģiskie NADP (H) līmeņi grauzēju audos, un visizplatītākais mērījums bija aknās. Peļu aknu vidējā vērtība bija 124,2 nmol/g NADP plus (n=13) un 140,2 nmol/g NADPH (n=4) (4.a, b att. ), savukārt žurku aknas uzrādīja vidējo 95,11 nmol/g NADP plus (n=10) un 240,7 nmol/g NADPH (n=9) (papildu 5.a, b attēls). Vidējā NADP plus /NADPH attiecība, kas iegūta pētījumos, kuros tika mērīti abi metabolīti, lielākajā daļā peles un žurku audu bija mazāka par 1 (4.c attēls, papildu 5.c attēls). Vidējais kopējais NADP(H) (NADP plus plus NADPH) līmenis peles un žurkas aknās bija 244,4 (n=3) (4.d attēls) un 342,1 (n=9) (papildu 5.d attēls). , attiecīgi. Cilvēkiem visizplatītākie NADP(H) mērījumi tika veikti sarkanajām asins šūnām, uzrādot vidējo 33,2 nmol/ml NADP plus (n=14) un 22,4 nmol/ml NADPH (n{{30}). }) no pētījumiem, kas nesakrīt, ar vidējo NADP plus /NADPH attiecību 1,27 un vidējo kopējo NADP(H) 52,0 nmol/ml no pētījumiem, kuros tika mērīti abi metabolīti (n=11) (4.e att. h). Kopumā pieejamo datu apjoms par NADP(H) ir mazs visās sugās, kā rezultātā samazinās katra audu vidējās vērtības ticamība.
NAD(P)(H) kvantitatīvās noteikšanas metožu novirzes un mainīguma analīze.
Ņemot vērā, ka lielākajā daļā šajā metaanalīzē iekļauto pētījumu tika pārbaudīti NAD plus līmeņi grauzēju aknu paraugos (1.c, e att.), mēs izmantojām gan peles, gan žurku aknu fizioloģiskos NAD plus līmeņus, lai noteiktu iespējamo novirzi rezultātos, kas atbilst. uz kvantitatīvās noteikšanas metodi (5a,b att.). Šajā analīzē iekļauto peļu vidējais vecums bija 17,9 nedēļas (diapazons: 2–55 nedēļas), un 6 pētījumos dzīvnieku vecums netika atklāts. Attiecībā uz žurkām lielākā daļa pētījumu neatklāja dzīvnieku vecumu, izņemot trīs, kas svārstījās no 2 dienām līdz 8 mēnešiem. Nevienā no pētījumiem netika ziņots par vecu dzīvnieku izmantošanu. Peļu aknās lielais NAD plus ziņoto koncentrāciju diapazons bija no 1,8 līdz 1132 nmol/g aknās ar vidējo vērtību 596.0 (n=26) (5.a att.) , savukārt NADH koncentrācijas svārstījās no 0,9 līdz 109 nmol/g audu ar vidējo vērtību 66,43 (n=6) (papildu 6.a attēls). Svarīgi, ka vidējiem fizioloģiskajiem NAD plus un NADH rezultātiem peļu aknās tika aprēķināts variācijas koeficients 52,5% un 76,5%, ko mēra ar vairākām kvantitatīvās noteikšanas metodēm, parādot mainīguma pakāpi pētījumos. Kā prognozēts no šiem rezultātiem, vidējā NAD plus /NADH attiecība peles aknās (3,41 plus /−3,16 SD, n=19) uzrādīja tikpat lielu mainīguma diapazonu ar CV 92,7 procentiem (papildu 6.c attēls). . Līdzīga NAD plus un NADH mērījumu atšķirība tika novērota arī žurku aknās (CV =42,6 procenti NAD plus un CV =44,4 procenti NADH). Atbilstošās NAD plus un NADH koncentrācijas žurku aknās bija attiecīgi no 159 līdz 796 (n=16) un no 65 līdz 265 (n=12) nmol/g (5.b attēls, papildu 6.b attēls). ), savukārt NAD plus /NADH attiecība uzrādīja CV 50,1 procenti (vidējais: 3,219 plus /−1,612 SD, n=23) (papildu 6. d attēls). Vidējās vērtības un standartnovirzes NAD plus , NADH, kopējā NAD(H) un NAD plus/NADH attiecības datiem peļu un žurku aknās, kas sagrupētas pēc kvantitatīvās noteikšanas metodes, ir parādītas 2. papildu tabulā. Kas attiecas uz NADP(H) līmeņiem un NADP plus / NADPH attiecība, līdzīga mainība tika novērota aknu audos. NADP plus līmenis svārstījās no 50,4 līdz 247,4 nmol/g audu pelēm (papildu 8.a attēls) un no 45,7 līdz 171 nmol/g audu žurkām (papildu 8.b attēls), savukārt NADPH līmenis pelēm svārstījās no 28 līdz 236,9 nmol/g audu (papildu 8.c attēls) un no 90 līdz 409 nmol/g audu žurkām (papildu 8.d attēls). Visbeidzot, NADP plus / NADPH attiecība svārstījās no 0, 12 līdz 0, 55 peles aknās (papildu attēls 8e) un no 0, 12 līdz 1, 44 žurku aknās (papildu attēls 8f).
vislielākajā rezultātu diapazonā (1,8 līdz 1132,3 nmol/g). Pat jaunākie pārbaudītie LC-MS pētījumi parādīja šo NAD plus vērtību diapazonu, tostarp vērtības 1,8 nmol/g41 un 33,8 nmol/g42 un daudz augstākas vērtības 946,3 nmol/g43 un 1132,3 nmol/g44. Turklāt lielais LC–MS NAD plus vērtību diapazons, šķiet, neatbilda pētījumiem, kuros tika izslēgti ar izotopu iezīmēti iekšējie standarti (5.a att.), kas ir metode, ko izmanto, lai uzlabotu metabolīta identificēšanu un kvantitatīvās vērtības precizitāti. . Tomēr divi identificētie LC-MS pētījumi, kas balstījās tikai uz ārējo standarta līkni NAD plus kvantitatīvā noteikšana, nevis ietverot iekšējo kontroli, bija vidēji zemāki par vidējo visiem pasākumiem (5.a att.). Turklāt pētījumos, kuros izmantoja iekšējo standartu normalizāciju, tika izmantoti dažāda veida iekšējie standarti, piemēram, viena marķēta atsauces metabolīta 45, 46 vai marķētu metabolītu ekstraktu iekļaušana no rauga 43, 44 vai šūnu kultūrām41. Interesanti, ka šajos pētījumos, kuros tika izmantoti no rauga vai šūnu kultūras ekstraktiem iegūti standarti, tika nodrošināti vai nu augstākie, vai zemākie no LC-MS iegūtie aknu NAD plus līmeņu mērījumi. Tas potenciāli uzsver, kā ar izotopiem bagātu standartu šūnu ekstrakti var veicināt NAD un mērījumu mainīgumu, jo pievienotā standarta rauga vai šūnu ekstrakta matricas efekts var ietekmēt jonizācijas efektivitāti un līdz ar to mērķa metabolītu izmērīto koncentrāciju.
Šīs kvantitatīvās noteikšanas novirzes un mainīguma analīzes ierobežojumi ietver iespējamās atšķirības vidē, ģenētiskajā izcelsmē, upurācijā, dzimumā un vecumā. Visi dati šai analīzei tika iegūti no dzīvniekiem, kuri izmantoja čau diētu, taču tie var atšķirties pēc veida. Pēc nonāvēšanas tiek ziņots par atšķirībām dzīvnieka paēdušajā vai tukšā dūšā stāvoklī un nogalināšanas diennakts laikā. Turklāt, lai gan lielākā daļa pētījumu ar pelēm tika veikti uz C57BL/6 fona, pētījumos tika izmantots lielāks fonu klāsts žurkām (Wistar: 38 procenti , Albino Wistar: 25 procenti un 6 procenti Hooded Wistar, Sprague-Dawley, Holtzman, ACI, Long-Evans un Cucker žurkas). Peļu aknu pētījumos netika konstatētas statistiskas atšķirības starp vīriešu vai sieviešu vērtībām NAD plus , NADH vai kopējā NAD(H) līmenī vai NAD plus / NADH attiecībai (7. papildu attēls). Tomēr mēs nevaram izdarīt secinājumus ierobežotā sieviešu kohortu skaita dēļ.
Jautājiet vairāk:
E-pasts:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950
