Metode Cistanche ķīmisko aktīvo sastāvdaļu identificēšanai

Kontaktpersonu:joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche Deserticola ķīmisko komponentu identifikācija, izmantojot X500R QTOF sistēmu

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, Āzijas un Klusā okeāna lietojumprogrammu atbalsta centrs (Šanhaja), Ķīna

Ievads

Cistanche deserticolapirmo reizi tika ierakstīts "Shen Nong Materia Medica"; tas ir pazīstams arī kā "Dayun", "Rousong Rong" un "Zong rong". Kā tradicionālas augu izcelsmes zāles tam piemīt īpašības, kas baro nieru jaņ, uzlabo asins plūsmu, darbojas kā caurejas līdzeklis, imūnstimulācija un citi efekti[1]. 1983. gadā japāņu zinātnieks H. Kobayashi un citi sāka pētīt ķīmisko sastāvuCistanche Deserticola[2], un kopš tā laika tā ir kļuvusi par populāru tēmu Ķīnas medicīnas pētniecībā, kas pēdējo 30 gadu laikā ir radījusi lielu interesi gan iekšzemē, gan ārzemēs.Cistanche Deserticolapieder augu klasei, kas satur fenoluGlikozīdi, iridoīdus un toGlikozīdi, un lignāniem un toGlikozīdi.

Četrkāršā lidojuma laika (QTOF) masas spektrometrija ir jutīgs un specifisks līdzeklis, lai identificētu ķīniešu medicīnas komponentus, kas pakāpeniski kļuvuši neaizstājami pētniecībā. Šī tehnoloģija ir pārvarējusi tradicionālās tehniskās problēmas, retrospektīvi analizējot atsevišķas injekcijas, kas ļauj iegūt svarīgus datus un visplašāko paraugu informācijas iegūšanu. Precīzu masas un augstas izšķirtspējas TOF-MS un TOF-MS/MS datu izmantošana ļauj veikt vienlaicīgu, ļoti specifisku mērķtiecīgu un nemērķa kvalitatīvu analīzi. Tomēr instrumentu darbības un programmatūras izmantošanas sarežģītība ir ievērojami ierobežojusi šīs tehnoloģijas izplatību un attīstību. Šeit mēs ieviešam jaunu QTOF sistēmu, kas izmanto revolucionāru jaunu N tipa ģeometrijā balstītu TOF ceļu, intuitīvu programmatūru un precīzas molekulmasas metodes, kuras ir vieglāk izmantot ķīniešu medicīnas komponentu identificēšanā.

Šīs metodes priekšrocības ir šādas:

1. X500R izmanto izturīgu, nozarē apstiprinātu Turbo VTM jonu avotu un gaisa aizkaru gāzes saskarnes dizainu, kam ir spēcīga pretpiesārņojuma funkcija;

2. SCIEX OS Software ir integrējusi iegūšanas, apstrādes un ziņošanas funkcijas vienā platformā; interfeiss ir intuitīvs, viegli apgūstams, un tam ir viena pieskāriena automātiskās pielāgošanas korekcija, lai nodrošinātu, ka analītiķi ar jebkuras kompetences pakāpi var iegūt augstas kvalitātes, uzticamus datus;

3. SCIEX OS programmatūras izmantošana, lai apstrādātu datus, lai identificētu ķīniešu medicīnas komponentus, ir vienkārša un ļauj ātri iegūt noderīgu informāciju, tādējādi ;

4. Tas iegūst precīzākus un uzticamākus identifikācijas rezultātus no Ķīnas medicīnas bibliotēkām, kas satur MS /MS spektrus;

5. Augstas izšķirtspējas MS/MS Ķīniešu medicīnas datubāzes ir balstītas uz "Ķīnas farmakopejas" 1. daļas TCM aktīvajām vielām; ieskaitot sastāvdaļu atsauces farmakopejā un aktīvās sastāvdaļas garšaugos, ir gandrīz 900 savienojumu

cistanche deserticola uzlabo efektivitāti

Eksperimentālais process

1. izmantojot TOF-MS-IDA MS/MS režīmu, injicē paraugu un vienlaikus iegūst primāros prekursora jonus un atbilstošos sekundāros spektrus;

2. Izmantojot SCIEX OS software mērķtiecīgu skrīningu, mērķa savienojumu un sekundāro spektru apstiprināšanu, kā arī Ķīnas medicīnas standartu un atbilstības metožu pārbaudi, var palielināt precizitāti un darba produktivitāti.

3. SCIEX OS Software nemērķa identifikācijas darbplūsma izmanto bibliotēkas meklēšanu un pilnīgus nezināmus meklējumus ChemSpider, lai pārbaudītu rezultātus, nodrošinot, ka vairāk komponentu tiek identificēti ar vienkāršāku darbplūsmu.

Paraugi un priekšapstrādes metode

Parauga avots:

Iegādāts no Šanhajas aptiekām šķēlēs

Priekšapstrādes metode:

1. Šķēles tika sasmalcinātas, veidojot pulveri;

2. 0,9mg tika nosvērts un iegremdēts 3 ml metanolā 40min;

3. Paraugs no 2. soļa) tika ultrasonizēts 1 h;

4. Tika veikta centrifugēšana un centrifugāta noņemšana, lai to izmantotu par paraugu.

Šķidruma hromatogrāfijas (LC) nosacījumi

Hromatogrāfiskā kolonna: XSelect HSS T3, 2,1*150mm, 3,5μm;

Kustīgā fāze: tika izmantota gradienta eluēšana

Kustīgā fāze: A ir 0,1% skudrskābes ūdens-2mM NH4FA

B ir 95% acetonitrila-5% ūdens-2mM NH4FA

Plūsmas ātrums: 0.5mL / min

Kolonnas temperatūra: 40ºC

Ievietotais daudzums: 5μL

Masspektrometrijas metode:

Skenēšanas metode: TOF MS-IDA-15 MS/MS kvalitatīvais skrīnings

ESI jonu avota parametri:

Gaisa aizkaru gāzes CUR: 35psi; IS spriegums: 5500V/-4500V

Avota temperatūra: 600ºC

Atomizējošā gāze GAS1: 55psi; Papildu gāze GAS2: 60psi

Instrumentu režīma meklēšana:

Viena pieskāriena (apakšējā labajā stūrī atlasiet MS Check), pilnībā automatizēts TOF-MS un TOF-MS/MS korekcijas režīms nodrošina, ka jebkura ekspertīzes līmeņa analītiķi var iegūt precīzus, uzticamus, reproducējamus datus.

Pozitīvie un negatīvie jonu režīma BBC:

Savienojuma identifikācijas procedūra

1. Mērķtiecīga komponentu identifikācijas darbplūsma

1.1: Molekulārās formulas meklēšana

Nepieciešams tikai ķīmiskā savienojuma nosaukums un molekulformula; tos var ievadīt tieši vai importēt, izmantojot Excel kopēšanas un ielīmēšanas funkciju, lai izveidotu apstrādes metodi

Kad rezultātu tabula ir izveidota, tajā pašā logā var apskatīt kvantitatīvus un kvalitatīvus rezultātus. Sarkanā/zaļā indikatora sistēma tiek izmantota, lai norādītu masas precizitāti, aiztures laiku, izotopa tipu un pārliecību par identifikāciju, izmantojot datu bāzes atbilstību.

SCIEX OS programmatūra ļauj lietotājiem filtrēt rezultātus un parādīt tikai tos savienojumus, kas atbilst pieņemšanas kritērijiem un atbilst lietotāja noteiktiem ticamības intervāliem. Tā var ātri atrast mērķtiecīgus rezultātus lielās datu bāzēs.

MS/MS spektru TCM datu bāze ļauj veikt sekundāro atbilstību un dod ticamākus rezultātus (pelēkā krāsa datu bāzē norāda MS/MS datus)

Literatūrā ir fenola nosaukumi un molekulārās formulasglikozīdsaktīvās sastāvdaļas. Izmantojot iepriekš minēto mērķa komponentu identificēšanas procesu, tika noteikts, ka paraugs satur 39 fenola glikozīdu veidus:

Bez fenolaglikozīdsaktīvās sastāvdaļas, Cistanche satur arī lielu skaitu savienojumu, piemēram, iridoīdus, glikozīdus un lignānus. Identifikācijas rezultāti ir šādi:

Iridoīdu, glikozīdu un lignānu identifikācijas saraksts:

1.2. Meklēšana datu bāzē:

53 savienojumi tika iegūti, veicot atbilstošu identifikāciju TCM datubāzē: 43 pozitīvi joni, 22 negatīvi joni un 12 atkārtojumi, kas uzskaitīti zemāk. Bez aktīvā fenolaGlikozīdi, iridoīdus, glikozīdus un lignānus, Cistanche satur arī

2. Nemērķa komponentu analīze

Nemērķa komponentu identifikāciju var veikt ar iebūvēto ChemSpider meklēšanas funkciju, lai noteiktu nezināmo klasifikāciju un veidu. Lai identificētu komponentus bez mērķa, vienkārši izvēlieties "nemērķa" režīmu, un molekulārās formulas meklēšana izstrādās apstrādes metodi. Darbplūsma ir šāda:

Pilnīgiem nezināmajiem molekulārās formulas meklēšanas rezultāti tiek parādīti maksimālā pārlūka logā TOFMS masas spektra apakšējā daļā; ar ChemSpider datu bāzes meklēšanu rezultāti tiek uzskaitīti pēc prioritātes, un ChemSpider iegūtā strukturālā informācija tiek automātiski salīdzināta ar iegūto MS/MS spektru, nodrošinot sekundāro atgriezenisko saiti ātrai identifikācijai.

Kopsavilkuma

1. Ātra augstas izšķirtspējas datu iegūšana; vienā injekcijā tika iegūti augstas izšķirtspējas DATI par TOF MS un MS/MS, kurā bija 39 identificējami fenola glikozīdu aktīvie komponenti un 16 iridoīdi, lignāni un glikozīdi;

2. TCM sekundāro spektru datu bāze sniedz papildu atbilstības informāciju, un programmatūra automātiski nodrošina datu bāzes atbilstības rezultātu. Izmantojot rezultātu, var viegli, ātri un precīzi identificēt ķīniešu medicīnas komponentus;

3. Ierīce ir vienkārša, un tai ir viena pieskāriena automātiskās pielāgošanas korekcija, lai nodrošinātu, ka analītiķi ar jebkuras kompetences pakāpi var iegūt augstas kvalitātes, uzticamus datus;

4. Jaunajā SCIEX OS programmatūras versijā ir integrēta datu iegūšana, apstrāde (kvantitatīva un kvalitatīva), attēlošana, ziņošana un datu bāzes pārvaldība. Tas atrisina grūtības, ar kurām saskaras daudzi lietotāji, izmantojot intuitīvu un viegli lietojamu saskarni;

5. Gan mērķtiecīgas, gan nemērķtiecīgas skrīninga darbplūsmas ir vienkāršas, un iebūvētā metodes rokasgrāmata palīdz lietotājiem precīzi un ātri izveidot metodes.

Atsauces

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, ĶTR farmakopeja [S]. Pekina: Nacionālā farmakopejas komisija, 2015

2. Lei, Song Zhihong, Tu Pengfei; Pētījumi par Cistanche ģints augu ķīmisko sastāvu, "Ķīniešu augu izcelsmes zāles", 34. sējums, Nr. 5, 2003. gada maijs,473-476.