Cistanche Deserticola polisaharīdu ekstrakta dekolorizācijas procesa un antioksidantu aktivitātes optimizācija pēc reakcijas virsmas metodoloģijas

Kopsavilkums:

 

Mērķis:Lai optimizētu Cistanche Deserticola polisaharīdu dekolorizācijas procesu un izpētītu to antioksidantu aktivitāti.

Tika izpētītas metodes, izmantojot aktivēto oglekli kā atkrāsojošu līdzekli, tika izpētītas 4 faktoru, tostarp aktivētās oglekļa devas, dekolorizācijas temperatūras, dekolorizācijas laika un pH, iedarbība uz dekolorizācijas ātrumu un polisaharīdu reģenerācijas ātrumu. Balstoties uz viena faktora eksperimentiem, Cistanche Deserticola polisaharīdu ekstrakta dekolorizācijas process tika optimizēts, izmantojot reakcijas virsmas metodoloģiju. Izmantojot in vitro antioksidantu aktivitātes novērtēšanas metodi, 1, 1- difenila {-2- pikrylhidrazīna (DPPH) brīvo radikāļu samazināšanas spēju, kopējo reducējošo spēju, hidroksilradikālo izkropļošanas spēju un 2,2'-azino spēju, hidroksilradikālas samazināšanas spējas un 2,2'-a-azino Tika noteikta bis ({3- etilbenzotiazols - 6- sulfonskābes) diamonija sāls (ABTS) katjonu brīvā radikāļu attīrīšanas spēja polisaharīdu no Cistanche Deserticola. Rezultāti optimālie dekolorizācijas procesa apstākļi polisaharīdu ekstraktam no Cistanche Deserticola bija šādi: aktīvā oglekļa deva 20%, dekolorizācijas temperatūra 37 grādi, atšifrēšanas laiks 49 minūtes, pH 5,03. Šajos optimālajos apstākļos dekoloizrācijas ātrums un polisaharīdu atjaunošanās līmenis bija attiecīgi 62,66% un 96,16%. Pēc dekolorizācijas ievērojami palielinājās DPPH radikālā un hidroksilgrupas brīvo radikāļu samazināšanas iespējas, savukārt abtu anjonu radikāļu spējas ievērojami samazinājās. SECINĀJUMS Dekolorizācijas procesu ir viegli darbināt, ar labu dekolorizācijas efektu un polisaharīdu atveseļošanās ātrumu. Tam ir svarīga lietojumprogrammas vērtība un tas nodrošina pamatu Cistanche Deserticola polisaharīda vēlākai izpētei un attīstībai.

Atslēgas vārdi: Cistanche Deserticolapolisaharīds; atkrāsošana; reakcijas virsmas metodika; antioksidanta aktivitāte

CistancheDeserticola ietekme

 

1.2.3. Polisaharīdu atjaunošanās ātruma mērīšana

Standarta līknes sagatavošana:
Tika izmantota fenola-sulfurskābes metode. Aptuveni 0. 0 5 0 0 g glikozes standarta (žāvēts līdz nemainīgam svaram 105 grādos) tika precīzi nosvērts un atšķaidīts līdz 50 ml tilpuma kolbai, lai sagatavotu izejas šķīdumu. Pēc tam precīzi izmērīja 1,0 ml rezerves šķīduma un atšķaidīja līdz 10 ml tilpuma kolbā, lai iegūtu 0,1 mg/ml standarta šķīdumu. Standarta risinājumi 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 un 100 μl glikozes tika precīzi izmērīti 1,5 ml centrifūgas mēģenēs. Katrai caurulei pievienoja destilētu ūdeni, lai kopējais tilpums būtu 100 μl. Kā tukšu vadības šķīdumu tika izmantots vēl 1,5 ml centrifūgas caurule, kas satur 100 μl destilētu ūdeni. Katrā mēģenē pievienoja 100 μl 5% fenola šķīduma, rūpīgi sajaucot, un pēc tam ātri pievienoja 500 μL koncentrētas sērskābes. Caurules tika virpuļotas 3 minūtes un atstāja, lai stāvētu 35 minūtes. Pēc tam 200 μl reakcijas šķīduma pārnesa 96- akas plāksnē, un absorbcija tika izmērīta pie 490 nm, izmantojot automātisko mikroplašu lasītāju. Standarta līkne tika attēlota ar absorbciju (y) kā vertikālo asi un glikozes koncentrāciju (x, ug/ml) kā horizontālo asi. Iegūtais standarta līknes vienādojums bija:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

Polisaharīdu satura mērīšana:
100 μl atšķaidīta alikvotaCistanche DeserticolaPolisaharīdu ekstrakts tika precīzi izmērīts 1,5 ml centrifūgas mēģenē. Absorbcijas vērtība tika noteikta, izmantojot iepriekš aprakstīto metodi, un polisaharīdu koncentrācija tika aprēķināta, izmantojot standarta līkni.

Polisaharīdu atjaunošanās ātruma mērīšana:
Polisaharīdu masaCistanche DeserticolaEkstrakts pirms un pēc dekolorizācijas tika izmērīts, izmantojot iepriekš minēto metodi. Polisaharīdu reģenerācijas ātrums tika aprēķināts, izmantojot (2) vienādojumu:

Polisaharīdu atjaunošanās līmenis (%)
= (maftermbefore) × 100%\ kreisais (\ frac {m _ \ teksts {pēc}} {m _ \ teksts {pirms}} \ pa labi)
Kur:

mbeForem _ \ teksts {pirms} mbefore un mafterm _ \ teksts {pēc} mafter ir masasCistanche DeserticolaPolisaharīdi attiecīgi un pēc atkrāsošanas (g).

 

 

1.2.4 viena faktora eksperimentālais dizains

Četru faktoru aktivētas oglekļa devas, dekolorizācijas temperatūras, dekolorizācijas laika un pH-on atkrāsošanas ātruma un polisaharīdu atgūšanas ātruma ietekme.Cistanche DeserticolaTika izmeklēts polisaharīdu ekstrakts.

Aktivizētas oglekļa devas ietekme:
Fiksēts dekolorēšanas laiks 30 minūtēs, dekolorizācijas temperatūra 50 grādos un pH pie 5,03 (izmērītā parauga vērtība). Tika pētīta aktivētās oglekļa devas ietekme uz dekolorizācijas ātrumu un polisaharīdu reģenerācijas ātrumu.

Atkrāsošanas temperatūras ietekme:
Fiksēta aktivētā oglekļa deva 20% (m: m), atkrāsošanas laiks 30 minūtēs un pH pie 5,03. Tika pētīta dekolorizācijas temperatūras ietekme uz dekolorizācijas ātrumu un polisaharīdu atjaunošanās ātrumu.

Atkrāsošanas laika ietekme:
Fiksēta aktivētā oglekļa deva pie 20%, dekolorizācijas temperatūra 50 grādos un pH pie 5,03. Tika pētīta dekolorizācijas laika ietekme uz dekolorizācijas ātrumu un polisaharīdu atjaunošanās ātrumu.

PH:
Fiksēta aktivētā oglekļa deva 20% (m: m), dekolorizācijas temperatūra 50 grādos un atkrāsošanas laiks 30 minūtēs. Tika pētīta pH ietekme uz dekolorizācijas ātrumu un polisaharīdu atjaunošanās ātrumu.

 

1.2.5. Reakcijas virsmas optimizācijas eksperimentālais dizains

Balstoties uz optimālā stāvokļa diapazoniem, kas identificēti viena faktora eksperimentos, tika izmantota kastes-behnken eksperimentālā projektēšanas metode, lai veiktu četru faktoru, trīs līmeņu dizainu dekolorizācijas apstākļiem, kas paredzēti atcelšanas apstākļiemCistanche Deserticolapolisaharīdu ekstrakts. Kā novērtēšanas indeksus tika izmantots dekolorizācijas ātrums un polisaharīdu reģenerācijas ātrums. Projektēšanas parametri ir parādīti 1. tabulā.

1.2.6. Antioksidantu aktivitātes noteikšanaCistanche DeserticolaPolisaharīdi

1) noteikšanaCistanche DeserticolaPolisaharīdu DPPH radikālas tīrīšanas spēja

Balstoties uz Kan Jintao et al. [21] ar nelielām modifikācijām, 0. 5 ml 1. 0 mg/ml polisaharīda ūdens šķīdums tika sajaukts ar 2,4 ml 0. 1 mmol/l dpph etanola šķīduma šķīduma (1, {{1 0}} diphenyl -2- pikrylhidrazīns) un 1,1 ml destilēta ūdens. Maisījumam ļāva reaģēt tumsā 37 grādos 30 minūtes. Reakcijas šķīduma absorbcija tika izmērīta pie 517 nm, un DPPH radikāļu notveršanas ātrums 1,0 mg/ml polisaharīdus pirms un pēc dekolorēšanas tika aprēķināts, izmantojot (3) vienādojumu:

DPPH radikāļu samazināšanas ātrums (%)

{{0}} [1− (A1 - A2) a 0] × 100%= \ kreisais [{1 - \ fRAC {(a _1 - a _2) 100 \%= [1 - A0 (A1 −A2)] × 100%

Kur:

A1A _1 A1 ir parauga mēģenes absorbcija,

A2a _2 A2 ir absorbcija, kad bezūdens etanols aizstāj DPPH risinājumu,

A {{0}} A _0 A0 ir absorbcija, ja destilēts ūdens aizstāj paraugu.

 

(2) Kopējās samazināšanas jaudas noteikšanaCistanche DeserticolaPolisaharīdi

Atsaucoties uz Lu Xue et al. [22], 1. 0 mg/ml polisaharīdi pirms un pēc dekolorizācijas. 5 μl paraugs un 180 μL FRAP (dzelzs jonu samazinošs antioksidantu jaudas) darba šķīdums tika pievienots 96- urbuma plāksnei, rūpīgi sajaukts un ļāva reaģēt 37 grādos 5 minūtes. Absorbcija tika izmērīta pie 593 nm, un polisaharīdu kopējā reducējošā jauda tika izteikta FESO4 standarta šķīduma koncentrācijas izteiksmē.

(3) hidroksilradikālas samazināšanas spējas noteikšanaCistanche DeserticolaPolisaharīdi

Pēc literatūrā aprakstītās metodes un hidroksilradikālo izvadīšanas testa komplekta instrukcijas, 1. 0 mg/ml polisaharīdi pirms un pēc atcelšanas. Destilēts ūdens tika izmantots, lai aizstātu ūdeņraža peroksīdu kontroles grupas absorbcijai (Acontrola _ \ teksts {Control} acontrol), un destilēts ūdens tika izmantots, lai aizstātu tukšās grupas absorbcijas paraugu (Ablanka _ \ teksts {tukšs} ablank). Absorbcijas vērtības tika izmērītas pie 550 nm, un hidroksilradikālo notveršanas ātrums tika aprēķināts, izmantojot (4) vienādojumu:

Hidroksilradikālie samazināšanas ātrums (%)

= A _ \ teksts {tukšs})} \ pa labi] \ Times 100 \%= [(acontrol −ablank) (acontrol −s paraugs)] × 100%

Kur:

Asamplea _ \ teksts {paraugs} As paraugs ir parauga grupas absorbcija,

Acontrola _ \ teksts {Control} Acontrol ir kontroles grupas absorbcija,

Ablanka _ \ teksts {tukšs} Ablank ir tukšas grupas absorbcija.

 

(4) Abtu katjonu radikālās tīrīšanas spējas noteikšanaCistanche DeserticolaPolisaharīdi

Saskaņā ar metodi, kas aprakstīta literatūrā [24], un ABTS katjonu radikālas tīrīšanas testa komplekta instrukcijas, 1. 0 mg/ml polisaharīdi pirms un pēc atcelšanas. 10 μL paraugs tika sajaukts ar 20 μl reaģenta darba šķīduma četriem un 170 μl ABT darba šķīduma, rūpīgi sajaukts un 6 minūtes ļāva reaģēt tumsā istabas temperatūrā. Dejonizēts ūdens tika izmantots kā tukša vadība. Absorbcija tika izmērīta pie 405 nm, un ABTS katjonu radikāļu samazināšanas ātrums tika aprēķināts, izmantojot (5) vienādojumu:

Abta katjonu radikālas tīrīšanas ātrums (%)

= [(bblank - bblank] × 100%= \ kreisais [\ fRAC {(b {_ \ teksts {tukšs} - b _ \ text {paraugs})} {b _ \ teksts {blank}}}} \ \ \ \ \ theses Times} \ \ \ \ \ \ \ \ theses \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ { 100 \%= [bblank (bblank −bsample)] × 100%

Kur:

Bblankb _ \ teksts {tukšs} bblank ir reakcijas absorbcija starp destilētu ūdeni un abts šķīdumu,

BSAMPLEB _ \ teksts {paraugs} BSample ir reakcijas absorbcija starp paraugu un ABTS risinājumu.

 

1.3 Datu apstrāde

Sigmaplot 12.5 programmatūra tika izmantota grafikam, un dizaina eksperts 8. 0. 6 programmatūra tika izmantota datu analīzei.