1. daļa: Karbamilēts sortilīns, kas saistīts ar sirds un asinsvadu pārkaļķošanos pacientiem ar hronisku nieru slimību

Kontaktpersona: Odrija Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pasts:audrey.hu@wecistanche.com

1. daļa: Karbamilēts sortilīns, kas saistīts ar sirds un asinsvadu kalcifikāciju pacientiem ar hronisku nieru slimību

Atslēgvārdi: hroniska nieru slimība, sirds un asinsvadu, nieru

Tulkošanas paziņojums

Pacienti arhroniska nieru slimībair ļoti jutīgi pret attīstībusirds un asinsvaduslimība.Hroniska nieru slimība- specifiskssirds un asinsvaduriska faktori līdz šim galvenokārt nav zināmi. Mēs parādām, ka cirkulējošo sortilīnu pēc translācijas modificē karbamilācija pacientiem ar samazinātunieresfunkciju. Sortilīna karbamilācija palielina saistīšanās afinitāti ar interleikīnu-6 un veicina artēriju kalcifikāciju ex vivo. Turklāt karbamilēts sortilīns ir koronāro artēriju kalcifikācijas klātbūtnes un progresēšanas riska faktors. Mūsu rezultāti norāda uz karbamilētu sortilīnu kā potenciālu terapeitisku mērķi kavēšanaisirds un asinsvadukalcifikācija pacientiem arhroniska nieru slimība.

Ievads

Sortilīns, intracelulārais šķirošanas receptors, ir identificēts kā asirds un asinsvaduriska faktors vispārējā populācijā. Pacienti arhroniskanieresslimībair ļoti jutīgi pret kardiovaskulāru komplikāciju attīstību, piemēram, pārkaļķošanos. Tomēr specifiskihroniskanieresslimība- inducētas sortilīna pēctranslācijas proteīnu modifikācijas un to saikne arsirds un asinsvadupārkaļķošanās paliek nezināma. Lai to izpētītu, mēs pārbaudījām divus neatkarīgushroniskanieresslimībakohortas cirkulējošā sortilīna karbamilācijai un konstatēja palielinātus karbamilētā sortilīna lizīna atlikumus sortilīna ekstracelulārajā domēnā arnieresfunkciju samazināšanās, izmantojot mērķtiecīgu masas spektrometriju. Struktūras analīze paredzēja izmainītu ligandu saistīšanos ar karbamilētu sortilīnu, kas tika pārbaudīts saistīšanās pētījumos, izmantojot virsmas plazmonu rezonanses mērījumus, parādot palielinātu interleikīna 6 afinitāti pret in vitro karbamilētu sortilīnu. Turklāt karbamilēts sortilīns palielināja asinsvadu pārkaļķošanos in vitro un ex vivo, ko paātrina interleikīns 6. Cilvēka pārkaļķotu artēriju attēlveidošana ar masas spektrometriju atklāja in situ karbamilētu sortilīnu. Pacientiem arhroniskanieresslimība, sortilīna karbamilācija bija saistīta ar koronāro artēriju kalcifikāciju neatkarīgi no vecuma unnieresfunkciju. Turklāt pacientiem ar karbamilētu sortilīnu koronāro artēriju kalcifikācija progresēja ievērojami ātrāk nekā pacientiem bez sortilīna karbamilācijas. Tādējādi karbamilēts sortilīns var būt riska faktorssirds un asinsvadukalcifikāciju un var veicināt paaugstinātusirds un asinsvadukomplikācijas pacientiem arhroniskanieresslimība.

Cistanchevar izvairītieshroniskanieresslimība.

Apmēram 1 no 10 cilvēkiem visā pasaulēhroniskanieresslimība.1 Bojātsnieresfunkcija ir galvenais neatkarīgs riska faktorssirds un asinsvadusaslimstība un mirstība un visu cēloņu mirstība.1,2 Faktiski pacienti arhroniskanieresslimībair daudz lielāka iespēja nomirtsirds un asinsvadunotikumiem, nekā attīstīties ar dialīzi nepieciešamas beigu stadijas nieru Q14 slimības.3 Pārmērīga kaļķakmens minerālu nogulsnēšanās asinsvadu audos, kas novērotahroniskanieresslimībapacienti galvenokārt veicina palielinātosirds un asinsvadurisks.4hroniskanieresslimībaatvieglo proteīnu pēctranslācijas modifikāciju (PTM).5 PTM savukārt ir saistīti arsirds un asinsvadupārkaļķošanās,6 liecina par labāku izpratni par PTMhroniskanieresslimība- izraisīti kalcifikācijas procesi varētu atklāt jaunus terapeitiskos mērķus. Tomēr līdz šim specifiskshroniskanieresslimība- saistītās olbaltumvielu modifikācijas, kas saistītas arsirds un asinsvadukalcifikācija nav zināma.

Sortilīns ir visuresoši izteikts intracelulāro šķirošanas receptoru vakuolāro proteīnu šķirošanas 10 proteīnu saimes loceklis.7 Tas ir vienas plūsmas I tipa transmembrānas proteīns ar dažādu lomu proteīnu šķirošanā, tirdzniecībā un šūnu signalizācijā. Kā endocitozes receptors sortilīns var izraisīt ligandu internalizāciju no šūnas virsmas ar endocitozes palīdzību un kārtot ligandus starp intracelulāriem nodalījumiem, piemēram, trans-Golgi tīklu, endosomu, lizosomu un sekrēcijas ceļu.8 Preklīniskie in vivo pierādījumi liecina par svarīgu lomu sortilīns asinsvadu un vielmaiņas traucējumu patoģenēzē, veicinot artēriju sieniņu iekaisumu un pārkaļķošanos, disregulētu lipoproteīnu metabolismu un 2. tipa cukura diabētu.sirds un asinsvadurisk factors.7 In human vascular smooth muscle cells (hSMCs), intracellular sortilin regulates the loading of the procalcific protein tissue nonspecific alkaline phosphatase (TNAP) into extracellular vesicles, thereby conferring the calcification potential that contributes to microcalcification formation.9 The ectodomain of plasma membrane-bound sortilin can be shed and secreted into the circulation.7 In a community-dwelling cohort of men aged >50 gadus mēs ziņojām par augsta sortilīna līmeņa serumā saistību ar aortas kalcifikāciju unsirds un asinsvadunotikumus, iesakot sortilīnu kā asirds un asinsvaduriska faktors vispārējā populācijā.10 Sortilina loma inhroniskanieresslimība, pacientu populācija ar ievērojamu pieaugumusirds un asinsvadupārkaļķošanās, turpina izaicināt noskaidrošanu. Lielākā daļa pētījumu ir vērsti uz šūnu sortilīna funkciju, nevis uz cirkulējošās šķīstošās formas bioloģisko funkciju izpēti.7 Tāpēc labāka izpratne par mehānisko saistību starp cirkulējošo sortilīnu un PTM regulējošo ietekmihroniskanieresslimībapaplašinās zināšanas par sortilīnusirds un asinsvadupārkaļķošanās.

Šis pētījums apšauba hipotēzi, ka cirkulējošā sortilīna PTM ir iesaistīts attīstībāsirds un asinsvadukalcifikācija pacientiem arhroniskanieresslimība.

Cistanche ieguvums: ārstējiet nieru slimības

METODES

Sirds un asinsvaduun nieru iznākumshroniskanieresslimība2–4 pacienti – Ceturtā Homburgas novērtējuma (CARE FOR Home) kohorta

Pētījums CARE FOR HOME iepriekš tika detalizēti aprakstīts11. Analīzei tika izmantota 97 pacientu apakškopa.

Dan-NICAD 1 kohorta

The study design of the Danish study of noninvasive testing in coronary artery disease (Dan-NICAD 1) trial has been described previously.12 For the analysis, we identified a subset of 97 enrolled patients with estimated glomerular filtration rate (eGFR) >60 ml/min un veikta biežuma saskaņošana, pamatojoties uz vecumu, dzimumu, ķermeņa masas indeksu, smēķēšanas statusu, cukura diabētu unsirds un asinsvaduslimība. Identifikācija tika veikta akli attiecībā uz sortilīna līmeni.Sirds un asinsvaduPadziļinātā novērtējuma (CARVIDA) kohorta CARVIDA ir vācu valodas apakšpētījums.HronisksNieresSlimībaPētījumā.13 Tika izmantoti tikai CARVIDA pacientu paraugi, kas tika iekļauti pētījumā Āhenē, Vācijā (n ¼ 78). Datortomogrāfiskā attēlveidošana tika veikta ar divu avotu CT skeneri (SOMATOM Definition Flash vai Force; Siemens), kā aprakstīts iepriekš.14 Ar vidējo novērošanas laiku 4,4 gadi, 41 no 78 pacientiem piekrita vai bija pieejams otrai datortomogrāfijai. skenēšana otrā CARVIDA apmeklējuma laikā 2019. gada 15 2020. ceturksnī.

Statistiskā analīze

Eksperimentālo pētījumu dati ir parādīti kā vidējais SD; n norāda neatkarīgo eksperimentu skaitu vai pacientu skaitu. Normalitāte tika pārbaudīta, izmantojot Shapiro-Wilk testu, un kvantiļu diagramma un dispersijas neviendabīgums tika pārbaudīts, izmantojot Brown-Forsythe testu. Lai salīdzinātu 2 grupas, tika veikts sapārots vai nesapārots 2-astes Studenta t-tests ar vienādām vai nevienlīdzīgām dispersijām. Lai salīdzinātu 3 ārstēšanas grupas, datiem ar normālu sadalījumu un vienādu dispersiju tika veikta 1- vai 2-veidu dispersijas analīze, kam sekoja Tukey post hoc. Dati ar šķību sadalījumu tika novērtēti ar Kruskal-Wallis testu, kam sekoja Dunn post hoc tests. Dati ar nevienlīdzīgām dispersijām tika pārbaudīti ar Velča dispersijas analīzi, kam sekoja Dunnett T3 post hoc tests.

Klīniskajos pētījumos nepārtrauktie dati tiek parādīti kā vidējais SD, ja tie ir normāli sadalīti, vai kā vidējais un starpkvartiļu diapazons mainīgajiem lielumiem ar novirzītu sadalījumu. Kategoriskie dati tiek parādīti procentos. Pīrsona/Fišera c2 tests tika izmantots, lai pētītu saistību starp kategoriskiem mainīgajiem un nepāra Studenta t-testu vai Mann-Whitney U testu nepārtrauktiem mainīgajiem. Atšķirības starp 3 grupām tika salīdzinātas, izmantojot 1-veidu dispersijas analīzi, kam sekoja Sidak post hoc tests. Mazākā kvadrāta nozīmē, ka daudzfaktoru koriģēts karbamilēta sortilīna atlieku skaits tika aprēķināts, izmantojot vispārinātus lineāros modeļus, kā aprakstīts iepriekš.

Koronāro artēriju kalcifikācijas (CAC) tilpums tika logaritmiski pārveidots (ti, naturālais logaritms, ln; ln[CAC plus 1]), lai samazinātu šķībumu. Divfaktoru korelācija tika novērtēta, izmantojot Eta (1 nominālais mainīgais un 1 metriskais mainīgais) vai Pīrsona korelācijas koeficientus (ja abi mainīgie bija metriski). CAC apjoma izmaiņas gadā tika aprēķinātas šādi: [(CAC novērošana – CAC bāzes līnija) / novērošanas laiks mēnešos] * 12. Dispersijas analīze ar CAC apjoma izmaiņām kā atkarīgo mainīgo un fiksētas iedarbības termiņu karbamilācijai (jā pret nē) tika izmantota CAC progresēšanas analīzei. Turklāt šis modelis tika koriģēts, izmantojot kovariantu CAC kovariācijas analīzi Q18 sākotnējā līmenī un mainīgajiem. P < 0.05="" tika="" uzskatīts="" par="" statistiski="" nozīmīgu.="" statistiskās="" analīzes="" tika="" veiktas,="" izmantojot="" graphpad="" prism="" (prism="" software="" inc.,="" 9.="" versija)="" vai="" spss="" (versija="">

Cistanchevar uzlabotnieresfunkcijas unhroniskanieresslimība.

REZULTĀTI

Karbamilētais sortilīns palielinās arnieresfunkciju samazināšanās

Sākotnēji mēs novērtējām sortilīna līmeni serumā pacientiem arhroniskanieresslimībano pētījuma CARE FOR HOME11 un konstatēja paaugstinātu sortilīna līmeni, salīdzinot ar atbilstošu kontroles grupu ar normālunieresfunkcija no Dan-NICAD 1 izmēģinājuma (1. tabula). Cirkulējošie proteīni ir pakļauti PTM pacientiem arhroniskanieresslimībaQ20 .5 Tāpēc mēs veicām detalizētu cirkulējošā sortilīna PTM atlieku kartēšanu pētījuma CARE FOR HOME dalībniekiem un veseliem kontroles subjektiem (S1 papildu tabula), izmantojot MALDI-TOF/TOF MS. Salīdzinot ar kontroles subjektiem,hroniskanieresslimībapacientiem bija 8 no 30 lizīna atlikumiem, kas pārsvarā tika karbamilēti sortilīna ekstracelulārajā domēnā (papildu tabula S3 Q21 un papildu attēls S1). Reprezentatīvi MS spektri no kontroles subjekta un pacienta arhroniskanieresslimībair parādīti 1.a un b attēlā. Signāla specifiku atbalstīja MALDI-TOF / TOF-MS / MS spektri (papildu attēls S2A). Kvantitatīvā noteikšana atklāja ahroniskanieresslimībano stadijas atkarīga karbamilēto atlieku skaita palielināšanās (1.c attēls) un karbamilēto sortilīna peptīdu intensitāte (1.d attēls). Lizīna atlikums 205 tika vienādi modificētshroniskanieresslimībaposmos, savukārt atlikumi 95, 260 un 294 biežāk tika modificēti progresīvāhroniskanieresslimībaposmos (1.e attēls).

Pēc tam mēs novērtējām saistību starp sortilīna karbamilāciju un sākotnējām īpašībām (papildu tabula S2) pētījumā CARE FOR HOME. Mēs novērojām no vecuma atkarīgu sortilīna karbamilācijas atlikumu pieaugumu (2. Zemāka nieru darbība, pamatojoties uz eGFR, pamatojoties uz cistatīna c un kreatinīna līmeni serumā (eGFRcys apgabals), un augstāks urīnvielas un N-termināla pro-smadzeņu natriurētiskā peptīda (NT-proBNP) līmenis bija saistīts ar augstākiem karbamilētā sortilīna atlikumiem (2. Asociācijas saglabājās nozīmīgas pēc vecuma un dzimuma korekcijas (2. tabula).hroniskanieresslimībapacientiem, kuri lietoja Q22 aldosterona antagonistu medikamentus, tika novērota samazināta sortilīna karbamilācija (2. tabula), savukārt eGFRcys laukums neatšķīrās (nē, 50.6 23.2 ml/min uz 1,73 m2; jā, 43.{{10}},9 ml/min uz 1,73 m2; P ¼ 0,236) un urīnviela (nē, 68.6 40},1 mg/dl; jā, 72.{21) }},9 mg/dl; P ¼ 0,729) starp pacientiem ar vai bez aldosterona antagonistiem. Papildus urīnvielai mieloperoksidāze var veicināt proteīnu karbamilācijusirds un asinsvaduslimība.19 Tomēr mēs neatradām saistību starp kopējo mieloperoksidāzes līmeni un aktivitāti un sortilīna karbamilāciju (papildu attēli S3A un B).

nieru slimību ārstēšana:Cistanche

Turklāt, izmantojot MS attēlveidošanu, mēs novērtējām karbamilēta sortilīna klātbūtni cilvēka augšstilba artērijās. Karbamilētais peptīds SEDYGK*NFK* (m/z 1172) lielā mērā bija sastopams pārkaļķotās augšstilba kaula artērijās no plkst.hroniskanieresslimībapacientiem un nav pārkaļķotās augšstilba artērijās (1.f attēls). MS / MS spektri atbalstīja SEDYGK * NFK * identifikāciju (papildu attēls S2B). SEDYGK*NFK* atrodas tuvu pārkaļķotiem apgabaliem tunikas vidē (1.g attēls). Turpretim pēctranslācijas nemodificēta peptīda SEDYGKNFK masas signāla intensitāte (m/z 1086) bija augstāka kontroles artērijās (1.f attēls).

Apkopojot, salīdzinot ar kontrolēm ar parastonieresfunkcija, pacienti arhroniskanieresslimībair augstāks sortilīna līmenis serumā un pēctranslācijas karbamilēts sortilīns cirkulācijā, ko var noteikt arī asinsvados.

Karbamilēts sortilīns veicina gludās muskulatūras šūnu pārkaļķošanos Ņemot vērā mūsu konstatējumu, ka karbamilēts sortilīns ir lokalizēts pārkaļķotās vietās, mēs pēc tam novērtējām sortilīna karbamilācijas ietekmi uz asinsvadu kalcifikāciju in vitro un ex vivo. Lai noteiktu sortilīna karbamilācijas funkcionālo nozīmi, mēs in vitro izraisījām rekombinantā sortilīna (SortCarb) karbamilāciju ar urīnvielu un atklājām līdzīgu karbamil-lizīna atlieku modeli, kāds konstatēts cilvēkiem in vivo (papildu attēls S4A un papildu tabula S4). In vitro karbamilācija nemainīja SortCarb proteīna integritāti, salīdzinot ar kontroles izspēles modifikāciju (SortCo), ko novērtēja ar gēla elektroforēzi un Western blot (papildu attēls S4B un C). Ne SortCo, ne SortCarb neuzrādīja citotoksisku ietekmi uz hSMC (papildu attēls S5A). SortCo un SortCarb vienādi izmantoja hSMC (papildu attēls S5B). Kalcificējot hSMC, SortCarb inducēja proosteogēnos transkriptus ALPL (þ56 procenti; P ¼ 0.039) un RUNX2 Q23 (þ25 procenti; P ¼ 0.014; 2.a un b attēls. ), kā arī audu nespecifiskā sārmainās fosfatāzes aktivitāte (þ46 procenti; P ¼ 0,007; 2.c attēls), salīdzinot ar SortCo. Funkcionālā līmenī SortCarb ievērojami palielināja matricas kalcifikāciju (2.d un e attēls). Visbeidzot, ex vivo orgānu kultūras modelī SortCarb palielināja kalcifikāciju žurku aortas gredzenos (attēls 2f un g).

Cistanche ieguvums: ārstējiet nieru slimības

Lai turpinātu, noklikšķiniet uzšeit2. daļai.