1. DAĻA Cistanche Tubulosa (Schenk) Wight ekstrakts uzlabo pakaļējo ekstremitāšu veiktspēju un mazina miozīna smagās ķēdes IId/IIx ekspresiju imobilizētām pelēm

Lai iegūtu vairāk informācijas, lūdzu, sazinieties ar:Joanna.jia@wecistanche.com

1Neiromedicīnas zinātnes nodaļa, Dabas medicīnas institūts, Tojamas Universitāte, 2630 Sugitani, Toyama 930-0194, Japāna 2Japānas Austrumu medicīnas nodaļa, Tojamas Universitātes Medicīnas un farmācijas zinātņu augstskola, 2630 Sugitani, Toyama {{5 }}, Japāna

Sarakste jāadresē Chihiro Tohda; chihiro@inm.u-toyama.ac.jp

Saņemts 2019. gada 14. jūnijā; Pārskatīts 2019. gada 13. septembrī; Akceptēts 2019. gada 17. septembrī; Publicēts 2019. gada 22. oktobrī

Akadēmiskais redaktors: Wen-yi Kang

Autortiesības © 2019 Yoshiyuki Kimbara et al. Šis ir brīvpiekļuves raksts, kas tiek izplatīts saskaņā ar Creative Commons Attribution License, kas atļauj neierobežotu izmantošanu, izplatīšanu un reproducēšanu jebkurā datu nesējā, ja oriģinālais darbs ir pareizi citēts.

Skeleta muskuļu atrofija ir sastopama daudzos klīniskos stāvokļos, bet farmakoloģiskā ārstēšana vēl nav noteikta.Cistanche tubulosa(Schenk) Wight ir augu izcelsmes zāles, ko izmanto tradicionālajā japāņu un ķīniešu medicīnā. Pašreizējā pētījumā mēs pētījām ietekmiC. tubulosa ekstrakts(CTE) uz atrofētiem muskuļiem in vivo. Mēs arī pētījām pakaļējo ekstremitāšu ģipša imobilizāciju pelēm un izstrādājām jauna veida pakaļējo ekstremitāšu imobilizāciju, kas sastāv no sūklim līdzīgas lentes un plānas plastmasas caurules. Izmantojot šo metodi, 3 no 4 peļu grupām (n 11 katrai grupai) tika imobilizētas pakaļējās ekstremitātēs un 13 dienas tika ievadītas CTE vai nesējs. Ceturtās grupas pelēm, kurām tika ievadīts nesējs, tika veikta viltus procedūra. Pēc tam tika izgriezti tricepsa muskuļi (TS). Lai analizētu jaunās liešanas sistēmas un CTE ievadīšanas ietekmi uz muskuļu atrofiju, mēs novērtējām TS slapjo svaru un miofibras šķērsgriezuma laukumu (CSA). Mēs arī noteicām MyHC IId / IIx ekspresijas līmeņus ar Western blotēšanu, jo to palielināšanās ir muskuļu atrofijas pazīme, kas liecina par lēnas uz ātru miofibras tipa maiņu. Turklāt mēs veicām divus pakaļējo ekstremitāšu veiktspējas testus. Jaunā lējuma imobilizācijas metode ievērojami samazināja TS slapjo svaru un miofibras CSA. Tam sekoja pakaļējo ekstremitāšu funkcijas pasliktināšanās un MyHC IId / IIx ekspresijas palielināšanās. CTE ievadīšana nemainīja TS mitro svaru vai miofibras CSA; tomēr tas liecināja par pakaļējo ekstremitāšu funkciju zuduma uzlabošanos un palielinātas MyHC IId/IIx ekspresijas nomākšanu imobilizētām pelēm. Mūsu jaunā pakaļējo ekstremitāšu ģipša imobilizācijas metode efektīvi izraisīja muskuļu atrofiju. CTE neietekmēja muskuļu masu, bet nomāca pāreju no lēnas uz ātru miofibras tipu ģipsi imobilizētām pelēm, uzlabojot pakaļējo ekstremitāšu funkciju pasliktināšanos.

Cistanche deserticola ir daudz efektu, noklikšķiniet šeit, lai uzzinātu vairāk

1. Ievads

Patofizioloģiskie stāvokļi, kas saistīti ar skeleta muskuļu atrofiju, ir sarkopēnija [1], kaheksija [2] un glikokortikoīdu izraisīta skeleta muskuļu atrofija [3]. Skeleta muskuļu atrofiju izraisa arī ilgstoša nelietošana [4], ko var izraisīt gultas režīms [5], ģipsi uzlikšana lūzumu vai saišu traumu ārstēšanai [6] vai lidojumi kosmosā [7]. Tā kā šo stāvokli var izraisīt dažādas slimības, tas skar lielu daļu iedzīvotāju.

Atbilstoša fiziskā slodze un uztura terapija ir būtiska muskuļu atrofijas ārstēšanai [8]. Turklāt daži pētījumi ir ziņojuši, ka farmakoloģiskie pretpasākumi, tostarp selektīvi androgēnu receptoru modulatori, cilvēka monoklonālās antivielas pret miostatīnu un selektīvie grelīna receptoru agonisti, ir efektīvi [9]; tomēr šīs pieejas vēl nav izveidotas.

Iepriekš aprakstītie muskuļu atrofiskie apstākļi ir saistīti ar miofibras tipa profila maiņu un muskuļu masas samazināšanos. Muskuļu disfunkcija, ko izraisa nervu ietekmes zudums un mehāniska atslodze, izraisa lēnas uz ātru miošķiedras tipa maiņu un izmaiņas miozīna smagās ķēdes (MyHC) izoformas profilā [10], par ko liecina MyHC IId/IIx ekspresijas līmeņa paaugstināšanās. [11, 12]. Tā vietā ātri uz lēnu miofibras tipa maiņu izraisa glikokortikoīdu ievadīšana, kaheksija, sepse un citi faktori [10].

Cistancheir augu izcelsmes zāles, kuru izcelsme ir noCistanche deserticolaYC Ma,C. tubulosa(Schenk) Wight vai C. salsa (CA Mey) Beck saskaņā ar Japānas farmakopeju [13]. Tradicionālajā japāņu (Kampo) un ķīniešu medicīnā to lieto, lai ārstētu "nieru deficīta sindromu", kam raksturīga neauglība, sistēmisks muskuļu vājums (īpaši mugurā un apakšējās ekstremitātēs) un kaulu vājums [14, 15]. Ir zināms, ka tas satur dažādas sastāvdaļas, tostarp akteozīdu, ehinakozīdu un izoakteozīdu [16]. Šī auga ekstraktam vai tā ķīmiskajām sastāvdaļām ir bijusi sirds, aknu un neiroprotektīva iedarbība; pretnovecošanās, pretnoguruma, vazodilatatora un afrodiziaka iedarbība; antioksidanta un pretiekaisuma darbība; un spēja uzlabot atmiņu un mācīšanos [15, 16]. Tomēr šī auga efektivitāte muskuļu izsīkuma slimību profilaksē vai ārstēšanā nav apstiprināta. Tāpēc šajā pētījumā mēs pētījām sekasC. tubulosaekstrakts (CTE) kā muskuļu atrofijas ārstēšana.

Šim nolūkam mēs izmantojām pakaļējo ekstremitāšu ģipša imobilizāciju, lai izraisītu muskuļu atrofiju pelēm, jo ​​īpaši koncentrējoties uz ģipsi izmantotajiem materiāliem. Ir ziņots par dažādām lējuma sistēmām, tostarp Parīzes lējumu ģipsi [17], stiklšķiedras lējumu [18], polipropilēna mikrocentrifūgas caurulēm [19], ierobežojošajiem tērpiem līdzīgas ierīces, kas izgatavotas no kokvilnas un tērauda sieta [20], plastmasas pipetes ar proksimālu. sūkļa polsterējums [21], lējumi, kas izgatavoti no neelastīgas pārsēju lentes un ar vinila pārklājumu pārklātas tērauda stieples [22], stieples ievietošana kombinācijā ar metāla plāksnēm [23] un ķirurģiskā ādas skavotāja izmantošana [24]. Ideālam ģipsim jābūt minimāli invazīvam un netraumatiskai, lai izvairītos no iekaisuma izmaiņām, jo ​​iekaisums var izraisīt muskuļu atrofiju [25]. Turklāt eksperimenta beigu posmā jābūt iespējai veikt pakaļējo ekstremitāšu veiktspējas testus ar ģipsi. Turklāt ar lējumu jābūt viegli apstrādājamam bez īpašām zināšanām vai prasmēm; tai jābūt vieglai, lētai, viegli iegādājamai, un tai nevajadzētu būt nepieciešamas īpašas ierīces uzklāšanai un noņemšanai.

Ir ziņots par dažādiem muskuļu izsīkuma dzīvnieku modeļiem. Aizmugurējo ekstremitāšu izkraušana ir izmantota bieži [11, 12], taču tai ir vairākas problēmas, tostarp astes nekroze, kas var izraisīt sistēmisku iekaisumu [25]; ķermeņa šķidrumu novirze uz astes pusi, kā rezultātā rodas anomālijas pakaļējo ekstremitāšu asinsvados [26]; ārkārtēja mikrogravitācija uz pakaļējās ekstremitātes, kas var spēcīgi ietekmēt proteīnu ekspresiju, tostarp mitohondriju enzīmu ekspresiju [27]. Visi šie faktori var ietekmēt muskuļu izsīkuma gaitu. Dažāda metode izraisa muskuļu atrofiju, atņemot muskuļiem neironu ievadi (piemēram, ar sēžas nerva pārslēgšanu) [28]; tā kā muskuļi ir pakļauti terminālo neironu trofiskiem faktoriem [29], šī metode, kas izraisa neparastu gandrīz pilnīgu denervētu stāvokli, var mainīt muskuļu atrofijas procesu. Dzīvniekus, kuri ir pakļauti sistēmiskām perturbācijām, kas izraisa muskuļu atrofiju, piemēram, cukura diabēts [30], nieru mazspēja [31], kortikosteroīdu ievadīšana [32] un novecošana vai paātrināta novecošana [33, 34], var izmantot kā cilvēku modeļus. slimības; tomēr šie sistēmiskie stāvokļi var traucēt arī muskuļu atrofijas procesu.

Tādējādi mēs izvēlējāmies pakaļējo ekstremitāšu ģipša imobilizāciju, lai izraisītu muskuļu atrofiju, un mēs centāmies izveidot jaunu metodi, kā to veikt pelēm, ar kuru mēs pētījām CTE ietekmi uz muskuļu atrofiju.

CistancheUztura bagātinātāju gardumiNieresSlimībaunPaaugstinaSpēks

2. Materiāli un metodes

2.1. Augu materiāls un ieguve.

CTE tika iegādāts no Alps Pharmaceutical Industry Co., Ltd. (Hida, Gifu, Japāna).

C. tubulosa gaļīgie stublāji tika savākti no Shinjang Uyghur Aptonom Rayon, Ķīnas Tautas Republikas. Kopumā 193 kg C. tubulosa jauktu pulveru tika iegremdēti 1883 l 30 procentu etanola. Maisījumu 2 stundas atdzesēja 55–64 grādu temperatūrā. Ekstrakta iznākums bija 7,2 procenti un saturēja 3,36 procentus akteozīda un 12,72 procentus ehinakozīda.

2.2. Peles.

Pieauguši ddY (12 nedēļu veci) peļu tēviņi (Japāna SLC, Shizuoka, Japāna) tika izmitināti atsevišķi plastmasas būros un turēti 12-h gaismas/tumsas ciklā ar temperatūru regulētā (25 ± 2 grādi) vivārijā. Visiem dzīvniekiem tika atļauts ad libitum piekļūt ūdenim un ēdam (Labo MR krājums; Nosan Corporation, Jokohama, Kanagava, Japāna).

Visi eksperimenti ar dzīvniekiem un protokoli tika veikti saskaņā ar Tojamas Universitātes Sugitani pilsētiņas laboratorijas dzīvnieku kopšanas un lietošanas vadlīnijām. Apstiprinājuma numurs eksperimentiem ar dzīvniekiem ir A2016INM-3. Tika pieliktas visas pūles, lai samazinātu izmantoto dzīvnieku skaitu.

2.3. Pakaļējo ekstremitāšu muskuļu atrofijas ierosināšana un CTE ievadīšana.

Peles tika sadalītas 4 grupās (n 11 katrā grupā): 2. dienā visas peles tika anestēzētas, un to mati tika noņemti no augšstilba līdz potītei ar depilācijas krēmu (Epilat krēms; Kracie, Tokija, Japāna). Pēc tam 3 no 4 grupām, kas tika izmestas (plus ), tika imobilizētas saskaņā ar šādu procedūru, kā parādīts 1. a)–1(g) attēlā:

1. darbība. Izgrieziet EPDM gumijas putu blīvlenti (Cemedine Corporation, Tokija, Japāna) 12 8 25 mm sloksnē (1. attēls (a)).

2. solis. Turiet pakaļējo ekstremitāšu potītes plantāra pozīcijā un ļoti uzmanīgi aptiniet to potītes locītavā ar blīvlenti (1. attēls (b)).

3. darbība. Nogrieziet mīkstu PVC izolācijas vāciņu TIC-22 (Nichifu Corporation, Osaka, Japāna) un pārklājiet blīvlentes aproci. Izmantojiet abpusējo līmlenti (PRO SELF parocīgi nogrieztu abpusēju lenti J-1300; Nitoms Inc., Tokija, Japāna), lai tās pieliptu (1. attēls (c)).

4. solis. Savāc nogrieztos vāciņa galus; nogrieziet ūdensnecaurlaidīgu augstas veiktspējas līmlenti (power tape; Asahipen Corporation, Osaka, Japāna) līdz apm. 4 48 mm izmēru un nostipriniet savilktos galus (1. attēls (d)).

5. darbība. Uzlieciet nelielu alumīnija folijas lentes gabalu (apmēram 5 30 mm) (AL-30; Nichiban Corporation, Tokija, Japāna) vāciņa augšējā gala priekšpusē (1. attēls). (e)).

6. solis. Nogrieziet plastmasas lenti (vinila elektriskās izolācijas lente Nr. 21; Nitto Denko Corporation, Osaka, Japāna) līdz apm. 19 × 40 mm, un aptiniet vāciņu (1. attēls (f)).

7. solis. Veiciet to pašu procedūru ar kontralaterālo pakaļējo ekstremitāti (1. attēls (g)).

Šajā pētījumā izmantotais imobilizācijas periods bija 13 dienas, un ģipsi tika nomainīti, ja radās viens vai vairāki no šiem stāvokļiem: smaga pedāļa tūska, pakaļējo ekstremitāšu nekroze, smagas ādas čūlas, ģipša atslābums iznīcināšanas dēļ vai ģipša izmežģījums no potīti. Pārējā grupā tika veikta tikai depilācija (fiktīva procedūra), un nesējs (fizioloģiskais šķīdums) tika ievadīts 13 dienas no nākamās dienas pēc depilācijas (2. diena). No 3 ģipšu ( plus ) grupām 2 tika ievadītas CTE (50 un 100 mg/kg/dienā; ģipšu ( plus )/CTE-50 grupa un ģipšu ( plus )/CTE-100 grupa), un vienam tika ievadīts nesējs (lieta ( plus )/nesēja grupa), arī no 2. dienas. CTE tika izšķīdināts fizioloģiskā šķīdumā un tika ievadīts katru dienu ar orālo zondi 13 dienas.

2.4. Pakaļējo ekstremitāšu funkcijas un pakaļējo ekstremitāšu muskuļu spēka novērtējums.

14. dienā ģipša ( plus ) grupas peles pēc CTE ievadīšanas atkal tika anestēzijas, un ģipsis tika noņemti. Nākamajā dienā (15. dienā) visām pelēm tika pārbaudīta pakaļējo ekstremitāšu funkcija un muskuļu spēks, izmantojot šādus divus testus:

2.4.1. Gaitas ātruma mērīšana.

15 mm plata kvadrātveida koka platforma tika turēta horizontāli aptuveni 50 cm no zemes. Pēc tam pele tika novietota uz platformas, un gaitas ātrums tika novērtēts, dzīvniekam šķērsojot platformu, manuāli ierakstot laiku, izmantojot hronometru, lai noietu 50 cm attālumu. Iepriekš katra pele tika pieradināta pie platformas, šķērsojot to divas reizes kā treniņu.

2.4.2. Pēdas defekta pārbaude.

Lai novērtētu pakaļējo ekstremitāšu muskuļu spēku, mēs veicām "pēdas vainas testu", kurā katra pele atkal tika novietota uz platformas, un tika tabulā norādīts pakaļējo ekstremitāšu izslīdēšanas skaits no platformas. Šis tests ir statiskā stieņa testa modificēta versija, kurā gaisa stieņi tiek fiksēti, izmantojot G-skavu, un pelēm tiek likts tos šķērsot [35]. Pēdas vainas pārbaude tika veikta trīs reizes, un tika reģistrēts vidējais kāju skaits trīs sesijās. Starp sesijām bija vismaz 15 minūšu atpūtas intervāls.

2.5. Tricepsa muskuļa histoloģiskā un morfometriskā analīze.

Pēc pakaļējo ekstremitāšu funkcijas novērtēšanas peles tika dziļi anestēzijas un eitanāzijas ar fizioloģiskās sāls šķīduma perfūziju. Pēc tam no abām pakaļējo ekstremitāšu pusēm tika izgriezti triceps surae (TS) muskuļi; paraugi no kreisās pakaļējās ekstremitātes tika fiksēti 4% paraformaldehīdā PBS šķīdumā 24 stundas, pēc tam pārnesti uz 30% saharozes šķīdumu PBS un inkubēti krioaizsardzībai un kriosekcionēšanai. Pēc tam, izmantojot kriostatu (Leica 3050S; Leica Systems, Nußloch, Vācija), tika izgrieztas 12- μm biezas sekcijas pa mazāko asi no katra muskuļa vēdera vidusdaļas. Septiņas līdz desmit secīgas sekcijas tika uzstādītas uz stikla priekšmetstikliņiem, kas pārklāti ar pretsloksnes pārklājumu (MAS-GP A tips, Matsunami Glass Industry, Osaka, Japāna), nekavējoties žāvētas ar fēnu, uzglabātas 30 grādu temperatūrā un iekrāsotas ar hematoksilīna-eozīna krāsošanu (HE krāsojums). , ScyTek Laboratories, Logana, Jūta, Amerikas Savienotās Valstis). Katram dzīvniekam tika atlasīta viena reprezentatīva sadaļa, kurā bija skaidri redzama katras miofibras īsās ass šķēle, un tās šķērsgriezuma laukums (CSA) tika izmērīts, izmantojot attēlu J (Nacionālie veselības institūti, Betesda, Merilenda, Amerikas Savienotās Valstis). .

2.6. Western blotēšana.

Kopējais proteīns no labās TS tika ekstrahēts ar šādu metodi. Labais TS tika sasmalcināts, izmantojot šķēres, un nekavējoties sasaldēts šķidrā slāpeklī, uzglabāts 30 grādu temperatūrā un vēlāk homogenizēts, lai iegūtu audu lizātu. Atkausētos muskuļus 30 minūtes inkubēja ledus aukstā veidā 2 ml M-PER zīdītāju proteīna ekstrakta šķīdumā (Pierce Biotechnology, Rokforda, Ilinoisa, ASV) un pēc tam homogenizēja. Pēc tam homogenātus centrifugēja 4 grādos un 4000 g 10 minūtes, un supernatanti tika savākti.

10 ug kopējā proteīna katrā muskuļu lizātā tika ievietots un atdalīts ar nātrija dodecilsulfāta-poliakrilamīda gēla elektroforēzi (SDS-PAGE), kam sekoja elektropārnese uz nitrocelulozes membrānu (0.2 μm, #). 1620112, Bio-Rad Laboratories, Hercules, Kalifornija, Amerikas Savienotās Valstis). Nespecifiskā saistīšanās tika bloķēta ar 5 procentiem beztauku sausā piena (vājpiena pulveris, 190-12865, FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japāna) Tris buferētā fizioloģiskā šķīdumā ar 0,05 procentiem Tween 20 (TBS-T). Pēc tam membrānas nakti inkubēja 4 grādu temperatūrā ar primāro antivielu, kas izšķīdināta Can Get Signal imūnreakcijas pastiprinātāja šķīdumā 1 (Toyobo, Osaka, Japāna). Pēc maisīšanas un skalošanas ar TBS-T membrānas 1 stundu inkubēja istabas temperatūrā ar mārrutku peroksidāzes (HRP-) konjugētu sekundāro antivielu, kas atšķaidīta Can Get Signal imūnreakcijas pastiprinātāja šķīdumā 2 (Toyobo, Osaka, Japāna). Signāli uz membrānām tika atklāti, izmantojot elektroķīmiluminiscenci, izmantojot luminolu. Pēc tam tika veikta densitometriskā analīze, izmantojot CS Analyzer programmatūru (Atto, Tokija, Japāna). Antivielas tika izvēlētas un atšķaidītas šādi: peles anti-MyHC IId/IIx monoklonālā antiviela (1:1000, klons A4.1025, #05-716, Merck Millipore, Burlington, Masačūsetsa, Amerikas Savienotās Valstis), peles anti-GAPDH slodzes kontroles monoklonālā antiviela (1: 3500, G041 ABM, Vankūvera, Kanāda) un HRP konjugēta kazas pretpeles IgG poliklonālā sekundārā antiviela H&L (1: 2000, Abcam, Cambridge, Apvienotā Karaliste).

2.7. Statistiskās analīzes.

Visi rezultāti ir izteikti kā vidējā ± vidējā standarta kļūda (SEM). Salīdzinājumu statistiskā nozīme starp grupām tika pārbaudīta ar vienvirziena ANOVA un post hoc Dunnett testiem vai Tukey HSD testu; Kruskal–Volisa tests un post hoc Danna testi; vai divvirzienu ANOVA ar atkārtotiem mērījumiem un post hoc Dunnett testu. Lai izslēgtu novirzes, tika izmantots Smirnova-Gruba tests. Visiem statistiskajiem novērtējumiem p vērtības, kas mazākas par 0,05, tika uzskatītas par statistiski nozīmīgām, un visas analīzes tika veiktas, izmantojot GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, La Jolla, Kalifornija, Amerikas Savienotās Valstis).

CistancheUztura bagātinātāji pret novecošanos un palielina spēku

3. Rezultāti

3.1. Dzīvnieku veselība un CTE ietekme uz ķermeņa svaru.

Pēc vizuālā izskata ģipsi imobilizēto peļu pakaļējās ekstremitātes bija atrofiskas, salīdzinot ar ģipša ( )/transportlīdzekļa grupas pelēm. Ģipša imobilizācija izraisīja ievērojamu ķermeņa svara zudumu līdz pētījuma fāzes beigām. Turpretim ķermeņa masas izmaiņas nebija nozīmīgas cast ( )/transportlīdzekļa grupas pelēm. Salīdzinot ar ģipša ( plus )/transportlīdzekļa grupu, abām ģipšām ( plus )/CTE grupām nebija būtisku ķermeņa svara izmaiņu (2. attēls).

Netika novērotas smagas komplikācijas imobilizētu peļu pakaļējās ekstremitātēs, piemēram, ādas nekroze vai gangrēna, kā arī netika novērota patoloģiska uzvedība vivārijā. Tomēr vieglas komplikācijas, tostarp pēdu tūska, virspusējas ādas čūlas un pakaļējo ekstremitāšu nobrāzums, tika novērotas visām ģipsi imobilizētām pelēm (attēls 1 (h)). Vairumā gadījumu tika novērota arī ģipša atslābināšana un izmežģījums, kas izraisīja ģipša nomaiņu.

3.2. CTE ietekme uz muskuļu spēku un muskuļu veiktspēju.

Pēdas defekta testā (3. attēls (a)) ģipša (plus)/transportlīdzekļa grupā ievērojami palielinājās pakaļējo ekstremitāšu paslīdēšanas gadījumu skaits, un gaitas ātrums bija ievērojami lēnāks nekā ģipša ( )/transportlīdzekļa grupā (3(b) attēls). )).

Ārstēšana ar CTE izraisīja no devas atkarīgu tendenci uz samazinātu pakaļējo ekstremitāšu slīdēšanu. Ģipša ( plus )/CTE-100 grupā ārstēšanai bija tendence samazināt (p 0.0604) pakaļējo ekstremitāšu paslīdēšanu, salīdzinot ar ģipša ( plus )/transportlīdzekļa grupu (3. attēls (a)). Runājot par gaitas ātrumu, gan metienu (pluss)/CTE-50, gan metienu (pluss)/CTE-100 grupām nebija būtisku gaitas ātruma atšķirību, salīdzinot ar metienu ( plus )/transportlīdzekļu grupu, lai gan pastāv bija neliela, nenozīmīga no devas atkarīga tendence uz lielāku ātrumu (3. (b) attēls).

3.3. TS un Myofiber CSA mitrais svars.

TS slapjais svars tika ievērojami samazināts ar ģipša imobilizāciju, salīdzinot ar ģipša ( )/transportlīdzekļa grupu (4. attēls (a)). CTE ievadīšana neietekmēja TS mitro svaru.

Tika analizēts arī vidējais miofiber CSA katrā grupā. Lēti ( plus )/transportlīdzekļa grupā tika konstatēts būtisks miofibera CSA samazinājums, salīdzinot ar ģipša ( )/transportlīdzekļa grupu (4. attēls (b)). Myofiber CSA tika sīkāk klasificēts un analizēts pēc biežuma sadalījuma, kā parādīts 4. (c) attēlā. Visbiežāk sastopamā CSA klase dalībnieku ( )/transportlīdzekļu grupā bija lielāka nekā dalībnieku ( plus )/transportlīdzekļa grupā; miofibru procentuālā daļa 1350- 2250 μm2 CSA klasē bija vai bija ievērojami augstāka līgotāju ( )/transportlīdzekļu grupā nekā līgotāju ( plus )/transportlīdzekļu grupā, un pretēja tendence bija redzama CSA klases 0 900 μm2 grupas (4. attēls (c)). CSA izplatību neietekmēja CTE ievadīšana divās ģipšu grupās ( plus )/CTE, salīdzinot ar lējumu ( plus )/transportlīdzekļa grupu (4. attēls (c)). Reprezentatīvi miofibras attēli ir parādīti 4. attēlā (d).

3.4. CTE ietekme uz MyHC IId/IIx ekspresijas līmeņiem TS.

Western blotēšana tika veikta sešos reprezentatīvos paraugos no katras grupas (5. attēls (a)). Šie paraugi tika atlasīti, pamatojoties uz to atvasinājumu no dzīvniekiem, kuriem pēdas vainas testa veiktspēja bija vistuvākā to attiecīgo grupu vidējām vērtībām.

Cietušu ( plus )/transportlīdzekļa grupā MyHC IId/IIx bija ievērojami palielināts, salīdzinot ar līgotāju ( )/transportlīdzekļa grupu. Šo pieaugumu no devas atkarīgi nomāca CTE ievadīšana. Atlases ( plus )/CTE-100 grupā MyHC IId/IIx izteiksmei bija tendence samazināties salīdzinājumā ar dalībnieku ( plus )/transportlīdzekļa grupu (p 0.0810) (5. attēls (b)) . GAPDH ekspresija, kas tika izmantota kā iekšējā kontrole, starp grupām būtiski neatšķīrās (5. attēls (c)).

Cistanchetubulozei ir daudz efektu