II DAĻA.: Cilvēka primārā nieru fibroblasta loma TGF-β1-mediētās fibrozes imitācijas ierīcēs

Kontakti: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 e-pasts:audrey.hu@wecistanche.com

II DAĻA.: Cilvēka primārā nieru fibroblasta loma TGF-β1-mediētās fibrozes imitācijas ierīcēs

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee u.c.

Abstrakts

Nieru fibrozeir progresējoša hroniska nieru slimība, kas galu galā izraisa nieru mazspēju beigu stadijā. Neskatoties uz vairākām pieejām cīņainieru fibroze, eksperimentāls modelis, lai novērtētu pašlaik pieejamās zāles, nav ideāls. Mēs izstrādājām b-imitēšanas modeļus, izmantojot trīsdimensiju (3D)kokultūras ierīces, kas izstrādātas ar trim atsevišķiem tubulu intersticium slāņiem, proti, epitēlija, fibroblastiskiem un endotēlija slāņiem. Mēs ieviesām cilvēka nieru proksimālās tubulārās epitēlija šūnas (HK-2), cilvēka nabas vēnu endotēlija šūnas un no pacienta atvasinātus nieru fibroblastus, kā arī novērtējāmtizpirkuma maksas pieauguma faktors-β(TGF-β)unTGF-βinhibitoru ārstēšana ar šoNieruFibrozeModelis. IzteiciensFibrozemarķieris alfa-gludās muskulatūras aktīns pēcTGF-β1ārstēšana tika papildināta ar monoslāņu kultivētām HK-2 šūnām 3D slimības modelī. Asinsvadu nodalījumāNieruFibrozemodeļiem, kuģu blīvums tika palielināts un samazinātsTGF-β-ārstētā grupa unTGF-β-attiecīgi inhibitoru terapijas grupa. Multipleksu ELISA, izmantojot centrifugātusTGF-β-stimulējošie 3D modeļi parādīja, ka iekaisuma citokīna un augšanas faktora līmenis, ieskaitot beta interleikīnu-1, audzēja nekrozes faktoru-alfa, pamata fibroblastu augšanas faktoru, unTGF-β1,TGF-β2unTGF-β3palielinājās, kas imitēja cilvēka nieru fibrotisko mikrovidi. Šis pētījums var dot iespēju veidot cilvēkuNieruFibroze-atdarināšanas ierīces modelis ārpus tradicionālajiem kultūras eksperimentiem.

Atslēgvārdi: nieru fibroblasts; fibroze; TGF-β1

cistanche tubolosa ieguvumi veselībai: hronisku nieru slimību ārstēšana

NOKLIKŠĶINIET ŠEIT, LAI PIEDALĪTOS I DAĻĀ.

3. Diskusija

TGF-β1ir svarīga loma matricas uzkrāšanā nieru fibroģenēzē un kavē proliferāciju lielākajā daļā šūnu, ieskaitot glomerulārā epitēlija un endotēlija šūnas, kā arī cauruļveida epitēlija šūnas 【1】. Tomēr TGF-ß1 izraisa proliferāciju cilvēka nieru fibroblastos, inducējot pamata fibroblastu augšanas faktoru (FGF-2) [8].

Šajā pētījumā mēs izveidojāmFibroze-atdarināšanas ierīce, kurā izmanto trīs būtiskus šūnu komponentus, tostarp cilvēka primāros nieru fibroblastus, nieru cauruļveida epitēlija šūnas un cilvēka endotēlija šūnas, un novērtēja to kāNieruFibrozemodelis, kura pamatā irTGF-β1Stimulāciju. Lai ģenerētuNieruFibroze-on-a-chip, mēs izveidojām jaunu 3D kultūras sistēmu, kas izstrādāta ar trim atsevišķām audu daļām, kuras mērķis ir pārvarēt šķēršļus, kas saistīti ar nieru slimību modelēšanu. Mūsu pētījums parādīja, kaTGF-β1inducētas šūnu reakcijas, tai skaitā epitēlija šūnu cauruļveida epitēlija-mezenhimālā pāreja (EMT), endotēlija šūnu mikrovaskulāras izmaiņas un citokīnu izmaiņas nieru fibroblastos. Šis ir pirmais pētījums, kas iepazīstina arFibroze-atdarināšanas ierīce, kas satur primārus fibroblastus, kuri iegūti no cilvēka nierēm, un stimulētus fibroblastus, kas izolēti no pacientiem arTGF-β1, zināms fibrotisko reakciju induktors, ko parasti izmanto kā standartu atdarināšanaiFibrozešūnu kultūrās [9]. Šie rezultāti liecina, kaTGF-β1-apstrādātās epitēlija šūnas tiek pārveidotas par mezenhimālas šūnas līdzīgu fenotipu. KadTGF-β1tiek ievadīts fibroblastiem, dažādi citokīni tiek mainīti, lai atspoguļotu fibrotisko procesu indukciju. Ir acīmredzams, kaNieruFibrozemodelis, fibroblasti ir galvenais spēks, kas veicina izveidotās kultūras sistēmas attīstību, izmantojot TGF stimulāciju.

Davis et al, ziņoja, ka endotēlija šūnu 3Dkultūra ir pietiekama, lai šūnas iebruktu un veidotu lūmenu un cauruļu tīklu pēc neskarta organisma in vivo [10,11]. Vairākas grupas ir ziņojušas, ka 3D kultūras modeļiem ir augstāks nefrotoksicitātes līmenis nekā 2D šūnu kultūras modeļiem [12]. Turklāt nefrotoksicitātes un ar iekaisumu saistīto gēnu ekspresija nieru 3D šūnu kultūras modelī bija ievērojami augstāka nekā tipiskā2D kultūrā[13].

Šajā pētījumā cilvēka kultūras medijiNieruFibroze-on-a-chip bija ievērojami augstāks citokīnu līmenis, salīdzinot ar 2Dkultūru. Mūsu grupa ir parādījusi, ka no pacienta atvasināti fibroblasti var atjaunot vietējos nieru audus, tostarp endotēlija un epitēlija šūnu slāņus, izmantojot mūsu ieteiktosFibroze-on-a-chip modelis. Līdz ar to šie konstatējumi liecina, kaNieruFibroze-on-a-chip modelis precīzi simulē cilvēka nieres mikrofizikālo vidi. Turklāt, tā kā mikroshēmā kultivētie fibroblasti ir iegūti no pacientiem, citus klīniski nozīmīgus pacientu modeļus var viegli un skaidri iegūt drošā veidā. Tāpēc cilvēksNieruFibroze-on-a-chip modeļa sistēma var ļaut attīstīt personalizētu medicīnu ar jutīgiem epitēlija un endotēlija funkciju mērījumiem. Mūsu eksperimentos,Fibrozeun angioģenēze samazinājāsTGF-βar inhibitoriem apstrādātas grupas. TGF-β inhibitori ir dabiski TGF-β antagonisti, kas ir pierādīti, izmantojot dažādus nieru slimību modeļus. Šķiet, ka ir iespējams veikt eksperimentus, lai apstiprinātu ārstēšanas efektivitāti slimību modeļos, izmantojot terapeitiskus līdzekļus, piemēram, šo TGF-β inhibitoru. Tāpēc šī mikroshēma ir nodrošinājusi līdzekļus, lai izstrādātu uzlabotu nieru fibrozes modeli, lai izmērītu šūnu morfoloģiju un funkciju, un tā varētu būt noderīga, veicot nefrotoksicitātes novērtējumus zālēm.

TGF-βir dominējošais profibrotiskais faktors dažādās nieru slimībās [14], un tam ir nozīme angioģenēzē [15]. TGF-β angiogēnā iedarbība ir ļoti sarežģīta, un tai var būt vai nu proangiogēna, vai antiangigēna aktivitāte atkarībā no iestatījuma un dažādiem regulatīviem faktoriem [16]. Angiogēniem augšanas faktoriem, piemēram, VEGF un FGF-2ievadot angioģenēzi in vivo, šķiet, ir galvenā loma angioģenēzes modulācijā in vivo [17-20]. Daži pierādījumi liecina, ka šie divi faktori var darboties sinerģiski, lai veicinātu endotēlija šūnu morfoģenētiskos notikumus [21,22]. Mēs esam snieguši pierādījumus tam, ka VEGF mRNS ekspresija un FGF-2 proteīna sekrēcija ir ievērojami paaugstināta par TGF-β1 3D mikroshēmās, salīdzinot ar 2D kultūru.

Mūsu ierobežojumsFibrozemodeļi varētu būt tādi, ka tie tika izveidoti salīdzinoši īsā laika periodā, 24 h. TGF-beta ir pro-fibrotiskas un pretiekaisuma īpašības agrīnāFibrozeprocesā, nevis hroniskā procesā. TradicionāliTGF-βgalvenokārt tiek izmantots citokīnu izraisītā veidāFibrozeModeļi. Tomēr, tā kā in vivo nevar attēlot tikai vienu citokīnu,Fibrozeindukcijas modeļi, kuros izmanto vairākas papildu kandidātvielas, piemēram,TGF-βun ir ierosināts BMP7. Tomēr ar diviem vai trim citokīniem joprojām nepietiek, lai vairotos in vivo. Mēs izmantojāmTGF-βkā sākumpunkts; tomēr mēs mēģinājām ieviest in vivo mikrovidi uz mikroshēmas, izraisot daudzveidīgāku citokīnu vētru. Fibroblasts, galvenais šūnu komponentsFibroze, tika ieviesta un sekundāra stimulācija daudzveidīgākiem citokīniem (IL-1β, TNF-α, b-FGF,TGF-β1,TGF-β2unTGF-β3), tika inducēts fibroblastos, kas stimulēti arTGF-β. Tādējādi vide, kas līdzīgaFibrozecilvēka ķermenī tika reproducēts.

cistanche deserticola ekstrakts: nieru slimību ārstēšana

4. Materiāli un metodes

4.1.Šūnu kultūras

Nieru fibroblasti (KF) tika izolēti no nieru šūnu karcinomas pacientu normālās audu daļas biopsijām ar aplēsto glomerulārās filtrācijas ātrumu (eGFĀ)>60 ml/minūtē/1,73 m2 pēc tam, kad pacienti bija devuši piekrišanu otrajai biopsijai pētniecības nolūkos. KF tika kultivēti fibroblastu augšanas vidē (FGM-2, Lonza, Šveice), un eksperimentiem tika izmantoti 3. līdz 4. fragmenti. Nieru fibroblasti tika nokasīti no kultūras 1-2 nedēļas, līdz šūnas veidoja monoslāni. Lai likvidētu epitēlija šūnas, kas piesārņo kultūru, fibroblasti tika izvēlēti, pēc pirmās pārejas izmantojot magnētiskās anti-fibroblastu krelles (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, ASV). Šūnas tika atdalītas, izmantojot 0,05% tripsīna-etilēndiamīntetraetiķskābi (EDTA)(Welgene, Gyeongsan, Koreja), inkubētas ar anti-fibroblastu lodītēm un atdalītas, izmantojot magnētisko kolonnu, un caurplūde tika savākta. Attīrītajiem primārajiem fibroblastiem bija raksturīga fluorescences aktivētas šūnu šķirošanas (FACS) analīze, izmantojot PE konjugētas anti-fibroblastu antivielas. Maiga magnētiski aktivēta šūnu šķirošana (MACS)Disociators tika izmantots maigai nieru audu malšanai. Octo MACSTM magnētiskais separators ar MACS LS kolonnām (ar virzuļiem), kas tika piemērots ar mikrobīdiem marķētu šūnu attīrīšanai, tika iegādāts no Miltenyi Biotec Inc. Maigās MACS C caurules (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA) tika izmantotas nieru malšanai šūnu atdalīšanai. MACS Smart Strainers (70 um)tika iegūti no Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, ASV). Kolonnu buferšķīdumu izmantoja kolonnu mazgāšanai un šūnu granulu atjaunošanai. Buferšķīdumu sagatavoja kā šķīdumu, kas satur 0,5 % liellopu seruma albumīna (BSA) ar 2 mM EDTA fosfātu buferšķīdumā (pbs) (pH7,4), un iegādājās no Miltenyi Biotec Inc. Zaļās fluorescējošās proteīnu ekspresējošās cilvēka nabas vēnu endotēlija šūnas (GFP-HUVECs, Lonza, Šveice) tika kultivētas endotēlija augšanas vidē (EGM-2, Lonza, Šveice), un tika izmantotas šūnas 3. līdz 4. fragmentā. Cilvēka proksimālā cauruļveida šūnu līnija (cilvēka nieru-2(HK-2) šūnas tika iegūtas no Amerikas tipa kultūras kolekcijas (ATCC). Šūnu līnija tika audzēta dulbecco modificētajā vidē ar augstu glikozes līmeni Eagle's barotnē (DMEM), kas papildināta ar 10% augļa liellopu serumu (FBS), penicilīnu (100 U/ml) un streptomicīnu (100 ug/ml). Reaģenti tika iegādāti no Gibco (Rockville, MD, ASV). Visas šūnas tika atdalītas, izmantojot 0,05% Tripsīna-EDTA, un uzturētas mitrinātā inkubatorā 37 °C un 5% CO2 temperatūrā. KF tika atkārtoti suspendēti FGM-2 ar šūnu koncentrāciju 4×10° šūnās/ml. Cilvēka nieru cauruļveida epitēlija šūnas (HK-2) tika atkārtoti suspendētas 2×10° šūnu/ml koncentrācijā DMEM ar augstu glikozes līmeni. GFP-HUVEC tika atkārtoti suspendēti 2×10° šūnu/ml koncentrācijā EGM-2.

4.2.Reaģenti

Matricu veidoja fibrīna gēli, tostarp komerciāli pieejams fibrinogēns no liellopu plazmas, aprotinīns no liellopu plaušām un trombīns no liellopu plazmas. Iepriekš minētie trīs materiāli tika iegādāti no Sigmas (Sentluisa, MO, ASV). Fibrinogēns tika izšķīdināts l×PBS ūdens vannā (37°C) 30 minūtes ar koncentrāciju 10 mg/ml. Trombīnu un aprotinīnu izšķīdināja dejonizētā ūdenī koncentrācijā 50 vienības/ml un 4 TIU/ml. Trīs šķīdumi tika sterilizēti, filtrējot caur 0,22 μm filtru. Rekombinants cilvēksTGF-β1tika iegūts no PeproTech EC Ltd. (Londona, Apvienotā Karaliste). Specifisks TGF-beta receptoru kināzes inhibitors SB431542 tika iegādāts no Tocris Cookson, Inc.

4.3. Šūnu modelēšana ierīcē

Pirms šūnu sēšanas, lai atvieglotu ciešu savienošanu, ierīce tika apstrādāta 1 min plazmas mašīnā (Femto Science Inc., Suwon, Korea) ar jaudu 70 W, 50 Hz. Plazmas apstrādes izraisīta virsmas hidrofilitāte un palīdzēja atvieglot gēla rakstīšanu un mediju slodzi. Lai izvairītos no hidrofilitātes izmaiņām, eksperimenti tika veikti 30 minūšu laikā pēc plazmas apstrādes. Dažādus mobilos modeļus ierīcēs var veikt ļoti pielāgojamā veidā. Bija svarīgi iepriekš noteikt dažādu šūnu tipu sastāvu un koncentrāciju. Šūnu hidrogēla suspensijām 37,5 μL šūnu suspensijas un atdalītai alikvotai 12,5 μL 10 mg/ml fibrinogēna šķīduma (250 μL 10 mg/ml fibrinogēna šķīduma ar 40 μL 4 TIU/ml aprotinīna) tika sagatavots sajaukšanai tieši pirms iekraušanas. Tieši pirms iekraušanas 37,5 μL šūnu suspensijas sajauca ar 12,5 μL 10 mg/ml fibrinogēna līdz homogenizācijai. 50uL hidrogēla sajauca ar 1 uL trombīna pilienu (0,5 vienības/ml). Tūlīt pēc sajaukšanas trombīns ar fibrīna suspensiju GFP-HUVECs (šūnu koncentrācija 2×10' šūnās/ml) tika injicēts ārējā kanāla ārējā malā (3. attēls, A gels). Mēs gaidījām 3 min, līdz fibrinogēna šķērssaistīšana būs pabeigta. Tūlīt pēc sajaukšanas trombīns ar fibrīna suspensiju KF (šūnu koncentrācija 4×10° šūnu/ml) tika novietots katrā rezervuāra grīdas pusē uz vienu iedobi (3. attēls, C gels). Šai FF fibrīna suspensijai tika atļauts 3 minūtes šķērssaistīt istabas temperatūrā. Iekšējā kanāla injekcijas portā tika injicēta 10 μL cilvēka nieru proksimālo cauruļveida epitēlija šūnu suspensija (HK-2) (3. attēls, B gels). Lai piestiprinātu HK-2 pie fibrīna gēla sienas GFP-HUVECs kanālā, ierīce tika pagriezta par 90 grādiem un ievietota 5% CO, inkubatorā 30 min 37 °C temperatūrā. HK-2 nosēdās un izveidoja šūnu loksni fibrīna gēla sānos.

Pēc HK-2 piestiprināšanas ierīce tika piepildīta ar EGM-2. Ierīce tika inkubēta 3 dienas 37 ° C temperatūrā 5% CO inkubatorā. Barotne tika mainīta ar vai bez 5ng/ mlTGF-β1un ar5ng/mlTGF-β1un 10 umsTGF-β1inhibitors pēc trīs dienu inkubācijas (3. attēls).

kas ir cistanche

4.4. Imunocitofluorescence

Ierīces līdzkultivētie audi tika fiksēti ar 4% (w /v) paraformaldehīda šķīdumu (Biosesang, Seongnam, Korea) PBS (Welgene, Gyeongsan, Korea) 20 minūtes, kam sekoja caurlaidība ar 20 minūšu iegremdēšanu 0,15%Triton X-100(Sigma, St.Louis, MO, ASV). Pēc tam paraugus 1 stundu apstrādāja ar 3% BSA(Sigma, ASV). Šūnas tika inkubētas ar antivielām, kas iegādātas no Abcam. Primārās antivielas bija anti-citokeratīns 8 un anti-o-SMA, ko atstāja uz 2 dienām istabas temperatūrā (RT). Kā sekundārā antiviela tika izmantota Alexa Fluor 647 konjugēta ēzeļa pret trusīti IgG(H+L). DNS marķēšana tika veikta ar 1:250 Hoechst33342 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) atšķaidījumu 3 h RT. Attēli tika savākti, izmantojot Zeiss LSM 710 konfokālo lāzera mikroskopu. Vidējā fluorescences intensitāte(MFI)tika mērīta, izmantojot ImageJ un fluorescences intensitātes analizatoru.

4.5. Citokīnu multipleksa analīze

MSD V-Plex Cytokine un Angiogenesis Panel 1 Cilvēka komplekts (Rockville, MD, ASV)tika izmantots, lai izmērītu interleikīna-1 beta (IL-1ß) un pamata fibroblastu augšanas faktora (b-FGF) koncentrāciju atsevišķos paraugos saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Visos paraugos tika novērtēts kopējais IL-1β un b-FGF olbaltumvielu līmenis. Daudzumu (pg/ml) kvantificēja no katra mērījuma standarta līknes.

4.6. Multipleksa pērlīšu imūnanalīze

Citokīnu koncentrācijas tika analizētas, izmantojot multipleksu lodīšu imūnanalīzes sistēmu (Procarta Cytokine Testsay Kit; Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA, ASV), pamatojoties uz multiplexing tehnoloģiju (xMAP; Luminex, Austin, TX, ASV), saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Dati tika iegūti, izmantojot ar Luminex saderīgu darbstaciju un tās pārvaldnieka programmatūru (Bio-Plex darbstacija un programmatūras versija 6.0; Bio-Rad, Tokija, Japāna), saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Cilvēka TGF-β1, TGF-β2 un TGF-β3, kas saistīti arFibrozeprocess tika analizēts vienlaicīgi atšķaidītajos paraugos. Izoformas noTGF-βtika atklāti, izmantojot Bio-Plex 200 sistēmas un komerciāli pieejamās Bio-Plex ProTM HumanTGF-βtesti (Bio-Rad Laboratories, Inc); pamatojoties uz ražotāja sniegto informāciju. Multipleksa testa komplektā var kvantitatīvi izmērīt vairākus citokīnus no centrifugāta ar zemāku noteikšanas robežu 1 pg/ml uz citokīnu. Katrs paraugs tika veikts kā viens mērījums ierobežotam savāktā centrifugāta daudzumam.

4.7.Reālā laika PCR

RNS ekstrakcija tika veikta, izmantojot TRIzol Reaģentu (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, ASV). Master Mix un Revert Aid Pirmā virziena cDNS sintēzes komplekts tika izmantoti kopējā RNS reversajai transkripcijai.qPCR tika veikti, izmantojot Applied BiosystemsTM PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix(Thermo Fisher Scientific, Inc.). Konkrētos gruntējumus sagatavoja Bioneer (Daejeon, Koreja) un šajā eksperimentā izmantoja šādi. Gruntēšanas secības ir apkopotas 1. tabulā.

Desmit microliters PowerUp SYBR Green Master Mix, 4 μL cDNS un 2 pmol katra praimera tika izmantoti reāllaika PCR galīgajā tilpumā 20 μL. Reakcija tika veikta 95°C temperatūrā 1s un 60°C temperatūrā 20 sekundes 45 ciklus pēc denaturēšanas 95°C temperatūrā 20 sekundes. PCR katram paraugam veica divos eksemplāros vai trijos eksemplāros. cDNS līmeņi tika noteikti, izmantojot cikla robežvērtību standarta līkni. Visi dati par katru cDNS bija atbilstošajā standarta līknē. Iegūtie dati tika normalizēti, lai β-aktīna cDNS.

4.8. Statistiskā analīze

Kvantitatīvos datus sniedz kā vidējos ±SD vai SE vismaz trijos neatkarīgos eksperimentos. Statistiskā analīze tika veikta, izmantojot divu astu studenta t-testu. Mēs uzskatījām, ka būtiska atšķirība ir tikai pie 95% vai augstāka ticamības līmeņa (p<>

5. Secinājumi

Kopumā šī pētījuma protokoli ļāva veidot cilvēkuNieruFibroze-imitēšanas ierīces kā modelis un parādīja dažādus efektus, kas nav iespējami 2D kultūras eksperimentos. Mēs uzskatām, ka šajā pētījumā ierosinātā novērtēšanas stratēģija ļaus labāk izprast detalizētoFibrozemehānismi, kas saistīti ar patoloģiskām izmaiņām laikāNieru slimība. Izstrādāto 3D nieru fibrozi uz mikroshēmas varētu izmantot kā potenciālu in vitro modeli, kas mūs tuvinās uzlabota nieru-mikroshēmas modeļa izveidei.

cistanche phelypaes: nieru slimību ārstēšana

Atsauces

1. Robeža, V.; Cēls, N. Transformējošs augšanas faktors audosFibroze.N. Engl. J. Med.1994, 331,1286-1292.

2. Vanags, V.; Huangs, X.R.; Li,A.G.; Liu, F; Li,J.; Truong, L.D.; Vanags, K.J.; Lan, H.Y.TGF-betal signalizācijas mehānisms nieru iekaisuma profilaksē: Smad loma. I. Am. Soc. Nephrol.2005, 16, 1371-1383. [CrossRef]

3. Liu,Dž.NieruFibroze: Jauns ieskats patoģenēzē un terapijā. Nieres Int.2006,69,213-217. [CrossRef] [PubMed]

4. Andi, D.; Craig, W.A. Dzīvnieku modeļa farmakokinētika un farmakodinamika: kritisks pārskats. Int. J.Antimicrob.Agents 2002, 19,261-268. [CrossRef]

5. Kima, S.; Takayama, S.Organ-on-a-chip un nieres. Niere Res. Klints. Pract.2015, 34, 165-169. [CrossRef] [PubMed]

6. Jangs, K.J.; Mehr, A.P; Hamiltons, G.A.; Makpartlins, L.A.; Čungs, S.; Suh, K.Y; Ingber, D.E.Cilvēka nieru proksimālais kanāliņš uz mikroshēmas narkotiku transportēšanai un nefrotoksicitātes novērtēšanai. Integer. Biol. 2013,5,1119-1129. [CrossRef[PubMedl

7. Rendons, S. "Orgāni uz čipsiem" iet mainstream. Daba 2015, 523, 266. [CrossRef]

8. Strutz, F; Zeisbergs, M; Renziehausen, A.; Raške, B.; Bekers, V; Kooten, C.V.; MuLlers, G.A.TGF-β1izraisa proliferāciju cilvēka nieru fibroblastos, inducējot pamata fibroblastu augšanas faktoru (FGF-2). Niedru int. 2001, 59, 579-592. [CrossRef] [PubMed]

9. Zanotti, S.; Bragato, C.; Zucchella, A.; Maggi, L.; Mantegazza, R.; Morandi, L.; Mora, M.Pirfenidona anti-fibrozes efekts muskuļos atvasinātiem fibroblastiem no Duchenne muskuļu distrofijas pacientiem. Dzīve Sci. 2016, 145,127-136. [CrossRef]

10. Deiviss, GE.:Camarillo. Dž. Alfa 2 beta 1 no integrīna atkarīgais pinocitiskais mehānisms, kas ietver intracelulāru vakuola veidošanos un koloriscenci, regulē kapilāru lūmena un caurulītes veidošanos trīsdimensiju kolagēna matricā. 1996., 224., 39.-51. lpp. [CrossRef]

11. Beils, K.J.; Dāvis, Dž. Cdc42 un Race GTPases ir nepieciešamas kapilāru lūmena veidošanai trīsdimensiju ekstracelulārās matricās. J. Šūnu Sci. 2002,115,1123-1136. [CrossRef [PubMed]

12. DesRochers, T.M.; Suters, L.; Rota, A.; Kaplan, D.L. Bioinženiered 3D cilvēka nieru audi, platforma nefrotoksicitātes noteikšanai. PLoS ONE 2013, 8, e59219. [CrossRef]

13. Astaškina, A.I.; Manns, B.K; Prestvičs, G.D.; Grainger, D.W. Salīdzinot prognozējošo zāļu nefrotoksicitātes biomarķierus nieru 3-D primārajā organoīdu kultūrā un iemūžinātajās šūnu līnijās. Biomateriāli 2012, 33, 4712-4721. [CrossRef] [PubMed]

14. Mengs, X.M.; Nikolic-Paterson, D.J.; Lan, H.Y. TGF-beta: galvenais regulatorsFibroze. Nat.Rev.Nephrol.2016,12, 325-338. [CrossRef]

15. Pardali,E.; Goumans, M.J.; desmit Dijke,P. TGF-beta ģimenes locekļu signalizēšana asinsvadu morfoģenēzē un slimībās. Tendences Cell Biol.2010, 20, 556-567. [CrossRef] [PubMed]

16. Cunha, S.L; Pietras, K. ALK1 kā jauns vēža antiangiogēnās terapijas mērķis. Asinis 2011,117,6999-7006. [CrossRef]

17.Klagsbruna, M.;D" Amore, P.A. Angioģenēzes regulatori. Annu. Physiol.1991,53, 217-239. [CrossRef]

18. Folkmans, Dž.; Shing, Y.Angiogenesis. J.Biol. Chem.1992, 267,10931-10934. [CrossRef]

19. Shweiki, D. Itin, A.Soffer, D.Keshet, E. Asinsvadu endotēlija augšanas faktors, ko izraisa hipoksija, var būt par starpnieku hipoksijas izraisītā angioģenēzē. Daba 1992, 359, 843-848. [CrossRef]

20. Kima, K.J.; Li, B.; Viners, Dž.; Armanini, M; Gilets, N.; Filipss, H.S.; Ferrera, N. Asinsvadu endotēlija augšanas faktora izraisītas angioģenēzes inhibīcija nomāc audzēja augšanu in vivo. Daba 1993, 362, 841-844. [CrossRefl]

21. Pipari, M.S.; Ferrāra, N.; Orci, L.; Montesano, R. Spēcīgs sinerģisms starp asinsvadu endotēlija augšanas faktoru un pamata fibroblastu augšanas faktoru angioģenēzes inducēšanā in vitro. Bioķīmija. Biophys. Res. Commun.1992,189,824-831. [CrossRefl

22. Goto, F.; Goto, K.; Veindels, K.; Folkman, J.Asinsvadu endotēlija augšanas faktora un pamata fibroblastu augšanas faktora sinerģiskā ietekme uz liellopu kapilāro endotēlija šūnu proliferāciju un nabassaites veidošanos kolagēna gēlos. Lab. Investig.1993,69, 508-551. [PubMed]

NOKLIKŠĶINIET ŠEIT, LAI PIEDALĪTOS I DAĻĀ.