Party1: Šrilankā kultivēto pirkstu prosa (Eleusine Coracana (L.) Gaertn.) pretiekaisuma un antioksidantu īpašības

Lai iegūtu vairāk informācijas. kontaktpersonatina.xiang@wecistanche.com

Iekaisuma izraisītu un ar oksidatīvu stresu saistītu slimību izplatība pieaug visā pasaulē, radot pieaugošu pieprasījumu pēc jauniem avotiempretiekaisumaaģenti unantioksidanti. Šis pētījums bija vērsts uz in vitro arahidonāta {{0}}lipoksigenāzes (A5-LOX), ksantīna oksidāzes (XO), hialuronidāzes, oksidatīvo uzliesmojumu inhibējošo aktivitāšu un antioksidantu īpašību noteikšanu Ravi, Rawana. , un Oshadha pirkstu prosa šķirnes, izmantojot etanola un metanola ekstraktus. Starp visiem ekstraktiem Oshadha metanola ekstraktam bija visaugstākā A5-LOX (ICsvalue∶ 484,42 ug/ml) un XO (ICsvalue∶764,34 ug/ml) inhibējošā iedarbība. Visi ekstrakti uzrādīja mazāk nekā 50 procentus hialuronidāzes inhibējošās aktivitātes pie 1 mg/ml koncentrācijas, metanola ekstrakti uzrādīja mērenu inhibēšanas potenciālu pret reaktīvām skābekļa sugām (ROS), kas ģenerētas no pilnas asins fagocītiem, ar IC vērtībām no 26,9 līdz 27,7 ug/ml, salīdzinot ar ibuprofēnu (IC.vērtība: 11,18 ug/ml). Visi ekstrakti uzrādīja spēcīgu ROS inhibīciju, kas iegūta no polimorfonukleārajiem neitrofiliem, kas izolēti no cilvēka asinīm, salīdzinot ar ibuprofēnu (ICsvērtība: 2,47 ug/ml), un metanola un etanola ekstraktu ICs vērtības svārstījās no 0,29 līdz 0,47 ug/ml un 1,70 ug/ml un 1,70 ug/ml. attiecīgi. Visos ekstraktos bija ievērojami liels fenola savienojumu daudzums, tostarpflavonoīdiun iespēja attīrīt 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolīns-6-sulfonskābes (ABTS) katjonu,2,2-difenil-1-pikrilhidrazil( DPPH) un skābekļa radikāļi. Turklāt tie spēja reducēt metāla jonus un helātus metāla jonus, izbeidzot radikāļu ģenerēšanas reakcijas. Šis ir pirmais ziņojums par A5-LOX, XO, hialuronidāzes un oksidatīvo uzliesmojumu inhibējošām īpašībām jebkuram Šrilankā kultivētas prosas šķirnes ekstraktam. Rezultāti atklāja iespēju izmantot šos pirkstu prosa ekstraktus kā dabiskus pretiekaisuma zāļu kandidātu avotus. Turklāt atklājumi norādīja, ka Ravi, Rawana un Oshadha šķirnes ir labi antioksidantu avoti. Tādēļ šo pirkstu prosa šķirņu regulārai lietošanai var būt svarīga loma ar oksidatīvo stresu saistīto slimību profilaksē un uztura pārvaldībā.

Noklikšķiniet šeit, lai uzzinātu vairāk par produktiem

1. Ievads

Iekaisumsir aizsardzības reakcijaimūnssistēma, lai novērstu kaitīgus stimulus, piemēram, patogēnus, bojātas šūnas un alerģiskus vai ķīmiskus kairinājumus, kā arī lai uzsāktu dzīšanas procesu. Lai gan iekaisums ir normāla reakcija, ja to nekontrolē, pārmērīgs iekaisums izraisa daudzas akūtas un hroniskas slimības. Pašlaik visā pasaulē palielinās iekaisuma izraisītu slimību izplatība, radot arvien lielāku pieprasījumu pēc jauniem un efektīviem pretiekaisuma līdzekļiem [1, 2].

Arahidonāta 5-lipoksigenāze(A5-LOX) ir galvenais enzīms, kas ir iesaistīts spēcīgu iekaisuma traucējumu un alerģisku reakciju mediatoru biosintēzē. Tas katalizē leikotriēnu veidošanos no arahidonskābes [3]. Leikotriēni ir endogēni mediatori vairāku iekaisuma slimību, tostarp astmas, alerģiskā rinīta, hroniska bronhīta, reimatoīdā artrīta, iekaisīgu zarnu slimību un alerģisku reakciju patoģenēzē [3,4]. Tāpēc A5-LOX inhibīcija ir svarīga dažādu iekaisuma traucējumu profilaksē un ārstēšanā.

Ksantīna oksidāze (XO) katalizē hipoksantīna oksidēšanos par ksantīnu un ksantīna oksidēšanos par urīnskābi[5]. XO inhibitori bloķē urīnskābes biosintēzi un attiecīgi samazina urīnskābes līmeni, kā arī asinsvadu oksidatīvo stresu. XO katalītiskās darbības laikā veidojas reaktīvās skābekļa sugas (ROS), un tāpēc XO ir patoģenētiska loma arī citos iekaisuma traucējumos. Līdz ar to XO inhibitori ir svarīgi dažādu iekaisuma traucējumu ārstēšanā, ko pavada XO katalītiskā darbība [2,5].

Hialuronidāze ir lizosomu enzīms, kas katalizē mukopolisaharīdu, piemēram, hialuronskābes, hidrolīzi. Reimatoīdā artrīta gadījumā hialuronidāze pārmērīgi noārda hialuronskābi un samazina tās daudzumu un molekulmasu, radot artrīta simptomus [6]. Hialuronskābes noārdīšanās kavēšana ir kritiska un obligāta, lai kontrolētu hialuronidāzes izraisītos patoloģiskos stāvokļus[7].

Iekaisuma apstākļos imūnās šūnas tiek piesaistītas iekaisuma vietai. Aizsardzības un imunoloģisko reakciju laikā imūnās šūnās esošās NADPH oksidāzes tiek aktivizētas un ģenerē ROS lielos daudzumos, radot oksidatīvu uzliesmojumu [1, 8]. Zems un mērens ROS daudzums ir labvēlīgs dažādos fizioloģiskos procesos. Tomēr ROS pārprodukcija atceļ šūnu funkcijas, kas savukārt uzlabo iekaisuma stāvokli [8, 9]. Tāpēc ROS izraisītas oksidatīvās sprādziena kavēšana ir potenciāls līdzeklis, lai novērstu un pārvaldītu iekaisuma izraisītas slimības.

Oksidatīvās fosforilēšanās laikā,brīvie radikāļitostarp ROS veidojas kā blakusprodukti [10]. Papildus normālai šūnu vielmaiņai ir arī daudzi citi faktori, kas izraisa brīvo radikāļu veidošanos, un, ja brīvo radikāļu ģenerēšanās ātrums pārsniedz neitralizācijas ātrumu, rodas oksidatīvais stress. tiek radīts, un tas būtiski veicina visas iekaisuma slimības. Tā kā antioksidanti spēj novērst brīvo radikāļu veidošanos un dzēst brīvos radikāļus, līdzsvars starp antioksidantiem un brīvajiem radikāļiem ir būtisks, lai pareizi uzturētu fizioloģiskās funkcijas [8,11,12].

Cirku prosa (Eleusine coracana(L.)Gaertn.) ir vissvarīgākā mazā prosa tropos, un iepriekš ir ziņots par vairākām prosa ārstnieciskajām īpašībām [13-17]. Tomēr pašlaik Šrilankā kultivēto un patērēto prosas šķirņu ārstnieciskajām īpašībām trūkst zinātnisku pierādījumu.

un potenciālie ieguvumi patērētāju veselībai. Līdz ar to ir obligāti jāizpēta Šrilankas prosa šķirņu pretiekaisuma un antioksidanta īpašības un jāatzīst to potenciāls uzlabot patērētāju uzturvērtību un veselības stāvokli. Iekaisuma izraisītu un ar oksidatīvu stresu saistītu slimību izplatība pieaug visā pasaulē, radot arvien lielāku pieprasījumu pēc jauniem pretiekaisuma līdzekļu un antioksidantu avotiem [1, 2]. Ņemot to vērā, šis pētījums bija vērsts uz Šrilankas prosa šķirņu in vitro pretiekaisuma īpašību novērtēšanu saistībā ar A5-LOX, XO, hialuronidāzi, oksidatīvo pārrāvumu inhibējošām aktivitātēm un antioksidantu īpašībām, izmantojot dažādus antioksidantu testus. .

2. Materiāli un metodes

2.1.Paraugu ņemšana un sagatavošana. Pirkstu prosas šķirnes, kuras Šrilankā ir ieteicis audzēt Lauksaimniecības departaments, proti, Ravi, Rawana un Ošadha, tika savāktas no Laukaugu pētniecības un attīstības institūta (FCRDI), Mahailuppallama, Šrilanka. Šīs šķirnes tika kultivētas eksperimentālos lauciņos zemās zemes sausajā zonā FCRDI, Mahailuppallama, un sēklas sertificēja Šrilankas Lauksaimniecības departamenta Sēklu sertifikācijas dienests.

Pirkstu prosas sēklas tika izlobītas (TM 05C, Satake Cor-poration, Japāna), un miltus no veseliem graudiem ieguva samaļot (Pulverisette 14, Fritsch, Vācija) un izsijājot caur 0,5 mm sietu. Pilngraudu milti tika ekstrahēti ar etanolu un metanolu atsevišķi. Pilngraudu miltus (100 g) ekstrahēja ar šķīdinātāju (400 ml) nakti istabas temperatūrā (28 ± 2 grādi), izmantojot magnētisko maisītāju, un centrifugēja ar 4000 apgr./min 20 minūtes. Supernatants tika savākts atsevišķi, un atlikums tika atkārtoti ekstrahēts divas reizes, izmantojot tādus pašus apstākļus. Supernatanti tika apvienoti un iztvaicēti līdz sausumam pazeminātā spiedienā 40 grādu temperatūrā, izmantojot rotācijas iztvaicētāju (R-114, Büchi Labortechnik AG, Šveice). Šķīdinātājus nesaturošie ekstrakti tika uzglabāti hermētiski noslēgtos stikla traukos -20 grādos līdz izmantošanai analīzei.

2.2. Fermenti, ķīmiskās vielas un aprīkojums. Folin-Ciocalteu fenola reaģents, alumīnija hlorīds, 2,4,6-tri(2-piridil)-s-triazīns (TPTZ), 2,2'-azobis (2-amidinopropāna) dihidrohlorīds (AAPH),2,2-difenil-1-pikrilhidrazils (DPPH), kvercetīns, 6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilhromāns{{19} }karbonskābe (Trolox), etilēndiamīntetraetiķskābe (EDTA), 2,2'-azinobis(3-etilbenzotiazolīns-6-sulfonskābe) diamonija sāls (ABTS), fluoresceīns, 3-( 2-Piridil)-5,6-difenil-1,2,4-triazīna-p,pdisulfonskābes mononātrija sāls

hidrāts (ferozīns), arahidonāta 5-lipoksigenāze, linolskābe, baicaleīns, ksantīna oksidāze, ksantīns, allopurinols, hialuronidāze, hialuronskābes nātrija sāls, p-dimetilaminobenzaldehīds, gallskābe, tanīnskābe, dimetilsulfoksīds un tika iegādāti no ibuprofēna Sigma-Aldrich, MO, ASV. HBS* plus un HBSS tika iegādāti no Thermo Fisher Sci-entific Inc., Masačūsetsā, ASV. Zymosan tika iegādāts no Wako Pure Chemical Industries Ltd., Osaka, Japāna.

Luminols (3-aminoftalhidrazīds) tika iegādāts no Alfa Aesar GmbH & Co KG, Karlsrūe, Vācija. Limfocītu atdalīšanas barotne tika iegādāta no MP Biomedicals, Inc., Ohaio, ASV. Visas pārējās eksperimentos izmantotās ķīmiskās vielas un reaģenti bija ACS, HPLC un analītiskās kvalitātes. Lai noteiktu skābekļa radikāļu absorbcijas spēju, tika izmantots fluorescences mikroplašu lasītājs (SpectraMax-Gemini EM, Molec-ular Devices Inc., ASV). Ķīmiluminiscences testiem tika izmantots luminometrs (Luminoskan RS, Labsystems, Somija). Visiem pārējiem biotestiem tika izmantots mikroplašu lasītājs (Spectra-Max Plus384, Molecular Devices Inc, ASV).

2.3.Kopējā fenola satura noteikšana. Kopējais fenola saturs (TPC) tika noteikts saskaņā ar Folin-Ciocalteu metodi 【18】. Pirkstu prosa ekstrakts (20ul) tika sajaukts ar 110 ul svaigi pagatavota 10 reizes atšķaidīta Folin-Ciocalteu reaģenta un 70 ul nātrija karbonāta šķīduma (10 % w/v) un inkubēts istabas temperatūrā (RT) 30 minūtes. Absorbcija tika mērīta pie 765 nm. Gallskābe tika izmantota, lai attēlotu standarta līkni (y=0.0532x plus 0.0339;r=0.9992), un TPC aprēķināja kā gallskābes ekvivalentu (GAE) mg uz 100g miltu uz sausas virsmas. svara bāze.

2.4. Kopējā flavonoīdu satura noteikšana. Kopējais flavonoīdu saturs (TFC) tika noteikts pēc alumīnija hlorīda kolorimetriskās metodes [19]. Pirkstu prosa ekstrakts (100 ul) tika sajaukts ar alumīnija hlorīda šķīdumu (2 procenti w/v, 100 ul), inkubēts 10 minūtes RT, un absorbcija tika mērīta pie 415 nm. Kvercetīns tika izmantots, lai attēlotu standarta līkni (y=0.0349x-0.2091; r²=0.9974）, un TFC tika aprēķināts kā kvercetīna ekvivalenti mg uz 100 g miltu sausnā.

2.5. DPPH radikālas attīrīšanas aktivitātes noteikšana. Spēja attīrīt DPPH radikāļus tika noteikta saskaņā ar Blois [20] aprakstīto metodi. Finger mil-let ekstrakts (50 ul) tika sajaukts ar 90 ul metanola un 60 ul DPPH šķīduma (0, 02 procenti w/v) un inkubēts RT tumsā 10 minūtes. Parauga (As) un kontroles (Ac) absorbcijas vērtības tika mērītas pie 517 nm. Trolox tika izmantots kā standarts. DPPH radikāļu attīrīšanas aktivitāte kā procentuālā inhibīcija tika aprēķināta, izmantojot vienādojumu (1). IC vērtība tika aprēķināta, izmantojot devas-atbildes diagrammas.

2.6. ABTS katjonu radikālas attīrīšanas aktivitātes noteikšana. Spēja attīrīt ABTS katjonu radikāļus tika noteikta saskaņā ar Re et al. aprakstīto metodi. [21] ar dažām izmaiņām. ABTS katjonu radikāļu šķīdums tika sagatavots, inkubējot 10 mg ABTS 2, 5 ml kālija persulfāta 37 ° C temperatūrā tumsā 16 stundas un atšķaidot 7 reizes ar 50 mM fosfāta buferšķīdumu (pH 7, 4). Pirkstu prosa ekstrakts (12,5 ul) tika sajaukts ar fosfāta buferšķīdumu (147,5 ul) un svaigi pagatavotu ABTS katjonu radikāļu šķīdumu (40 ul) un inkubēja RT tumsā 10 minūtes. Parauga (As) un kontroles (Ac) absorbcijas vērtības tika mērītas pie 734 nm. Trolox tika izmantots kā standarts. ABTS katjonu radikāļu attīrīšanas aktivitāte kā procentuālā inhibīcija tika aprēķināta, izmantojot vienādojumu (2). ICs vērtība tika aprēķināta, izmantojot devas-atbildes diagrammas.

2.7.Skābekļa radikālas absorbcijas spējas (ORAC) noteikšana. ORAC tika novērtēts saskaņā ar Ou et al aprakstīto metodi.[22] ar dažām modifikācijām.Fluoresceīna (4.8uM) un AAPH (40mg/ml) šķīdumus sagatavoja 75mM fosfāta buferšķīdumā (pH 7.4). Pirkstu prosa ekstraktu (10 ul) sajauca ar 40 ul fosfāta buferšķīduma un 100 ul fluoresceīna un inkubēja 37 grādu temperatūrā 10 minūtes. Tika pievienots AAPH (50 ul), un fluoresceīna samazināšanās tika mērīta pie ierosmes un emisijas viļņu garumiem attiecīgi 494 nm un 535 nm 37 grādos 35 minūtes ar 1 min intervālu, izmantojot fluorescences mikroplašu lasītāju. Tro-lox tika izmantots kā standarts. Tika reģistrēts laukums zem līknes (AUC) parauga (AUC), kontroles (AUC) un Trolox (AUC-) vērtības. ORAC vērtība tika aprēķināta, izmantojot vienādojumu (3), kur konc. apzīmē koncentrēšanos. Rezultāti tika izteikti kā mg Trolox ekvivalenti uz 100 g miltu uz sausnas masas.

2.8. Dzelzs jonu helātu veidošanās (FIC) aktivitātes noteikšana. Dzelzs jonu helātu veidošanās spēja tika noteikta pēc Kārtera [23] aprakstītās metodes. Pirkstu prosa ekstraktu (100 ul) sajauca ar 1 mM dzelzs sulfāta šķīdumu (20 ul) un 40 ul destilēta ūdens. Pēc tam pievienoja 1 mM ferozīna šķīdumu (40 ul) un inkubēja 10 minūtes RT. Parauga (As) un kontroles (Ac) absorbcijas vērtības tika reģistrētas pie 562 nm. EDTA tika izmantots kā standarts. FIC aktivitāte kā helātu procentuālā daļa tika aprēķināta, izmantojot (4) vienādojumu.

2.9. Dzelzs reducējošo antioksidantu jaudas (FRAP) noteikšana. FRAP tika noteikts pēc Benzine un Szeto [24] aprakstītās metodes ar dažām modifikācijām. FRAP reaģents tika sagatavots, sajaucot 300 mM acetāta buferšķīdumu (pH 3,6), 20 mM dzelzs hlorīdu un 10 mM TPTZ proporcijā 10:1:1 un inkubējot 37 ° C temperatūrā 10 minūtes. Pirkstu prosa ekstrakts (20 ul) tika sajaukts ar 30 ul acetāta buferšķīduma un 150 ul svaigi pagatavota FRAP reaģenta, inkubēts istabas temperatūrā 8 minūtes, un absorbcija tika reģistrēta pie 600 nm. Trolox tika izmantots, lai attēlotu standarta līkni (y=0,17x plus 0,15; 产=1,00), un FRAP ir aprēķinājis kā mg Trolox ekvivalentu uz 100 g miltu sausnā.

2.10. A5-LOX inhibējošās aktivitātes noteikšana. A{{0}}LOX inhibējošā aktivitāte tika novērtēta pēc Tappel [25] aprakstītās metodes ar dažām modifikācijām. Pirkstu prosa ekstraktu (10ul) sajauca ar 115 ul 100 mM nātrija fosfāta buferšķīduma (pH 8,0) un 50 ul A5- LOX šķīduma (5000 U/ml) un inkubēja RT 10 minūtes. Reakcija tika uzsākta, pievienojot 25 ul 0,08 mM linolskābes. Absorbcijas izmaiņas tika reģistrētas pie 234 nm ar 1 minūtes intervālu 10 minūtes RT, un tika reģistrētas parauga (Vmaxs) un kontroles (Vmaxc) maksimālā ātruma (Vmxk) vērtības. Baicaleīns tika izmantots kā standarts. A5-LOX inhibējošā aktivitāte kā procentuālā vecuma inhibīcija tika aprēķināta, izmantojot vienādojumu (5). ICs.vērtība tika aprēķināta, izmantojot devas-atbildes diagrammas.

2.11.XO inhibējošās aktivitātes noteikšana. XO inhibējošā aktivitāte tika noteikta saskaņā ar metodi, ko aprakstīja Lee et al. [26] ar dažām izmaiņām. Pirkstu prosa ekstraktu (10ul) sajauca ar 150ul 50 mM nātrija fosfāta buferšķīduma (pH 7,4) un 20 ul XO (0,15 U/ml) un inkubēja 10 minūtes RT. Reakcija tika uzsākta, pievienojot 20 ul 0,1 mM ksantīna. Absorbcijas izmaiņas tika reģistrētas pie 295 nm ar min intervālu 15 minūtes RT, un tika reģistrētas parauga (Vmaxs) un kontroles (Vmaxc) Vmax vērtības. Allopurinols tika izmantots kā standarts. XO inhibējošā aktivitāte kā procentuālā inhibīcija tika aprēķināta, izmantojot vienādojumu (6). ICs.vērtība tika aprēķināta, izmantojot devas-atbildes diagrammas.

2.12.Hialuronidāzes inhibējošās aktivitātes noteikšana. Hialuronidāzes inhibējošā aktivitāte tika novērtēta saskaņā ar Sahasrabudhe un Dedhar [27] aprakstīto metodi ar dažām modifikācijām. Pirkstu prosa ekstrakts (50ul) tika sajaukts ar 10ul hialuronidāzes (8400 U/ml) un inkubēts 37 grādos 10 minūtes. Fermentu aktivizēja, pievienojot 20 ul kalcija hlorīda (12,5 mM) un inkubējot 37 grādu temperatūrā 10 minūtes. Reakcija tika uzsākta, pievienojot nātrija hialuronātu (50 ul) un inkubēta 37 ° C temperatūrā 40 minūtes. Pēc tam pievienoja 10 ul 0,9 M nātrija hidroksīda un 20 ul 0,2 M nātrija borāta un inkubēja 100 grādos 3 minūtes. Pēc atdzesēšanas līdz istabas temperatūrai pievienoja 50 ul 67 mM p-dimetilaminobenzaldehīda un inkubēja 37 grādu temperatūrā 10 minūtes. Parauga (As) un kontroles (Ac) absorbcijas vērtības tika mērītas pie 585 nm. Tanīnskābe tika izmantota kā standarts. Hialuronidāzes inhibējošā aktivitāte kā inhibīcija procentos tika aprēķināta, izmantojot (7) vienādojumu.

2.13.Oksidatīvo sprādzienu inhibējošo aktivitāšu noteikšana. Pretiekaisuma potenciāls attiecībā uz oksidatīvo sprādziena inhibējošo aktivitāti cilvēka asinīs un izolētos polimorfonukleārajos neitrofilos tika noteikts, izmantojot luminola pastiprinātas hemiluminiscences testu [28, 29] ar dažām modifikācijām. Eksperimenti tika veikti Dr. Panjvani Molekulārās medicīnas un zāļu izpētes centrā, Karači universitātes Starptautiskajā ķīmisko un bioloģijas zinātņu centrā, Pakistānā, un institūtam ir neatkarīgas ētikas komitejas ICCBS, UoK ētiskā atļauja veikt pētījumus par cilvēka asinīm. . Nr.:ICCB-S/IEC-008-BC-2015/Protocol/1.0.

2.13.1. Oksidatīvās sprādzienbīstamības inhibējošās aktivitātes noteikšana cilvēka asinīs. Cilvēka asinis (1 ml) tika aseptiski savāktas ar vēnu punkciju heparinizētā mēģenē no vesela nesmēķējoša brīvprātīgā, kurš nav lietojis zāles vai uztura bagātinātājus ilgāk par vienu nedēļu, un atšķaidīts (atšķaidījums 1:20) ar HBS plus *(Hanks Balanced). Sāls šķīdums, kas satur kalciju un magniju). Pirkstu prosas ekstraktu (25 ul) sajauca ar atšķaidītām pilnām asinīm (25 ul) un inkubēja 37 ° C temperatūrā 15 minūtes. Pēc tam pievienoja 25 ul seruma opsonizēta zimozāna un 25 ul luminola. Oksidatīvā pārrāvuma ROS ražošana tika uzraudzīta 50 minūtes, izmantojot luminometru ar atkārtotu skenēšanu ar 30 sekunžu intervālu un 1 s punktu mērīšanas laiku. Ibuprofēns tika izmantots kā standarta zāles. Inhibīcijas procentuālais daudzums tika aprēķināts, izmantojot (8) vienādojumu.

kur RLU ir luminometra rādījums relatīvo gaismas vienību (RLU) izteiksmē kontrolei un RLU ir luminometra rādījums paraugam RLU. IC vērtība tika aprēķināta, izmantojot devas-atbildes diagrammas.

2.13.2. Oksidatīvā sprādziena inhibējošās aktivitātes noteikšana izolētos polimorfonukleāros neitrofilos. Veselas cilvēka asinis (10 ml) sajauca ar vienādiem tilpumiem HBSS (Hanks Balanced Salt Solution, bez kalcija un magnija) un limfocītu atdalīšanas barotni (LSM) un ļāva eritrocītiem nosēsties 30 minūtes RT. Pēc tam plazmu rūpīgi uzklāja uz LSM un centrifugēja ar ātrumu 400 × g 20 minūtes RT. Supernatants tika noņemts; sarkanās asins šūnas iegūtajā granulā tika lizētas, sajaucot ar aukstu dejonizētu ūdeni, sajaucot ar aukstu HBSS7 un centrifugējot ar ātrumu 300 × g 10 minūtes 4 grādu temperatūrā. Granulas tika mazgātas divas reizes, un iegūto polimorfonukleāro neitrofilu dzīvotspēja tika pārbaudīta, izmantojot tripāna zilās izslēgšanas metodi. Šūnu koncentrācija tika noregulēta uz 1 × 10 grādu šūnām / ml. Izolēti polimorfonukleārie neitrofīli (25 山l) tika sajaukti ar pirkstu prosa ekstraktu (25 ul) un inkubēti 15 minūtes 37 grādu temperatūrā. Pēc tam tika pievienoti 25 ul seruma opsonizēta zimozāna un 25 ul luminola, un oksidatīvā sprādziena ROS ražošana tika kontrolēta 50 minūtes, izmantojot luminometru ar atkārtotu skenēšanu ar 30 sekunžu intervālu un ls punktu mērīšanas laiku. Ibuprofēns tika izmantots kā standarta zāles. Inhibīcijas procentuālais daudzums tika aprēķināts, izmantojot vienādojumu (8).

2.14. Statistiskā analīze. Katra eksperimenta dati tika statistiski analizēti, izmantojot programmatūru IBM SPSS Statistics (20. versija), un rezultāti tika izteikti kā vidējā±standarta kļūda (SE). Statistiskais nozīmīgums tika iestatīts uz 95 procentu ticamības līmeni. Lai noteiktu atšķirības starp šķirnēm un ekstraktiem, tika izmantota vienvirziena dispersijas analīze (ANOVA) un Tukey tests. Korelācijas analīzei tika izmantots Pīrsona korelācijas koeficients.

Iekaisuma klasifikācija

Akūts iekaisums: galvenokārt raksturīgs apsārtums, pietūkums, sāpes utt., Tas ir, iekaisums galvenokārt sastāv no asinsvadu sistēmas reakcijas.

Hronisks iekaisums: galvenokārt dažas hroniskas iekaisuma slimības, piemēram, hronisks gastroenterīts, hronisks hepatīts, recidivējoši ginekoloģiski iekaisumi un citas slimības.

Iekaisuma cēlonis

Jebkurš faktors, kas var izraisīt audu bojājumus, var būt iekaisuma cēlonis, tas ir, iekaisuma faktorus var iedalīt šādās kategorijās:

(1) Bioloģiskie faktori

Baktērijas, vīrusi, mikoplazmas, sēnītes, spirohetas un parazīti ir visizplatītākie iekaisuma izraisītāji. Iekaisumu, ko izraisa bioloģiskie patogēni, sauc arī par infekciju. Baktēriju ražotie eksotoksīni un endotoksīni var tieši bojāt audus; vīrusu replikācija inficētajās šūnās izraisa šūnu nekrozi; daži antigēni patogēni bojā audus, izraisot imūnās atbildes reakcijas pēc inficēšanās, piemēram, parazitāras infekcijas un tuberkuloze.

2) Fiziskie faktori

Augsta temperatūra, zema temperatūra, radioaktīvās vielas, ultravioletie stari utt., un mehāniski bojājumi.

(3) Ķīmiskie faktori

Eksogēnas ķīmiskas vielas, piemēram, stipra skābe, stiprs sārms un terpentīns. Endogēnas toksiskas vielas, piemēram, nekrotisku audu sadalīšanās produkti un metabolīti, piemēram, urīnviela, kas uzkrājas organismā noteiktos patoloģiskos apstākļos.

(4) Svešķermenis

Svešķermeņi, kas cilvēka organismā nonāk caur dažādiem līdzekļiem, piemēram, ar dažādiem metāliem, koka atkritumiem, putekļiem gaisā, ķirurģiskām šuvēm u.c., to atšķirīgās antigenitātes dēļ var izraisīt dažādas pakāpes iekaisuma reakcijas.

(5) Nekrotiskie audi

Cēloņi, piemēram, išēmija vai hipoksija, var izraisīt audu nekrozi, kas ir potenciāls iekaisuma faktors. Gan sastrēguma hemorāģiskās joslas, gan iekaisuma šūnu infiltrācija svaigu infarktu malās ir iekaisuma izpausmes.

(6) Alerģijas

Ja organisma imūnā atbilde ir patoloģiska, tā var izraisīt neatbilstošu vai pārmērīgu imūnreakciju, izraisot audu un šūnu bojājumus un izraisot iekaisumu. Piemēram, alerģisks rinīts, kolīts, nātrene, tuberkuloze, glomerulonefrīts un citas slimības.

Antibiotikām ir baktericīda un pretiekaisuma iedarbība, ilgstoša lietošana iznīcinās cilvēka organisma normālo floru, iznīcinās labās baktērijas, izraisīs zarnu floras nelīdzsvarotību, izraisīs dažādus zarnu darbības traucējumus un nevēlamas reakcijas, kā arī izraisīs sekundāru infekciju, mazinās organismu. pretestība. Turklāt antibiotikas galvenokārt metabolizējas aknās un nierēs, un antibiotiku ļaunprātīga izmantošana, visticamāk, var izraisīt aknu un nieru darbības traucējumus. Visu pretiekaisuma līdzekļu instrukcijās varat pievērst uzmanību vārdiem "lietojiet piesardzīgi pacientiem ar sliktu aknu un nieru darbību". Turklāt antibiotikas var arī palielināt alerģiskas reakcijas pret zālēm. Pēdējos gados alerģiskā rinīta un alerģiskās astmas biežums ir saistīts ar antibiotiku ļaunprātīgu lietošanu.

Eksperimenti ir parādījuši, ka ar ehinakozīdu bagātais Cistanche pipiensis ekstrakts labi uzlabo kolītu; Cistanche glikozīdam K un pipozīdam B ir laba slāpekļa oksīda sekrēcijas inhibējoša iedarbība šūnās, kas liecina, ka tā ir laba pretiekaisuma iedarbība.Cistancheir ķīniešu ārstniecības materiāls ar tādu pašu izcelsmi kā zālēm un pārtikai. Tā ir viena no desmit populārākajām ķīniešu augu izcelsmes zālēm manā valstī. Tas ir dārgums no tuksneša dzīlēm un dabisks toniks. Cistanche Cistanche zāļu vēsture ir gandrīz 2,000 gadi. Tas pirmo reizi tika ierakstīts "Shen Nong's Materia Medica". 2005. gadā Cistanche tika iekļauts "Ķīnas Tautas Republikas farmakopejā" kā īsts ārstniecības materiāls. Kopš seniem laikiem Cistanche ir bijis labs toniks, bez jebkāda toksicitātes rekorda, kas pilnībā pierāda tā drošību.