Cistanche Tubulosa feniletanoīdu oligoglikozīdi un acilēti oligocukuri ar vazorelaksējošu iedarbību

lai iegūtu plašāku informāciju:ali.ma@wecistanche.com

Masayuki Yoshikawa et al

Abstrakts

Metanola ekstrakts no žāvētiem kātiemCistanche tubulosa(Schrenk) R. Vaitam tika konstatēta inhibējoša iedarbība uz noradrenalīna izraisītām kontrakcijām izolētās žurkas aortas sloksnēs. No ekstrakta tika izdalītas jaunas feniletanoīdu aminoglikozīdu sastāvdaļas, kankanosīdi F un G, un acilēts oligocukurs kankanoze kopā ar 14 zināmiem savienojumiem. Šo jauno savienojumu struktūras tika noteiktas, pamatojoties uz to ķīmiskajiem un fizikāli ķīmiskajiem pierādījumiem. Turklāt galvenās sastāvdaļas, kankanosīds F, kankanoze, ehinakozīds, akteozīds un cistanozīds F, uzrādīja vazorelaksējošu darbību, un tika precizētas vairākas aktivitātes strukturālās prasības. 2006 Elsevier Ltd. Visas tiesības paturētas.

Noklikšķiniet uz Cistanche efekta produktiem

Ievads

Orobanchaceae parazitārais augs,Cistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight, ir plaši izplatīts Ziemeļāfrikā, Arābijā un Āzijas valstīs, un kātiCistanche tubulosa, kā arī C. salsa un C. deserticola, tradicionāli tiek izmantotas kā asinsrites veicinošs līdzeklis un impotences, sterilitātes, lumbago, ķermeņa vājuma un tonizējoša viela. zāles,1,4–14 mēs esam ziņojuši par piecu iridoīdu, kankanozīda A–D un kankanola, kā arī monoterpēnglikozīda kankanosīda E izolāciju un struktūras noskaidrošanu kopā ar 16 zināmiem savienojumiem no cilmes kātiem.Cistanche tubulosa1 Turpinot šo augu izcelsmes zāļu pētījumu, tika konstatēts, ka metanola ekstrakts inhibē noradrenalīna izraisītas kontrakcijas izolētās žurkas krūšu aortas sloksnēs. No šī metanola ekstrakta mēs papildus izolējām feniletanoīdu oligoglikozīdus, kankanosīdus F (1) un G (2) un anacilētu oligo cukuru, kankanozi (3) un 14 zināmus savienojumus, ehinakozīdu (4), akteozīdu (5), izoakteozīdu (6). ),20-acetilakteozīds (7), tubulozīdi A (8) un B (9), cistanīds F (10), salidrosīds (11), (2R,3R)-butāns-2,{{18 }}diols 2-ObD-glikopiranozīds,Meso-butāns-2, 3-diols2-ObD-glikopiranozīds, etil-bD-glikopiranozīds,3-metilbutanols bD-glikopiranozīds, (plus)-pinoresinols40-ObD -glikopiranozīds un (plus)-syringaresinol 40-ObD-glikopiranozīds. Šajā rakstā aplūkota jaunu savienojumu struktūras noskaidrošana (1–3), kā arī galveno sastāvdaļu (1, 3–6, 10 un 11) vazorelaksējošā iedarbība uz kontrakcijām, ko izraisa noradrenalīna izolētas žurku aortas sloksnes, pamatojoties uz tradicionālo pielietojumu asinsrite (1. att.).

rezultāti un diskusija

2.1. Metanola ekstrakta vazorelaksējoša iedarbība no kātiemCistanche tubulosapar noradrenalīna izraisīto kontrakciju izolētā žurku krūšu aortā

Kā parādīts 1. tabulā, metanola ekstrakts no kātiemCistanche tubulosa(iegādāts Urumči, Sjiņdzjanas provincē, Ķīnā), tika konstatēta vazorelaksējoša iedarbība uz kontrakcijām, ko noradrenalīns izraisa izolētās žurkas aortas sloksnēs, atkarībā no laika un koncentrācijas (30–3{{10}} 0 lg/mL). Metanola ekstrakts tika tālāk attīrīts ar normālās un apgrieztās fāzes kolonnas hromatogrāfiju un visbeidzot ar HPLC, lai iegūtu 1 (0.016 procenti), 2(0).{31} }25 procenti ), 3 (0.020 procenti ), 4 (3.09 procenti ), 3 5 ({{64} },68 procenti ),3 6(0.096 procenti ),3 7 (0,017 procenti ),3 8 (0,052 procenti ),3 9 (0,0036 procenti ),3 10(0,025 procenti ),15 11 (0,044 procenti ),16 (2R,3R)-butāns-2,{{44 }}diols2-ObD-glikopiranozīds (0,0087 procenti), 17 mezobutāns-2, 3-diols 2-ObD-glikopiranozīds (0,0065 procenti), 17 etilb-D- glikopiranozīds (0,055 procenti), 17 3-metilbutanols bD-glikopiranozīds (0,0030 procenti),17 (plus)-pinoresinols 40-ObD-glikopiranozīds (0,016 procenti),18 un (plus)-šļirce1}rezinols{{8 }ObD-glikopiranozīds (0,022 procenti ).15

2.2. Kankanozīdu F (1) un G (2) struktūras

Kankanozīds F (1) tika iegūts kā balts pulveris ar negatīvu optisko rotāciju (½a -28D -44.8- MeOH). IR spektrs 1 uzrādīja absorbcijas joslas pie 156{{69}. }, 1508 un 1458 cm-1, ko var attiecināt uz aromātiskām un spēcīgām absorbcijas joslām pie 3432, 1075 un 1044 cm-1, kas liecina par aminoglikozīdu struktūru. negatīvo jonu FAB-MS ar 1, kvazimolekulāro jonu maksimumi tika novēroti pie m/z 647 (M plus Na) plus un 623 (MH), un augstas izšķirtspējas FAB-MS analīze atklāja, ka molekulārā formula 1 ir C26H40O17. 1H un 13C KMR (CD3OD, 2. tabula) spektri 1, kas tika piešķirti ar dažādiem NMR eksperimentiem,19 uzrādīja signālus, kas attiecināmi uz diviem metilēniem [d 2,78 (2H, m, H2-7), 3,70, 4.{{ 39}} (katrs 1H, abi m, H2-8)] un orto- un meta-savienotie ABC tipa aromātiskie protoni [d 6,56 (1H, dd, J=1,9,7,9 Hz, H-6), 6,67 (1H, d, J=7,9 Hz, H-5), 6,69 (1H, d, J=1,9 Hz, H{ {64}})] kopā ar trim glikopiranozes daļām [d 4,30 (1H, d, J=8,0 Hz, H-10), 4,37 (1H, d, J=8). 0 Hz, H-1000), 5,16 (1H, br s, H-100)]. Aminoglikozīdu struktūru 1. punktā raksturoja ar heteronukleārās vairāku saišu savienojamības (HMBC) eksperimentu, kas parādīja liela attāluma korelācijas starp šādiem protonu un oglekļa pāriem (H-10 un C-8; H-100 un C-30; H-1000 un C-60), kā parādīts 2. attēlā. Ehinakozīda (4), kura absolūtā stereostruktūra tika ziņots iepriekš3, fermentatīvā deacilēšana, izmantojot tannāzi13,14, deva 1. Pamatojoties uz iepriekšminētajiem pierādījumiem, kankanosīda F struktūra tika noteikta kā 2-(3,4-). dihidroksifenil)etil OaL-ramnopiranozil(1-3)[bD-glikopiranozil(1-6)]-b-D-glikopiranozīds (1).

Kankanozīds G (2) tika iegūts arī kā balts pulveris ar negatīvu optisko rotāciju (½a-26D-35.0-MeOH). IR spektrs 2 uzrādīja absorbcijas joslas pie 3432, 1709, 1638, 1518, 1447 un 1040 cm{11}}, kas attiecināmi uz hidroksilgrupu, konjugētu karbonilesteru un ētera funkcijām un aromātisko gredzenu. Molekulārā formula C29H36O14 no 2 tika noteikta no pozitīvo un negatīvo jonu FAB-MS [m/z 631 (M plus Na) plus un 607 (MH)-] un ar augstas izšķirtspējas FAB-MS. 2 fermentatīvā deacilēšana ar tanāzi radīja cistanozīdu G(12), kura absolūtā stereostruktūra tika ziņots iepriekš.16 Sārmainā hidrolīzē 2 ar 10% kālija hidroksīda (KOH) ūdens šķīdumu – 50% 1,4-dioksāna (1:1, v/v), kofeīnskābe tika identificēta ar HPLC analīzi. 1H un 13C KMR (CD3OD, 2. tabula) spektri19 no 2 liecināja par šādu funkciju klātbūtni: 4-hidroksifeniletilspirta daļa {twometilēni [d 2,82 (2H, m, H2-7), 3,70, 3,96 ( 1H katrs, abi m, H2-8)] un orto-savienoti A2B2- tipa aromātiskie protoni [d 6,65, 7,03 (katrs 2H, abi d, J=8,6 Hz, H{ {62}},5 un H-2,6)]} un divas glikopiranozes daļas [d4,33 (1H, d, J=7,9 Hz, H-10), 5,19 (1H, br s, H-100)]kopā ar kofeoilgrupu {trans-olefīnu [d 6,29, 7,56 (katrs 1H, abi d, J=15.9 Hz, H{{84) }} un H-7)] un pirokatehola tipa dihidroksibenzols [d 6,78 (1H, d, J=8,3 Hz, H-5), 6,89 (1H, dd, J {{ 96}},9, 8,3 Hz, H-6), 7,04 (1H, d, J=1,9 Hz, H-2)]}. 2. HMBC eksperimentā tika novērota liela attāluma korelācija starp 60-protonu [d 4,36 (1H, dd, J=6.1, 11,6 Hz), 4,50 (dd, J {{). 119}},8, 11,6 Hz)] un kafeoilkarboniloglekli (dC 169,1). Līdz ar to tika noteikts, ka kankanosīda G struktūra ir 4-hidroksifenil-OaL-ramnopiranozil(1 ! 3)-(6-O-kafeoil)-bD-glikopiranozīds (2).

2.3. Kankanozes struktūra (3)

Kankanoze (3), ½a- 27D-35.3- (MeOH), tika iegūta arī kā balts pulveris. IS spektrs 3 uzrādīja absorbcijas joslas pie 343{{30}}, 1702, 1639, 1611, 1458 un 1071 cm-1, kas attiecināmas uz hidroksilgrupa, konjugētā estera karbonilgrupa un ētera funkcijas un aromātiskais gredzens. Pozitīvo un negatīvo jonu FAB-MS 3 uzrādīja kvazimolekulāro jonu maksimumus attiecīgi pie m/z 673 (M plus Na) plus un m/z 649 (MH). Augstas izšķirtspējas FAB-MS ar 3 atklāja, ka molekulārā formula ir C27H38O18. 3 sārmaina hidrolīze ar 10 procentiem KOH–50% ūdens 1,4- dioksānu atbrīvotu kofeīnskābi, kas tika identificēta ar HPLC analīzi, kopā ar oligo cukuru. Šī oligocukura skābā hidrolīze ar 1,0 M sālsskābi (HCl) atbrīvoja L-ramnozi un D-glikozi, kuras identificēja ar HPLC analīzi, izmantojot optiskās rotācijas detektoru.1,13,14 1H un 13CNMR (CD3OD, 3. tabula) spektri19 no 3 uzrādīja signālus, kas attiecināmi uz trisaharīda daļu {d [5,11 (d, J=3,4 Hz), 4,57 (d, J=7,9 Hz), H{ a- un b formas maisījums {52}} (apmēram 1:1)], 4,25, 4,27 (abi d, J=7,7 Hz, H-1000), 5,13, ​​5,18 (abi br s, H{{66 }})} kopā ar kafeoilgrupu [d 6,28, 6,29 (abi d, J=15,9 Hz, H-9), 6,78 (d, J=8,0 Hz, H -5), 6,96 (dd, J=2,0, 8,0 Hz, H-6), 7,06 (d, J=2,0 Hz, H{{90} }), 7,60 (d, J=15,9 Hz, H-7)]. HMBC eksperimentos ar 3 tika novērotas liela attāluma korelācijas starp 40-protonu [d 5,04, 4,99 (abi dd, J=9,5, 9,8 Hz)] un kafeoilkarboniloglekli (dC168,53). , 168.65). Pamatojoties uz iepriekš minētajiem pierādījumiem, kankanozes struktūra tika noskaidrota līdz bea-L-ramnopiranozil(1-3)[bD-glikopiranozil(1-6)]-O-(4- O-kofeoil)-D-glikopiranoze (3).

2.4. Galveno sastāvdaļu (1, 3–6, 10, 11) vazorelaksējoša iedarbība no plkst.Cistanche tubulosapar kontrakciju, ko izraisa noradrenalīns un augsts K plus izolētā žurku krūšu aortā

Kā parādīts 4. tabulā un 3. attēlā, galveno sastāvdaļu kankanosīda F (1) un kankanozes (3), ehinakozīda (4), akteozīda (5), izoakteozīda (6), cistanozīda F (10) un salidrosīda ( 11) tika pārbaudītas noradrenalīna izraisītas kontrakcijas izolētā žurkas krūšu aortā. Rezultātā savienojumi 3–5 un 10, kam ir kofeoilgrupa 40-pozīcijā, ievērojami kavēja kontrakcijas atkarībā no laika un/vai koncentrācijas (10–100 lM), savukārt 6. savienojumiem bija 60- O-kafeoilgrupa uzrādīja vāju aktivitāti nekā 4 un 5. No otras puses, savienojums 1 ar kateholu grupām uzrādīja būtisku inhibīciju, bet 11 ar fenola grupu šādu efektu neuzrādīja. Šie rezultāti lika mums pieņemt, ka 40-O-kofeoilgrupa un 10-O-dihidroksifenetildaļa ir būtiskas spēcīgai vazoreslaksējošai darbībai. No otras puses, savienojumi 1, 3–6 un 10 (100 lM) neuzrādīja nekādu ietekmi uz kontrakcijām, ko izraisīja augsta kālija katācijas koncentrācija (augsts K plus ), kas atšķiras no nifedipīna, no sprieguma atkarīga kalcija kanālu blokatora. tie paši audi (dati nav parādīti). Šis atklājums liecināja, ka šīs aktīvās sastāvdaļas kavē kontrakcijas, izmantojot receptoru darbinātu kalcija kanālu, bet ne caur sprieguma atkarīgo kalcija kanālu. Nesen Iizuka et al. ziņoja, ka feniletanoīds, forsitiazīds, no Forsythia suspensa augļiem, inhibēja noradrenalīna izraisītās kontrakcijas žurku aortas gredzena preparātos, un norādīja, ka noradrenalīna izraisīto kontrakciju inhibīcija ar foritiazīdu daļēji ir saistīta ar noradrenalīna izraisītu kontrakciju samazināšanos. kalcija pieplūdums.20 Tomēr šajā pētījumā aktīvo sastāvdaļu relaksējošā iedarbība tika novērota apm. 30 minūtes pēc noradrenalīna pievienošanas, kas atšķiras no prazosīna, adrenalīna a1-receptoru antagonista, pievienošanas. Aktīvo sastāvdaļu darbības mehānismi ir jāturpina pētīt.

3. Eksperimentāls

3.1. Vispārējā eksperimentālā procedūra

Fizisko datu iegūšanai tika izmantoti šādi instrumenti: specifiskās rotācijas, Horiba SEPA-300 digitālais polarimetrs (l=5 cm); UV spektri, Shimadzu UV-1600spektrometrs; IR spektri, Shimadzu FTIR-8100 spektrometrs; 1H KMR spektri, JEOL JNM-LA500 (500 MHz) spektrometrs; 13C KMR spektri, JEOLJNM-LA500 (125 MHz) spektrometrs ar tetrametilsilānu kā iekšējo standartu; FABMS un HR-FAB MS, JEOL JMS-SX 102A masas spektrometrs; HPLC detektors, Shimadzu RID{15}}A refrakcijas indekss un SPD 10A UV-redzes detektori. HPLC kolonna, YMC-PackODS-A (250 · 4,6 mm id) un (250 · 20 mm id) kolonnas tika izmantotas attiecīgi analītiskiem un sagatavošanās nolūkiem.

Hromatogrāfijai tika izmantoti šādi eksperimentālie apstākļi: normālās fāzes silikagēla kolonnas hromatogrāfija, silikagela BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd, 150–350 acs); apgrieztās fāzes silikagēla kolonnu hromatogrāfija, Chromatorex ODS DM1020T (FujiSilesia Chemical, Ltd, 100–200 acs); TLC, iepriekš pārklātas TLC plāksnes ar silikagelu 60F254 (Merck, 0,25 mm) (normālā fāze) un silikagelu RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm) (apgrieztā fāze); apgrieztās fāzes HPTLC, iepriekš pārklātas TLC plāksnes ar silikagelu RP-18 WF254S(Merck, 0,25 mm); noteikšana tika panākta, izsmidzinot ar 1% Ce(SO4)2–10% H2SO4 ūdens šķīdumu, kam sekoja karsēšana.

Cistanche tubulosa

3.2. Augu materiāls

Žāvēti kātiCistanche tubulosatika iegādāti Urumqi, Sjiņdzjanas provincē, Ķīnā, 2005. gada janvārī, izmantojot EishinTrading Co., Ltd, Osaka, Japāna, kā aprakstīts iepriekš.1

3.3. Ekstrakcija un izolācija

Frakcijas {{0}} (590 mg), 2-1 (466 mg), 2-3 (3931 mg), 3-3(3610 mg), 3-4 (190 mg), 4-5 [=ehinakozīds (4, 2595 mg, 0,44 procenti )], 4-6 (1635 mg), 5-2 (1114 mg), {{ 20}} (306 mg), 5-4(347 mg), 5-5 (=4, 1620 mg, 2,03 procenti) un 5-6 (1453 mg) tika iegūti no stublāju metanola ekstraktsCistanche tubulosakā ziņots iepriekš.1 Frakcija 1–2 (590 mg) tika attīrīta ar HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)], lai iegūtu 3-metilbutanola bD-glikopiranozīdu (18 mg). , 0.0030 procenti ), (plus )-pinoresinols 40-ObD-glikopiranozīds (96 mg, 0). 016 procenti ), un (plus )-syringaresinol 40-O bD-glikopiranozīds (129 mg, 0.022 procenti ) kopā cistanohlorīns (21 mg, {{ 76}}.{{80}}035 procenti). Frakcija 2-1 (466 mg) tika atdalīta ar HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)], lai iegūtu (2R,3R)-butānu-2,{{40 }}diols 2-ObD-glikopiranozīds (12 mg, {{1{{108}}4}}.0087 procenti ), (2R, 3S)-butāns-2, 3-diols 2-ObD glikopiranozīds (9 mg, 0.0065 procenti) un etil-bD -glikopiranozīds (76 mg, 0.055 procenti ) kopā ar uridīnu (0.0069 procenti ). Frakcija 2-2 (535 mg) tika attīrīta ar HPLC[MeOH/H2O (5:95, v/v)], lai iegūtu salidrozīdu (11, 41 mg, 0,022 procenti) kopā ar antirrīdu (15 mg, 0,0079 procenti). un 6-deoksikatalpols (214 mg, 0,11 procenti). Frakcija 2-3 (535 mg) tika atdalīta ar HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)], lai iegūtu 11 (17 mg, 0,022 procenti) kopā ar gluro pusi (110 mg, 0,14 procenti) un bartsiozīds (164 mg, 0,21 procents). Frakcija 3-3 (510 mg) tika pakļauta HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)], lai iegūtu akteozīdu (5, 257 mg, 0,31 procents), izoakteozīds (6, 79 mg, 0,096 procenti) un 20-acetilakteozīds (7, 14 mg, 0,017 procenti). Frakcija 3-4 (190 mg) tika tālāk attīrīta ar HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)], lai iegūtu kankanosīdu G (2, 17 mg, 0,0029 procenti) un tubulozīdu B (9, 21 mg, 0,0036). procenti). Frakcija 4-6 (75 mg) tika attīrīta ar HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)], lai iegūtu 5 (18 mg, 0,065 procenti). Frakcija 5-2 (1114 mg) tika pakļauta HPLC [MeOH/H2O (10:90, v/v)], lai iegūtu 2 (24 mg, 0,030 procenti). Frakcija 5-3 (306 mg) tika noteikta. attīra ar HPLC [MeOH/H2O (15:85, v/v)], lai iegūtu kankanosīdu F (1, 13 mg, 0,016 procenti). Frakcija 5-4 (347 mg) tika pakļauta HPLC [MeOH/H2O (10:90, v/v)], lai iegūtu kankanozi (3, 30 mg, 0,038 procenti) un cistanozīdu F (10, 20 mg, 0,025). procenti). Frakcija 5-6 (530 mg) tika attīrīta ar HPLC [MeOH/H2O (35:65, tilp./tilp.)], lai iegūtu 4 (185 mg, 0,62 procenti), 5 (91 mg, 0,30 procenti) un tubulozīdu A. (8, 16 mg, 0,052 procenti).

3.3.1. Kankanosīds F (1).

Balts pulveris, ½a{{0}}D -44.8- (c0,50, MeOH). Augstas izšķirtspējas pozitīvo jonu FAB-MSm/z: aprēķināts C26H40O17Na (M plus Na) plus , 647,2163. Atrasts: 647,2160. UV [MeOH, nm (log e)]: 224 (3,83), 283 (3,37). IR (KBr): 3432, 2940, 1560, 1508, 1458, 1075, 1044 cm-1. 1H KMR (500 MHz, CD3OD) d: norādīts 2. tabulā. 13C KMR dati (125 MHz, CD3OD) dC: norādīts 2. tabulā. Pozitīvo jonu FAB-MS m/z: 647 (M plus Na) plus . Negatīvo jonu FAB-MS m/z: 623 (MH), 477 (M-C6H11O4)-, 623 (M-C6H11O5)-, 623 (M-C12H21O9)-.

3.3.2. Kankanozīds G (2).

Balts pulveris, ½a{{0}}D -35.0-(c 0,80, MeOH). Augstas izšķirtspējas pozitīvo jonu FAB-MSm/z: aprēķināts C29H36O14Na (M plus Na) plus , 631.2003.Atrasts: 631.1996. UV [MeOH, nm (loge)]: 329 (4,10).IR (KBr): 3432, 2924, 1709, 1638, 1518, 1447, 1264,1040 cm-1. 1H KMR (500 MHz, CD3OD) d: norādīts 2. tabulā. 13C KMR dati (125 MHz, CD3OD) dC: norādīti 2. tabulā. Pozitīvo jonu FAB-MS m/z: 631 (M plus Na) plus .negatīvais jonu FAB-MS m/z: 607 (MH)-, 461 (M-C6H11O4).

3.3.3. Kankanoze (3).

Balts pulveris, ½a{{0}}D -35.3- (c0,50, MeOH). Augstas izšķirtspējas pozitīvo jonu FAB-MSm/z: aprēķināts C27H38O18Na (M plus Na) plus , 673,1956. Atrasts: 673,1959. UV [MeOH, nm (loge)]: 219 (4,10), 247 (3,96), 333 (4,21). IR (KBr): 3430, 2962, 1702, 1639, 1611, 1458, 1264, 1071 cm-1. 1H KMR (500 MHz, CD3OD) d: norādīts 3. tabulā. 13C KMR dati (125 MHz, CD3OD) dC: norādīti 3. tabulā. Pozitīvo jonu FAB-MS m/z: 673 (M plus Na) plus . Negatīvo jonu FABM-Sm/z: 649 (MH), 487 (M-C9H8O3)-, 325 (M-C15H18O8)-.

Cistanche tubulosa

3.4. 2 un 4 fermentatīvā deacilēšana ar tanāzi

2 (4,8 mg, 0.008 mmol) šķīdumu ūdenī (1.0 ml) apstrādāja ar tannāzi (3,7 mg, no Aspergillus oryzae). , Wako Pure Chemical Ind., Ltd, Osaka, Japāna) un šķīdumu maisīja 37 grādu temperatūrā 24 stundas. Pēc tam, kad reakcijas maisījumam tika pievienots EtOH, šķīdinātājs tika noņemts pazeminātā spiedienā un atlikums tika attīrīts ar HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)], lai iegūtu cistanozīdu G (12, 2,8 mg, 80 procenti).16 Caur līdzīgu procedūru, 4 (9,2 mg, 0,012 mmol) šķīdumu H2O (2,0 ml) apstrādāja ar tanāzi (7,5 mg) un šķīdumu maisīja 37 grādu temperatūrā 24 stundas. Apstrādājot reakcijas maisījumu, kā aprakstīts iepriekš, tika iegūts atlikums, kas tika attīrīts ar HPLC [MeOH/H2O (15:85, v/v)], lai iegūtu 1 (4,7 mg, 62 procenti).

3.5. 2. un 3. sārmaina un skābes hidrolīze

2 un 3 (katrs 3,5 mg) šķīdumu 50 procentu 1,4- dioksāna (10 ml) ūdens šķīdumā apstrādāja ar 10 procentu KOH ūdens šķīdumu. (1.{{30}} ml) un visu maisīja 37 C temperatūrā attiecīgi 1 stundu. Šķīdinātāja noņemšana pazeminātā spiedienā radīja reakcijas maisījumu, kas tika pakļauts HPLC analīzei [kolonna: YMC-Pack ODS-A, 250 · 4,6 mm id; kustīgā fāze: MeOH/H2O (30:70, v/v); noteikšana: UV (254 nm); plūsmas ātrums: 1,0 ml/min], lai identificētu kofeīnskābi (tR: 13,1 min). Pēc tam reakcijas maisījumu no 3 izšķīdināja 1 M HCl (2, 0 ml) un karsēja ar atteci 3 stundas. Pēc atdzesēšanas reakcijas maisījumu ekstrahēja ar EtOAc. Ūdens slānis tika pakļauts HPLC analīzei attiecīgi šādos apstākļos: HPLC kolonna, KaseisorbLC NH2-60-5, 250 × 4,6 mm id (Tokyo Kasei Co., Ltd, Tokija, Japāna); noteikšana, optiskā rotācija [ShodexOR-2 (Showa Denko Co., Ltd, Tokija, Japāna); mobilā fāze, CH3CN/H2O (85:15, v/v); plūsmas ātrums 0,8 ml/min]. Ūdens slānī esošās L-ramnozes un D-glikozes identificēšana tika veikta, salīdzinot to aiztures laiku un optisko rotāciju ar autentiskajiem paraugiem, tR: 9,9 min (L-ramnoze, negatīva optiskā rotācija) un 17,9 min (D-glikoze, pozitīva optiskā rotācija).

3.6. Vasorelaksanta darbība

3.6.1. Audu sagatavošana.

Sprague–Dawley žurku tēviņi, kas sver 250–350 g, tika nogalināti, anestēzijā atdalot abas miega artērijas, un krūšu aorta tika izolēta un sagriezta spirālveida sloksnēs (2–3 mm ·15–2{25). }} mm). Fizioloģiskais sāls šķīdums saturēja NaCl (118,0 mM), KCl (4,7 mM), KH2PO4 (1,2 mM), MgSO4 (1,2 mM), CaCl2 (2,5 mM), NaHCO3 (25,0 mM) un D-glikozi (10,0 mM). Šķīdumu aerēja ar 95% O2–5% CO2 gāzu maisījumu un turēja 37 grādu temperatūrā. Lai izpētītu mehānisko reakciju, katrs preparāts tika suspendēts orgānu vannā (6 ml) un pakļauts sākotnējai apmēram 1 g slodzei. Pirms eksperimentu uzsākšanas tika atļauts vienas stundas līdzsvarošanas periods. Kontrakcijas tika mērītas izometriski, izmantojot spēka nobīdes devēju (AD Instruments) un reģistrētas poligrāfā.

3.6.2. Inhibējošs efekts uz kontrakciju, ko izraisa dl-noradrenalīns vai augsts K plus .

Pēc līdzsvarošanas vannai pievienoja dl-nor-adrenalīnu (galīgā koncentrācija: 1 lM) vai 3 M KCl (0,1 ml, K plus: 54 mM galīgā koncentrācija). Pēc tam, kad kontrakcija bija sasniegusi maksimālo līmeni, audi tika mazgāti trīs reizes un no jauna līdzsvaroti. Noturīgo kontrakciju atkal izraisīja, pievienojot dl-noradrenalīnu vai KCl, un pēc tam testa savienojumu uzklāja ar 10–100 lM (noradrenalīns) vai 100 lM (augsts K plus ). Kontrakcijas reakcija pirms testa parauga uzklāšanas tika uzskatīta par 100 procentiem. Prazosīna hidrohlorīds un nifedipīns tika izmantoti kā atsauces savienojumi.

3.6.3. Statistiskā analīze.

Vērtības ir izteiktas kā vidējie± SEM. Statistiskajai analīzei tika izmantota vienvirziena dispersijas analīze, kam sekoja Daneta tests vairāku salīdzinājumu analīzei. Varbūtības (p) vērtības, kas mazākas par 0,05, tika uzskatītas par nozīmīgām.

Pateicības

Šo pētījumu atbalstīja 21. COE programma, akadēmiskās robežas projekts un Japānas Izglītības, kultūras, sporta, zinātnes un tehnoloģiju ministrijas dotācija zinātniskiem pētījumiem.

Atsauces un piezīmes

1. Šis raksts ir 19. numurs sērijā "Bioaktīvie komponenti no Ķīnas dabīgajām zālēm". Papīra numuru 18 skatiet Xie, H.; Morikava, T.; Matsuda, H.; Nakamura, S.; Muraoka, O.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bullis. 2006, 54, 669–675.
2. Namba, T. In The Encyclopedia of Wakan-Yaku (tradicionālās Ķīnas un Japānas zāles) ar krāsainiem attēliem; Hokurjuša: Osaka, 1994; II sējums.
3. Kobajaši, H.; Oguči, H.; Takizava, N.; Mijase, T.; Ueno, A.; Usmangani, K.; Ahmad, M. Chem. Pharm. Bullis. 1987, 35, 3309–3314.
4. Matsuda, H.; Morikava, T.; Tao, Dž.; Ueda, K.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bullis. 2002, 50, 208–215.

5. Morikava, T.; Matsuda, H.; Togučida, I.; Ueda, K.; Jošikava, MJ Nat. Prod. 2002, 65, 1468–1474.

6. Tao, J.; Morikava, T.; Togučida, I.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Jošikava, M. Bioorg. Med. Chem. 2002, 10, 4005–4012.
7. Morikava, T.; Tao, Dž.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Jošikava, MJ Nat. Prod. 2003, 66, 638–645.
8. Tao, J.; Morikava, T.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bullis. 2003, 51, 654–662.
9. Matsuda, H.; Morikava, T.; Xie, H.; Yoshikawa, M. Planta Med. 2004, 70, 847–855.
10. Saule, B.; Morikava, T.; Matsuda, H.; Tevtrakuls, H.; Vu, LJ; Harima, S.; Jošikava, MJ Nat. Prod. 2004, 67, 1464–1469.

11. Morikava, T.; Saule, B.; Matsuda, H.; Vu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bullis. 2004, 52, 1194–1199.

12. Sje, H.; Van, T.; Matsuda, H.; Morikava, T.; Jošikava, M.; Tani, T. Chem. Pharm. Bullis. 2005, 53, 1416–1422.
13. Morikava, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Jošikava, MJ Nat. Prod. 2006, 69, 881–886.
14. Morikava, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Van, T.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bullis. 2006, 54, 506–513.
15. Kobajaši, H.; Karasava, H.; Mijase, T.; Fukušima, S. Chem. Pharm. Bullis. 1985, 33, 1452–1457.

16. Karasava, H.; Kobajaši, H.; Takizava, N.; Mijase, T.; Fukušima, S. Yakugaku Zasshi 1986, 106, 721–724.

17. Kitadžima, J.; Išikava, T.; Tanaka, Y. Chem. Pharm. Bullis. 1998, 46, 1643–1646.
18. Čiba, M.; Hisada, S.; Nišibe, S.; Thieme, H. Phytochemistry 1980, 19, 335–336.
19. 1H un 13C KMR spektri no 1 līdz 3 tika piešķirti, izmantojot bez kropļojumu uzlabošanu ar polarizācijas pārnesi (DEPT), dubultā kvantu filtra korelācijas spektroskopiju (DQF COSY) un heteronukleāro daudzkvantu koherenci (HMQC), heteronukleāro vairāku saišu savienojumu. (HMBC) eksperimenti.
20. Iizuka, T.; Nagai, M. Yakugaku Zasshi 2005, 125, 219–224.