Dažādu C. Deserticola ekstrakcijas daļu tīrīšanas funkcijas pret aizcietējumiem žurkas modeļa

KOPSAVILKUMS: MĒRĶIS Izpētīt dažādu ekstrahēto C. deserticola daļu caureju veicinošo iedarbību. METODES Imodium aizcietējuma žurku modelis tika izveidots, lai novērotu defekāciju un noteiktu kuņģa-zarnu trakta hormonus un neirotransmiterus utt. REZULTĀTI Dažādām ekstrahētām C. deserticola daļām bija jāveicina ietekme uz žurku aizcietējumu izdalīšanos. Salīdzinot ar modeļu grupu, oligosaharīdu daļas SS, AchE, SP un MTL bija tendence pieaugt, 5-HT, VIP un NT oligosaharīdu daļā ievērojami palielinājās (P<0. 05 or P<0. 01), AQP3 significantly reduced (P<0. 01), which suggested that the oligosaccharide part had obvious therapeutic effects. The remaining parts showed no significant difference. Oligosaccharide was an ef-the festive working part of C. deserticola. CONCLUSION The oligosaccharide of C. deserticola has good purging effects, and can effectively treat constipation, which provides the scientific basis for pharmaceutical development.

ATSLĒGVĀRDI:C. deserticola; attīrīšana; kuņģa-zarnu trakta hormoni; neirotransmiteri; oligosaharīdi

Cistanche deserticola ir sauss, zvīņains, gaļīgs Orobaceae auga Cistanche deserticola vai cauruļveida zieds Cistanche deserticola kāts. Tas ir pazīstams kā "tuksneša žeņšeņs", un tam ir tādas funkcijas kā zarnu mitrināšana, zarnu kustības veicināšana, nieru tonizēšana un jaņa stiprināšana. Cistanche deserticola ir nomierinoša un caureju veicinoša iedarbība, un tā ir piemērota aizcietējuma ārstēšanai cilvēkiem ar vāju ķermeni. Pašlaik ir daudz ziņojumu par Cistanche deserticola defekācijas efektu, taču ir neliels salīdzinājums par dažādu ekstrakcijas daļu defekācijas efektu atšķirībām. Mūsu pētniecības grupa iepriekš ir pētījusi Cistanche deserticola defekācijas ietekmi uz žurkām ar aizcietējumiem un normālām žurkām. Lai identificētu tā efektīvās daļas, mūsu pētnieku grupa tālāk pētīja atšķirības dažādu Cistanche deserticola ekstraktu defekācijas efektā uz aizcietējumiem žurkām, nodrošinot zinātnisku pamatojumu jaunu zāļu izstrādei.

Tuksneša žeņšeņs

Noklikšķiniet šeit, lai skatītu Cistanche produktus

【Jautājiet vairāk】 E-pasts:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1 Materiāls

1.1 Izmēģinājuma zāles

Cistanche deserticola tika iegādāta no Inner Mongolia Wangyedi Co., Ltd., un profesors Zhai Yanjun no Liaoningas Tradicionālās ķīniešu medicīnas universitātes to identificēja kā sausu, zvīņainu, gaļīgu auga Cistanche deserticola YCMa stublāju ķīniešu medicīnas saimē.; Loperamīda hidrohlorīda kapsulas (tirdzniecības nosaukums: Yimengting, partijas numurs: 150413966, Xi'an Janssen Pharmaceutical Co., Ltd.); Tongbianling kapsulas (sērijas numurs 12090202, Jinan Limeng Pharmaceutical Co., Ltd.); Aktivētā ogle (partijas numurs 20040602, Liyang Zhuxi Activated Carbon Co., Ltd.); Vielas P (SP) komplekts (sērijas numurs: BPE30328), somatostatīna (SS) komplekts (sērijas numurs: BPE30378), motilīna (MTL) komplekts (sērijas numurs: BPE30376), acetilholīnesterāzes (AchE) komplekts (sērijas numurs: BPE30063), Vasoactive zarnu peptīdu (VIP) testa komplekts (sērijas numurs BPE31682), 5-hidroksitriptamīna (5-HT) testa komplekts (partijas numurs BPE30326), akvaporīna 3 (AQP3) testa komplekts (partijas numurs BPE30361), neirotenzīns ( NT) testa komplekts (partijas numurs BPE30823), visu nodrošina Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd; Atlikušie reaģenti ir analītiski tīri.

Supermena garšaugu cistanche

1.2 Instruments 

Enzīmu marķēšanas instruments (Thermo Fisher Scientific, ASV); TGL{0}}C galddatora centrifūga (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Elektroniskie svari (Shanghai Yousheng Weighing Instrument Co., Ltd.); Vortex mikseris (Shanghai Qingpu Huxi instrumentu rūpnīca); Pastāvīgas temperatūras un mitruma kaste (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.).

1.3 Dzīvnieks

SD žurkas, kuru ķermeņa svars ir 180-220g, SPF pakāpe, nodrošina Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., licences numurs SCXK (Liao) 2015-0001.

2 Metodes

2.1. Dažādu ekstrahētu Cistanche deserticola daļu sagatavošana

Cistanche deserticola šķēle

Paņemiet atbilstošu daudzumu Cistanche deserticola novārījuma gabaliņu, pievienojiet 8 reizes lielāku ūdens daudzumu, uzkarsējiet un ar atteci, lai ekstrahētu 3 reizes, katru reizi 1 stundu. Apvienojiet filtrātu, samaziniet spiedienu un koncentrējiet līdz relatīvajam blīvumam 1,15 (mērot 50 grādu temperatūrā), pievienojiet 95% etanola 60% spirta saturam, nogulsnējiet zemā temperatūrā 12 stundas, filtrējiet un nogulsnējiet līdz kopējai polisaharīda ekstrakcijas vietai. ; Ņem vakuumkoncentrācijā iegūto šķidrumu, attīra ar makroporainiem sveķiem, mazgā ar ūdeni, savāc ūdens mazgāšanas šķīdumu un iztvaicē līdz sausam, lai iegūtu kopējo oligosaharīdu frakciju; Pēc tam eluē ar 40 procentu etanolu, savāc 40 procentu etanola eluentu, koncentrē pazeminātā spiedienā un žāvē, lai iegūtu kopējos glikozīdus. Katru ekstrahēto daļu izšķīdina ūdenī un noliek malā.

Cistanche deserticola eksperiments

2.2 Grupēšana

Pēc vienas nedēļas adaptīvās barošanas SD žurkas tika nejauši sadalītas 6 grupās ar 8 žurkām katrā grupā, ieskaitot parasto kontroles grupu, modeļa grupu, pozitīvo zāļu kontroles grupu, kopējo polisaharīdu grupu, kopējo oligosaharīdu grupu un kopējo saponīna grupu. Paņēma normālas žurkas. Izņemot parasto kontroles grupu, katrai žurku grupai trīs dienas pēc kārtas tika ievadītas 30mg · kg-1 loperamīda hidrohlorīda kapsulas (tirdzniecības nosaukums: Yimengting), lai atkārtotu aizcietējuma modeli. Pēc veiksmīgas modelēšanas, izņemot parasto kontroles grupu un modeļa grupu, žurkām visās pārējās grupās 9 dienas tika nepārtraukti ievadīta zonde ar devu 1 ml/100 g ar koncentrāciju 2,74 g · kg-1, kas atbilst testa paraugam. . Normālajai kontroles grupai un modeļa grupai tika veikta barošana ar tādu pašu daudzumu fizioloģiskā šķīduma.

Cistanche deserticola šķēle

2.3. Novērošanas rādītāji

2.3.1. Žurku defekācijas stāvoklis

Pēc pēdējās ievadīšanas žurkas badojās 12 stundas un nevarēja nelaistīt ūdeni. Katrai grupai ar zondi tika ievadīti 20% aktīvās ogles ar ātrumu 25 ml · kg-1. Žurkas tika ievietotas vielmaiņas būrī, un tika novērots 6 stundu laikā izdalīto melno izkārnījumu daļiņu skaits un svars.

2.3.2. Dažādu indikatoru ekspresijas līmeņi žurku serumā, plazmā un resnās zarnas audos

Pēc novērošanas pabeigšanas visas žurkas turpināja badoties 6 stundas un nevarēja nelaistīt. Apmēram 5 ml asiņu paņēma no visas vēdera aortas un ievietoja divās EP mēģenēs, no kurām viena tika pievienota ar heparīnu 50 iepriekš μL. Lai savāktu plazmu un otru, lai savāktu serumu. Pēc 30 minūšu nostāvēšanas centrifugējiet ar ātrumu 2500 r · min-1 5 minūtes, savāciet serumu un plazmu atsevišķi, paņemiet supernatantu testēšanai un uzglabājiet -70 grādu temperatūrā zemā temperatūrā. Resnās zarnas audi 2 cm pēc aklā vārsta noņemšanas tika atdalīti. Saturs tika mazgāts ar fizioloģisko fizioloģisko šķīdumu un žāvēts ar filtrpapīru, un tika pievienots atbilstošs daudzums PBS (pH 7, 4). Centrifugējiet pie 4 grādiem 3500r · min-1 15 minūtes, un supernatants tika ņemts testēšanai. Supernatants tika uzglabāts -70 grādu temperatūrā zemā temperatūrā. Paņemiet serumu, plazmu un resnās zarnas audu supernatantu saskaņā ar komplekta norādījumiem un izmantojiet SS, AchE, SP, MTL, 5-HT, VIP, NT un AQP3.

2.4 Datu apstrāde

Dispersijas analīzei tika izmantota SPSS 17.{1}} statistikas programmatūra, un visi dati tika izteikti 珚 x ± s. t-tests tika veikts starpgrupu atšķirībām, un P<0.05 was considered significant and statistically significant.

3 Rezultāti

3.1. Ietekme uz defekāciju žurkām ar aizcietējumiem

Salīdzinot ar parasto kontroles grupu, modeļa grupas žurku fekāliju daļiņām un svaram bija tendence samazināties. Salīdzinot ar modeļu grupu, Cistanche deserticola grupām bija tendence palielināt fekālo daļiņu skaitu un fekāliju svaru žurkām. Cistanche deserticola kopējā oligosaharīdu grupa uzrādīja augstāku tendenci nekā citās ārstēšanas grupās, taču nebija statistiskas nozīmes, kas norāda, ka kopējai oligosaharīdu grupai bija ievērojams terapeitiskais efekts un tā bija efektīva iedarbības vieta. Rezultāti ir parādīti 1. tabulā.

1. cilne Pārbaudāmo paraugu ietekme uz aizcietējušu žurku izkārnījumu graudu skaitu un svaru (士s,n=8)

3.2. Ietekme uz SS, NT un AchE līmeni serumā aizcietējuma modeļa žurkām

No rezultātiem 2. tabulā redzams, ka, salīdzinot ar parasto kontroles grupu, modeļa grupas žurkām SS un NT bija ievērojami samazinātas (P<0.01), and AchE showed a downward trend, indicating that the constipation model was successfully established. Compared with the model group, the NT of rats in each treatment group was significantly increased (P<0.05), while SS and AchE showed an increasing trend. Among them, the total oligosaccharide group showed a significant increase, indicating that the total oligosaccharide had a significant therapeutic effect and was an effective site of action for Cistanche deserticola.

3.3. Ietekme uz SP un MTL līmeni plazmā aizcietējuma modeļa žurkām

No rezultātiem 3. tabulā redzams, ka, salīdzinot ar parasto kontroles grupu, modeļa grupas žurkām SP un MTL bija ievērojami samazināti (P<0.05 or P<0.01), indicating that the constipation model was successfully established. Compared with the model group, the SP and MTL of rats in each treatment group showed an increasing trend. Among them, the SP of rats in the total oligosaccharide group was significantly increased compared to the other treatment groups (P<0.05 or P<0.01), and the MTL showed an increasing trend, but there was no statistical difference, indicating that the total oligosaccharide group had a significant therapeutic effect and was an effective part of Cistanche deserticola.

2. cilne Testa paraugu ietekme uz SS, NT un AchE žurkām ar aizcietējumiem serumā (士s,n=8)

Piezīme: Salīdzinot ar parasto kontroles grupu, aP<0.05, bP<0.01; Compared with the model group, cP<0.05, dP<0.01; Compared with the total oligosaccharide group, eP<0.05, fP<0.01 (the same in the following table)

3.4. Ietekme uz AQP3, 5-HT, VIP saturu aizcietējuma modeļa žurku resnās zarnas audos

Salīdzinot ar parasto kontroles grupu, 5-HT un VIP modeļa grupas žurkām bija ievērojami samazinātas (P<0.05 or P<0.01), and AQP3 showed an upward trend, indicating that the constipation model was successfully established. Compared with the model group, the 5-HT, and VIP of the total oligosaccharide group rats were significantly increased (P<0.05 or P<0.01), while AQP3 was significantly reduced (P<0.01). The AQP3 and 5-HT of the total oligosaccharide group rats showed significant differences compared to the other treatment groups (P<0.05 or P<0.01), and VIP showed an upward trend, but there was no statistical difference, It indicates that the total oligosaccharide group has significant therapeutic effects and is the effective site of action for Cistanche deserticola (Table 4).

3. cilne Testa paraugu ietekme uz SP un MTL aizcietējumu žurku plazmā (士s,n=8)

4 Diskusija

Aizcietējums ir izplatīta klīniska slimība, kas cieši saistīta ar kuņģa-zarnu trakta motoriku. MTL un SP ir ierosinoši peptīdi ar regulējošām funkcijām kuņģa-zarnu trakta kustībā, kas var veicināt kuņģa-zarnu trakta kustīgumu. NT atrodas nervu audos, distālajā ileumā un tukšajā zarnā, un tā funkcija ir uzlabot resnās zarnas kustīgumu. SS eksistē zarnu nervu pinumā un aizkuņģa dziedzera un kuņģa D šūnās, kas var kavēt kuņģa-zarnu trakta peristaltiku, pagarināt resnās un tievās zarnas tranzīta laiku [6], kā arī kavēt VIP un citu kuņģa-zarnu trakta hormonu sekrēciju. 5-HT ir svarīgs zarnu nervu sistēmas neirotransmiters, kas var veicināt sekrēciju un zarnu peristaltiku. AQP3 atrodas gremošanas trakta epitēlija šūnās, un tam ir svarīga loma ūdens absorbcijā. Šim eksperimentam ir terapeitiska iedarbība uz aizcietējumiem, regulējot šos kuņģa-zarnu trakta hormonus un zarnu neirotransmiterus.

Ekstrakcijas vietai ir veicinoša iedarbība uz aizcietējumu žurku izdalīšanos. Salīdzinot ar modeļu grupu, kopējā oligosaharīdu grupā bija pieaugoša tendence SS, AchE, SP un MTL, ievērojami palielinoties 5-HT, VIP un NT (P<0.05 or P<0.01), and a significant decrease in AQP3 (P<0.01), indicating that the total oligosaccharide group has a significant therapeutic effect, There was no significant difference between the other groups, and total oligosaccharides were the effective active sites of Cistanche deserticola. The total oligosaccharides of Cistanche deserticola have good moisturizing and defecating effects, which can effectively treat constipation. It is hoped that this result will provide a scientific basis for the development of new drugs.

4. cilne AQP3, 5-HT un VIP ietekme uz žurku resnās zarnas audiem (士s,n=8)

atsauce:

[1] Ķīnas farmakopeja. 1. daļa [S]. 2010:126

[2] Zhong Ping. Tuksneša žeņšeņs un Cistanče [J]. Mežs un cilvēks, 2004, 24 (11): 25

[3] Tu Pengfei, Jiang Yong, Guo Yuhai u.c. Pētījumi par Cistanche deserticola un tās rūpniecisko attīstību [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46 (12): 882-886

[4] Wu Feng, Zhao Xi, Xue Hua u.c. Alvejas Lingzhi kapsulu ietekme uz zarnu mitrināšanu un aizcietējumu mazināšanu [J]. Journal of Transportation Medicine, 2008, 22 (4): 338

[5] Foxx OA, Camilleri M, Ste PD u.c. Somatostatīna-alvas analoga ietekme uz kuņģa motoru un maņu funkcijām veseliem cilvēkiem [J]. Gut, 2003, 52: 1555-1561.

[6] Park JH, Rhee PL, Kim G u.c. Enteroendokrīno šūnu skaits korelē ar viscerālo paaugstinātu jutību pacientiem ar caurejas dominējošo kairinātu zarnu sindromu [J]. Neurogastro-enterol Motil, 2006, 18(7): 539-546.

[7]Brancati SB, Zadori ZS, Nemeth J u.c. Viela P inducē kuņģa gļotādas aizsardzību supraspinālā līmenī, paaugstinot endomorfīna-2 līmeni žurkām[J]. Brain Res Bull, 2013, 91(2):38-45.

[8] Fukuda A, Goto T, Kuroishi KN u.c. Hemokinīns-1konkurējoši inhibē vielas P izraisītu os-teoklastu veidošanās un darbības stimulāciju[J]. Neuropeptides, 2013, 47 (4):251-259.

[9] Layer PK, Laczinski J, Salfelder A, et al. Holīnesterāzes izstrādes procesā: AChEasa ugunsmūris, lai kavētu šūnu proliferāciju un atbalstītu diferenciāciju [J]. Chem Biol Interact, 2013, 203(1):227-269.