Sarmentosamīds, pretnovecošanās savienojums no jūras izcelsmes Streptomyces Sp. APmarine042

Atslēgvārdi:Cistanche; Streptomycessp. APmarine042;pretnovecošanas; MMP-1; UVB; TNF-

Noklikšķiniet šeit, lai iegūtu vairāk informācijas par Cistanche novecojošai ādas kopšanai

1. Ievads

Ādas novecošanāsTo izraisa divi galvenie procesi, kas izriet no iekšējiem un ārējiem faktoriem.Ārējā novecošanāsgalvenokārt izraisa vides faktoru, piemēram, gaisa piesārņojuma, iedarbība [1] un ultravioletais (UV) starojums [2]. UV gaisma sastāv no UVA (315–400 nm), UVB (280–315 nm),un UVC (200–280 nm), no kuriem zināms, ka UVB stari iekļūst epidermā un veicina ādas stāvokli.fotonovecošanās [3]. UVB izraisīta ādas fotonovecošanās izraisa DNS bojājumus [4] un reaktīvās skābekļa sugas(ROS) paaudze [5] un izjauc ekstracelulāro matricu [6]. Iekšējo novecošanos izraisa dabiskaisfizioloģisko izmaiņu sekas, piemēram, ģenētiskie faktori, hormoni un vielmaiņas procesi [7]. Turklāt iekaisuma citokīni, piemēram, audzēja nekrozes faktors-alfa (TNF ), interleikīns 1 alfa/beta(IL-1 / ) un interleikīna 6 (IL-6), hroniski palielinās līdz ar vecumu. Jo īpaši audzēja nekrozefaktors- (TNF ) ir zināms, ka tas paātrina ekstracelulārās matricas (ECM) komponentu degradāciju, izmantojotmatricas metaloproteināžu (MMP) ekspresijas un aktivitātes regulēšana novecojošā ādā [8]. MMP-1 irgalvenokārt dermā atbrīvo fibroblasti, un izdalītais MMP{0}} ir atbildīgs par degradācijuādas kolagēna, kas atbalsta ādas struktūru un funkcijas. Tāpēc MMP modulācija-1ekspresija dermas fibroblastos varētu būt daudzsološs mērķis pretnovecošanās attīstībaikosmētikas sastāvdaļas.

Iepriekšējie pētījumi liecina, ka UVB starojums inducē ROS (reaktīvo skābekļa sugu veidošanos un izraisa intracelulāro signalizācijas ceļu un transkripcijas faktoru (piemēram, AP-1, NF-kB) aktivizēšanos [9. Šos transkripcijas faktorus regulē mitogēns. -aktivētās proteīna kināzesMAPK), kas inducē MMP-1 un proinflammatoriskus citokīnus. UVB/ROS stimulos ir iesaistītas trīs atšķirīgas MAPKgrupas: ārpusšūnu signālu regulētās kināzes (ERK), c-Jun N-termināls.

kināze (NK) un p38. Mūsu pētījums identificēja Streptomyces sp. APmarine042 ekstrakts, kam bija spēcīga inhibējoša iedarbība uz MMP-1 ekspresiju. Pēc tam šajā Streptomyces sp. APmarine042 ekstrakts un tā ķīmiskā struktūra tika identificēti, izmantojot KMR analīzes palīdzību (1), savienojumu ar heksadinamīda daļu 101. Pēc tam mēs tālāk pētām, vai šis savienojums inhibēja MMP-1 ekspresiju UVB apstarotā un TNFa izraisītā cilvēka dermā. fibroblastus, kā arī tā lomu pamatā esošo signalizācijas ceļu regulēšanā. Turklāt mēs pārbaudījām the cistanche antioksidanta aktivitāte(1) caur 2,2-difenil-1-pikrilhidrazilu (DPPHI)radikāļu attīrīšanas tests.

2. Rezultāti un diskusija

2.1. cistanche (1) Izolācija un identifikācija

cistanche (1) tika izolēts, izmantojot HPLC-UV un bioaktivitātes vadītas izolācijas kombināciju. Pamatojoties uz salīdzinājumu starp šajā pētījumā identificētā savienojuma (turpmāk tekstā kā savienojums 1") KMR dati (papildu materiāli) ar iepriekš ziņoto savienojumu datiem, savienojums 1 tika identificēts kā cistanche. Savienojuma 1 optiskās rotācijas vērtība bija atbilst arī iepriekšējiem ziņojumiem, kas vēl vairāk atbalstīja 1. savienojuma palīdzību (1. attēls).

2.2. Cistanche (1) citotoksiskā ietekme uz cilvēka ādas fibroblastiem

Lai izpētītu cistanche citotoksisko iedarbību, normāli cilvēka dermas fibroblasti (NHDFor cilvēka priekšādiņas fibroblastu šūnas (Hs68)) tika apstrādāti ar cistanču dažādās koncentrācijās (6, 12, 25, 50, 100 ug/mL) 24 stundas, pēc tam šūna skaitīšanas komplekta-8 (CCK-8) ​​tests tika veikts, lai kvantitatīvi noteiktu šūnu dzīvotspēju. Ūdenī šķīstošais tetrazolija sāls (WST-8) CCK-8 šķīdumā tika samazināts dehidrogenāzes aktivitāšu dēļ šūnas, lai iegūtu dzeltenas krāsas formazāna krāsvielu, kuras daudzums bija proporcionāls dzīvo šūnu skaitam. Kā parādīts 2. attēlā, cistanche neizraisīja novērojamu citotoksisku iedarbību ne NHDF, ne Hs68 šūnās koncentrācijās no {{15} } ug/ml

2. attēls. Cistanche šūnu dzīvotspējas tests uz fibroblastiem. ab) šūnu dzīvotspējaapstrādāts ar cistanšunormālas cilvēka dermas fibroblastu (NHDF) (a) un cilvēka priekšādas fibroblastu šūnu (Hs68) (b) šūnas 24 stundās tika mērītas ar CCK (šūnu skaitīšanas komplekta) testu. * p < 0.05, ** p < 0,01 pret. neārstēta grupa).

2.3. cistanche (1) inhibē MMP-1 ekspresiju un sekrēciju UVB apstarotās NHDF šūnās

Pēc tam NHDF bez UVB starojuma (25 mJ/cm2) īsu laiku tika apstrādāti ar cistanche (2,5 ug/mL), un relatīvie MMP-1 mRNS ekspresijas līmeņi tika kvantitatīvi kvantitatīvi reāllaikā. PCR analīze. Tika konstatēts, ka cistanche samazina MMP-1 mRNS līmeni līdz pat 16 procentiem un 17 procentiem bez UVB (attiecīgi 3.a attēls) un klātbūtnes (attiecīgi 3b. attēls). UVB starojums, galvenais ārējais ādas novecošanās riska faktors, var iekļūst epidermā un sasniedz augšējo dermu, kā rezultātā rodas reaktīvo skābekļa sugu (ROS) MMP ražošana un kolagēna sintēzes regulēšana. Tāpēc mūsu pētījumā tika mēģināts noskaidrot, vai cistanche inhibē MMP-1 sekrēciju UVB apstarotā gadījumā. NHDF šūnas. MMP-1 sekrēcijas līmeņi šūnu kultūras barotnēs tika mērīti ar ELISA palīdzību, un relatīvais MMP-1sekrēcijas daudzums tika normalizēts līdz kopējam proteīnam veselu šūnu lizātos, kas tika mērīti, izmantojot bicinhonīnu. skābes (BCA) proteīna kvantitatīvās noteikšanas tests. UVB apstarošana (25 mJ/cm2) ievērojami palielināja MMP-1sekrēciju (83- reizes), salīdzinot ar grupu, kas neapstaro UVB (3.c attēls) un cistanču - inhibēja MMP-1 sekrēciju UVB apstarotās NHDF šūnās atkarībā no devas.

3. attēls. Cistanča ietekme uz metaloproteināzes -1 (MMP-1) ekspresiju UVB apstarotos NHDF. (a, b) MMP-1 relatīvais mRNS līmenis NHDF šūnās, kas apstarotas ar UVB (25 mJ/cm2) vai apstrādātas ar cistanču (2,5 ug/ml) 16 stundas. RPLPO gēns tika izmantots kā iekšējā kontrole. * p < {{10}}.05.*** p < 0.001 (C) Pēc UVB apstarošanas (25 mJ/cm2) , cistanche serumu nesaturošā barotnē tika apstrādāta 48 stundas, un pēc tam MMP-1 relatīvie sekrēcijas līmeņi šūnu kultūras barotnē tika analizēti ar ELISA metodi### p < 0,001 (salīdzinājumā ar ne-UVB kontroles grupu); ** p < 0,01; *** p < 0,001 (UVB apstarotā kontroles grupa).

Jautājiet vairāk:

E-pasts:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950