Ar ādu saistītās īpašības un sastāvdaļas no Persicaria Senticosa gaisa daļu ekstrakta

Kontakti: ali.ma@wecistanche.com

Yun-Hyeok Choi, 1 Džejs Jeons Lī, 2 Dži Eižens Lī, 1 Yeon Woo Jung, 1 Wonsik Jeong, 1 Seong Su Hong, 1 Jaunais-Raks Čo, 2 un Chun Whan Choi 1

1. Ievads

Persicaria senticosair ikgadējs augs Polygonaceae ģimenē, kas tiek izplatīts visā Korejā. Kopš agras reizes šis augs ir izmantots kā tautas medicīna ar labvēlīgu ietekmi dažādu slimību ārstēšanai, piemēram, noņemot brūces vai karbunkulu pietūkuma daļas un celulīts un cirkulējošās asinis, un asins stagnācijas novēršana. Jaunākie pētījumi liecina, kaPersicaria senticosabija pretiekaisuma iedarbība [1]; tomēr šim augam ir nav ziņots kā par bioaktīvu kosmētikas sastāvdaļu. Un iepriekšējie fitoķīmiskie pētījumi par ziediem, stublāju un saknēm polygonum ģints ir atklājuši dažādus flavonoīdus un fenola savienojumus, piemēram, hidroksibenzoskābi, t rutīns, kvercetīns-3-O-glikuronīds, kvercetīns-3-O-glikozīds, un luteolīns-7-O-rutinozīds tika uzskatīti par galvenajiem aktīvās sastāvdaļas [2, 3]. Šie aktīvie savienojumi eksponē dažādas farmakoloģiskās iedarbības, piemēram, pretiekaisuma līdzekļi, t antiulcer, antihipertensīva un pretvēža iedarbība [4]. Laikā kosmētikas līdzekļu sastāvdaļu skrīnings, izmērot radikālo atslāņojošo iedarbību uz 1,1-difenil-2-pikrilhidrazilu, (DPPH), ABTS radikāla attīrīšanās, elastāzes inhibīcija,tirozināzeinhibīcija un slāpekļa oksīda tests, vairāki Polygonum tika konstatēts, ka ekstrakti liecina par spēcīgu aktivitāti.

Noklikšķiniet, laiCistanche izmanto tirozināzes aktivitātes samazināšanai.

2. Materiāli un metodes

2.1. Augu materiāli un dabiskās vispārīgās procedūras Produktiem.

Persicaria senticosatika savākts no Seo-myeon, Chuncheon-si, Gangwon-do, Koreja, 2016. gadā (GPS: N 37° 55′ 30,1", E 127° 37′ 57,0", augstums: 434 m). Kuponu paraugi (G071) autentificēja Dr. Chun Whan Choi.Persicaria senticosatika noguldīti Biocentra herbārijā, Gyeonggido biznesa un zinātnes akselerators, Suvona, dienvidi Koreja (att. S3). 99,9% metanola ekstrakts no trīsdesmit četriem Polygonum tika iegūts no Korejas augu ekstrakta bankas Korejas Biozinātnes un biotehnoloģijas pētniecības institūtā (Daejeon, Koreja). 1 H un 13C NMR eksperimenti bija izpildīts uz Bruker Ascend 700 MHz spektrometra ar tetrametilsilāns (TMS). LC-ESI-MS tika iegūts ar Triple TOF 5600+ instrumentu (AB SCIX, ASV) un HRESI-MS uz LTQ Orbitrap XL instrumenta (Thermo, ASV). Plānslāņa hromatogrāfija (TLC) tika veikta ar silikagelu 60 F254 (Merck, Vācija) un silikagels 60 RP-18 F254S (Merck, Vācija) plāksnes. Kolonnas hromatogrāfija(CC) veikta, izmantojot silikagelu 60 (daļiņu izmērs 70 ~ 230, Merck, Vācija), ODS-A (12 nm S-7 μm, YMC GEL, Japāna) un preparatīvs HPLC tika veikts uz LC-8A (Shimadzu, Japāna).

2.2. NAV pārbaudes.

RAW 264.7 šūnas tika iesētas 96 urbumu plāksnēs (5 × 104 šūnas/iedobe) un tika apstrādāti ar paraugu 1 stundu pirms LPS (1 μg/ml) stimulācijas 24 stundas. Negatīvā kontrole tika ārstēts ar barotni bez seruma. Nitrīta daudzums, a stabils NO metabolīts, tika mērīts, lietojot Griess reaģents (1% sulfanilamīds un 0,1% naftiletilēndiamīna dihidrohlorīds 2,5% fosforskābes). Absorbciju pēc tam tika mērīts pie 540 nm, izmantojot ELISA lasītājs. Nitrātu daudzums tika noteikts no standarta līkne nātrija nitrītam [5–7].

2.3. Šūnu citotoksicitātes noteikšana.

RAW 264,7 šūnas tika pārklātas ar blīvums 5 × 104 šūnas/urbums 96 iedobju plāksnēs. Šūnas bija apstrādāts ar paraugiem 1 stundu pirms LPS (1μg/ml) stimulācijas 24 h. MTT (5 mg/ml PBS) tika pievienots katrai iedobei un inkubēja 2 h. Barotne tika noņemta no akas pēc aspirācijas, DMSO tika pievienots katrai akai, un šķīvis tika sakrata. Tika mērīta katras iedobes absorbcija pie viļņu garuma 540 nm, izmantojot ELISA nolasītāju. Dati ir ko uzrāda kā trīs atkārtojumu vidējo ± standartnovirzi.

2.4. DPPH radikālās skrāpēšanas aktivitātes tests.

DPPH radikāls scavenging aktivitāte tika mērīta, izmantojot metodi aprakstīja Bloiss [8] un Ozgens u.c. [9]. DPPH šķīdums paraugam pievienoja izšķīdinātu metanolā, kas bija atšķaida līdz vajadzīgajai koncentrācijai, un reakcija bija veic istabas temperatūrā 30 min. Absorbciju tika mērīts pie 517 nm, izmantojot ELISA lasītāju. Antioksidants butilēts hidroksianizols (BHA) tika izmantots kā pozitīvs kontroli, un tika noteikta parauga IC50 vērtība.

2.5. ABTs radikālā skrāpēšanas darbība.

ABTS radikālās deformācijas aktivitāte tika mērīta, izmantojot iepriekš aprakstīto metode [10, 11]. ABTS+ tika izveidots, sajaucot 7 mM ABTS šķīdums un 2,45 mM kālija persulfāts (K2S2O8) šķīdums ar ABTS: K2S2O8 (attiecība 2: 1) 12–16 h, lai izveidotu katjonu (ABTS+ ). Absorbciju mērīja pie 734 nm izmantojot ELISA lasītāju. BHA, antioksidants, tika izmantots kā pozitīvā kontrole.

2.6. Tirozināzes inhibīcijas tests.

Tirozināzeinhibējošo aktivitāti noteica, izmantojot Yagi aprakstīto metodi u.c. [12]. Reakcija tika veikta 0,1M kālija fosfāta buferšķīdums (pH 6,5), kas satur 1,5 mM L-tirozīna un 1250 vienības/ml sēņu tirozināzes. Reakcijas maisījums tika inkubēts 37° temperatūrā C par 20min. Testa paraugi bija pārbauda tirozināzes inhibīciju, mērot tās ietekmi uztirozināzedarbība, izmantojot SpectraMax 190PC mikroplašu ELISA lasītājs pie 490 nm. Arbutīnu un kojskābi izmantoja kā pozitīvu kontroli, un tika noteikta parauga IC50 vērtība.

2.7. Elastāzes inhibīcijas tests.

Reakcija tika veikta 0,5 mM Tris buferšķīdums (pH 8,5), kas satur 1 mg/ml N-sukcinil- (Ala)3-p-nitroanilīds un 0,6 vienības/ml elastāzes. Reakcija maisījums tika inkubēts 25° temperatūrā C 10 min. Testa paraugi tika pārbaudīti elastāzes inhibīcijai, izmērot tās iedarbību elastāzes aktivitātei, izmantojot ELISA lasītāju pie 405 nm. Ursoliskais skābe tika izmantota kā pozitīva kontrole, un IC50 vērtība paraugs tika noteikts [13].

2.8. Statistiskā analīze.

Datu statistiskā analīze bija ko veic PRIZM5 programmatūra (GraphPad, CA, ASV), un dati tiek parādīti kā vidējais ± SD. Vienaista studenta t-tests tika izmantots, lai analizētu atšķirības starp grupas un P< 0:05="" was="" considered="" statistically="">

3. Rezultāti un diskusijas

3.1. Ģimenes augu ekstraktu ar ādu saistītās īpašības Polygonaceae.

Radikāla atslābuma ietekme uz DPPH, ABTS radikāla atslāņošanās, elastāzes inhibīcija,tirozināzeinhibīcija un tika atrasts slāpekļa oksīda tests uz vairākiem Polygonum ekstraktiem lai parādītu spēcīgu aktivitāti. Rezultāti parādīja, ka Persicaria japonica un Rumex longifolius ir NO tests (IC50 45,3 un zem 25,0μg/ml). DPPH gadījumā metanola IC50 Polygonum ciliinerve, Polygonum alpinum un Persicaria Chinensis ekstrakts bija attiecīgi 36,9, 15,4 un 19,2μg/ml. ABTS radikālā scavenging aktivitātē metanoliskā IC50 Polygonum cuspidate un Polygonum alpinum ekstrakts bija attiecīgi 5,2 un 5,3 μg/ml. Piemēram,tirozināzeinhibējošā aktivitāte, Polygonum sachalinens metanola ekstrakta IC50 saknes un Polygonum cuspidata bija 289,0 un 483,9 μg/ml, attiecīgi. Elastāzes inhibīcijas testā Polygonum sachalinense, Polygonum cuspidatum, Persicaria hidropipera, Persicaria sieboldi, Polygonum Polygonum metanola ekstrakta IC50 orientale, Persicaria lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Rumex acetosella, Rumex Crispus, Polygonum alpinum, Persicaria longiseta, Persicaria Chinensis, Persicaria japonica, Persicaria iekšējie orgāni, Persicaria conspicua, Rheum palmatum un Persicaria lapathifolia bija mazāka par 100 μg/ml (1. tabula).

3.2. Persicaria senticosa frakciju ar ādu saistītās īpašības.

Radikāla atslābuma ietekme uz 1,1-difenil-2-pikrilhidrazilu(DPPH), ABTS radikālu atslāņošanos, elastāzes inhibīciju, t un slāpekļa oksīda tests uz vairākiemPersicaria senticosaDaļskaitļus tika konstatēts, ka tie liecina par spēcīgu aktivitāti. Rezultāti parādīja, ka CH2Cl2 un EtOAc frakcijām ir NO tests (saskaņā ar attiecīgi 25 un 44,64 μg/ml). ETOAc frakciju DPPH un ABTS radikālās atslābuma aktivitātes bija 13,7 un 5,0 μg/ml. Elastāzes inhibīcijas testā n-heksāna un CH2Cl2 frakciju IC50 bija mazāks par 100 μg/ml (2. tabula).

3.3. Savienojumu izolēšana un noteikšana no Persicaria senticosa ekstrakts.

Persicaria senticosagaisa daļas (1,4kg), žāvēti ēnā un pulverveida, tika pievienoti 40 L no 70 % etanola (AUGSTAS izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija) un divas reizes istabas temperatūrā (katru reizi 2 dienas), un tie bija koncentrēti vakuumā pie 40° C, lai iegūtu 180,4 g ekstraktu. Ekstrakti tika apturēti destilētā ūdenī un pēc tam sadalīts ar n-heksānu (4:0L× 3), CH2Cl2 (4:0L×3), EtOAc (4:0L×3) un n-butanols (4:0L×3 ), lai iegūtu n-heksānu (11,7 g), CH2Cl2 (7,4 g), EtOAc (21,7 g), butanolu (22,5 g) un ūdenī šķīstošas frakcijas (110,1 g), (1. shēma). EtOAc frakcija (21,7 g) tika atdalīta ar MPLC, kas par eluentiem izmantoja gradienta maisījumus (F001-003). Savienojumi 1 (3,2mg) un 5 (3,9mg) tika izolēti no F002 kurus izmantoja prep-HPLC. Frakcija F001 tika atdalīta ar MPLC, kas kā eluentus izmantoja gradienta maisījumus (F011-F018). Savienojums 6 (1,5mg) tika izolēts no F016, kas tika izmantots ar preparatīvu HPLC. 7. savienojums (2,7 mg) tika izolēts no F017, ko izmantoja preparatīvs HPLC. F012 tika atdalīts izmantojot MPLC, kas par eluentiem izmantoja gradienta maisījumus (F121-F124). Savienojums 4 (10.8mg) tika izolēts no F124 ko izmantoja preparatīvs HPLC. Turklāt F014 tika atdalīts ar preparatīvu HPLC, izmantojot gradienta maisījumus kā eluentus (F141- F143). Savienojums 3 (2,3 mg) tika izolēts no F141, izmantojot preparatīvu HPLC. 2. savienojums (4,8 mg) tika izolēts no F142 izmantojot puspreparatīvo HPLC. EtOAc šķīstošā slāņa attīrīšana tika veikta ar kolonnas hromatogrāfijas atdalīšanu un MPLC analīzi savienojumiem 1-7. Tas tika identificēts kā loliolīds (1) [14], kvercetīna-3-O-glikozīds (2) [15], kvercetīna-3-O-glikuronīds (3) [16], 4-metoksi katedrīnskābe (4) [17], kaempferol-3-(6-metilglikuronīds) (5) [18], kvercetīns-3-(6- metilglikuronīds) (6) [19, 20] un kvercetīns (7) [21]. Struktūra tika izskaidrota ar 1D un 2D NMR kombināciju un MS spektrometrija, kā arī salīdzinājums ar ziņoto literatūru (1. attēls).

3.4. Persikārijas savienojumu īpašības, kas saistītas ar ādu senticosa.

Radikāla scavenging ietekme uz DPPH,tirozināzeinhibīcija un slāpekļa oksīda noteikšana vairākiem savienojumiem noPersicaria senticosatika konstatēts, ka tam piemīt spēcīga aktivitāte (Att. S4–7). Rezultāti parādīja, ka 7. savienojumam ir NO pārbaude (IC50 29,7 μg/ml). DPPH gadījumā savienojumu IC50 2, 3, 5 un 7 bija attiecīgi 39,6, 31,2, 37,0 un 22,7 μg/ml. Tirozināzes inhibējošās aktivitātes gadījumā IC50 no 7. savienojums bija 14,3 μg/ml (3. tabula).

4. Secinājumi

Persicaria senticosair ikgadējs polygonaceae dzimtas augs, kas tiek izplatīts visā Korejā. Kopš agrīniem laikiem, šis augs ir izmantots kā tautas medicīna ar izdevīgu ietekme uz dažādu slimību ārstēšanu. Šajā pētījumā tika novērtētas ar ādu saistītās īpašības un sastāvdaļas no gaisa daļa Persicaria senticosa ekstrakta un trīsdesmit četri Polygonaseae augi. Kosmētisko sastāvdaļu skrīninga gaitā, izmērot radikālo ietekmi uz DPPH, ABTS radikāla skrāpēšana, antiwrinkle tika novērtēta, izmantojot elastāzes inhibīciju, balināšanu pētījatirozināzeinhibīcija un pretiekaisuma līdzeklis tika pārbaudīts ar slāpekļa oksīdu Pārbaude. Tika konstatēts, ka vairāki Polygonum ekstrakti ir spēcīgi aktivitāte. Rezultāti parādīja, ka Persicaria senticosa metanoliskajam ekstraktam ir DPPH un ABTS radikālas attīrīšanas darbības (IC50 61,0 un 17,5 μg/ml). Elastāzes inhibīcijas testā un slāpekļa oksīda testā metanola IC50 Persicaria senticosa ekstrakts bija 241,5 μg/ml un attiecīgi 71,8 μg/ml. Persicaria senticosa 70% etanola ekstrakts tika sadalīts ar n-heksānu, CH2Cl2, EtOAc, n-BuOH un ūdens frakcijas.

EtOAc šķīstošā frakcija uzrādīja spēcīgu ar ādu saistītu frakciju aktivitāte (2. attēls un 3. tabula). Šie rezultāti liecināja, ka aktīvie komponentiPersicaria senticosaatbild par ar ādu saistītā aktivitāte tika koncentrēta etoac šķīstošajā Persicaria senticosa daļa (1. shēma). No otras puses roku, n-heksānu, dihlormetānā šķīstošo frakciju un BuOH šķīstošā frakcija, kas iegūta no Persicaria senticosa ekstrakta, uzrādīja spēcīgu aktivitāti uz slāpekļa oksīda tests, DPPH un ABTS radikāla atslābuma aktivitāte, bet atlikusī ūdens frakcija uzrādīja sliktu inhibējošo iedarbību efekti (2. tabula).

Tādējādi biotesta vadīta trīs aktīvo frakciju attīrīšana, t.i., EtOAc šķīstošā frakcijaPersicaria senticosatika veikts, lai attīrītu atbildīgos aktīvos principus, ar ādu saistītai aktivitātei, kam seko aprakstītais process attiecīgi 1. shēmā.

EtOAc šķīstošā slāņa attīrīšana noPersicaria senticosa70% etanola ekstrakta tika veikta ar kolonnas hromatogrāfijas atdalīšanu un MPLC analīzi, lai Savienojumi 1-7. Tas tika identificēts kā loliolīds (1), kvercetīns3-O-glikozīds (2), kvercetīna-3-O-glikuronīds (3), 4- metoksikotrarīnskābe (4), kaempferol-3-(6-metilglikuronīds) (5), kvercetīns-3-(6-metilglikuronīds) (6) un kvercetīns (7). Struktūra tika izskaidrota ar 1D kombināciju un 2D NMR un MS spektrometrija, kā arī salīdzinājums ar ziņoto literatūru (Att. S2). Radikāls skrāpējošs efekts uz 1,1-difenil-2-pikrilhidrazila(DPPH),tirozināzetika konstatēts, ka inhibīcija un slāpekļa oksīda tests vairākiem Persicaria senticosa savienojumiem liecina par spēcīgu aktivitāti. Gada rezultāti parādīja, ka 7. savienojumam ir NO tests (IC50 29,7 μM). DPPH gadījumā 2., 3., 5. un 7. savienojuma IC50 bija attiecīgi 39,4, 32,1, 37,0 un 22,7 μM. Piemēram,tirozināzeinhibējošā aktivitāte, 7. savienojuma IC50 bija 14,3 μM. Kā parādīts 3. attēlā, 2. un 5. savienojums ir galvenie savienojumi EtOAc šķīstošajā Persicaria senticosa frakcijā(- Vīģes. S1). Un 2. un 5. savienojums parādīja lielisku antioksidanta aktivitāte (4. attēls), kas atbilst iepriekšējiem pētījumiem [18, 22].

Šis pētījums parādīja, kaPersicaria senticosaun Polygonaseae satur ķīmiskus savienojumus ar labu ar ādu saistītas aktivitātes, un tās varētu būt interesantas kā romāns bioaktīvo līdzekļu avots kosmētikas rūpniecībai.