Pētījums par imunitātes ietekmi uz pelēm

Lai uzzinātu vairāk informācijas, lūdzu sazinietiesdavid.wan@wecistanche.com

Divi no trīsdesmit vīriešiemDBA/2NCrl(D2N) peles, ko izmantoja kā kontroles celmu fona datu analīzēDBA/2N-MDXpelēm, kurām tika konstatēti patoloģiski konstatējumi, kas liecina par infekciju. 1. gadījums: 4-nedēļu vecam D2N peles tēviņam kreisajā nierē tika konstatēts baltas plāksnes bojājums (bez klīniskiem simptomiem), un tika veikta nieres patoloģiska izmeklēšana. Kreisās nieres kanāliņos un intersticijā tika novērota iekaisuma šūnu, galvenokārt neitrofilu, infiltrācija, un no kreisās nieres segmenta tika konstatēts Staphylococcus aureus (S.aureus). Tāpēc šis kreisās nieres bojājums tika diagnosticēts kā strutojošstubulointersticiālsnefrīts, ko izraisa S. aureus infekcija. 2. gadījums: 9-nedēļu vecai D2N peles tēviņiem tika konstatēts kreisais torticollis ar svara zudumu. Histoloģiskais novērtējums atklāja eksudatīvu iekaisumu ap eistāhija caurulīšu rīkles atveri un strutojošu vidusauss un kreisās iekšējās auss iekaisumu ar abscesu veidošanos un klasteriem kā grampozitīvas mikrokolonijas. S. aureus tika identificēts no abu ārējo auss kanālu uztriepju kultūrām. Rezultātā šo torticollis gadījumu izraisīja S. aureus-strutainais vidusauss iekaisums un internets. S. aureus ir labi pazīstams kā oportūnistisks patogēns, kas var bieži izraisīt strutojošu slimību imūnkompetentiem laboratorijas dzīvniekiem. Tomēr, cik mums zināms, šis S. aureus infekcijas gadījums ar torticollis D2N pelei nav ziņots.

Noklikšķiniet šeit, lai uzzinātu vairāk par Cistanche

Pret meticilīnu rezistenti Staphylococcus aureus (MRSA) izolāti parādījās laboratorijas pelē Nacionālās aizsardzības medicīnas koledžas Laboratorijas dzīvnieku zinātnes centrā 2018.MRSAizolāti tika iegūti no pelēm arī citās peļu telpās pēc tam. Šiem MRSA izolātiem, lai noteiktu to genotipus, tika veikta molekulārā tipēšana, piemēram, vairāku lokusu sekvences tipēšana (MLST), Staphylococcus aureus proteīna A (spa) tipēšana, SCCmec tipēšana un koagulāzes tipēšana. Visi izolāti atklāja identiskus genotipus (ST1, spa t1784, IV tipa SCCmec un VII tipa koagulāzes), kas liecina, ka izolāti bija identiski kloni. Pirms MRSA parādīšanās 2018. gadā šajā iestādē nebija izolēti izolāti ar šādiem genotipiem, tika pieņemts, ka MRSA klons objektā tika ievests ar cilvēku vai laboratorijas dzīvnieku starpniecību. STl1 ir pirmā sabiedrībā iegūtā MRSA, kas atgūta no bērniem Amerikas Savienotajās Valstīs, tomēr pašlaik ST1 ir atgūta no cilvēkiem un dzīvniekiem visā pasaulē. Japānā ST1 un SCCmec IV tipa celmi ir izolēti no cilvēkiem un kaķiem, kas liecina, ka ST1 tiek pārnests starp cilvēkiem un dzīvniekiem. No cilvēkiem ir iegūts MRSA celms ar šiem genotipiem, kā arī ar spa tl784. Pašlaik atšķirība starp slimnīcā iegūto MRSA, sabiedrībā iegūto MRSA un ar mājlopiem saistīto MRSA ir neskaidrāka. Šie rezultāti liecina, ka peles var darboties kā MRSA rezervuāri.

Nesenajā vēža imūnterapijā molekulu, piemēram, PD-1, aktivitāte tiek kavēta, lai palielinātu imūno šūnu aktivitāti pret vēzi. Neskatoties uz augsto terapeitisko efektu, vēža imūnterapijā ir gadījumi, kad attīstās autoimūna slimība. Šeit mēs izveidojām sistēmu, kas var noārdīt PD-1 noteiktā laikā kultivētās šūnās un pelēs, izmantojotSMASh degron sistēma. PD-1-SMASh saplūsmes proteīna līmenis Jurkat šūnās un CD3 plus splenocītos tika samazināts par 1 dienu pēc Asunaprevir (ASV) vai Grazoprevir (GRV), kas ir NS3/4A proteāzes inhibitori, ievadīšanas. MC-38 adenokarcinomas šūnu augšana, kas inokulēta PD-1-cherry-SMASh knockin (KI) pelēm ar ASV, tika apspiesta salīdzinājumā ar savvaļas tipa (WT) un neapstrādātām KI pelēm. Turklāt WT peles, kurām tika pārstādītas KI kaulu smadzeņu šūnas pēc apstarošanas ar letālu starojumu, varēja atgrūst MC-38 šūnas ar GRV. KI peles izskatījās veselas, un tām nebija autoimūnas slimības pazīmju. Mēs ierosinām, ka degronu sistēmas izmantošana dzīvos organismos veicinās ne tikai dažādus bioloģiskos pētījumus, bet arī slimību ārstēšanu.

Progesterons (P4) tiek izdalīts no placentas, lai uzturētu grūtniecību un funkcionētu kā imūnregulators. Glikokortikoīds ir vēl viensimunitāti regulējošssteroīdi iekaisuma regulēšanai. Šajā pētījumā cilvēka perifēro asiņu mononukleārās šūnas (PBMC) tika transplantētas NOG pelēm, lai izraisītu transplantāta pret saimniekorganismu slimību (GVHD), un izmantotas P4 un kortizola (COR) iedarbības salīdzināšanai. PBMC tika stimulēti dažādu P4 vai COR koncentrāciju klātbūtnē, un šūnas tika analizētas ar plūsmas citometriju (FCM). Alikvotas noPBMCtika pārstādīti NOG pelēm, un P4 vai COR tika injicēts pelēm divas reizes nedēļā. Pēc 28 dienām tika veiktas FCM un imūnhistoķīmiskās analīzes. Tā rezultātā augsta P4 koncentrācija inhibēja T šūnu aktivāciju in vitro, savukārt inhibīcija neturpinājās pēc noņemšanas. T šūnu aktivācijas nomākums COR ārstēšanā bija mazāks, salīdzinot ar P4, un T šūnu izsīkums bija pamanāmāks. P4-injicētajām pelēm bija vairāk splenocītu, īpaši CD8 T šūnu, salīdzinot ar kontroles pelēm. Tomēr zemāka CD25 ekspresija, mazāka cilvēka T šūnu infiltrācija plaušās un aknās un mazākGVHDtika novēroti simptomi. No otras puses, splenocītu, īpaši T šūnu, skaits pelēm, kurām tika ievadīts COR, bija ievērojami mazāks, un aktivēto / izsmelto šūnu bija daudz. Šie rezultāti liecina, ka P4 dod priekšroku T šūnu uzturēšanai salīdzinājumā ar COR in vitro.

Helicobacter hepaticus un Helicobacter rēķini ir pazīstami kā patogēni, kas pelēm izraisa hepatītu un kolītu. Vairāku pozitīvu gadījumu esamība joprojām tiek apstiprināta katru gadu eksperimentālo dzīvnieku objektos Japānā. Par paraugu H. hepaticus un H. bilis PCR testēšanai vislabāk ir izmantot fekāliju saturu vai svaigas fekālijas.

Pēdējā laikā DNS un RNS transportēšanas un uzglabāšanas reaģentus ražo dažādi ražotāji. Paredzams, ka šie reaģenti tiks novērsti ar PCR testiem izmantoto paraugu transportēšanas problēmām. Tāpēc šajā pētījumā nukleīnskābju uzglabāšanas reaģenta lietderība tika pārbaudīta, veicot Helicobacter PCR testu, izmantojot cecum saturu, kas konservēts, izmantojot nukleīnskābju konservēšanas reaģentu. Rezultātā paraugos, kas tika uzglabāti 7 dienas, izmantojot konservēšanas šķīdumu, varēja konstatēt Helicobacter tādā pašā līmenī kā svaigā paraugā. No iepriekš minētā tika ierosināts, ka Helicobacter PCR testā, pat ja transportēšana ilgst dienas, testu ir iespējams veikt ar augstu precizitāti, transportējot paraugu, kas iegremdēts nukleīnskābju uzglabāšanas reaģentā ar atdzesētu lidojumu.

Iepriekš esam izstrādājuši E.coli mutantu celmus ar ievērojami uzlabotu pieķeršanos in vitro cietām virsmām, modificējot gēnus, kas reaģē uz barības vielu badu. Lai novērtētu mijiedarbību starp šiem ar adhēziju uzlabotajiem E. coli celmiem (AEE) un in vivo zarnu vidi, mēs novērtējām to kolonizācijas spēju zarnu traktā, inokulējot peles.

Pirms novērtēšanas eksperimenta mēs pārveidojām AEE ar plazmīdu, kas ekspresē luciferāzi, lai vizualizētu in vivo. kā perorāli inokulēja tukšā dūšā pelēm un savāca fekālijas ik pēc dažām dienām. Tiešraides skaitsAEEstika novērtēts, mērot KVV no savāktajiem fekālijām.

Tā rezultātā, salīdzinot ar kontroles celmu, AEE izkārnījumos bija vairāk nekā vienu nedēļu, kas liecina par pastiprinātu kolonizāciju zarnu traktā. Novērojot luciferāzes luminiscences lokalizāciju ar neinvazīvu attēlveidošanu, izmantojot IVIS, tika arī konstatēts, ka AEE bija tendence kolonizēties cecum un resnajā zarnā.

[Mērķis] Pašlaik [Pasteurella]pneumotropikair pārklasificēta kā jauna Rodentibacter ģints. No tiem R.pneumotropicus un R. Healy ir galvenie grauzēju mikrobioloģiskās uzraudzības mērķi. Mēs esam izolējuši vairākas Rodentibacter sp. kuras nevarēja identificēt kā sugas no grauzējiem. Šajā pētījumā mēs izpētām Rodentibacter sp. izolēt, koncentrējoties uz baktēriju virulenci. [Metodes] Rodentibacter sp. Pētījumā tika izmantotas no žurku trahejas izolētas. Uzmetuma genoma sekvencēšana tika veikta ar nākamās paaudzes sekvencētāju, un pēc tam tika prognozēti ar virulenci saistītie gēni. Eksperimentos ar dzīvniekiem Rag2 peles tika izmantotas Rodentibacter sp. infekcija.|Rezultāti| Ar uzmetuma genoma sekvencēšanu tika identificēts unikāls RTX toksīnu kodējošais gēns Rodentibacter sp. RTX toksīna proteīnu secība bija homologāka tām, ko ražo Enterobacteriaceae nekā Pasteurellaceae. Eksperimentā ar dzīvniekiem gandrīz visām inficētajām Rag 2 pelēm tika apstiprināta letāla pneimonija vai septicēmija. Lai gan izolātu nevarēja identificēt kā R. pneumotropicus un R. heylii, šī cieši radniecīgā suga var būt letāla dzīvniekiem ar novājinātu imunitāti virulences faktoru, piemēram, RTX toksīna, klātbūtnē.

NBRP pamattehnoloģiju attīstības programmā (2018-2019) mēs sekvencējām peļu oportūnistisku patogēno baktēriju genomus un veicāmRNAseqvienšūņiem pelēm, lai izstrādātu PCR testus šiem organismiem. Mēs izmantojām šos rezultātus, lai analizētu Rodentibacter spp. un vienšūņiem žurkām sadarbībā ar Kioto Universitāti (NBRP Rat). Šeit mēs ziņojam par testa rezultātiem žurku paraugos. [Metodes] 16S rRNS gēnu sekvences aptuveni 1,5 kbp tika nolasītas ar PCR sešiem Rodentibacter spp. žurku izolātiem, un viena izolāta (#25) genoma secības melnraksts tika noteikts, izmantojot Illumina HiSeq 2500. Tika veikta žurku cecal satura PCR. veikta, pamatojoties uz peles vienšūņu RNAseq rezultātiem. [Rezultāti] Visu izolātu 16S rRNS gēnu sekvences bija identiskas, un OTU analīzē tās tika identificētas kā Rodentibacter Ratti. Izolāta #25 atkārtota sekvencēšana arī atklāja, ka šis celms bija R. Ratti. PCR peļu vienšūņiem sniedza pozitīvus rezultātus žurku amēbai. Trichomonas pozitīvi rezultāti netika iegūtiPCRuz žurku paraugiem. [Diskusija] Rodentibacter spp. Šajā ziņojumā tika pārbaudīti visi R. Ratti. Veicot Rodentibacter testus žurkām, ir svarīgi apzināties R. Ratti klātbūtni. Daži žurku fekāliju paraugi uzrādīja pozitīvu peles amēbas PCR. Šis ir pirmais solis PCR izstrādē vienšūņu noteikšanai žurkām.

Rodentibacter organismi 'Pasteurella pneumotropica' ir oportūnistiska patogēna baktērija, kas izraisa elpceļu slimības pelēm un žurkām. Iepriekš tie tika klasificēti Pasteurella ģintī, un vairāki celmi tika provizoriski ierosināti kā biotipi. 2017. gadā tie tika kolektīvi reorganizēti par Rodentibacter ģints. MaM un MaR celmi tika izolēti no pelēm un žurkām attiecīgi aptuveni astoņdesmitajos gados. Šajā pētījumā mēs noteicām abu celmu genoma sekvences un salīdzinājām tās ar Rodentibacter ģints sekvencēm, materiāli un metodesMaM un MaR celmi tika iegūti no Nacionālā infekcijas slimību institūta (NIAID).

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Abi celmi tika audzēti šķidrā kultūrā, lai iegūtu genoma DNS, un genoma sekvences tika noteiktas, izmantojot Illumina Hiseq 2500 un PacBio Sequel.[Rezultāti]Pamatojoties uz 16S rRNS gēna secību, MaM celms tika identificēts kā R.pneumotropicus un MaR celms. kā R. Ratti. Turklāt tika noteikta MaR celma pilnīga genoma secība (2 213 961 bp) (rRNS operonu skaits bija 6 un gēnu skaits tika lēsts 2 063). [Diskusija MaM un MaR celmi ir izmantoti kā standarti Pasteurella pneumotropica identificēšanai Japānā. Pēc šīs analīzes mēs noteicām abu celmu sugas šādi: MaM celms ir R.pneumotropicus un MaR celms ir R.ratti. Jāatzīmē, ka šie rezultāti liecina, ka R. Ratti var izolēt no žurkām Japānā.

Clostridium pili for me (CP) ir uzņēmīga pret infekcijām dažādiem laboratorijas dzīvniekiem, tostarp žurkām un pelēm, un tai ir asimptomātiska infekcija, izņemot dzīvniekus ar novājinātu imunitāti. To uzskata par galveno diferenciāldiagnozi, lai uzturētu dzīvnieku telpas, un ir labi zināms, ka tā ietekmē eksperimentālos datus, kas iegūti pētījumos ar dzīvniekiem. Serodiagnosis (ELISA, IFA) un PCR parasti tiek izmantotas CP diagnosticēšanai, jo CP ir grūti izolēt mākslīgajā barotnē. Tomēr tiek ziņots par nespecifiskas antivielas esamību, kas norāda uz krustenisko reaktivitāti ar CP, izmantojot serodiagnozi, un mūsu iestādēs bieži tiek atpazīta līdzīgā gadījumā. Turklāt PCR metodei ir ierobežojumi kā uzticamai diagnostikas metodei ar periodisku uzraudzību, jo KP nav nosakāms izkārnījumos pēc pieaugošā antivielu titra. Nesen mēs pārbaudījām citu pieeju, katru mēnesi saglabājot dzīvnieku izkārnījumus. Mēs pieņēmām PCR testu CP, ko neietekmē antivielu ietekme, kā uzticamāku diagnostiku, izmantojot nepārtraukti saglabātos izkārnījumus. Šajā pārskatā mēs parādām nesenu gadījumu. (nespecifiska antiviela), lai pārbaudītu plūsmu, kas attīstās mūsu uzņēmumā.