Cistanche kopējo glikozīdu aizsargājošā iedarbība uz adriamicīna izraisīto peļu toksicitāti miokardā

Plašāka informācija:ali.ma@wecistanche.com

Jūlija Jiminga

[Projektu atbalsta Sjiņdzjanas Uiguru autonomā reģiona Zinātnes un tehnoloģiju komisijas Dabaszinātņu fonds (96814)]

[Autores Elija Jiminga (1964-) profils, sieviete (uiguru), meistare. Lektore, Pētījuma virziens: Sirds un asinsvadu farmakoloģija. ],

Van Sjaovens, Van Sjuefei, Heilimans Jilahongs 2, Sje Jaojuns 2, Du Nianshengs 3

(Sjiņdzjanas Medicīnas universitāte|Farmakoloģijas katedra, Farmācijas skola, Elektronmikroskopijas nodaļa, Medicīnas pamatzinātņu skola, Dabisko zāļu ķīmijas nodaļa, Farmācijas skola, Urumči 830054, Sjiņdzjana)

Abstract:Izpētīt aizsardzības efektu un mehānismuCistanche glikozīdi(GC) uz doksorubicīna (Dox) izraisītiem miokarda bojājumiem pelēm. Fang Xie: Lai noteiktu miokarda superoksīda dismutāzes (SOD) aktivitāti, tika izmantots akūtu miokarda bojājumu modelis, ko izraisīja intraperitoneāla Dox injekcija (17,5 mg/kg) NIH pelēm; selēna-glutationa peroksidāzes (Se-GSH-Px) aktivitāte; malondialdehīds (MDA) satur seruma kreatīna fosfokināzes (CPK) aktivitāti. Elektronu mikroskopija pārbauda kardiomiocītu ultrastrukturālās izmaiņas. Rezultāti: 48 stundas pēc intraperitoneālas Dox injekcijas var izraisīt būtisku bojājumu peļu miokardam. Miokarda SOD un Se-GSH-Px aktivitāte samazinājās, MDA saturs palielinājās, CPK aktivitāte serumā palielinājās un radās miokarda audu ultrastruktūras bojājumi. Cistanche glikozīdi(62,5, 125.{3}}, 250,0 mg/kg)var palielināt miokarda SOD, Se-GSH-Px aktivitāti. Samaziniet MDA saturu un samaziniet CPK izdalīšanos. Samaziniet miokarda ultrastruktūras bojājumus.Jie Leng: Cistanche kopējie glikozīdipiemīt noteikta aizsargājoša iedarbība pret doksorubicīna izraisītiem miokarda bojājumiem. Tās mehānisms var būt saistīts ar tā aizsardzību pret miokarda SOD un Se-GSH-Px aktivitāti, brīvo radikāļu iznīcināšanu un lipīdu peroksidācijas novēršanu.

Atslēgvārdi: doksorubicīns; kopējais cistanche glikozīds; kardiotoksicitāte; lipīdu peroksidācija; kreatīnkināze; ultrastruktūra

Doksorubicīns (Dox) ir sava veida sīpolu antibiotika, kas labi iedarbojas uz dažādiem ļaundabīgiem audzējiem, bet akūtās un hroniskās miokarda toksicitātes dēļ ierobežo Dox plašo pielietojumu klīniskajā praksē. Ir zināms, ka Dox pretvēža iedarbībai ir ietekme uz DNS replikāciju un RNS sintēzi, un tā kardiotoksicitāte ir saistīta ar lipīdu peroksidācijas bojājumiem, ko izraisa daļēji adriamicīns. Tāpēc ir svarīgi atrast brīvo radikāļu uztvērējus un antioksidantus, kas antagonizētu Dox kardiotoksicitāti, vienlaikus saglabājot tā pretvēža aktivitāti. Kopējaisekstrakti no Cistancheir aktīvās sastāvdaļas, kas iegūtas noCistanche. Attiecīgi pētījumi ir atklājuši, ka Cistanche glikozīdi piemīt antioksidanta iedarbība uz peles audiem, Cistanche glikozīdivar ievērojami samazināt lipofuscīna saturu (3), Cistanche glikozīdiir aizsargājoša iedarbība pret žurku miokarda išēmiju(3) un Cistanche glikozīdipiemīt pretlipīdu peroksidācijas un pretstarojuma iedarbība. Izpētīt aizsardzības efektu un mehānismu Cistanche glikozīdipar Dox izraisītu miokarda bojājumu pelēm.

Noklikšķiniet uz Cistanche tubulosa ieguvumiem un blakusparādībām

1 Materiāls un metodes

1.1. Zāles un reaģenti

Cistanche glikozīditiek iegūti noCistanche garšaugsSjiņdzjanas ziemeļos, un galvenās sastāvdaļas ir ehinācija, melno graudu etoksilāti utt. (nodrošina Sjiņdzjanas Medicīnas universitātes Farmācijas skolas Dabiskās medicīnas ķīmijas katedra); tetrametoksipropāns (TMP Sigma Company); Adriamicīns (Dox, Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd.); E vitamīns (E vitamīns, Šanhajas Yan'an farmācijas rūpnīca); citi reaģenti tiek ražoti vietējā tirgū.

1.2. Eksperimentālās iekārtas

721 tipa spektrofotometrs (Šanhajas Nr. 3 analītisko instrumentu rūpnīca); OLYMPUS mikroskops (ražots Japānā); JEM-100CXII transmisijas elektronu mikroskops (ražots Japānā)? PHS-250 tipa skābuma mērītājs (Shanghai Lei Magnetic Instrument Factory).

1.3. Dzīvnieku grupēšana un administrēšana

NIH peles nodrošina Sjiņdzjanas Endēmisko slimību institūta Dzīvnieku eksperimentālais centrs. Medicīniskās laboratorijas dzīvnieka sertifikāta numurs ir Nr. {{0}}. Tika atlasītas 138 NIH peles, kas sver (24 ± 2) g, puse tēviņa un puse mātītes. Nejauši sadalīti 6 grupās (23 katrā grupā): (1) kontroles grupa: parastais sāls šķīdums (NS) 20 ml/kg; (2) Dox traumu grupa: NS 20 ml/kg; (3) E vitamīns: E vitamīns 100 mg/kg; (4) GCs i grupa: GC 62,5 mg/kg; (5) GCs i grupa: GC 125,0 mg/kg; (6) GCS1 grupa: GC 25,0 mg/kg, katra no iepriekš minētajām grupām Visas tika ievadītas intragastriski vienu reizi dienā. Dox traumu grupa, Vit E grupa, GC|grupai, GCs I grupai, GCs I grupai intraperitoneāli injicēja Dox 17. 5 mg/kg 4. dienā pēc NS un GC injicēšanas 48 stundas, tika paņemti acs āboli un paņemtas asinis, sagatavots serums un nekavējoties dzīvnieki tika upurēti, lai izņemtu sirdi, noskaloti ar NS, nosusināti ar filtrpapīru un nosvērti. Zemūdens vannas apstākļos miokarda homogenāts tika sagatavots ar NS, centrifugēts ar 3 500 apgr./min, 30 min, un supernatants tika ņemts bioķīmisko rādītāju mērīšanai. Katrā grupā bija 3 peles, un sirdis tika ņemtas, lai izgatavotu elektronu mikroskopa paraugus.

1.4. Bioķīmisko rādītāju noteikšana

Miokarda superoksīda dismutāzes (SOD) aktivitātes noteikšanai tika izmantota pirogalola autoksidācijas metode; miokarda selēna-glutationa peroksidāzes (Se-GSH-Px) aktivitātes noteikšanai izmantota DTNB metode. Izmantot TBA metodi, lai noteiktu miokarda lipīdu peroksidācijas produkta malondialdehīda (MDA) saturu; proteīna kvantitatīvā noteikšana izmanto CBB-SDS metodi, ko sauc par CPK metodi, lai noteiktu seruma kreatīna fosfokināzes (CPK) aktivitāti.

1.5 Miokarda audu elektronmikroskopija

Sirds virsotne tika fiksēta ar 4% glutaraldehīda un 1% skābes, dehidrēta ar acetonu, iestrādāta Epon 812 un novērota caur transmisijas elektronu mikroskopu ar svina-urāna elektronu krāsojumu JEM-100CX I.

1.6. Statistiskā apstrāde

Visus datus pārstāv Wang Shi s. Pēc tam, kad eksperimentālie dati ir pārbaudīti attiecībā uz dispersijas viendabīgumu, statistiskajai apstrādei izmanto F testu un q testu. Pārbaudes līmenis a=0.05.

2 Rezultāti

2.1 IetekmeCistanche glikozīdiDox ievainota miokarda bioķīmiskie rādītāji ir parādīti 1. tabulā.

2. 1- 1 Ietekme noCistanche glikozīdipar Dox ievainota miokarda SOD aktivitāti.

Salīdzinot ar kontroles grupu, Dox traumu grupa samazināja miokarda SOD aktivitāti par 41,1 procentu (PV0.01). Salīdzinot ar Dox traumu grupu, tas palielinājās par 30,9 procentiem, 33,2 procentiem, 36,5 procentiem un 34,9 procentiem (visi P<0.01), the="" gcs1="" group="" was="" close="" to="" the="" control="" group="" (p="">0.05), un pārējās grupas bija zemākas par kontroles grupu.

2.1.2. GC ietekme uz Dox ievainoto miokarda Se-GSH-Px aktivitāti.

Salīdzinot ar kontroles grupu, Dox traumu grupā ir par 26,2 procentiem samazināta miokarda Se-GSH-Px aktivitāte (P<0.01), gcs,="" gcs,="" compared="" with="" the="" dox="" injury="" group,="" the="" gcs,="" group,="" and="" vit="" e="" group="" increased="" by="" 19.2%,="" 21.1%,="" 25.0%,="" and="" 26.1%="" respectively=""><0.01), which="" were="" all="" close="" to="" the="" control="" group="" (p="">0 . 05).

2.1.3. Ietekme uzCistanche glikozīdi on the MDA content of the Dox-injured myocardium was reduced by 16.7%, 17.3%, 18.6%, and 17.3% respectively compared with the Dox-injured group (Fall V0.01), which were all close to the Control group (P>0.05).

2.1.4. GC ietekme uz seruma CPK aktivitāti Dox ievainotām pelēm.

Seruma CPK aktivitāte Dox traumu grupā palielinājās par 87,3 procentiem (<0.01),>Cistanche glikozīdi I, Cistanche glikozīdigrupa un Vit Salīdzinot ar Dox traumu grupu, E grupa samazinājās par 26,6 procentiem, 33,1 procentiem, 37,4 procentiem un 36,7 procentiem (visi F<0.01), which="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" control="">

2.2. Peles miokarda elektronmikroskopija

2.2.1. Kontroles grupā miokarda šķiedru sarkoma bija neskarta, miofibrillas bija sakārtotas, sarkomēru joslas bija skaidri strukturētas, mitohondriji bija kārtīgi izkārtoti, struktūra bija normāla un kodola struktūra bija normāla.

2.2.2. Dox traumu grupa

Redzams, ka ir acīmredzamas izmaiņas miokarda šķiedru ultrastruktūrā, miokarda šūnas ir pietūkušas, intracitoplazmas sarkomērs aug, spilgtā josla paplašinās, atsevišķos apgabalos parādās patoloģiskas kontrakcijas joslas, palielinās Z-līnijas materiāls. Mitohondriji bija difūzi pietūkuši, hiperplastiski, reti izvietoti, salauzti un vakuolēti. Sarkoplazmatiskais tīklojums paplašinās, palielinās sekundārās lizosomas, un var redzēt fokusa deģenerāciju. Palielinās kodola tilpums un paplašinās perinukleārā telpa.

2. 2.3. Miokarda šķiedru pietūkums Cistanche glikozīdiI grupa tika samazināta.

Sarkomēra struktūra pamatā ir normāla, taču sarkomērs joprojām ir plašāks nekā kontroles grupai. Mitohondriju pietūkums ir samazināts, matricas blīvums ir palielināts, mitohondriju blīvums ir palielinājies, un atsevišķi mitohondriji joprojām ir mainījušies. Palielinātas sekundārās lizosomas citoplazmā.

2.2.4. Miokarda šķiedru struktūra Cistanche glikozīdiEs, es grupa būtībā atguvās līdz normai.

Miofibrilas ir sakārtotas glīti, sarkomēra struktūra ir normāla, un mitohondriju struktūra atgriežas normālā stāvoklī.

3 Diskusija

Dox ir sava veida sīpolu antibiotika, kurai ir plašs pretvēža spektrs un spēcīga iedarbība. Tomēr Dox var izraisīt smagu miokarda toksicitāti, piemēram, dažādas aritmijas zāļu lietošanas sākumposmā, no devas atkarīgu un sastrēguma sirds mazspēju vēlīnā stadijā, kas ierobežo tā klīnisko pielietojumu. Galvenais Dox mehānisms, kas izraisa miokarda toksicitāti, ir pārmērīga reaktīvo skābekļa brīvo radikāļu veidošanās, kas izraisa miokarda bojājumus. Dox afinitāte ar miokarda audiem ir ievērojami augstāka nekā citiem audiem. Pēc iekļūšanas miokarda šūnās Dox pārvēršas par pusdoksu, kas iedarbojas uz skābekļa molekulām, pārvēršot tās par superoksīda anjonu brīvajiem radikāļiem (Oxid), ko pavada ūdeņraža peroksīda (H2O2) ražošana. Ol un H2O2 MDA saturs Haber-Weiss Dox traumu grupā palielinājās par 25,8 procentiem, salīdzinot ar kontroles grupu (P<0.01), and="" the="">Cistanche glikozīdi |, Cistanche glikozīdi 1, Cistanche glikozīdi group, and Vit E group were reduced by 16.7% compared with the Dox injury group. , 17. 3%, 18. 6% and 17. 3% (Fall V0.01), which are all close to the control group (P>{{0}}.05). Reakcija jeb Fentona reakcija rada hidroksilradikālus (OH • ). 0$ un OH • Liels uzkrāšanās daudzums var izraisīt lipīdu peroksidāciju audos un šūnu membrānās un izraisīt bioloģisko makromolekulu bojājumus.

Eksperimentā tika novērots, ka pēc 48 stundu intraperitoneālas Dox (17,5 mg/kg) injekcijas pelēm SOD un Se-GSH-Px aktivitātes peles miokardā tika ievērojami samazinātas, kā arī lipīdu peroksidācijas produkta saturs. MDA tika ievērojami palielināts. Augsta, seruma CPK aktivitāte palielinās. Zem elektronu mikroskopa tika bojāta sirds muskuļa ultrastruktūra, kas izpaudās kā acīmredzams mitohondriju pietūkums, mitohondriju plīsums, vakuolu deģenerācija, matricas blīvuma samazināšanās un sarkoplazmatiskā retikuluma paplašināšanās.

Visas GC devu grupas var ievērojami palielināt brīvos radikāļus attīrošo enzīmu SOD un Se-GSH-Px aktivitāti Dox ievainoto peļu sirds muskuļos, samazināt MDA saturu un samazināt CPK izdalīšanos. Tiek ierosināts, kaCistanche glikozīdi var samazināt lipīdu peroksidācijas bojājumus, ko izraisa Dox, palielinot brīvos radikāļus attīrošo enzīmu aktivitāti organismā. Cistanche glikozīdi, grupas būtiski aizsargā miokarda šķiedru ultrastruktūru no Dox bojājumiem.Atklāts in vitro ar modernu hemiluminiscences analīzes tehnoloģiju un atklājis, kaCistanche glikozīdivar efektīvi novērst. Pareizi ir tikai aktīvie skābekļa radikāļi, piemēram, OH • un H2O2. Ganglija attīrošā iedarbība ir īpaši nozīmīga "⑵. Tiek ierosināts, ka Cistanche glikozīdi var attīrīt OR, ko miokardā izraisa pusdox, tādējādi pārtraucot brīvo radikāļu ķēdes reakciju un darbojoties kā lipīdu peroksidācijas ķēdes bloķētājs.

Šajā eksperimentā E vitamīns tika izmantots kā pozitīva kontrole. Rezultāti parādīja, ka E vitamīnam ir noteikta aizsargājoša iedarbība uz Dox izraisītiem akūtiem miokarda bojājumiem pelēm. Tas var samazināt miokarda MDA saturu un palielināt SOD un Se-GSH-Px aktivitātes. Saskaņā ar literatūru [13] ziņojumi ir konsekventi.

Galvenā sastāvdaļa Cistanche glikozīdiir fenetilamīns, un tā struktūra ir līdzīga Vit E, tas ir, tajā ir fenola hidroksilgrupa un hidroksilgrupa. Tāpēc tiek spekulēts, ka Cistanche glikozīdivar nodrošināt ūdeņraža atomus savas molekulārās struktūras fenola hidroksilgrupā lipīdu radikālim (LOO-), kas to pārvērš lipohidroperoksīdā (LOOH), kas pēc tam tiek sadalīts netoksiskā hidroksilā ar GSH-Px. Tas novērš nepiesātināto taukskābju peroksidāciju bioplēvē ar brīvajiem radikāļiem, tādējādi samazinot Dox bojājumus kardiomiocītiem. Mehānisms vēl ir rūpīgi jāizpēta.

Atsauces:

[1]Baser RL, Green MD. Ārstēšanas komplikācija: stratēģijas antraciklīna kardiotoksicitātes novēršanai [J]. Cancer Tread Rer, 1993, 19; 57.

[2]Doroshow JH. Antraciklīna antibiotiku ietekme uz skābekļa radikāļu veidošanos žurkām, dzirdēts [J] Cancer Res, 1983,43; 460.

[3] Van Sjaovens, Li Linlins, Mu Hu Jati u.c. Roxuanrong antioksidanta iedarbība uz peles audiem]·Chinese Journal of Chinese Materia Medica, 1998, 23(9):554-556.

[4] Mao Sjiņmings, Van Sjaovens, Li Linlins u.c. Rou Nu Rong Xi aizsargājošā iedarbība uz miokarda išēmiju žurkām □], Chinese Herbal Medicine, 1999, 30(2): 118-120.

[5] Li Linlins, Vans Sjaovens, Vans Sjufei u.c. Kopējās gaļas pelnu pastas pretlipīdu peroksidācija un pretradiācijas efekts [J]. Chinese Journal of Chinese Materia Medica, 1997, 22(6): 364-367.

[6] Zou Guolin, Gui Xingfen, Zhong Xiaoling uc SOD noteikšanas metode - pirogalola pašoksidācijas metodes uzlabošana [J]. Progress in Biochemistry and Biophysics, 1986, 4:17,

[7] Xia Yiming, Zhu Lianzhen. Glutationa peroksidāzes aktivitātes noteikšana asinīs un audos. Pirmā metode DTNB tiešā metode [J], Hygiene Research, 1987, 16(4): 29-32.

[8] Čeņ Šuņdži, Jin Juju. Trīs lipīdu peroksīda TBA krāsas veidošanas metožu salīdzinājums. Klīniskās laboratorijas zinātnes žurnāls. 1984, 2(4); 8-10.

[9]Macart M♦ Gerbaut L. Coomassie blue krāsas saistīšanas metodes uzlabojums, kas nodrošina labu jutību pret varas proteīniem: lietošana cerebrospinālajam šķidrumam [J], Clin Chem Acta, 1982, 112:93.

[10] Xu Shuyun, Bian Ruyuan, Chen Xiu, Farmakoloģiskā eksperimenta metodika [M]. 2. izdevums, Pekina: Tautas medicīnas izdevniecība, 1991.922.

[11]Halliwell B, Gutteridžas JMC. Brīvie radikāļi bioloģijā un medicīnā CM J. 2nd ed. New York Oxford University Press * 1989.543-550.

L12] Van Sjaovens, Dzjans Sjaojans, Elija Jimina u.c. Brīvo radikāļu attīrīšana un aizsargājoša iedarbība uz DNS bojājumiem, ko izraisa OH -[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2001, 36(1):29 -31.

[13]Wu Yuling, Xu Guangyuan. Eksperimentāls pētījums par akūtu kardiotoksicitāti un E vitamīna aizsargājošo iedarbību pelēm, ko izraisa adriamicīns [J]. Dalian Medical University Journal, 1991, 13(1): 22-27.