Cistanche Deserticola terapeitiskā ietekme uz defekāciju senils aizcietējuma žurkas modelī
Mar 27, 2022
Kontaktpersona:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Sja Džan, Fa-Huans Džens, Džens Džans
Abstrakts
PAMATOJUMS
Aizcietējums ir viena no hroniskām kuņģa-zarnu trakta funkcionālajām slimībām. Tas nopietni ietekmē dzīves kvalitāti. Cistanche deserticola (C. deserticola) acīmredzami var ārstēt aizcietējumus, taču tā mehānisms nav noskaidrots. Mēs domājām, ka tā mehānisms uzlaboja zarnu kustīgumu, stimulējot intersticiālās Cajalcells (ICC). C-kit receptora aktivizēšana uz ICC virsmas ir cieši saistīta ar ICC funkciju, un tajā svarīga loma ir cilmes šūnu faktoram (SCF)/C-kit signalizācijas ceļiem. Lai izpētītu mehānismu, kā C. deserticola ārstē aizcietējumu, šī pētījuma mērķis bija izveidot aizcietējuma modeli žurkām un izpētīt SCF/C-kit signalizācijas ceļa lomu ārstēšanā.
MĒRĶIS
Izpētīt SCF/C-kit signalizācijas ceļus C. deserticola aizcietējuma ārstēšanā ar aizcietējuma žurku modeli.
METODES
Četrdesmit astoņas 8-mēnešus vecas Sprague–Dawley žurkas tika sadalītas 4 grupās pēc nejaušības principa: parastā grupa (n=12), modeļu grupa (n=12), C. deserticola grupa. (n=12) un bloķētāju grupa (n=12). Parastā grupa saņēma parasto fizioloģisko šķīdumu; modeļu grupa saņēma loperamīdu ar zondi; blokatoru grupa saņēma loperamīdu un C. deserticola ar zondi, un STI571 tika injicēts intraperitoneāli. Ārstēšanas laikā ik pēc 10 dienām tika reģistrēts svars, fekāliju granulas un fekāliju kvalitāte. 20. dienā pēc modeļa indukcijas katras grupas resnās zarnas audi tika izņemti. Lai novērotu patoloģiskās izmaiņas, tika izmantota hematoksilīna un eozīna krāsošana. SCF, C-kit un Aquaporin gēnu ekspresijas līmeņi tika noteikti ar imūnhistoķīmiju, Western blotēšanu un reāllaika kvantitatīvo polimerāzes ķēdes reakciju. Resnās zarnas epitēlija mitohondriji un kausu šūnas tika novērotas ar transmisijas elektronu mikroskopiju.
REZULTĀTI
Salīdzinot ar parasto grupu, ārstēšanas gaitā žurku svars modeļa un bloķētāju grupās ievērojami samazinājās, izkārnījumu svars samazinājās un izkārnījumu kvalitāte bija sausa (P < {{0}}.{{6}="" }5).="" c.="" deserticola="" mainīja="" ķermeņa="" svara="" un="" izkārnījumu="" svara="" samazināšanos="" un="" uzlaboja="" izkārnījumu="" kvalitāti.="" histopatoloģiskā="" analīze="" liecināja,="" ka="" resnās="" zarnas="" gļotādas="" epitēlijs="" modeļu="" grupā="" bija="" nepilnīgs="" un="" dziedzeru="" izvietojums="" bija="" neregulārs="" vai="" bojāts.="" ārstēšana="" ar="" c.="" deserticola="" uzlaboja="" epitēlija="" šūnu="" integritāti="" un="" nepārtrauktību="" un="" regulāru="" dziedzeru="" izvietojumu.="" bloķētāji="" inhibēja="" c.="" deserticola="" iedarbību.="" imūnhistoķīmija="" un="" reāllaika="" kvantitatīvā="" polimerāzes="" ķēdes="" reakcija="" parādīja,="" ka="" scf="" un="" c-kitproteīna="" vai="" gēnu="" ekspresija="" modeļa="" grupas="" resnās="" zarnas="" audos="" tika="" samazināta="" (p="">< 0,05),="" ārstējot="" ar="" c.="" deserticola="" palielināja="" proteīna="" vai="" gēnu="" ekspresiju="" (p="">< 0,05).="" rietumu="" blotēšana="" parādīja,="" ka="" akvaporīna="" apq3="" ekspresija="" palielinājās,="" savukārt="" cx43="" ekspresija="" modeļa="" grupā="" samazinājās.="" ārstēšana="" ar="" c.="" deserticolainhibēja="" apq3="" ekspresiju="" un="" veicināja="" cx43="" ekspresiju.="" transmisijas="" elektronu="" mikroskopija="" parādīja,="" ka="" resnās="" zarnas="" epitēlija="" mitohondriji="" modeļu="" grupā="" bija="" pietūkuši="" un="" izkārtojušies="" nekārtīgi,="" un="" mikrovilli="" bija="" reti.="" labāks="" stāvoklis="" bija="" c.="" deserticola="" grupā.="" peles,="" kas="" tika="" ārstētas="" ar="" sti571="" blokatoru,="" apstiprināja,="" ka="" scf/c-kit="" ceļa="" bloķēšana="" kavē="" c.="" deserticola="" izraisītu="" aizcietējumu="">
SECINĀJUMS
C. deserticola uzlaboja defekāciju žurkām ar aizcietējumiem, un SCF/C-kitsignalizācijas ceļš, kas ir galvenā ICC funkcijas saikne, spēlēja svarīgu lomu ārstēšanā.
Atslēgas vārdi:Cistanche deserticola; Senils aizcietējums; Cilmes šūnu faktori; C-komplekts
svaiga cistanche izejviela
IEVADS
Senils aizcietējums (SC) ir viena no biežākajām hroniskām kuņģa-zarnu trakta funkcionālajām slimībām geriatriskiem pacientiem, kas izraisa vai pastiprina cerebrovaskulārus notikumus un citas slimības un nopietni ietekmē vecāka gadagājuma cilvēku dzīves kvalitāti[1,2]. Saskaņā ar tradicionālās ķīniešu medicīnas datiem galvenais SCare etioloģija un patoģenēze kuņģa-zarnu trakta karstums, Iņ un Jin trūkums un zarnu atslapināšana[3,4], savukārt Cistanche deserticola (C. deserticola) var sasildīt nieres un atslābināt zarnas. Pētnieki ir ziņojuši, ka zarnu trakta ietekme SC kustīguma uzlabošana un ārstēšana ir skaidra, taču tās mehānisms nav noskaidrots[5,6]. Intersticiālās Cajalcells (ICC) ir īpašs mezenhimālo šūnu veids kuņģa-zarnu traktā. C-komplekta receptoru aktivizēšana uz ICC virsmas ir cieši saistīta ar šūnu proliferāciju, diferenciāciju un darbību. ICC piedalās daudzu kuņģa-zarnu trakta motorisko disfunkciju patoģenēzē[7,8]. C komplekta aktivizēšana ir atkarīga no tā ligandu cilmes šūnu faktora (SCF) saistīšanās[9]. Izpētīt C ietekmi un darbības mehānismu. deserticola uz SC, šī pētījuma mērķis bija izveidot SC modeli žurkām, ko inducē byloperidola, lai izpētītu SCF/C-kit signalizācijas ceļa lomu C. deserticola izraisīta aizcietējuma ārstēšanā.
MATERIĀLI UN METODES
Eksperimentālie materiāli
Eksperimentālie dzīvnieki:Eksperimenta dzīvnieki bija 48 8-mēnešgadīgo Sprague Dawley žurku tēviņi, kas svēra 500-550 g; viss iegādāts no Changsha Tianqin BiotechnologyCo. Ltd. Žurkas tika audzētas Chongqing Weisiteng BiomedicalTechnology Co. Ltd. dzīvnieku laboratorijā, nodrošinot normālu dienas un nakts gaismu, pārtiku un dzērienus. Visas procedūras atbilda Čuncjinas tradicionālās ķīniešu medicīnas slimnīcas ētikas komitejas izdotajām vadības vadlīnijām.
Primārie reaģenti:Primārie reaģenti ietvēra loperamīdu (Sigma, Sentluisa, MO, Amerikas Savienotās Valstis), C. deserticola no Hubei Jurui Traditional Chinese Medicine DecoctionCo. Ltd., STI571 no Chinese Selleck Co. Ltd. un SCF, C-kit, connexin 43 (Cx43), akvaporīna 3 (AQP3) un -aktīna antivielas (Abcam, Cambridge, MA, Amerikas Savienotās Valstis), PrimeScript II 1st Strand cDNS Sintēzes komplekts un Premix Taq™ (Ex Taq™ 2. versija.0) (Takara Co. Ltd., Japāna).
cistanche garšaugu ekstrakta piedevas
Metodes
SC modeļa sagatavošana un grupēšana:Lai izvairītos no mulsinošu faktoru, piemēram, ķermeņa svara, ietekmes uz eksperimenta rezultātiem, žurkas tika nejauši grupētas ar bloku nejaušās grupēšanas metodi. Četrdesmit astoņas žurkas tika adaptīvi barotas 1 nedēļu, un žurkas tika numurētas svara secībā no vieglas līdz smagai. Atbilstoši ķermeņa svara secībai žurkas tika sadalītas 12 zonās (žurku svars katrā zonā bija līdzīgs), katrā zonā pa 4 žurkām. 12 zonas tika sadalītas 4 grupās pa 12 (parastā, modeļa, C. deserticola un bloķētāja). Modeļu grupas žurkām ar zondi tika ievadīts loperamīds (0.0625/100 g, 10 ml/kg). Pirmā deva ar zondi tika dubultota, un zāles tika ievadītas katru dienu pulksten 10:00 vienu reizi dienā 20 dienas pēc kārtas. Normālajai grupai ar zondi tika ievadīts tāds pats daudzums parastā fizioloģiskā šķīduma. Turklāt modeļa grupa tika apstrādāta ar C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg), izmantojot zondi. Bloķētāju grupai tika ievadīts C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) ar zondi un STI571 (25 mg/ml, 1 ml/kg) intraperitoneālas injekcijas veidā. Eksperimenta laikā ik pēc 10 dienām tika reģistrēts ķermeņa svars, izkārnījumu svars un izkārnījumu stāvoklis. Nevienai no žurkām nejauša nāve nenotika. Divdesmit dienas vēlāk žurkas tika nogalinātas, un resnās zarnas audi tika izņemti pārbaudei un šķidrā slāpekļa saglabāšanai. Pārējās daļas tika fiksētas un iegultas.
Histopatoloģiskā analīze:Žurkas, kas bija tukšā dūšā nakti, nākamajā dienā tika anestēzijas ar intraperitoneālu injekciju ar 7% hlorhidrātu (5 ml/kg). Vēders tika atvērts, lai atdalītu resnās zarnas audus, un tika izņemti 8-10 mm resnās zarnas. Zarnu saturs tika noņemts, viegli sakratot iepriekš atdzesētā polibutilēna sukcinātā un 24 stundas fiksēts 4% paraformaldehīda fiksējošā šķīdumā. Tika veikta parastā parafīna iegulšana. Audu sekcijas (5 μm) tika noņemtas, lai iekrāsotu hematoksilīnu un eozīnu, un histopatoloģiskā morfoloģija tika novērota mikroskopā.
SCF un C-komplekta ekspresijas noteikšana ar imūnhistoķīmisko krāsošanu:Parafīna audi, kas tika pārbaudīti iepriekš ar histopatoloģiju, tika sadalīti, rehidrēti ar atdalītu ksilola atvaskotu gradienta etanolu, antigēnu attīra ar karstumu un 1 stundu aizzīmogoja ar kazas serumu istabas temperatūrā. SCF un C-kit primārās antivielas tika pievienotas pa pilienam, un audi tika turēti nakti 4 grādu temperatūrā. Pēc skalošanas ar polibutilēnsukcinātu mārrutku peroksidāze tika pilināta, lai iezīmētu sekundāro antivielu, 5 minūtes skalots ar polibutilēna sukcinātu, pilināts 2, 4-diaminosviestskābes hromogēna šķīdums, pārkrāsots ar hematoksilīnu, apgrieztā gradienta spirta dehidratācija, caurspīdīga ar ksilolu un a. sveķu blīvējums. Mikroskopiski kodoli bija purpura zilā krāsā, un pozitīvie rezultāti bija brūngani dzeltenas vai dzeltenas daļiņas.
C-kit mRNS ekspresijas noteikšana resnās zarnas audos ar reāllaika kvantitatīvo polimerāzes ķēdes reakciju (RT-qPCR):Saldēti žurku resnās zarnas audi tika samalti ar homogenizatoru un pievienoja 1 ml RNAiso Plus. Kopējā resnās zarnas audu RNS tika ekstrahēta ar hloroforma/izopropanola metodi, un RNS kvalitāte tika noteikta ar gēla elektroforēzi. Pēc identificēšanas ar Bio-Rad gēla attēlveidotāju 1 ug RNS tika reversi transkribēts par cDNS, izmantojot Takara PrimeScript II 1st Strand cDNS Synthesis Kit. Saskaņā ar NCBI datubāzi Gēna ID: 64030, C-kit gēna CDS reģions tika atrasts un apvienots ar NCBI Primer-Blast dizains Primer secība, ko sintezēja Sangon Biotech Co. Ltd, C-kit primer secība sensora virkne 5'-AGGT GTACCGTTCCTGTCCC-3', antisense virkne 5'-GGCTGGATTTGCTCTTTGCTGT-3', - aktīna sensorā virkne 5'-CTTCCTTCCTGGGTATGGAATC-3', antisense virkne 5'-CTGTGTTGGCATAGAGGTCTT-3'. PCR amplifikācija tika veikta ar Bio-RadCFX90 reāllaika PCR instrumentu. PCR testa nosacījumi bija sākotnējā denaturācija 95 grādos 5 minūtes, 30 cikli 95 grādos 30 sekundes, 60 grādos 30 sekundes un 72 grādus 1 minūti, kam sekoja galīgā pagarināšana 72 grādos 10 minūtes. 2-ΔΔCt (ΔCt=Ct vērtība - -actin Ctvalue) tika ņemta, lai analizētu relatīvo gēnu ekspresiju.
Cx43 un AQP3 proteīna ekspresijas līmeņa noteikšana resnās zarnas audos ar Rietumu blotēšanu:Apmēram 1 cm saldētu resnās zarnas audu tika savākti un lizēti ar RIPA spēcīgu pirolīzes šķidrumu (100 μL). Audus 20 reizes homogenizēja ar stiklhomogenizatoru un pārnesa uz 1, 5 ml centrifūgas mēģeni. Supernatants tika ekstrahēts pēc centrifugēšanas ar ātrumu 12000 apgr./min 4 grādos 5 minūtes, un kopējā proteīna koncentrācija supernatantā tika noteikta ar BCA metodi. Mēs noņēmām 25 ug denaturētā proteīna, lai veiktu nātrija dodecilsulfāta-poliakrilamīda gēla elektroforēzi, un pēc tam gēlā esošās olbaltumvielas pārnesām uz polivinilidēna fluorīda membrānu ar nemainīgu 200 mA strāvu, pēc tam 2 stundas istabas temperatūrā aiztaisām ar 5 procentiem vājpiena un šķidruma. Atbilstošās primārās antivielas tika atšķaidītas ar blīvēšanas šķidrumu, inkubētas 4 grādos nakti, pēc tam nomazgātas membrānas pretestība un pievienotas otrās antivielas. Pēc ECL šķidruma pievienošanas tie tika ievietoti zem ekspozīcijas mērītāja pārbaudei, izmantojot optiskā blīvuma analīzi.
Transmisijas elektronu mikroskopija:Mēs paņēmām apmēram 1 cm proksimālo resnās zarnas audu, 24 stundas fiksējām to 2,5 procentu glutaraldehīdā, dehidrējām ar gradētu acetonu, iestrādājām Epon812 un izgriezām 50 nm īpaši plānas sekcijas ultramikrotomā. Sekcijas tika iekrāsotas ar urāna dioksīda acetātu un svina citrāta krāsošanas šķidrumu istabas temperatūrā 10 minūtes. Mēs novērojām resnās zarnas bārkstiņas, epitēlija šūnu mitohondrijus un kausu šūnas Philips Tecnai{7}} transmisijas elektronu mikroskopā.
Statistiskā analīze
Datu analīzei tika izmantota programmatūra SPSS 19.{1}}, un rezultātu attēlošanai tika izmantota programmatūra GraphPad Prism8.4. Normalitātes pārbaudei tika izmantots Šapiro-Vilka tests. Dati ar normālu sadalījumu tika attēloti kā vidējais ± SD. Kļūdu vienumi tika izmantoti, lai attēlotu hemoglobīna vidējo ± SD pēc ārstēšanas. Studenta t-tests tika izmantots divu grupu salīdzināšanai. Vairāku grupu salīdzināšanai tika izmantota dispersijas analīze. Studenta-Ņūmena-Kīla metode tika izmantota, lai salīdzinātu vairākas grupas pa pāriem, un Daneta tests tika izmantots, lai secīgi izmērītu atšķirības starp katru eksperimentālo grupu un kontroles grupu. Saistītie dati tika mērīti pēc vairākiem laika punktiem, un tika veikta atkārtota mērījumu datu dispersijas analīze. veikta. Ja sfēriskuma tests uzrādīja P > 0.{{10}}5, tika izmantota atkārtotu mērījumu datu dispersijas analīze. Ja P < 0,05,="" tika="" pieņemts="" vispārinātā="" novērtējuma="" vienādojums.="" dati,="" kas="" neatbilda="" normālam="" sadalījumam,="" tika="" attēloti="" ar="" m="" (p25,="" p75),="" un="" grupu="" salīdzināšanai="" tika="" izmantots="" kruskal-wallis="" h="" rangu="" summas="" tests.="" χ2="" tests="" tika="" izmantots,="" lai="" salīdzinātu="" starp="" grupām,="" ja="" dati="" bija="" nesakārtoti,="" un="" pīrsona="" χ2="" testu="" izmantoja,="" ja="" šūnu="" īpatsvars="" ar="" teorētisko="" biežumu="">< 5="" bija="">< 20="" procenti.="" ja="" šūnu="" proporcija="" ar="" teorētisko="" biežumu="">< 5="" bija="" lielāka="" vai="" vienāda="" ar="" 20="" procentiem,="" tika="" izmantots="" fišera="" precīzais="" tests.="" p="">< 0,05="" tika="" izmantots,="" lai="" noteiktu,="" ka="" atšķirība="" ir="" statistiski="">
1. attēls Resnās zarnas histopatoloģiskās izmaiņas.
REZULTĀTI
Vispārīgie nosacījumi
Vienu dienu pēc loperamīda barošanas ar zondi, salīdzinot ar parasto grupu, ķermeņa svars un izkārnījumu svars modeļu grupā bija ievērojami samazināts (P < {0}},05),="" taču="" nebija="" būtiskas="" atšķirības="" izkārnījumu="" kvalitātē.="" punktu="" (p=""> 0,05). C. deserticola terapija modeļu grupā palēnināja ķermeņa svara un izkārnījumu svara samazināšanos (P< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">
Resnās zarnas histopatoloģija
Žurku resnās zarnas audu hematoksilīna un eozīna krāsojums parādīts 1. attēlā. Normālajā grupā zarnu bārkstiņas bija neskartas, zarnu gļotāda bija neskarta un nepārtraukta, šūnas un dziedzeri tika sakārtoti regulāri. Iekaisuma šūnas nebija infiltrētas uz gļotādām un submukozām, un audu struktūra bija normāla. Modeļu grupā zarnu nūjiņas un gļotāda tika lielā mērā iznīcinātas, vietējās bārkstiņas tika izmestas un brīvi sakārtotas, un daļa dziedzeru struktūras pazuda. C. deserticola grupā histopatoloģiskā iekrāsošanās bija mazāka nekā modeļa grupā, bet dažās kausu šūnās bija nekroze. Pēc intraperitoneālās injekcijas blokatoru grupā, salīdzinot ar C.deserticola grupu, joprojām bija lokāls zarnu bārkstiņu zudums, kā arī bija lūzumi un zarnu gļotādas zudums.
2. attēls. Cilmes šūnu faktora un relatīvā optiskā blīvuma attiecības izpausme resnās zarnas audos ar imūnhistoķīmisko noteikšanu.
Cilmes šūnu faktora un C komplekta proteīna ekspresijas noteikšana ar imūnhistoķīmisko krāsošanu
Imūnhistoķīmiskā krāsošana parādīja, ka SCF un C-kit tika ekspresēti kontroles grupas resnajā zarnā. Salīdzinot ar kontroles grupu, SCF un C-kit ekspresija modeļu grupā bija ievērojami samazināta (P < 0.05).="" salīdzinot="" ar="" modeļu="" grupu,="" scf="" un="" c-kit="" ekspresija="" c.="" deserticola="" grupā="" bija="" ievērojami="" palielināta="" (p="">< 0.05).="" scf="" un="" c-kit="" ekspresijā="" starp="" bloķētāju="" un="" modeļu="" grupām="" nebija="" atšķirību="" (p="">< 0,05,="" 2.="" un="" 3.="">
RT-qPCR
RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >0.05). Šie rezultāti liecināja, ka C-kit ekspresija, ko koriģēja C. deserticola, piedalījās aizcietējuma uzlabošanā, un blokatori inhibēja C. efektivitāti. deserticola.
cistanche salsas priekšrocības
Western blotēšana
Western blotēšana parādīja, ka AQP3 proteīns tika ekspresēts zemā līmenī normālā kontroles grupā, savukārt modeļa grupā tas bija ievērojami palielināts salīdzinājumā ar kontroles grupu (5. attēls) (P < 0.05)="" .="" pēc="" apstrādes="" ar="" c.="" deserticola="" tika="" samazināta="" aqp3="" proteīna="" ekspresija,="" un="" c.deserticola="" inhibējošā="" iedarbība="" uz="" aqp3="" ekspresiju="" tika="" inhibēta="" ar="" bloķētāju="" (p="">< 0,05).="" cx43="" ekspresija="" bija="" pretēja="" aqp3="" ekspresijai.="" šie="" rezultāti="" liecināja,="" ka="" c.="" deserticola="" farmakoloģiskā="" iedarbība="" uz="" žurkām="" ar="" sc="" tika="" panākta,="" veicinot="" cx43="" ekspresiju="" un="" inhibējot="" aqp3="" ekspresiju="" (attēli="">
Transmisijas elektronu mikroskopija
Pēc loperamīda indukcijas dažās modeļa grupas resnās zarnas gļotādas epitēlija šūnās parādījās mitohondriju pietūkums un autofagija. Samazinājās zarnu mikrovillu skaits un garums, un notika kausa šūnu piknoze (8. attēls). Pēc ārstēšanas ar C. deserticola palielinājās zarnu mikrovillu skaits. Mikrovilli bija sakārtoti glīti, un struktūra bija pabeigta. Kausu šūnas ir īsākas, mitohondriju neregulāra morfoloģija un smaga kausu šūnu piknoze.
3. attēls C-komplekta un relatīvā optiskā blīvuma attiecības izpausme resnās zarnas audos ar imūnhistoķīmisko noteikšanu.
DISKUSIJA
Aizcietējums ir izplatīts gados vecākiem cilvēkiem, un tas ir viens no izplatītākajiem simptomiem, kas ietekmē vecāka gadagājuma cilvēku veselības stāvokli un dzīves kvalitāti[10,11]. Tradicionālās ķīniešu medicīnas pārstāvji Bai et al[12] uzskatīja, ka SC pamata patoģenēze ir resnās zarnas vadīšanas funkcijas disfunkcija, senils ķermeņa mazspēja, pakāpenisks aknu un nieru funkciju zudums, qi un asiņu trūkums un ķermeņa šķidruma zudums. , kas izraisīja sausu izkārnījumu, izraisot aizcietējumus[13]. SC daudzos aspektos rada spiedienu uz pacientiem un viņu ģimenēm, un ir svarīgi izpētīt tā patoģenēzi.
C. deserticola ir nieru Yang tonizējoša funkcija, labvēlīga ietekme uz asinīm un ķermeņa imunitātes regulēšana[14]. C. deserticola un Ķīnas augu novārījums, kas satur C. deserticola ir plaši izmantotas aizcietējumu ārstēšanā, un klīniskais efekts ir ievērojams. Du et al[15] Yang deficīta un aizcietējuma žurkas modelī konstatēja, ka C. deserticola uzlaboja izolētas resnās zarnas kontrakcijas amplitūdu, pastiprināja zarnu trakta kontraktilitāti un normalizēja kuņģa-zarnu trakta hormonu līmeni. Turklāt C. deserticola diētiskās šķiedras, kas ir C. deserticola pārstrādes blakusprodukts, uzlabo fekāliju ūdens aiztures spēju, un tās priekšrocība ir maza deva un laba iedarbība zarnu barošanā un defekācijas uzlabošanā[16]. Mūsu pētījums atklāja, ka ārstēšana ar C. deserticola uzlaboja fekāliju mitrumu un resnās zarnas histopatoloģiju žurkām ar aizcietējumiem.
ICC ir atrodami visā zarnu traktā, un tiem ir būtiska nozīme zarnu kustības neironālā kontrolē kā elektrokardiostimulatoriem un zarnu nervu transmisijai[17]. ICC ekspresē protoonkogēnu kodējošo receptoru tirozīna kināzi, C-komplektu, un SCF ir ligands C komplekts[18]. SCF/C-kit sistēmai ir izšķiroša nozīme ICC izstrādē. SCF/C-kit signalizācijas ceļš ir analizēts, ārstējot lēnu aizcietējumu žurkām ar akupunktūru[19]. Elektroakupunktūra Tjanšu punktā palielināja resnās zarnas ICC skaitu ar ACK2-ārstētajām pelēm, pārregulēja SCF un C-kit proteīnu ekspresiju un mainīja ICC fenotipu. Cji un liesas uzmundrināšanas receptes var palielināt ICC ekspresiju resnās zarnas audos un pārregulēt C-kit un SCF mRNS ekspresiju, tādējādi uzlabojot aizcietējuma simptomus[20]. Mūsu pētījumā imūnhistoķīmija parādīja, ka C. deserticola ievērojami pārregulēja SCF un C-kit proteīna ekspresiju SC žurku modelī, un RT-qPCR parādīja, ka C. deserticola ievērojami pārregulēja C-kitmRNS ekspresiju. C-kit blokators inhibēja C. deserticola izraisīto SCF un C-kit ekspresijas augšupregulāciju.
Fekālo ūdens saturs un resnās zarnas ūdens transports ir cieši saistīti ar AQP, kam ir svarīga loma zarnu ūdens metabolismā[21]. Pētījumā ar žurkām ar lēnas transportēšanas aizcietējumiem Defekācijas novārījums ievērojami uzlaboja aizcietējuma simptomus, regulējot ūdens uzsūkšanos zarnās, samazinot AQP3 un AQP4[22]. Žurku funkcionālā aizcietējuma modelī Oral Xiaofu Tongjie Fluid funkcionālā aizcietējuma ārstēšanas mehānismu var realizēt, regulējot vazoaktīvā zarnu polipeptīda un AQP3 ekspresiju resnajā zarnā[23]. Gapjunctions spēlē būtisku lomu gludo muskuļu šūnu sinhronās kontrakcijas starpniecībā. Cx43 ir vissvarīgākais proteīns šajā procesā[24]. Cx43 ekspresijas zudums var būt daļēji atbildīgs par gludās muskulatūras motora disfunkciju[25].Zarnu nervu sistēmas tīkla struktūras atjaunošana žurkām ar lēnu tranzīta aizcietējumu var uzlabot Cx43 uc ekspresiju un aizcietējuma simptomus[26]. Šie rezultāti liecina, ka palielināts AQP3 ekspresija samazina fekāliju ūdens saturu, izraisot aizcietējumus, kas var būt svarīgs aizcietējuma mehānisms. Cx43 ekspresija var būt saistīta ar zarnu gludo muskuļu kontrakciju un samazināt aizcietējumu rašanos. Mūsu pētījumā Western blotting parādīja, ka Cx43 ekspresija tika palielināta un AQP3 ekspresija tika inhibēta ar C.deserticola ārstēšanu, kā rezultātā palielinājās gludo muskuļu kontrakcija un samazinājās ūdens absorbcija, un ārstēšana ar blokatoriem mainīja šīs sekas.
Lai iegūtu plašāku informāciju, lūdzu, noklikšķiniet šeit.
SECINĀJUMS
Visbeidzot, C. deserticola var inhibēt AQP3 ekspresiju un veicināt Cx43 ekspresiju, izmantojot SCF/C-kit ceļu, tādējādi uzlabojot aizcietējumus, ko izraisa loperamīns un samazinot resnās zarnas audu bojājumus vecām žurkām. Šis pētījums sniedza labu teorētisko pamatu C. deserticola klīniskai izmantošanai.
