Cassia Spectabilis DC etanola lapu ekstrakta toksikoloģiskais novērtējums un aizsargājošā iedarbība uz Plasmodium Berghei inficēto peļu aknu un nieru darbību
Oct 30, 2023
1. Ievads
Līdz šai dienai problēma irPlazmodijsparazītu rezistence pret esošajiem pretmalārijas līdzekļiem joprojām ir galvenā malārijas izskaušanas problēma [1–3]. tāpēc joprojām tiek veikti pētījumi par jaunu pretmalārijas zāļu avotu atklāšanu, no kuriem viens ir no ārstniecības augiem [4].In vivounin vitromodeļi jau sen ir izmantoti pretmalārijas testos. 20. gadsimta otrajā pusēPlasmodium bergheivaiPlasmodium yoeliitika izmantots grauzēju inficēšanai. TikmērP. bergheikļuva par visbiežāk izmantoto sugu pētījumos aknu stadijā, īpaši hipnozoīta veidošanā, lai pētītu malārijas recidīvu [5–7].
KLIKŠĶINIET ŠEIT, LAI IEGŪTU AUGU FORMULU CISTANHE NIERĒM
Viens no tradicionālajiem augiem Indonēzijā, Caesalpiniaceae dzimtas Cassia spectabilis DC, ir eksperimentāli pierādīts in vitro pret P. falciparum un malārijas ārstēšanā in vivo pret P. berghei [8, 9], norādot, ka C. spectabilis DC augs ir ļoti potenciāls tikt tālāk attīstītam kā pretmalārijas zāļu kandidātam. Iepriekšējos darbos tika ziņots, ka in vivo tests ar C. spectabilis DC lapu 90% etanola ekstraktu pret P. berghei ANKA BALB/c pelēm parādīja, ka ED50 vērtība bija 131,5 mg/kg ķermeņa masas [9], un tā ir klasificēta kā ļoti smaga. laba pretmalārijas aktivitāte [10].
Turklāt C. spectabilis DC ekstrakts, frakcijas, subfrakcijas un izolētie savienojumi ir pārbaudīti in vitro attiecībā uz to pretmalārijas aktivitāti. *Šī auga aktīvais savienojums ir veiksmīgi identificēts kā savienojums, kas ir identisks (–){0}}hidroksikasīnam, un tā in vitro pretmalārijas aktivitātes tests uzrādīja ļoti zemu IC50 0,016 ug/ml [ 11], kas tiek klasificēta kā ļoti spēcīga pretmalārijas iedarbība [12].
Pētījumi par šo augu par malārijas zāļu rezistences pārvarēšanu ir turpināti, pārbaudot C. spectabilis DC lapu ekstrakta uzlabošanas drošību un ietekmi uz aknu un nieru funkcijām ar P. berghei ANKA inficētām pelēm. Plaši veikti pētījumi par ārstniecības augu, kam ir pretmalārijas iedarbība, ietekmi uz ar parazītiem inficētu peļu aknu un nieru funkcijām [13–16], kā arī akūtās un subakūtās toksicitātes testi [17–20]. Aknām ir svarīga loma fizioloģisko procesu regulēšanā. ir orgāns, kas ir iesaistīts vairākās svarīgās funkcijās, piemēram, vielmaiņā, sekrēcijā un uzglabāšanā. Turklāt aknām ir svarīga loma endogēno un eksogēno savienojumu detoksikācijā un izvadīšanā [21–24].
Malārijas infekcija sākas, kad sporozoidus inficē malārijas parazītu inficēta Anopheles moskītu mātīte. Asins barošanas laikā inficētā Anopheles mātīte injicē parazīta sporozoīta stadiju [25, 26]. Apmēram pēc stundas ilgas ceļošanas cilvēka ķermenī sporozoīti nonāk aknās, uzbrūk hepatocītiem un sāk eksoeritrocītu šizogonijas aseksuālo ciklu. Aknu šūnās parazīti vairojas aseksuāli, līdz tie sasniedz nobriedušu šizontu, un, visbeidzot, liels skaits merozoītu ražo un nonāk asinsritē pēc inficēšanās ar hepatocītu pārsprāgšanu. *inficēti hepatocīti, kas izraisa aknu bojājumus inficēto hepatocītu un merozoītu plīsuma dēļ, nonāk asinsritē un sāk eritrocītu ciklu sarkanajās asins šūnās [27, 28]. Bojājumi, kas rodas aknu šūnās, var palielināt enzīmu, kas darbojas uz aknu darbību, īpaši transamināžu enzīmu, līmeni, kā arī morfoloģiskas izmaiņas aknu izskatā [29, 30], piemēram, hepatomegālija. Hepatosplenomegālija ir izplatīta malārijas infekcijas pazīme cilvēkiem [31] un pelēm [32], ko izraisa hroniska malārijas parazītu iedarbība. Tomēr malārijas infekcijas gadījumā nieres nepalielinās.
Aknu disfunkciju var noteikt, veicot plazmā izdalītās glutamīnskābes transamināzes (SGOT) un plazmā izdalītās glutamīnskābes transamināzes (SGPT) hepatocelulāro transamināciju vai audu histoloģisku izmeklēšanu [33]. Visizplatītākais bojājums ir apoptotiskas šūnu nāves vai hepatocītu nekrozes aktivizēšanās [34–36]. Klīniski nozīmīga nieru iesaistīšanās ir saistīta ar P. falciparum un P. malariae infekciju. *P. falciparum infekcija izraisa akūtas izpausmes, sākot no asimptomātiskiem līdz pat urinācijas traucējumiem un viegliem elektrolītu traucējumiem akūtas nieru mazspējas (ARF) vai akūta nieru bojājuma (AKI) gadījumā, kam nepieciešams dialīzes atbalsts [27, 37]. *Ir zināms, ka AKI gadījumi malārijas komplikācijā veicina augstu mirstības līmeni, kas ir aptuveni 75% gadījumu. * Histoloģiskais pētījums liecina par glomerulonefrīta, akūtas tubulārās nekrozes un intersticiāla nefrīta klātbūtni kā galveno hemodinamisko faktoru malārijas izraisītā AKI [38]. Parasti nieru disfunkcijas pakāpi var noteikt pēc atbilstoša daudzuma olbaltumvielu klātbūtnes urīnā un plazmas urīnvielas, kreatinīna un plazmas elektrolītu līmeņa paaugstināšanās [39].
* C. spectabilis DC (EECS) lapu 90% etanola ekstrakta toksicitāte BALB/c pelēm, kam seko enzīmu izmeklējumi, var ietekmēt histopatoloģiju un aknu un nieru funkcijas pēc EECS ievadīšanas.
2. Materiāli un metodes
2.1. Augu materiāls un EECS sagatavošana. *e C. spectabilis
DC lapas tika iegādātas un noteiktas LIPI (Indonēzijas pētniecības centrā), Botāniskajā dārzā, Purwodadi, Austrumjavā, Indonēzijā (B-160/IPH.06/KS.02/III/2019). *Šis paraugs tika deponēts kā herbārijs Universitas Airlangga Farmācijas fakultātes Farmakognozijas un fitoķīmijas katedrā. *e lapas tika rūpīgi noskalotas ar krāna ūdeni, lai noņemtu svešus piesārņotājus, žāvētas 45 grādu temperatūrā un ar dzirnaviņām sasmalcinātas pulverī. *Etrakcija tika veikta, macerējot pulverveida augu materiālus (500 g) kolbā, kas satur 2500 ml 90% etanola (25–30 grādu temperatūrā) 3 × 24 stundas. * Ekstrakcijas šķīdinātājs tika atdalīts, filtrēts caur filtrpapīru un iztvaicēts pazeminātā spiedienā ar rotācijas iztvaicēšanu. *Etanola ekstrakta iznākums no 1000 g kaltētas C. spectabilis DC lapu pulvera masas bija 10,20% (w/w), un tika izmantots šajā eksperimentā.
2.2. Dzīvnieki.
Pētījumā tika izmantotas BALB/c peļu tēviņi vecumā no 6 līdz 8 nedēļām, svars 25–30 g. Visas peles tika iegūtas no Farma veterinārā centra, Lauksaimniecības ministrijas Lopkopības un dzīvnieku veselības ģenerāldirektorāta, Surabajas, Austrumjavas, Indonēzijas. *Dzīvnieki tika izmitināti standarta apstākļos un baroti ar barību un ūdeni ad libitum. * Pētījuma protokola apstiprinājums tika saņemts no Dzīvnieku pētniecības ētikas komitejas, Universitas Air langga, Indonēzija, numurs 2.KE.181.10.2018.
2.3. Akūtas toksicitātes tests.
EECS tika nosvērts un atkārtoti suspendēts ar 0,5% nātrija karboksimetilcelulozi (Na CMC), lai iegūtu vēlamās devas. BALB/c peles 24 stundas nebaroja pirms barošanas ar ekstraktu. * Dzīvnieki tika sadalīti trīs grupās, katrā grupā bija piecas peles. *e devas katrai grupai bija 1250; 2500; un attiecīgi 5,000 mg/kg ķermeņa masas. Katras peles vispārējā uzvedība tika novērota nepārtraukti vienu stundu pēc katras devas, ar pārtraukumiem ik pēc četrām stundām un pēc tam 24 stundu laikā [40–42].
2.4. Subakūtas toksicitātes tests.
Subakūtās toksicitātes testā peles tika sagrupētas trīs grupās, un katra grupa tika ārstēta ar EECS uzreiz, piecas reizes un desmit reizes ar 150 mg/kg ķermeņa masas dienas devu perorāli 28 dienas; normālajai kontroles grupai tika dots tikai ēdiens un dzēriens ad libitum [43]. *Dzīvnieki tika novēroti 28 dienas, lai atklātu jebkādas toksicitātes pazīmes. Novērošanas perioda beigās visi dzīvnieki tika nogalināti ētera anestēzijā, un dzīvībai svarīgie orgāni, piemēram, aknas un nieres, tika izņemti no visiem dzīvniekiem, lai veiktu rupjas un histopatoloģiskas izmeklēšanas.
2.5. Grauzēju parazīts.
Plasmodium berghei ANKA jutība pret hlorokvīnu tika iegūta no Biomolekulārā Eijkmana institūta, Džakarta, Indonēzija, un tika uzturēta ar sērijveida caurlaidību, kas tika izmantota šajā pētījumā.
2.6. EECS ietekme uz SGOT un SGPT plazmas līmeni.
*is eksperiments bija nomācošs tests, kura pamatā bija Pīters [44]. * pirms SGOT un SGPT līmeņa plazmas EECS novērtēšanas tika veikts nomācošais tests. *e dzīvnieki tika inficēti ar P. berghei ANKA un tika sadalīti piecās A, B, C, D un E grupās. *e dzīvnieki tika ārstēti neilgi pēc inficēšanās dienā 0 (D{2}}) un turpinājās katru dienu trīs dienas (D1–D3). A grupa kā negatīvā kontrole saņēma 0,5% Na CMC iekšķīgi. B un C grupām kā ārstētajām grupām tika ievadīta EECS viena perorāla deva attiecīgi 150 un 200 mg/kg ķermeņa masas. D grupa bija pozitīva kontrole, kas saņēma hlorokvīnu vienā perorālā devā 100 mg/kg ķermeņa masas. Turklāt E grupa kā veselīga kontrole nebija inficēta ar parazītiem, un tai tika dota tikai pārtika un dzērieni ad libitum. Ceturtajā dienā (D4) katras peles asins uztriepes tika sagatavotas un mikroskopiski pārbaudītas. Turklāt plazma tika savākta pirms SGOT un SGPT līmeņa mērīšanas.
2.7. EECS ietekme uz aknu un nieru histopatoloģiju.
Novērošanas perioda beigās visi dzīvnieki tika nogalināti ētera anestēzijā pirms aknu un nieru noņemšanas. Pēc orgānu svēršanas audi tika fiksēti 10% formaldehīda šķīdumā un tālāk apstrādāti hematoksilīna-eozīna (H&E) krāsošanai. *veikts histopatoloģiskais novērojums, lai noskaidrotu EECS toksikoloģisko ietekmi uz audu deģeneratīvajām un nekrotiskajām šūnām. *e zaudējumi tika klasificēti, pamatojoties uz Gibson-Corley et al. [45].
2.8. Statistiskā analīze.
*e dati tika attēloti kā vidējā ± standarta novirze (SD). Vienvirziena dispersijas analīze (ANOVA) tika izmantota, lai salīdzinātu normāli sadalītos datus starp ārstēšanu, kam sekoja post hoc vairāku salīdzināšanas tests, kad tika iegūta atšķirīga nozīme. Ja dati netika izplatīti normāli, lai novērtētu ārstēšanas atšķirības, tika izmantots Kruskal-Wallis un Mann-Whitney U tests.
Wecistanche atbalsta dienests - lielākā cistanche eksportētāja Ķīnā:
E-pasts:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel.:+86 15292862950
Iegādājieties sīkāku informāciju par specifikācijām:
Skatīt šeit: https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
