Kāda ir atšķirība starp savvaļā audzētu cistanche un mākslīgi kultivētu cistanču imunitāti uzlabojošām aktivitātēm

Kontaktpersona: Odrija Huaudrey.hu@wecistanche.com

Džao Bings; Yang Xiumei; Vu Daočengs; Ba Sjueli; Li Quanxiao; Tan Jačao; Džans Ailians

Abstract:

Mērķis:Salīdzināt savvaļā augošu cistanche un mākslīgi kultivētu cistanche polisaharīdu imūnsistēmu uzlabojošo iedarbību no cistanche (turpmāk attiecīgi: WCDPS un CCDPS).

Metodes:Dažādas WCDPS un CCDPS un ovalbumīna (OVA) devas (zemas, vidējas un lielas) tika subkutāni imunizētas ar ICR pelēm, OVA specifiskās antivielas IgG un antivielu apakštipi IgGl un IgG2a tika noteikti ar ELISA un ar MTT metodi. OVA specifiska limfocītu proliferācijas aktivitāte, plūsmas citometrija, lai noteiktu CD4 plus T šūnu un CD8 plus T šūnu ekspresijas līmeni.

Rezultāti:Gan WCDPS, gan CCDPS var ievērojami palielināt OVA specifisko antivielu IgG un antivielu tipizēšanas IgG1 un IgG2a ekspresijas līmeni (P<0.05), and="" there="" is="" no="" statistically="" significant="" difference="" between="" the="" same="" doses="" of="" wcdps="" and="" ccdps="" (f="">0. 05); WCDPS and CCDPS can significantly promote OVA-specific lymphocyte proliferation, and the difference between the same dose is not statistically significant (P>0.05); WCDPS un CCDPS var arī ievērojami palielināt CD4 plus T un CD8 plus T šūnu apakšsatura procentuālo daļu (P<0.05), and="" the="" difference="" between="" the="" same="" dose="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05), WCDPS un CCDPS neietekmēja imunizēto peļu svaru.

Secinājums:Gan WCDSP, gan CCDPS var ievērojami uzlabot OVA specifiskās humorālās un šūnu imūnās atbildes, un starp tām nav statistiski nozīmīgas atšķirības, un tām ir laba drošība.

Atslēgvārdi: cistanche; polisaharīdi no cistanche; ovalbumīns; adjuvants

Cistanche (C. deserticola. YC Ma),pazīstams arī kā Cunyun un Dayun, daudzus gadus ir Lydanaceae parazītisks lakstaugs. Tas ir rets un vērtīgs ķīniešu ārstniecības materiāls. Tās galvenās sastāvdaļas ir cistanche polisaharīdi, Cistanche feniletanoīdu glikozīdu savienojumi, organiskās skābes, alkaloīdi utt.⑷, kam ir vairākas funkcijas, piemēram, barojoša esence un asinis, palīdz jangam un tonizē nieres, kā arī mazina novecošanos⑸. Pateicoties cistanche ārkārtīgi augstajai ārstnieciskajai vērtībai, savvaļas sugu pārmērīga izmantošana ir uz izmiršanas robežas, un mākslīgi kultivēta cistanča ir bijusi veiksmīga. Pētnieki gan mājās, gan ārvalstīs ir veikuši daudz pētījumu par savvaļā augošu cistanču un mākslīgi kultivētu cistanču ķīmiskajām sastāvdaļām un aktīvajām sastāvdaļām, taču ir maz ziņojumu par savvaļas un kultivēto cistanču polisaharīdu salīdzināšanu no cistanche (WCDPS/CCDPS) adjuvanta aktivitātes. . Liels skaits pētījumu ir parādījuši, ka augu polisaharīdi no cistanche kā palīgviela var regulēt ķermeņa imūnreakciju. Daudzi pētnieki ir izmantojuši ķīniešu augu izcelsmes zāles kā vakcīnas adjuvantu un ir guvuši labus panākumus.

Šis pētījums ir balstīts uz iepriekšējo pētījumu (6), lai salīdzinātuimūnstimulējošaSjiņdzjanas WCDPS un CCDPS darbības. Galvenokārt ar peles imunizācijas eksperimentiem, dažādas WCDPS un CCDPS devas tika subkutāni imunizētas ar OVA ICR pelēm un to ietekme uz humorālo līmeni.imunitāteTika pārbaudīta OVA izraisītā šūnu imunitāte pēc imunizācijas. Salīdzinātmežonīgi aug cistancheunmākslīgi kultivēta cistanchepolisaharīdi Polisaharīdu imunitāti uzlabojošā aktivitāte citrusaugļos var būt atsauce uz labāku mākslīgi kultivētu cistanču attīstību un izmantošanu Siņdzjanā.

Materiāli un metode

Eksperimentālie materiāli:

Savvaļā audzē cistanche un kultivētās cistanche (nopērkamas tirdzniecībā). RPMI 1640 barotne tika iegādāta no GIBCO; Liellopu augļa serums tika iegādāts no Izraēlas Bioind; Plūsmas citometrijas antivielas: PE žurku pret peles CD3, APC žurku pret peles CD4, FITC žurku pret peles CD8a tika iegādātas no Amerikas BD uzņēmuma, olu baltuma proteīna (ovalbumīns, OVA) Sigma produkts, ar mārrutku peroksīdu marķēts kazas pretpeļu līdzeklis. IgG, IgGl un IgG2a tika iegādāti no Southbiotech, ASV. Visi pārējie eksperimentālie ķīmiskie reaģenti ir vietējie analītiskie reaģenti.

Eksperimentālie dzīvnieki:

Tīras kvalitātes ICR peļu mātītes (6-8 nedēļas, 18-22 g) tika iegādātas no Sjiņdzjanas Medicīnas universitātes Eksperimentālo dzīvnieku centra. Dzīvnieki tika turēti mūsu laboratorijas dzīvnieku telpā, un eksperiments tika uzsākts 7 dienas pēc dzīvnieku aklimatizācijas.

WCDPS un CCDPS sagatavošana:

[17] atsaucē izmantota ūdens ekstrakcijas un spirta izgulsnēšanas metode. Īsi soļi ir šādi: Ņemiet sausu Xinjiang kultivētu un savvaļas cistanche pulveri, pievienojiet 10 reizes lielāku daudzumu vazelīna un absolūtā etanola ultraskaņai 1 stundu; pēc sūkšanas filtrēšanas saglabājiet zāļu atlikumus un nosusiniet, pievienojiet 10 reizes lielāku destilēta ūdens tilpumu 37T Ultraskaņa divreiz, centrifugējiet ar 4 000 apgr./min 10 minūtes, apvienojiet supernatantus, rotācijas ietvaicē un koncentrējiet, un nogulsnējiet uz nakti ar alkohols; pēc vakuuma filtrēšanas un žāvēšanas iegūst neapstrādātu ekstrakta pulveri; Savage metode ⑻ noņem olbaltumvielas no WCDPS un CCDPS. Polisaharīdu saturs no cistanche WCDPS un CCDPS, kas noteikts ar sīpolu-sērskābes metodi, bija attiecīgi 76,82 procenti un 59,58 procenti.

Peļu imunizācija un seruma savākšana:

Kā eksperimentālie dzīvnieku modeļi tika izmantotas {{0}} nedēļas vecas ICR peļu mātītes. Eksperiments tika sadalīts 9 grupās, pa 5 katrā grupā: 0,9 procenti NaCl, OVA 10 jig, OVA-Alum 200 |jLg, OVA-WCDPS 10 |xg, OVA -WCDPS 50 |xg, OVA- WCDPS 100 tīkls, OVA-CCDPS 10 |jLg, OVA-CCDPS 50 |xg, OVA-CCDPS 100 tīkls. Pirms imunizācijas izšķīdina ar 0,9% NaCl un imunizē peles subkutāni divas reizes ar 2 nedēļu intervālu. Asinis tiek savāktas pirms imunizācijas, un serums -80Y tiek sagatavots un uzglabāts vēlākai lietošanai.

WCDPS un CCDPS ietekme uz peļu augšanu:

Lai novērotu WCDPS un CCDPS ietekmi uz peļu augšanu, peļu svars katrā grupā tika nosvērts 0 d pirms sākotnējās imunizācijas, 14 d un 21 d pēc imunizācijas.

Peļu seruma antivielu IgG noteikšana un tipizēšana pēc WCDPS un CCDPS imunizācijas:

Seruma antivielu noteikšanai tika izmantota netiešā ELISA metode. Pārklāja ELISA plāksni ar 2,5 džigi/ml OVA, 4Y uz nakti; nomazgāts ar PBST 3 reizes un pēc tam pievienots 5% beztauku piena pulveris 37L bloķēšanai 1 h; mazgā 3 reizes ar PBST un pievienoja primāro antivielu pelēm pēc imunizācijas katrā grupā Serums, primārā antivielu atšķaidījuma attiecība ir 1:100, 100 tabletes uz iedobi, 37Tl h; pēc 3 reizes mazgāšanas ar PBST pievienot sekundārās antivielas: kazas anti-peles IgG, IgGl, IgG2a (l: 5 000), kas marķētas ar HRP 37 Inkubēt pūķi 1 stundu; pēc 4 reizes mazgāšanas ar PBST, pievienojiet tetrametilbenzidīna (TMB) substrāta šķīdumu, lai izvairītos no gaismas 15 minūtes. Katrai iedobei pievienojiet 50, lai apturētu reakciju ar 2 mol/L H2SO4, un izmēra A45O/655 vērtību. Salīdziniet antivielu līmeni katrā grupā.

Peles liesas limfocītu proliferācijas noteikšana pēc WCDPS un CCDPS imunizācijas:

MTT metode tika izmantota, lai noteiktu limfocītu proliferāciju peļu, kas imunizētas ar CCDPS un WCDPS, liesā. Peļu liesa tika izolēta aseptiskos apstākļos 21 dienu pēc sākotnējās imunizācijas, un liesas šūnas tika atšķaidītas ar 10% FBS saturošu RPMI 1640 barotni, lai izveidotu atsevišķas šūnas. Šūnu suspensija, skaitīšana un regulēšana (r šūnas/ml izkliedē 96-iedobes šūnu kultūras plāksnē, pievieno attiecīgi 20 OVA (galīgā koncentrācija 10 |xg/ml) un ConA (galīgā koncentrācija 5 cūkas/ml). Stimulējiet, iestatiet tukšu šūnu kontroli un tukšu serumu. kontroles tajā pašā laikā, ievietojiet to 37Y šūnu inkubatorā uz 48 stundām, pievienojiet 20 MTT katrai iedobei, 37^ un turpiniet inkubēt 4 stundas, pievienojiet katrai iedobei 100|±1 DMSO, lai izšķīdinātu un pārbaudītu sirdi 0 /63.Vērtība, aprēķināt stimulācijas indeksu (SI) katrai peļu grupai.

CD4 un CD8 ekspresija uz CD3 plus T šūnām pēc WCDPS un CCDPS imunizācijas:

Plūsmas citometrija tika izmantota, lai noteiktu CD4 plus T un CD8 * T šūnu ekspresiju uz CD3 plus T šūnu virsmas. Peles liesa tika izolēta aseptiskos apstākļos 21 dienu pēc primārās imunizācijas, un liesa tika apstrādāta ar RPMI 1640 barotni, kas satur 10 procentus FBS. Sagatavojiet vienas šūnas suspensiju, saskaitiet un noregulējiet šūnu skaitu līdz 1x106 šūnām paraugā, veiciet CD4 un CD8 krāsošanu uz CD3 plus T šūnu virsmas, pasargājiet no gaismas istabas temperatūrā 25 minūtes un izmantojiet 10 ml fosfātu buferšķīdums, kas satur 0,5 procentus FBS (fosfātu buferšķīdums). fizioloģiskais šķīdums, PBS) 1 200 apgr./min. 7 min mazgāšana vienu reizi, pievieno 250 |jl PBS, laiž cauri 200 sieta vara sietu, plūsmas citometrija, lai noteiktu CD4 un CD8 ekspresiju uz CD3*T šūnu virsmas.

Statistikas metodes:

Flowjo 7.6 programmatūra apstrādā plūsmas citometrijas testa rezultātus; GraphPad Prism 5.0 tiek izmantots datu analīzei, un visi dati ir balstīti uz vidējo ± standarta novirzi. Izmantojiet Studentu un testu, lai salīdzinātu datus starp eksperimentālajām grupām. P<0.05 means="" that="" there="" is="" a="" difference.="" statistical="">

Rezultāts

1. The effect of WCDPS and CCDPS on the growth of mice: After co-immunization with WCDPS and CCDPS and OVA, weigh the weight of the mice (Table 1). There was no statistically significant difference in the bodyweight of mice in each group during the same growth period ( P>0.05).

2. WCDPS un CCDPS ietekme uz OVA specifisko antivielu IgG: WCDPS un CCDPS tika subkutāni imunizēti ar OVA, lai noteiktu OVA specifiskās antivielas IgG ekspresiju serumā pēc 14 un 21 dienas pēc imunizācijas. Rezultāti parādīti 1. attēlā, WCDPS un CCDPS veicināja antivielu IgG ekspresiju serumā atkarībā no devas; OVA plus WCDPS 50 p,g salīdzinājumā ar OVA plus CCDPS 50 |xg var ievērojami veicināt OVA specifiskās antivielas, salīdzinot ar OVA plus CCDPS 50 |xg. IgG ekspresija (F<0.05), but="" the="" difference="" was="" not="" statistically="" significant="" compared="" with="" the="" aluminum="" adjuvant="" group="" (p="">0.05); the difference between WCDPS and CCDPS at the same dose was not statistically significant (P>0.05).

3. WCDPS un CCDPS ietekme uz OVA specifisko antivielu tipizēšanu: 21 dienu pēc imunizācijas tika konstatēta OVA specifisko antivielu, kas tipizē IgG1 un IgG2a, ekspresija serumā. Rezultāti parādīti 2. attēlā. OVA-WCDPS 50 jig un OVA-WCDPS 100 |xg Mumu ievērojami veicināja antivielu IgG2a ekspresiju serumā nekā OVA grupa atsevišķi (P<0.05); both="" ova-wcdps="" 50="" and="" ova-ccdps="" 50="" pigs="" could="" significantly="" promote="" the="" expression="" of="" ova-specific="" antibody="" iggl=""><0. 001);="" compared="" with="" ova-wcdps="" 50="" p,g,="" and="" ova-wcdps="" 100="" jig,="" the="" aluminum="" adjuvant="" group="" can="" significantly="" promote="" the="" expression="" of="" antibody="" igg2a=""><0.05); the="" expression="" of="" antibody="" typing="" is="" different="" between="" wcdps="" and="" ccdps="" at="" the="" same="" dose="" no="" statistical="" significance="" (p="">0.05).

4. WCDPS un CCDPS ietekme uz peles OVA specifisko limfocītu proliferāciju: Lai noteiktu WCDPS un CCDPS ietekmi uz liesas limfocītiem, cistanche polisaharīdi tika subkutāni imunizēti ar OVA, un liesas šūnas tika atdalītas 21 dienu pēc imunizācijas. , un to noteikšanai tika izmantota MTT metode Veicināt OVA specifisko limfocītu proliferāciju. Rezultāti parādīti 3. attēlā. WCDPS un CCDPS pastiprināja OVA specifisko limfocītu proliferāciju atkarībā no devas. WCDPS un CCDPS kombinācija ar OVA grupu var ievērojami veicināt OVA specifisko limfocītu proliferāciju, salīdzinot ar tikai OVA grupu. Limfocītu proliferācija (P<0.05); ova-wcdps="" 50="" jig="" and="" ova-ccdps="" 50="" |xg="" compared="" with="" an="" aluminum="" adjuvant="" group="" can="" significantly="" promote="" ova-specific="" lymphocyte="" proliferation=""><0.05); the="" same="" dose="" of="" wcdps="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" between="" ccdps="" and="" ccdps="" (p="">0.05).

5. WCDPS un CCDPS ietekme uz CD3 plus CD4 plus T un CD3 plus CD8 plus T šūnām: 21 dienu pēc WCDPS un CCDPS subkutānas imunizācijas ar OVA, CD4 un CD8 ekspresija CD3 plus T šūnās tika noteikta ar plūsmas citometriju. , kā parādīts 4.A attēlā Ir parādīts, ka OVA-WCDPS 50, OVA-CCDPS 50 džiga un OVA-WCDPS 100 var ievērojami veicināt CD3 plus CD4 plus T šūnu proliferāciju (P<0.05); as="" shown="" in="" figure="" 4b,="" ova-wcdps="" 10="" a,="" ova-wcdps="" 50="" zhao="" significantly="" promotes="" the="" proliferation="" of="" cd3+cd8+="" t="" cells=""><0.05), ova-wcdps="" 100="" |xg,="" ova-ccdps="" 100="" significantly="" promotes="" the="" proliferation="" of="" cd3+cd8+="" t="" cells=""><0.01); but="" the="" same="" dose="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" wcdps="" and="" ccdps="" (p="">0.05); there was no significant difference between WCDPS and CCDPS and OVA compared with an aluminum adjuvant group (P>0.05).

Diskusija

Daudzi pētījumi ir parādījuši, ka ķīniešu augu izcelsmes zālēm ir imūnmodulējoša funkcija "Da], un ir arī liels skaits ziņojumu, kas pierāda, ka ķīniešu augu izcelsmes zāļu polisaharīdus no cistanche var izmantot kā adjuvantu, lai uzlabotu vakcīnu imūno efektu"3], un šajā pētījumā atlasītā Sjiņdzjanas tuksneša gaļa no Congrong ir unikāls ārstniecības materiāls Sjiņdzjanā, un savvaļas sugas atrodas uz izmiršanas robežas, apvienojumā ar to augstāko ārstniecisko vērtību, kultivēto sugu kultivēšana ir īpaši svarīga ārstniecības augu resursu attīstībai un izmantošanai. . Jaunajām vakcīnām pašreizējā tirgū ir laba antigēnu specifika, bet vāja imunogenitāte. Augu polisaharīdi no cistanche var kompensēt šo trūkumu. manai valstij ir lielas priekšrocības ķīniešu augu izcelsmes zāļu izpētē. Mēs pārbaudām vakcīnu palīgvielas no dabīgām ķīniešu augu izcelsmes zālēm. Augsta iespējamība. Pētījumi ir parādījuši, ka ķīniešu augu polisaharīdiem no cistanche ir dažādas specifiskās imunitātes un nespecifiskās imunitātes regulēšanas pakāpes, piemēram, Ganoderma polisaharīdi no cistanche, Radixisatidis polisaharīdi no cistanche, Poria cocos polisaharīdi no cistanche koji, inulīna polisaharīdi no cistanche27 utt. Var pastiprināt vakcīnas imūno efektu.

Tā kā pieprasījums pēc cistanche strauji pieaug, tās savvaļas sugas ir izmirušas, un tagad manā valstī tās ir iekļautas apdraudēto un aizsargājamo augu sarakstā. Pamatojoties uz tuksneša Caulis Carlsbad mākslīgās stādīšanas panākumiem, ir sagaidāms, ka kultivētās sugas aizstās savvaļas sugas. Šajā eksperimentā savvaļā audzēti cistanche un kultivēti mākslīgi kultivēti cistanche polisaharīdi tika izmantoti kā OVA adjuvanti, lai veiktu in vivo peļu imunizācijas eksperimentus. Pārbaudot dažādus rādītājus, sākotnēji tika novērtēts savvaļas un kultivētās cistanšas imūnā efekts, kas sniedza atsauci uz kultivētās cistančas efektīvu izmantošanu Sjiņdzjanā.

Lai izprastu mežonīgi augošo un mākslīgi kultivēto cistanču drošībucistanche saharīdino cistanche, in vivo imunizācijas eksperimentos ar dzīvniekiem ir novērotas peļu izskata īpašības un konstatēts, ka pelēm pēc imunizācijas nav caurejas, stāvu apmatojuma vai asaru, un to darbība un elpošana ir normāla, un nav muskuļu raustīšanās. Nebija būtiskas atšķirības peļu ķermeņa svarā katrā grupā traucējumu fenomena dēļ, norādot, ka WCDPS un CCDPS imunizācija neietekmēja peļu augšanu un tai ir noteikta drošības pakāpe. Antivielu IgG un tipizēšanas testa rezultāti liecina: WCDPS un CCDPS var ievērojami palielināt OVA specifiskās antivielas IgG ekspresiju pēc koimunizācijas ar OVA, un efekts ir līdzvērtīgs alumīnija adjuvantam; tas var ievērojami uzlabot OVA specifisko antivielu tipa IgG2a un IgGl ekspresiju. Tas parāda, ka cistanche polisaharīdi vienlaikus uzlabo Th1 un Th2 imūnreakciju, un nav būtiskas atšķirības starp WCDPS un CCDPS. Antivielu tipizēšanas IgG2a rezultāti atklāja, ka WCDPS un CCDPS un OVA koimunizācijas grupa var ievērojami uzlabot IgG2a ekspresiju salīdzinājumā ar alumīnija adjuvantu grupu, alumīnija adjuvants ir vājāks T šūnu ekspresijas veicināšanā, kas pierāda, ka tiek izmantoti WCDPS un CCDPS. kā adjuvanti Spēja veicināt šūnu imunitāti ir ievērojami augstāka nekā alumīnija palīgvielām.

Limfocītu proliferācijas noteikšanas rezultāti ar MTT metodi parādīja, ka katras grupas peļu liesas šūnas tika stimulētas ar OVA. Limfocītu proliferācijas stimulācijas indekss (SI) WCDPS un CCDPS kombinācijā ar OVA bija ievērojami augstāks nekā tikai OVA imunizācijas grupā. OVA- WCDPS 50 Ah un OVA-CCDPS 50 džiga grupas stimulācijas indekss bija ievērojami augstāks nekā alumīnija adjuvantu grupā; tas norāda, ka WCDPS un CCDPS kopā ar OVA grupu var ievērojami palielināt OVA specifisko limfocītu proliferāciju, salīdzinot ar OVA grupu un alumīnija adjuvantu grupu.

Ir dažādas T limfocītu apakšgrupas. CD3 ir visu T limfocītu virsmas molekula. Saskaņā ar dažādiem fenotipiem tos var iedalīt CD8 plus T šūnās un CD4 T šūnās. CD4 plus molekulas var veidoties MHC fl molekulu iedarbībā, kuras galvenokārt tiek izmantotas kā palīgšūnas (Th) pēc aktivācijas. CD8 plus molekulas ir jāveido MHC I molekulu iedarbībā. Pēc aktivācijas tās kļūst par killer (TC vai CTL) šūnām, kurām ir svarīga loma imunitātē pret vīrusu infekcijām un audzēju imunitātē. 3". Plūsmas citometrija nosaka CD3PD4 plus T un CD3 plus CD8 plus T šūnu ekspresiju, rezultāti liecina, ka WCDPS un CCDPS var ievērojami veicināt CD4 plus T un CD8 plus T šūnu proliferāciju noteiktā devu diapazonā, un nav būtiskas atšķirība starp WCDPS un CCDPS vienā devā. CCDPS un OVA kombinācija var stimulēt CD3 plus CD4 plus T un CD3 plus CD8 plus T šūnu ekspresiju, un abi efekti ir līdzvērtīgi.

Rezumējot, WCDPS un CCDPS ir droši kā palīgvielas. Pēc imunizācijas ar OVA tie var vienlaikus uzlabot specifisko humorālo imunitāti un šūnu imunitāti. Salīdzinot ar alumīnija palīgvielām, WCDPS un CCDPS labāk ietekmē šūnu imunitātes uzlabošanos, un nav atšķirības abu cistanche polisaharīdu uzlabošanās efektos. Šie pētījumu rezultāti sniedz materiālas atsauces uz Sjiņdzjanas mākslīgi kultivētiem cistanche polisaharīdiem no cistanche kā palīgvielām, kā arī nodrošina materiālo pamatu drošu un efektīvu imūnsistēmas palīgvielu skrīningam no Sjiņdzjanas tuksneša.cistanche.

Atsauces

[1] Zhao X, Sun W, Zhang S u.c. Atractylodis macrocephalus Koidz polisaharīdu imūnā adjuvanta reakcija cāļiem, kas vakcinēti pret Ņūkāslas slimību (ND) [J]. Carbohydr Polym, 2016, 190-196. DOI: 10. 1016/j. carb pop. 2016. 01.033.

[2]Li J, Wang X, Wang W u.c. Pleurotus ferulate ūdens ekstrakts uzlabo peļu kaulu smadzenēs iegūto dendritisko šūnu nobriešanu un darbību, izmantojot TLR4 signalizācijas ceļu [J]. Vakcīna, 2015, 33(16): 1923-1933. DOI: 10.1016/j. vakcīna.2015.02. 063.

[3] Zhao H, Luo Y, Lu C u.c. Zarnu gļotādas imūnreakcija var izraisīt Ganoderma polisaharīda imūnmodulācijas aktivitāti pelēm [J]. Planta Med, 2010, 76(3): 223-227. DOI: 10. 1055/S-0029-1186055.