AM6545 un AM4113 terapijas renoaizsardzības efekts uz metabolo sindromu
Mar 21, 2022
Kontakti: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 e-pasts:audrey.hu@wecistanche.com
I DAĻA:Iejaukšanās TGFβ1-Mediētā iekaisuma un fibrozes vidū ir pamatā CB1 receptoru neitrālo antagonistu AM6545 un AM4113 reno-aizsargājošajai iedarbībai metaboliskā sindroma žurku modelī
Basma G.Eid, Thikryat Neamatallah, Abeer Hanafy, Hany M.El-Bassossy &.
1. Ievads
VielmaiņasSindroms(MetS), irVielmaiņasanomālijas, kas parasti izpaužas kā insulīna rezistence (IR), vēdera aptaukošanās, dislipidēmija un augsts asinsspiediens [1]. Pacienti ar MetS(VielmaiņasSindroms) ir augsts risks saslimt ar diabētu, aterosklerotiskām sirds un asinsvadu slimībām (CVD) un nieru darbības traucējumiem [2]. Visas šīs slimības ir nopietni un bieži vien letāli veselības stāvokļi, kas ir izplatīti lielākajā daļā valstu. MetS izplatība(VielmaiņasSindroms) visā pasaulē pieaug, un tagad ir skarts vairāk nekā miljards cilvēku [3]. Šis pieaugums ir saistīts ar fizisko neaktivitāti, augstas kaloritātes pārtikas patēriņu un dzērieniem, kas papildināti ar cukuru [4,5]. Attiecības starp MetS(VielmaiņasSindroms) un hroniska nieru slimība (HNS) ir pretrunīga. Tomēr vairāki pētījumi ir ziņojuši, ka ar fruktozi bagāts uzturs izraisa MetS(VielmaiņasSindroms), kas pēc tam progresē dažādās nefropātijas izpausmēs, piemēram, samazinātā glomerulārā filtrācijā, albuminūrijā, uricosūrijā, proteinūrijā un nieru morfoloģijas izmaiņās [6-8]. Iespējamie nieru darbības traucējumu mehānismi var ietvert pretiekaisuma citokīnu mediatoru, brīvo radikāļu un oksidatīva stresa sistēmisku izdalīšanos MetS(VielmaiņasSindroms)[9,10]. Patiešām, HNS sastopamība pacientiem ar MetS(VielmaiņasSindroms) ir 2,6 reizes augstāks nekā indivīdiem bez MetS(VielmaiņasSindroms) sastāvdaļas [11].
cistanche ekstrakta ieguvums: antibakteriāls līdzeklis
Therapeutic interventions for MetS(VielmaiņasSindroms) ietver hiperaktīvās endokanabinoīdu (EK) sistēmas modulāciju, inhibējot kanabinoīdu CB1 receptoru apakštipu |12]. Ir pierādīts, ka CB1 receptora inhibīcija regulē apetīti, uzturu un lipoģenēzi žurkām ar aptaukošanos [13-15]. CB1 ir A klases Rodopsīnam līdzīgs G-proteīnam līdzīgs receptors (GPCR), kas aktivizē galvenokārt Gαi/o proteīnus [16]. Visuresošie CB1 receptori ir plaši sastopami centrālajā nervu sistēmā (CNS), kas var palielināt neiropsihiatrisku traucējumu biežumu [17]. Ir konstatēts, ka nierēs pastāv pilna endokanabinoīdu sistēma, un tai ir nozīmīga loma nieru homeostāzē, kā arī diabētiskās nefropātijas un tādu stāvokļu kā HNS attīstībā[18]. Tika ziņots, ka CB1 un CB2 receptori ir sastopami dažādās nefrona daļās, kā arī citās nieru šūnās gan cilvēkiem, gan grauzējiem [19]. Turklāt endokanabinoīdu sistēmai nierēs ir dominējoša loma nieru hemodinamikā [20].
Piemēram, Rimonabants (SR141716) ir CB1 receptoru apgrieztais agonists, kas 2006. gada aprīlī tika klīniski pierādīts, lai ārstētuVielmaiņaskomplikācijas un aptaukošanās Eiropā [21]. Tomēr Eiropas Zāļu aģentūra veica CNS iekļūstošā medikamenta rimonabanta izņemšanu, jo tā bija saistīta ar trauksmi, depresiju un pieaugošu tendenci izraisīt pašnāvību [17].
Lai apietu rimonabant neiropsihiatriskās blakusparādības, kas bija attiecināmas uz centrālajiem efektiem, kas saistīti ar tā apgriezto agonistu profilu, mēs īstenojām divas stratēģijas, lai izstrādātu efektīvus analogus, kuriem nav nevēlamu blakusparādību. Pirmais no tiem bija CB1 neitrālu antagonistu atklāšana. Šie savienojumi, atšķirībā no to apgrieztajiem agonistu kolēģiem, kas darbojas, veicinot receptora neaktīvo stāvokli, novērš endogēni sastopamo endokanabinoīdu mijiedarbību ar CB1. AM4113 ir veiksmīgs CB1 neitrāls antagonists, kas piekrīt rimonabanta vēlamajai iedarbībai, bet kam trūkst nevēlamu blakusparādību. Mūsu otrā stratēģija bija izstrādāt CB1 receptoru antagonistus, kas nespēj šķērsot asins un smadzeņu barjeru.AM6545ir veiksmīgs perifēras darbības ligands, vienlaikus saglabājot CB1 neitrālo antagonista profilu. Tika ziņots, ka abas zāles saglabā terapeitisko aktivitāti dažādos dzīvnieku modeļos ar mazāku nelabvēlīgu ietekmi nekā rimonabants [22-26].
Pašreizējā pētījumā mūsu mērķis bija noteikt, vai ārstēšana ar CB1 receptoru antagonistiemAM6545unGrozījums Nr. 4113uzlabotu nieru darbību augsta fruktozes augsta sāls līmeņa modelīVielmaiņasSindromsun izpētīt uzlabotās funkcijas pamatmehānismu. Šāds pētījums ļautu mums noteikt, vai kādam no šo savienojumu efektiem ir kāds komponents, kas saistīts ar centralizēti ražotu CB1 inaktivāciju.
2. Rezultāti
2.1.Ārstēšanas ar AM6545 un AM4113 ietekme uz nieru endokanabinoīdu tonusu
Anandamīda (AEA) un 2-arahidonoila glicerīna (2-AG) mērījumi nieru homogenātos tika veikti, lai novērtētu endokanabinoīdu tonusu nierēs. Kā parādīts 1. tabulā, kad kontroles žurkas(C) tika ārstētas arAM6545(C+ A65) vaiGrozījums Nr. 4113(C+A41)netika būtiski ietekmēts gan AEA, gan 2-A džina saturs nierēs. Dzīvnieki arVielmaiņasSindroms(MetS) uzrādīja paaugstinātu gan AEA, gan 2-AG līmeni salīdzinājumā ar kontrolēm(C). Pēc apstrādesVielmaiņasSindromsžurkām ar vai nuAM6545(M+A65) vaiGrozījums Nr. 4113(M+A41), dzīvniekiem joprojām bija daudz augstāks gan AEA, gan 2-AG līmenis nierēs, salīdzinot ar kontroles ierīcēm.
Tabula Nr.1. Anandamīda un 2-arahidonoila glicerīna saturs nierēs.
2.2.AM6545 un AM4113 terapijas ietekme uz nieru darbību MetS(metaboliskā sindroma) žurkām
Mets(VielmaiņasSindroms), jo barošana ar augstu fruktozes saturu ir saistīta ar nieru darbības pasliktināšanos, par ko liecina palielinātais albumīna izdalīšanās ātrums (AER) un proteinūrija salīdzinājumā ar kontrolēm (p<0.05, figure="" 1a,="" b).="" both="">AM6545unGrozījums Nr. 4113ievērojami inhibēts (p<0.05)the elevated="" proteinuria="" and="" albumin="" excretion="" rate="" to="" similar="" levels="" suggesting="" protection="" of="" renal="" function="" in="">VielmaiņasSindroms). NeAM6545NeGrozījums Nr. 4113būtiski ietekmēja AER vai proteinūriju, ja to lietoja kontroles dzīvniekiem (1.A, B attēls). Kreatinīna klīrenss tika aprēķināts un bija daudz zemāksVielmaiņasSindromsgrupa(M) salīdzinājumā ar kontrolēm (att.] C). Administrēšana vai nuAM6545(M+A65) vai AM4113 (M + A41) uzVielmaiņasžurkām nebija nekādas ietekmes uz kreatinīna klīrensu (1.C attēls).
1. attēls. CB1 receptoru antagonistiAM6545unGrozījums Nr. 4113uzlabot nieru funkcionālos parametrus, barojot ar augstu fruktozes līmeni ar augstu sāls saturuVielmaiņasSindromsŽurkām.
(A)parāda albumīna ekskrēcijas ātrumu(AER), (B)uzrāda proteinūriju un (C) uzrāda kreatinīna klīrensu, ko mēra kontroles grupā
C) unVielmaiņasSindroms(M)žurkām, kā arī pēc 4 nedēļu ilgas intraperitoneālas injekcijasAM6545kontrolē(C+ A65) unVielmaiņasžurkām(M+A65)vai AM4113 kontrolē(C+A41)vaiVielmaiņasžurkām(M+A41)devā 10mg/kg/dienā.
Rezultāti tiek parādīti kā ailes parauglaukumi, un vidējais ir parādīts kā(+)(n=8).*p<0.05 relative="" to="" the="" control="" group=""><0.05 relative="" to="" the="">VielmaiņasSindromsgrupa pēc vienvirziena ANOVA, kam seko Tukeja pēcspēles tests.
2.3.AM6545 un AM4113 terapijas ietekme uz asinsspiedienu
Asinsspiediena mērīšana, izmantojot neinvazīvu astes aproces metodi, atklāja, ka MetS(VielmaiņasSindroms) dzīvniekiem (M, M+ A65, M+ A41)bija ievērojami augstāks sistoliskais un diastoliskais asinsspiediens, salīdzinot ar kontrolējošiem dzīvniekiem. Dzīvnieku apstrāde arAM6545vaiGrozījums Nr. 4113neizraisīja būtiskas sistoliskā un diastoliskā asinsspiediena izmaiņas (2. tabula).
Tabula Nr. 2. AM6545 un AM4113 ietekme uz metabolā sindroma (MetS) inducēto žurku sistolisko un diastolisko asinsspiedienu (BP).
2.4.Ārstēšanas ar AM6545 un AM4113 ietekme uz nieru histopatoloģiju MetS(metaboliskā sindroma) žurkām
H&E-iekrāsoto sekciju pārbaude no MetS(VielmaiņasSindroms) žurkām bija izteiktas histopatoloģiskas izmaiņas, jo īpaši nieru garozā, kur patoloģiskas izmaiņas tika novērotas galvenokārt glomerulu un proksimālos spirālveida kanāliņos un nieru stromā attiecībā pret kontroles grupu. Kontroles žurku nierēs bija normāla nieru garozas struktūra (2.A attēls, B), kurā galvenokārt bija nieru asinsķermenīši, kas sastāvēja no glomerulāriem kapilāriem, kurus norobežoja Bowman kapsula. Turklāt starp proksimālo (PCT) un distālo spirālveida kanāliņiem (DCT) bija kapsulas telpa. Garas kubveida šūnas ar eozinofīlu citoplazmu ar centrāliem noapaļotiem kodoliem izklāja proksimālos spirālveida kanāliņus. Garie mikrovilli piepildīja cauruļu lūmenus, kas parādīja sukas gaismas robežu. Distālās konvulsijas kanāliņi bija ierobežoti attiecībā pret PCT. Metsā(VielmaiņasSindroms) žurkām, nierēm bija mainīga izmaiņu pakāpe (2.C-E attēls), kur daži glomeruli tika hipertrofēti ar paplašinātiem glomerulāriem kapilāriem, bet citi glomeruli parādījās atrofiski. Turklāt lielākā daļa PCT tika paplašināti, zaudējot suku apmales; viņu šūnām bija vakuolēts citoplazma un tumši piknotiski kodoli. Turklāt DCT parādīja dažas deģeneratīvas izmaiņas ar sienām un vakuolētu citoplazmu. Turklāt dažādās nieru garozas zonās tika novērotas intersticiālas telpas, peritubulāra asiņošana un mononukleāra iekaisuma šūnu infiltrācija. Interesanti, ka Mets(VielmaiņasSindroms) žurkām, kas apstrādātas arAM6545(3.A, B attēls) un AM4113(3.C attēls, D) uzrādīja ievērojamu nieru histoloģiskā profila uzlabošanos, kas izpaužas kā gandrīz normāls glomeruls un PCT bez deģenerācijas pazīmēm un/vai iekaisuma šūnu infiltrācijas pazīmēm.
2. attēls. Nieru garozas histoloģiskās struktūras reprezentatīvie fotomikrogrāfi kontrolē unVielmaiņasSindromsŽurkām.
Kontroles grupa(A, B) uzrāda normālu nieru glomerulu(G) un kanāliņus (PCT, DCT), betVielmaiņasSindromsgrupa (C-E) daži glomeruli parādījās atrofēti (G1), bet citi parādījās hipertrofēti (G2) ar paplašinātiem kapilāriem ().
Lielākā daļa PCT šķita deģenerēta ar paplašinātu lūmenu, sukas robežas zudumu un piknotiskiem kodoliem (apļa iekšpusē).
Ņemiet vērā intersticiālu plašu telpu klātbūtni (*), ekstravazāciju asinīs (*) un infiltrāciju ar iekaisuma šūnām (ICI). (H&E—A, C ×200—B, D, E×400).
3. attēls. Nieru garozas histoloģiskās struktūras reprezentatīvie fotomikrogrāfi žurku grupāsVielmaiņasSindromsārstē arAM6545A, B) unGrozījums Nr. 4113(C, D) CB1 receptoru antagonisti.
Ievērojiet gandrīz normāla izskata atjaunošanu, salīdzinot ar kontroles grupu attiecībā uz glomeruliem (G) un kanāliņiem (PCT, DCT). (H&E—A, C×200—B, D ×400)
2.5. Ārstēšanas ar AM6545 un AM4113 ietekme uz Uirīnskābes līmeni MetS(metaboliskā sindroma) žurkām
Ņemot vērā urīnskābes nozīmi nieru iekaisumā un progresēšanu līdz hroniskai nieru slimībai, 4. attēlā redzams, ka MetS(VielmaiņasSindroms) dzīvniekiem urīnskābes saturs palielinājās desmitkārtīgi attiecībā pret kontrolēm (p<0.05). however,="" both="" cb1="" antagonists,="">AM6545unGrozījums Nr. 4113, ievērojami (p<0.05) inhibited="" this="" increased="" uric="" acid="" content="" while="" restoring="" it="" to="" near="" normal="" values.="" meanwhile,="" neither="">AM6545NeGrozījums Nr. 4113būtiski ietekmēja urīnskābes saturu urīnā kontrolējamos dzīvniekos.
2.6. Ietekme uzAM6545unGrozījums Nr. 4113Ārstēšana TGFβ1 līmenī MetS(VielmaiņasSindroms) Žurkas
Pētījumā tika pētīta arī TGFβ1 kā galvenā iekaisuma un fibrozes izraisītāja loma. Kā parādīts 5. attēlā, TGFβ1 koncentrācija audos nierēs, kas izolētas no MetS(VielmaiņasSindroms) žurkas bija izteikti (p<0.05) increased="" than="" in="" normal="" animals.="" however,="" the="" four="" weeks="" of="" treatment="" with="">AM6545unGrozījums Nr. 4113rezultējās ar zīmīgu (p<0.05)reduction of="" tgfβ1="" concentrations,="" restoring="" it="" to="" normal="" values.="" while="" neither="">AM6545NeGrozījums Nr. 4113būtiski ietekmēja TGFβ1 audu koncentrāciju kontroles nierēs. Šis rezultāts liecina, ka CB1 receptoram ir izšķiroša loma iekaisuma un nieru fibrozes mediācijā.
Korelācijas koeficients tika aprēķināts, lai novērtētu korelāciju starp albumīna ekskrēcijas ātrumu un TGFβ1 līmeni nierēs(3. tabula). Starp AER un TGFβ1 kontrolē unVielmaiņasSindromsDzīvniekiem. Korelācija bija arī dzīvniekiem, kas tika ārstēti arAM6545, bet ne arGrozījums Nr. 4113.
4. attēls. CB1 receptoru antagonistiAM6545unGrozījums Nr. 4113bloķēja urīnskābes satura desmitkārtīgu paaugstināšanos augstas fruktozes augsta sāls līmeņa paaugstināšanos, inducējot augstu sāls saturuVielmaiņasSindromsŽurkām.
Urīnskābes koncentrācija tika mērīta kontroles (C) urīnā unVielmaiņasSindromsM) žurkām, kā arī kontroles unVielmaiņasžurkām, kas ārstētas arAM6545(C+ A65) un (M+A65) attiecīgi vaiGrozījums Nr. 4113(C+A41)un (M+A41)attiecīgi devā 10 mg/kg/dienā. Rezultāti tiek parādīti kā ailes parauglaukumi, un vidējais ir parādīts kā (+)(n=8).*p<0.05relative to="" the="" control="" group="" and=""><0.05 relative="" to="" the="">VielmaiņasSindromsgrupa pēc vienvirziena ANOVA, kam seko Tukeja pēcspēles tests.
5. attēls. CB1 receptoru antagonistiAM6545unGrozījums Nr. 4113samazināt TGFβ1 ražošanu fruktozes izraisītā veidāVielmaiņasSindromsŽurkām.
TGFβ1 koncentrācija tika mērīta kontrolē(C) unVielmaiņasSindromsM) žurkām, kā arī kontroles unVielmaiņasžurkām, kas ārstētas arAM6545(C+A65)un (M+ A65) attiecīgi vai attiecīgi AM4113(C+A41) un(M+A41), lietojot devu 10 mg/kg/dienā. Rezultāti tiek parādīti kā bokseri, un vidējais tiek parādīts kā(+)(n=8).*p<0.05 relative="" to="" the="" control="" group=""><0.05 relative="" to="" the="">VielmaiņasSindromsgrupa pēc vienvirziena ANOVA, kam seko Tukeja pēcspēles tests.
Tabula Nr. 3. AM6545 un AM113 ietekme uz korelāciju starp albumīna ekskrēcijas ātrumu (AER) un transformējošā augšanas faktora-beta 1(TGF1) līmeni nierēs.
2.7.IetekmeAM6545unGrozījums Nr. 4113Nieru fibrozes ārstēšana MetS(VielmaiņasSindroms) Žurkas
6. attēlā ir parādītas nieru sekcijas no dažādām grupām, kas iekrāsotas ar Masson's Trichrome, lai novērtētu kolagēna šķiedras, kas parādījās kā zilgans krāsojums. Nieru garoza uzrādīja izteiktu kolagēna šķiedru palielināšanos nierēs, kas ņemtas no MetS(VielmaiņasSindroms) žurkām(6.B attēls)salīdzinājumā ar kontrolgrūšām (6.A attēls). Intersticijā un glomerulos bija kolagēna šķiedras nogulsnēšanās pārpalikums. Turpretī nieru garozā samazinājās kolagēna šķiedru nogulsnēšanās arAM6545(6.C attēls) un AM4113 (6.D attēls) procedūras. Masson's Trichrome krāsošanas kvantificēšana atklāja lielāku procentuālo daļuVielmaiņasSindroms(M), kā arīVielmaiņasapstrādātās grupas(M + A65, M + A41)salīdzinājumā ar kontrolēm. Tomēr MetS ārstēšana(VielmaiņasSindroms) dzīvniekiem arAM6545unGrozījums Nr. 4113izraisīja ievērojamu Masson iekrāsošanās samazināšanos attiecībā pret neapstrādātoVielmaiņasgrupa.
6. attēls. Dažādu grupu nieru garozas reprezentatīvie fotomikrogrāfi, kas iekrāsoti ar Masson's Trichrome. Ievērojiet izteikto kolagēna šķiedru pieaugumu.
(A)nierēs:VielmaiņasSindromsB) ap glomeruliem(G) un kanāliņiem(PCT, DCT), salīdzinot ar kontroli(A). TurpretīAM6545-ārstēts;VielmaiņasSindroms
C) un AM4113-apstrādātiVielmaiņasSindroms(D)uzrādīja ievērojamu kolagēna šķiedru samazināšanos. (Masson's Trichrome, A, B, C& D×200).
E) parāda Masson trihroma iekrāsojuma kvantificēšanu, kas izteikta kā %. Rezultāti tiek parādīti kā aiļu laukumi, un vidējais ir parādīts kā(+)(n=8).*Būtiski atšķiras no "C" pie p<0.05,# significantly="" different="" from"m"="" at="" p=""><>
