Divvērtīgā dzīvā novājināta gripas vīrusa vakcīna aizsargā pret novirzītiem H1N2 un H3N2 klīniskajiem izolātiem cūku 2. daļā

2.5. Ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests (ELISA)

Lai izgatavotu pārklājuma antigēnus, SD435 un SD467 tika pavairoti MDCK šūnās un attīrīti, izmantojot saharozes gradienta ultracentrifugēšanu. Vīrusu inaktivācija notika, pievienojot vīrusam 97% -propiolaktonu koncentrācijā 1:1000 (v/v) (Thermo Fisher Scientific, AAB2319703). Šo maisījumu kratīja 4 ◦ C temperatūrā uz nakti, inkubēja 37 ◦ C temperatūrā divas stundas, lai atvieglotu -propiolaktona hidrolīzi, pēc tam uzglabāja -80 ◦ C temperatūrā līdz lietošanai.

Antigēni un imunitāte ir nedalāmi. Antigēns attiecas uz jebkuru vielu, ko imūnsistēma var atpazīt un izraisīt imūnreakciju, tostarp baktērijas, vīrusus, audzēja šūnas utt., savukārt imunitāte attiecas uz organisma spēju reaģēt uz šiem antigēniem.

Antigēnu un imunitātes saistību var ilustrēt ar vienkāršu metaforu: tāpat kā vingrošanai nepieciešams pietiekams treniņš un uztura bagātinātāji, imunitātes uzlabošana ir atkarīga arī no atkārtotas saskares ar antigēniem un atbilstošajām imūnšūnām un imūnmolekulām. ražot. Kad imūnsistēma saskaras ar antigēnu, tā uzbrūk, ražojot specifiskas antivielas vai imūnās šūnas, kā arī atmiņas šūnas, lai pasargātu mūs no atkārtotas inficēšanās.

Zinātne ir apstiprinājusi, ka labu dzīves un ēšanas paradumu veidošana var palīdzēt uzlabot imunitāti. Piemēram, tīrības uzturēšana, nesmēķēšana, mērena fiziskā slodze un miega ieradumi var palīdzēt samazināt antigēnu, piemēram, baktēriju un vīrusu, invāziju. Tajā pašā laikā, ēdot dažus pārtikas produktus, kas bagāti ar antioksidantiem, vitamīniem un minerālvielām, piemēram, dārzeņus un augļus, veselus graudus un zivis, var arī palīdzēt uzlabot imunitāti.

Īsāk sakot, saistība starp antigēnu un imunitāti ir ļoti cieša. Tikai ar atkārtotu saskari ar antigēniem un pareiziem dzīves paradumiem var nepārtraukti uzlabot imunitāti, novērst un ārstēt dažādas slimības. Tāpēc mums ir jāsaglabā pozitīva attieksme un jāveido labi dzīves paradumi, lai pasargātu sevi no slimībām. Var redzēt, ka mums ir jāuzlabo imunitāte. Cistanche var mums palīdzēt uzlabot imunitāti, jo Cistanche ir bagāts ar dažādām antioksidantu vielām, piemēram, C vitamīnu, karotinoīdiem u.c. Šīs sastāvdaļas var attīrīt brīvos radikāļus un samazināt oksidatīvo stresu, Uzlabojot imūnsistēmas pretestību.

Noklikšķiniet uz cistanche deserticola papildinājuma

Lai izmērītu swIAV specifisko IgG līmeni, ko izraisa vakcinācija un provokācija, cūku serums tika ņemts pēc pirmās (20. diena) un otrās (30. diena) vakcinācijas, kā arī pirms autopsijas (36. diena).

Attīrīti ar propiolaktonu inaktivēti vīrusi SD435 (1 µg/ml) un SD467 (2 µg/mL), atšķaidīti karbonāta/bikarbonāta pārklājuma buferšķīdumā (pH 9,6) tika uzklāti uz Immulon-2 96- iedobju plāksnēm pie 1{{ 12}}0 µL/iedobē (Thermo Labsystems, Otava, ON, Kanāda, 3655) un inkubēja nakti 4 ◦C temperatūrā. Pēc inkubācijas pa nakti pārklātās plāksnes četras reizes mazgāja ar TBST (0,1 M Tris, 0,17 M NaCl un 0,05 procenti Tween 20), kam pievienoja četrkārtīgus seruma vai BALF sērijas atšķaidījumus. plāksni divos eksemplāros, kam seko divu stundu inkubācija istabas temperatūrā. Serums tika pievienots sākuma atšķaidījumā 1:10, un BALF tika pievienots neatšķaidītu. Iepriekš definēto pozitīvās kontroles serumu paraugi un atbilstošās negatīvās kontroles, serums un BALF no nevakcinētām cūkām iepriekšējā pētījumā tika palaistas uz katras plāksnes [14].

Plāksnes četras reizes mazgāja ar TBST, pēc tam ar kazas anti-cūku IgG (H plus L) fosfatāzes iezīmētu afinitātes attīrītu antivielu (1:5000) (Sigma Aldrich, SAB3700435) vai peles anti-cūku IgA (Serotec, MCA658) ( 1:300), kas atšķaidīts ar TBST, tika pievienots un atstāts inkubācijai istabas temperatūrā vienu stundu. IgA ELISA tika izstrādāti, pievienojot biotinilētas kazas anti-peļu IgG (H plus L) antivielas (CALTAG, Burlingame, CA, ASV, M30015) un streptavidīna sārmainās fosfatāzes šķīdumu (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) abus vienu stundu. istabas temperatūrā.

Pēc inkubācijas gan IgG, gan IgA plāksnes četras reizes nomazgāja ar TBST, kam pievienots p-nitrofenilfosfāta substrāts (PNPP) [10 mg/mL p-nitrofenilfosfāta di(tris) sāls kristālisks (Sigma-Aldrich) , pievienoja 1 procentu dietanolamīnu (Sigma-Aldrich), 0,5 mg/ml MgCl2 un pH 9,8] (1 mg/ml) un inkubēja istabas temperatūrā divas stundas.

Reakcija tika apturēta, pievienojot 0,3 M etilēndiamīntetraetiķskābi (EDTA), un plāksnes nolasīja spektrofotometrā pie 405 nm ar atsauci 490 nm. Parauga titrs tika definēts kā augstākais atšķaidījums, pie kura šī parauga OD bija augstāks par noteikto robežvērtību (zināmā negatīvā parauga vidējais OD plus divas reizes lielāka standartnovirze).

2.6. Vīrusu neitralizācijas (VN) tests

MDCK šūnas (3,5 × 104) tika izklātas 96-iedobju plāksnēs. Serums un BALF tika termiski inaktivēti 56 ◦ C temperatūrā 30 minūtes. Plāksnei četros eksemplāros pievienoja divkāršus seruma un BALF atšķaidījumus, un 60 µL atšķaidīta seruma vai BALF inkubēja ar vienādu tilpumu SD435 vai SD456, kas satur 100 TCID50 37 ◦C temperatūrā 1 stundu. Pēc tam MDCK šūnām pievienoja 100 µL maisījuma, un citopatogēnais efekts (CPE) tika dokumentēts 48 stundas un 72 stundas pēc inficēšanās (pi). Neitralizācijas antivielu titrs bija katra seruma parauga augstākais atšķaidījums, kas pilnībā aizsargāja šūnas no CPE vismaz 2 no 4 iedobēm.

2.7. Vīrusu noteikšana

Pēc savākšanas plaušu paraugi nekavējoties tika novietoti uz ledus un sasaldēti -80 ◦ C temperatūrā līdz apstrādei. Apstrādei katrs plaušu audi tika nosvērti un pievienota 10 procentu (w/v) MEM koncentrācija, kas papildināta ar 1x antibiotiku-pretsēnīšu līdzekli (Thermo Fisher Scientific, 15240-062). Plaušu audi tika homogenizēti TissueLyser II (Qiagen, Hilden, Vācija) ar frekvenci 30 Hz 5 minūtes, kam sekoja centrifugēšana ar ātrumu 5000 × g 10 minūtes 4 ◦C temperatūrā. Homogenizētais supernatants tika savākts un uzglabāts -80 ◦ C temperatūrā līdz turpmākai analīzei. Deguna uztriepes tika maisītas 15 sekundes un centrifugētas ar ātrumu 1600 × g 25 minūtes 4 ◦C temperatūrā. Supernatanti tika savākti un uzglabāti -80 ◦ C temperatūrā līdz turpmākai analīzei. Vīrusu titri tika noteikti ar TCID50 testu plaušām un kvantitatīvo RT-PCR deguna uztriepēm.

2.8. RNS ekstrakcija un kvantitatīvā RT-PCR (qRT-PCR)

Lai noteiktu SD467 un SD435 vīrusu RNS līmeni deguna uztriepēs pēc inficēšanās, tika veikta qRT-PCR. Standarta līkne tika izveidota, izmantojot RNS, kas ekstrahēta no zināma titra SD435 un SD467. Īsumā, RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Toronto, ON, Kanāda, 74136) tika izmantots, lai ekstrahētu vRNS no 200 µL deguna mazgāšanas. RNS tika pārveidota par cDNS, izmantojot universālo gripas primeru Uni12 un SuperScript III Transcriptase (Invitrogen, Burlington, ON, Kanāda) [19]. qPCR tika veikts trīs eksemplāros StepOnePlusTM Real-Time PCR sistēmā (Applied Biosystems, CA, ASV) ar Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), 5 µL cDNS un 1 µL 10 µM priekšējo un reverso praimeru. PCR reakcijas tika veiktas atlaidināšanas temperatūrā 58 ◦ C 40 ciklus. Visas qPCR primeru sekvences ir pieejamas pēc pieprasījuma.

2.9. Statistiskā analīze

Statistiskā analīze tika veikta, izmantojot GraphPad Prism 8 programmatūru. Tika izmantoti Mann-Whitney un Kruskal-Wallis neparametriskie testi. Būtiskas atšķirības ir apzīmētas ar * (p < 0.05), ** (p < 0.01), *** (p < 0,001) , vai **** (p < 0,0001). ns=nav nozīmīgs.

3. Rezultāts

3.1. Vakcinācija ar divvērtīgo vakcīnu nodrošināja aizsardzību pret jauniem klīniskiem izolātiem

Mēs izmērījām fizisko reakciju uz izaicinošiem vīrusiem, kā arī vīrusu replikāciju elpceļos, lai novērtētu bivalentās vakcīnas nodrošināto aizsardzību pret šiem jaunajiem klīniskajiem izolātiem. Temperatūra tika reģistrēta katru dienu piecas dienas pēc vīrusa iedarbības visās grupās. Cūkām, kuras tika vakcinētas un inficētas ar SD435 (H3N2) (MEM/SD435) vai SD467 (H1N2) (MEM/SD467), 1. dienā pēc vīrusa inficēšanās bija tipisks temperatūras pieaugums ar vidējo temperatūru 40,6 ◦C un 41,1 ◦. C, attiecīgi. Šis pieaugums netika novērots vakcinētajās grupās, kuras tika inficētas ar SD435 (Bivalent/SD435) vai SD467 (Bivalent/SD467), kuru vidējā temperatūra bija attiecīgi 39,4 ◦C un 39,6 ◦C. 2.–5. dienā pēc inficēšanās gan vakcinētajās, gan nevakcinētajās grupās temperatūra bija aptuveni 39 ◦C (2.A attēls).

Piecas dienas pēc inficēšanās visām cūkām tika veikta autopsija, pilnībā izņemtas plaušas un analizētas, lai noteiktu bojājumu daudzumu. Bivalent/SD435 grupā tika konstatēti minimāli bojājumi vai to nebija, ar vidējo plaušu bojājumu kopskaitu 0,65 procenti. MEM/SD435 grupai bojājumu skaits bija ievērojami lielāks nekā tās vakcinētajai grupai ar vidējo 5,1 procentu (p=0,0025) (2.B attēls). Bivalent/SD467 grupā piecām no septiņām cūkām bija maz bojājumu (<2%), one had minor lesions (3.75%), and one outlier had high lesions (31%), with a group median of 1.9%. Compared with the vaccinated group, the MEM/SD467 group had a higher degree of lesions with a median of 4.55% (p = 0.0417) (Figure 1C).

Plaušās gan Bivalent/SD435, gan Bivalent/SD467 grupām vīrusa titri bija zemi, attiecīgi vidēji 8,6 PFU/mL/gr un 3.0 PFU/mL/gr. Savukārt MEM/SD435 un MEM/SD467 grupās bija lielāks vīrusa daudzums ar vidējiem rādītājiem attiecīgi 656,1 un 9118,2 PFU/mL/gr (p=0.0025 abām) (3.A attēls, B). Līdzīgas tendences tika novērotas deguna tamponiem. Bivalent/SD435 grupā deguna titri bija zemi 1., 3. un 5. dienā pēc inficēšanās (dpc), savukārt MEM/SD435 grupā titri bija nedaudz paaugstināti un pieauga, dienām progresējot (ns) (3C attēls). Bivalent/SD467 grupā arī deguna titri bija zemi, vidēji zem 5 PFU/ml 1. un 5. dienā un 10,0 PFU/ml 3. dienā pēc inficēšanās. Titri bija augstāki MEM/SD467 grupā katru dienu, vidēji 4123,6 PFU/mL/gr uz 1dpc (p=0.0278), 77233,1 PFU/mL/gr (p=0.0009) 3dpc un 65,2 PFU/mL/gr uz 5dpc (ns) (3D attēls).

Kopumā šie rezultāti liecina, ka divvērtīgā vakcīna piedāvāja ievērojamu aizsardzības pakāpi pret izaicinājumu celmiem, samazinot plaušu bojājumus un vīrusu replikāciju, kas saistīta ar infekciju ar šiem diviem swIAV izolātiem plaušās un deguna ejās.

3.2. Divvērtīgā vakcīna izraisa imūnreakciju pret izaicinājumu celmiem

Pēc primārās pastiprināšanas vakcinācijas ar divvērtīgo vakcīnu mēs izmērījām antivielu reakciju serumā un plaušās, kas raksturīgi abiem provokācijas celmiem. Serums tika savākts no cūkām pēc pirmās vakcīnas (2. diena0) un pēc otrās vakcīnas (30. diena). Izaicinājuma vīrusi SD435 (H3N2) un SD467 (H1N2) tika izmantoti kā uztveršanas antigēni, lai noteiktu vīrusam specifisko IgG antivielu reakciju serumā. Izmantojot SD435, pēc pirmās vakcinācijas (20. diena) nebija būtiskas atšķirības starp antivielu titriem MEM un bivalentās vakcinācijas grupās. Tomēr pret SD467 antivielu titri bija ievērojami augstāki vakcinētajā grupā 20. dienā (p=0.0321). Pēc otrās vakcīnas (31. diena) antivielu titri bija ievērojami augstāki vakcinētajā grupā gan pret SD435, gan SD467 nekā MEM imitācijas vakcīnu grupās (p < 0,0001) (4.A, B attēls). Precīzāk, pret uztveršanas antigēnu SD435 seruma IgG titri MEM imitācijas vakcinācijas grupā bija vidēji 52 20. un 30. dienā, turpretim tie bija 311 (20. diena) un 4852 (30. diena) divvērtīgās vakcīnas grupā (3.A attēls). Pret SD467 seruma IgG titri viltus vakcinētajā MEM grupā bija 39 (20. diena) un 38 (30. diena), savukārt divvērtīgās vakcīnas grupā tie bija 219 (20. diena) un 3509 (30. diena) (3.B attēls).

Līdzīgas tendences tika novērotas, kad serumā tika mērīti neitralizējošu antivielu titri pret diviem provokatīviem celmiem. Atkal nebija būtiskas atšķirības starp neitralizējošu antivielu titriem MEM un bivalenti vakcinētajās grupās pret SD435 pēc vienas vakcīnas devas (2. diena0) ​​(5.A, B attēls). Pret SD467 antivielu līmenis bija ievērojami augstāks 2. dienā 0 pēc vienas vakcīnas (p=0.0069). Pret abiem vīrusiem antivielu titri palielinājās bivalento vakcīnu grupās pēc otrās devas 30. dienas) (p < 0,0001). Titri MEM imitācijas vakcinācijas grupā tika inficēti ar SD435 vidēji 1 (20. diena) un 3 (30. diena), savukārt titri divvērtīgajā grupā bija vidēji 10 (da20) un 77 (30. diena) (5.A attēls). Titri MEM imitācijas vakcinācijas grupā, kas tika inficēta ar SD467, bija vidēji 0 (20. diena) un 2 (30. diena), savukārt divvērtīgās vakcīnas grupā titri vidēji bija 10 (20. diena) un 54 (30. diena) (5.B attēls).

Pēc autopsijas (36. diena) no katras cūkas tika savākts BALF, lai varētu izmērīt antivielu līmeni plaušās. Izaicinājuma vīrusi SD435 un SD467 tika izmantoti kā uztveršanas antigēni, lai izmērītu vīrusam specifisko IgA un IgG reakciju. Pret SD435 IgA līmenis MEM imitācijas vakcīnu grupās bija vidēji 17, turpretim divvērtīgo vakcīnu grupā titri bija ievērojami augstāki, vidēji 95 (p=0.0014) (6.A attēls). SD467 IgA līmenis bija vidēji 18 mākslīgās vakcīnas grupā un bija ievērojami augstāks – 158 divvērtīgās vakcīnas grupā (p=0.0185) (6.B attēls). Runājot par IgG, titri pret SD435 MEM imitācijas vakcīnas grupā bija vidēji 3, savukārt divvērtīgajā grupā tie bija ievērojami augstāki, vidēji 138 (p < 0,0001) (6.C attēls). IgG antivielas pret SD467 MEM imitācijas vakcīnu grupās bija vidēji 16, turpretim divvērtīgo vakcīnu grupā tās bija ievērojami augstākas, vidēji 259 (p < 0,0001) (6.D attēls).

Attiecībā uz neitralizējošām antivielām BALF tendences bija līdzīgas tām, kas novērotas IgA un IgG ELISA testos. Pret SD435 neitralizējošu antivielu titri MEM imitācijas vakcīnu grupās nebija nosakāmi, un tie bija ievērojami augstāki – 13,2 divvērtīgās vakcīnas grupā (p < 0.0001) (7.A attēls). Līdzīgi antivielu titri, kas specifiski SD467, bija vidēji 0,7 MEM imitācijas vakcīnu grupās un bija ievērojami augstāki divvērtīgās vakcīnas grupā ar vidējo titru 10,9 (p=0,0002) (7.B attēls). Kopumā šie dati liecina, ka divas divvērtīgās vakcīnas devas izraisa spēcīgu sistēmisku humorālu reakciju, kā arī lokālu imūnreakciju plaušās pret šiem diviem nehomoloģiskajiem klīniskajiem izolātiem.

4. Diskusija

Iepriekš mēs pierādījām, ka no elastāzes atkarīgie vīrusi SD191-R342V un SD69.K345V cūkām bija pilnībā novājināti un nav virulenti un ka divas vakcinācijas ar šo divvērtīgo LAlV izraisīja spēcīgu imūnreakciju un nodrošināja aizsardzību pret infekciju ar homologu SD191 ( H1N2) un SD69 (H3N2) celmi [14). Šajā pašreizējā pētījumā mēs vēlējāmies pārbaudīt, vai divvērtīgā vakcīna izturēs in vivo pret jaunākiem klīniskiem izolātiem, kuriem ir veikta antigēnu novirze. SD467, tāpat kā SD191, ir Ho-3 antigēnu grupas loceklis, kas ir izveidojies Kanādā, taču tas ir ieguvis daudzas mutācijas galvenajās antigēnu vietās (12,15). Tāpat SD435 pārstāv H3N2 IV-E kopu. kas atrodas Kanādas rietumos un satur vairākas aminoskābju aizvietošanas galvenajās H3 antigēnu vietās salīdzinājumā ar tām, kas atrodas SD69 (17]).

Divvērtīgais LAlV ievērojami samazināja bojājumus vakcinētajām cūkām, kad tās tika inficētas ar SD435 (H3N2) vai SD467 (H1N2), un novērsa temperatūras kāpumu, kas tika novērots grupās, kas vakcinētas ar MEM (izspēles) vienu dienu pēc inficēšanās. Tas arī izraisīja abu celmu vīrusu replikācijas samazināšanos plaušās un SD467 (H1N2) samazināšanos deguna uztriepēs. Interesanti, ka SD435 (H3N2) deguna titri bija zemi gan vakcinētajās, gan nevakcinētajās grupās, neskatoties uz identiskām paraugu ņemšanas metodēm, kas liecina, ka šim celmam var nebūt tik daudz tropisma deguna ejām. Attiecībā uz izņēmuma cūku grupā, kurai bija augsts plaušu bojājuma punktu skaits — 31, temperatūras mērījumi neliecināja par smailēm, un vīrusu titri plaušās bija zem 10 PFU/g/ml. Antivielu līmenis serumā un vietējā plaušu reakcija arī bija tāda pati kā visām pārējām vakcinētajām cūkām. Tas liek mums domāt, ka bojājumi nebija saistīti ar gripu. Seroanalīze atklāja, ka pēc divām vakcīnas devām pret abiem celmiem izveidojās spēcīga imūnreakcija, un tas pats izrādījās taisnība attiecībā uz vietējo plaušu analīzi. Uz antivielām vērstie virsmas glikoproteīni ir vissvarīgākie, lai aizsargātu pret IAV infekciju, tāpēc augstais neitralizējošu antivielu līmenis, kā arī lgG un lgA, kas konstatētas vakcinētās cūkās, atbalsta aizsardzību, kas novērota in vivo [20].

Veselas inaktivētās vīrusa (WIV) vakcīnas ir visizplatītākās cūkām, kas tradicionāli sagatavotas ar adjuvantu, tās tiek uzskatītas par drošu pieeju, jo nepastāv risks, ka cirkulēs celmi. Tomēr tie nodrošina ierobežotu efektivitāti pret neatbilstošiem celmiem, un ir pierādīts, ka tie izraisa ar vakcīnu saistītus pastiprinātus elpošanas traucējumus (VAERD), ja tos lieto pret neatbilstošiem celmiem. To efektivitāte samazinās arī mātes izcelsmes antivielu (MDA) klātbūtnē [4]. Tie, kas ir komerciāli pieejami Ziemeļamerikā, ietver FluSure XP®, kas ir pieejams kā četrvērtīgs preparāts ASV ar H1N1, H1N2 un H3N2 klasteriem IV-A un IV-B [21]. Kanādā ir pieejama vecāka Flusure XP® formula ar diviem H1N1 celmiem un vienu H1N2 celmu, kas izolēti no 2000. līdz 2005. gadam [22]. Abās Ziemeļamerikas valstīs ir pieejama FluSure® Pandemic, monovalenta vakcīna, kas sastāv no H1N1pdm09 celma, kā arī Pneumostar SIV Complete (Elanco, Greensboro, North Carolina, US Inc.), kas satur H1N1, H1N2 un H3N2 un Pneumostar SIV ar H1N1 un H3N2 apakštipu celmiem (GOC, USDA) [23,24]. Šīs komerciāli pieejamās vakcīnas veido aptuveni 50 procentus no cūku gripas vakcīnām Ziemeļamerikā, bet pārējie 50 procenti vakcināciju ir autogēnas vakcīnas [4].

Runājot par alternatīvām vakcīnu platformām, ASV tika licencēta rekombinantā alfavīrusa replikona daļiņu vakcīna [4]. Šajā vakcīnas platformā tiek izmantots alfavīruss ar izmainītu genomu, kur vīrusa strukturālie gēni tiek aizstāti ar izvēlētu gēnu, padarot alfavīrusa replikācijas traucējumus. Šī RNS ir pašreplicējoša, tāpēc vakcīnas platforma nodrošina augstu interesējošā gēna ekspresiju, un gripai gan HA, gan nukleoproteīns (NP) ir pārbaudīti kā antigēni [25]. Pētījumi ir parādījuši, ka šīs platformas izmantošana aizsargā pret antigēnu HA un - neatbilstošiem izaicinājumiem, kā arī pret NP neatbilstošiem celmiem, lai gan platforma nespēja aizsargāt pret MDA klātbūtni.

Pirmo LAIV pret cūku gripu apstiprināja ASV Lauksaimniecības departaments (USDA) 2017. gadā. Ingelvac Provenza™ ir divvērtīga H3N2 un H1N1 vakcīna, kuras HA un NA no diviem ASV izolētiem celmiem, kas izteikti uz TX98 mugurkaula, novājināta, saīsinot nestrukturālo proteīnu (NS1) [14,26]. LAIV atdarina dabisko infekciju un, ievadot intranazāli, palielina augšējo elpceļu gļotādas imunitāti. Ja inaktivētās vakcīnas galvenokārt izraisa sistēmisku IgG antivielu veidošanos, dzīvās novājinātās vakcīnas var izraisīt gļotādas IgA elpošanas traktā, kā arī pastiprinātu šūnu izraisītu reakciju, jo imūnsistēma tiek pakļauta iekšējiem gripas proteīniem, kas satur vairāk T. šūnu epitopi [27]. Tas nodrošina labāku aizsardzību pret neatbilstošiem celmiem.

Tie ir parādījuši daļēju aizsardzību MDA klātbūtnē. Veselas IgG antivielas ir vairāk izplatītas apakšējos elpceļos, un polimēru IgA antivielas dominē cūku augšējos elpceļos, visbiežāk kā dimēri [28]. Šīs antivielas tiek ražotas lokāli un tiek transportētas pa epitēlija šūnu slāni, kur tās paliek gļotādās, un to palīdz sekrēcijas komponents, kas pretojas proteāžu noārdīšanai [28, 29]. IgA antivielas ir adaptīvās imūnsistēmas pirmā aizsardzības līnija pret ienākošajiem patogēniem, kas darbojas, lai bloķētu vīrusa piesaisti sialskābes receptoriem [30]. Polimēru IgA antivielas ir plašāk krusteniski reaģējošas nekā monomēra IgG antivielas, iespējams, daudzvērtīgās saistīšanās dēļ [31]. Pētījumi ir arī parādījuši, ka šīs antivielas var daudz efektīvāk novērst jaunizveidotā IAV izdalīšanos no inficētām šūnām daudz efektīvāk nekā IgG vai monomēra IgA, ko var atrast cūku serumā, kas liecina, ka IgA polimēra struktūra ir labvēlīga vīrusa pēcnācēju šķērssavienošanai. uz HA, kas izteikts uz inficētās šūnas virsmas [31–33]. Tāpēc vietējā IgA antivielu reakcija ir neatņemama sastāvdaļa aizsardzībā pret infekciju ar IAV, un tiek uzskatīts, ka tā ir korelācija cilvēku aizsardzībai [34].

Tomēr risks, lietojot LAIV, ir iespēja mainīties ar cirkulējošiem celmiem. Filoģenētiskā pētījumā ASV tika atklāti jauni celmi apritē, kas bija apvienoti ar vakcīnas celmiem, kas iekļauti Ingelvac Provenza™ [26]. No elastāzes atkarīgā LAIV platforma samazina šo risku, jo elastāzes proteīna cūku elpceļos ir ļoti maz, tāpēc vakcīnas vīrusu replikācija ir ļoti ierobežota, kā arī laika posms pārgrupēšanai. Turpmākajos pētījumos tiks novērtēts šīs divvērtīgās vakcīnas pārdalīšanas risks, kā arī tas, kā šī vakcīna iztur MDA klātbūtnē. Būtu arī interesanti pārbaudīt šīs vakcīnas šūnu izraisīto reakciju, jo tā ir viena no galvenajām LAIV priekšrocībām. Noslēgumā jāsaka, ka divvērtīgā elastāzes atkarīgais LAIV paplašināja aizsardzību uz jauniem klīniskiem izolātiem, kas atrasti Kanādas rietumos, un aizpilda dažus trūkumus cūku gripas vakcīnu tirgū.

Autora ieguldījums:

Konceptualizācija, YZ; metodoloģija, YZ un LA; formālā analīze, LA; izmeklēšana, LA un UB-C.; resursi, SD; rakstīšana — oriģinālā projekta sagatavošana, LA; rakstīšana — pārskatīšana un rediģēšana, YZ, UB-C. un SD; uzraudzība, YZ; finansējuma iegūšana, YZ Visi autori ir izlasījuši un piekrituši publicētajai manuskripta versijai.

Finansējums:

Šo pētījumu finansēja Lauksaimniecības attīstības fonds (ADF), Saskačevanas Lauksaimniecības ministrija. LA daļēji atbalsta Saskačevanas Universitātes Sabiedrības veselības skolas Vaccinology and Immunotherapeutics (V&I) stipendija. VIDO saņem darbības finansējumu no Saskačevanas valdības, izmantojot Innovation Saskatchewan un Lauksaimniecības ministriju, un no Kanādas Inovāciju fonda, izmantojot galvenās zinātnes iniciatīvas savam CL3 objektam (InterVac).

Institucionālās pārbaudes padomes paziņojums:

Nav piemērojams.

Paziņojums par datu pieejamību:

Visi šī pētījuma dati un analīze ir sniegti šajā rakstā.

Pateicības:

Mēs vēlamies pateikties VIDO veterinārārstiem un dzīvnieku tehniķiem par visu darbu veikšanu ar dzīvniekiem mūsu izmēģinājumos ar dzīvniekiem. Šis darbs ir publicēts ar VIDO direktora atļauju kā manuskriptu sērija #1005.

Interešu konflikti:

Autori paziņo, ka nav interešu konflikta.

Atsauces

Webster, RG Gripas vīruss: pārnešana starp sugām un nozīme nākamās cilvēku pandēmijas rašanās gadījumā. Arch. Virol. Suppl. 1997, 13, 105–113. [PubMed]

2. Li, Y.; Robertsons, I. Cūku gripas epidemioloģija. Anim. Dis. 2021, 1., 21. [CrossRef] [PubMed]

3. Donovan, T. Gripas loma cūku audzēšanas darbībā; Minesotas Universitāte: Mineapolisa, MN, ASV, 2005.

4. Gracia, JCM; Pīrs, DS; Masic, A.; Balasch, M. A gripas vīruss cūkās: epidemioloģija, izaicinājumi un vakcinācijas stratēģijas. Priekšpuse. Vet.-Sci. 2020, 7, 647. [CrossRef] [PubMed]

5. Ma, W. Cūku gripas vīruss: pašreizējais stāvoklis un izaicinājums. Virus Res. 2020, 288, 198118. [CrossRef]

6. Suzuki, Y.; Ito, T.; Suzuki, T.; Holande, RE; Chambers, TM; Kiso, M.; Išida, H.; Kawaoka, Y. Sialskābes sugas kā A gripas vīrusu saimniekdatora diapazona noteicējs. J. Virols. 2000, 74, 11825–11831. [CrossRef]

7. Saule, H.; Sjao, Y.; Liu, J.; Van, D.; Li, F.; Van, C.; Li, C.; Žu, J.; Dziesma, J.; Saule, H.; un citi. Izplatīts Eirāzijas putniem līdzīgs H1N1 cūku gripas vīruss ar 2009. gada pandēmijas vīrusa gēniem, kas veicina cilvēku inficēšanos. Proc. Natl. Akad. Sci. ASV 2020, 117, 17204–17210. [CrossRef]

8. Henrici, D.; Petričs, PP; Lūiss, NS; Grāfs, A.; Pesija, A.; Stariks, E.; Breitaupts, A.; Strebelovs, G.; Lutermans, C.; Pārkers, LMK; un citi. Eiropas mājas cūku populāciju uzraudzība identificē potenciāli zoonotisko cūku gripas A vīrusu rezervuāru. Šūnu saimniekmikrobi 2020, 28, 614–627.e6. [CrossRef]

9. Vincents, AL; Ma, V.; Lāgers, KM; Janke, BH; Richt, JA Cūku gripas vīrusi: Ziemeļamerikas perspektīva. Adv. Virus Res. 2008, 72, 127–154.

10. Rajao, DS; Andersons, TK; Kitikūns, P.; Stratons, Dž.; Lūiss, NS; Vincents, AL. Mūsdienu cūku H1 gripas vīrusu antigēna un ģenētiskā evolūcija Amerikas Savienotajās Valstīs. Virusoloģija 2018, 518, 45–54. [CrossRef]

11. Mena, I.; I Nelsons, M.; Quezada-Monroy, F.; Dutta, J.; Kortess-Fernandess, R.; Lara-Puente, JH; Kastro-Peralta, F.; Cunha, LF; Trovao, NS; Locāno-Dubernards, B.; un citi. 2009. gada H1N1 gripas pandēmijas izcelsme cūku vidū Meksikā. Elife 2016, 5, e16777. [CrossRef]

12. Nelsons, MI; Culhane, MR; Trovao, NS; Patnayak, DP; Halpin, RA; Līns, X.; Shilts, MH; Das, SR; Detmer, SE A (H1) gripas vīrusu rašanās un attīstība cūkām Kanādā un Amerikas Savienotajās Valstīs. J. ģenerālis Virols. 2017, 98, 2663–2675. [CrossRef] [PubMed]

13. Čauhans, RP; Gordon, ML Sistemātisks pārskats, kurā analizēta gripas vīrusu izplatība un cirkulācija cūku populācijā visā pasaulē. Patogens 2020, 9, 355. [CrossRef]

14. Landreth, S.; Detmer, S.; Gerdts, V.; Zhou, Y. Divvērtīgā dzīvā novājināta gripas vīrusa vakcīna aizsargā pret H1N2 un H3N2 vīrusu infekciju cūkām. Veterinārs. Microbiol. 2020, 253, 108968. [CrossRef] [PubMed]

15. Makkormiks, K.; Dzjans, Z.; Žu, L.; Lawson, SR; Langenhorsts, R.; Ransburgh, R.; Bruņiks, C.; Treisija, MC; Hurtigs, HR; Mabee, LM; un citi. Rekombinanto A tipa gripas vīrusu uzbūve un imunogenitātes novērtējums, kas satur himēriskos hemaglutinīna gēnus, kas iegūti no ģenētiski atšķirīgiem gripas A H1N1 apakštipa vīrusiem. PLoS ONE 2015, 10, e0127649. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com