Unikāls acilēts flavonola glikozīds no Prunus Persica (L.) Var. Floridas princis: jauns cieto lipīdu nanodaļiņu kosmētiskais sastāvs ādas kopšanai, 1. daļa

Apr 14, 2023

Anotācija: Polifenoli ir zināmi uztura antioksidanti. Tie nesen ir izraisījuši ievērojamu interesi par lietojumiem, lai novērstu ādas novecošanos un hiperpigmentāciju, ko izraisa saules UV starojums. Prunus persica (L.) lapas tiek uzskatītas par blakusproduktiem, un tika ziņots, ka tām piemīt ievērojama antioksidanta aktivitāte, pateicoties augstajam polifenolu saturam. Šī pētījuma mērķis bija izstrādāt kosmētisku pretnovecošanās un ādu balinošu krēmu, izmantojot Prunus persica (L.) (PPEE) etanola lapu ekstraktu, kas iepildīts cietās lipīdu nanodaļiņās (SLN), lai uzlabotu ādas piegādi. PPEE ķīmiskā izpēte uzrādīja ievērojami augstu kopējo fenola un flavonoīdu saturu ar ievērojamām antioksidantu aktivitātēm (DPPH, ABTS un karotīna testi). Unikāls acilēts kaempferola glikozīds ar retu struktūru, kaempferols 3-O- -4C1-(600 -O-3,4-dihidroksifenilacetilglikopiranozīds) ( KDPAG) tika izolēts pirmo reizi, un tā struktūra tika pilnībā noskaidrota. Tas ir pirmais piemērs acilēšanai ar 3,{{10}}dihidroksifeniletiķskābi flflavonoīdu ķīmijā. In vitro citotoksicitātes pētījumi pret cilvēka keratinocītu šūnu līniju atklāja PPEE un PPEE-SLN netoksicitāti. Turklāt PPEE, PPEE-SLN un KDPAG uzrādīja labu anti-elastāzes aktivitāti, kas ir salīdzināma ar N (metoksisukcinil)-Ala-Ala-Pro-Val-hlormetilketonu. Turklāt PPEE-SLN un KDPAG uzrādīja ievērojami (p < 0,001) augstākas antikolagenāzes un antitirozināzes aktivitātes, salīdzinot ar attiecīgi EDTA un kojskābi. Dažādas PPEE-SLN krēmu formulas (2 procenti un 5 procenti) tika novērtētas attiecībā uz iespējamo pretgrumbu aktivitāti pret UV izraisītu fotonovecošanos peles modelī, izmantojot grumbu noteikšanas metodi, un tika pierādīts, ka tās piedāvā ļoti nozīmīgu aizsargājošu efektu pret UV, kā tas ir pierādīts. audu biomarķieru (SOD) un histopatoloģisku pētījumu rezultātā. Tādējādi pašreizējais pētījums parāda, ka Prunus persica lapu blakusprodukti ir interesants, vērtīgs resurss dabīgām kosmētikas sastāvdaļām. Tas nodrošina saistītus datus, lai turpinātu pētīt PPEE-SLN iespējamo drošu lietošanu lokālos pretnovecošanās kosmētikas preparātos ar uzlabotām ādas caurlaidības īpašībām.

Saskaņā ar attiecīgiem pētījumiem,cistancheir izplatīta zāle, kas pazīstama kā "brīnumaugs, kas pagarina mūžu". Tās galvenā sastāvdaļa ircistanozīds, kam ir dažādi efekti, piemēram,antioksidants, pretiekaisuma, unimūnās funkcijas veicināšana. Mehānisms starp cistanche unādas balināšanaslēpjas antioksidanta iedarbībācistanche glikozīdi. Melanīns cilvēka ādā veidojas, oksidējoties tirozīnam, ko katalizētirozināze, un oksidācijas reakcijā ir nepieciešama skābekļa līdzdalība, tāpēc skābekļa brīvie radikāļi organismā kļūst par svarīgu faktoru, kas ietekmē melanīna ražošanu. Cistanche satur cistanozīdu, kas ir antioksidants un var samazināt brīvo radikāļu veidošanos organismā, tādējādikavē melanīna ražošanu.

how to take cistanche

Noklikšķiniet uz Cistanche papildinājums balināšanai

Vairāk informācijas:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Atslēgvārdi:kaempferola 3-O- -4C1-(600 -O-3,4-dihidroksifenilacetilglikopiranozīda) blakusprodukti; cietās lipīdu nanodaļiņas; antioksidants; ar ādu saistīti fermenti in vitro; in vivo pretgrumbu līdzeklis

1. Ievads

Ādas novecošanās ir sarežģīts daudzfaktoru progresējošs process, kas katalizē fiziskas izmaiņas ādā un saistaudos [1]. To iedala iekšējā un ārējā novecošanā.

Ārējo ādas novecošanos galvenokārt izraisa vides faktori, piemēram, piesārņotāji, smēķēšana un dzīves stress, vai galvenokārt atkārtota UV starojuma iedarbība (fotonovecošanās) [2].

Pārmērīga UV starojuma iedarbība stimulē reaktīvo skābekļa sugu (ROS) pārprodukciju, kas izraisa endogēnu oksidatīvo stresu ādas audos, izraisot ekstracelulārās matricas (ECM) komponentu degradāciju. ECM noārdīšanās ir tieši saistīta ar ādas novecošanos un ir atbildīga par noteiktu enzīmu, piemēram, kolagenāzes, elastāzes un tirozināzes, aktivitātes palielināšanos, kas ir iesaistīti ādas novecošanā. Šīs dermas enzīmu aktivācijas izraisa elastīna un kolagēna līmeņa pazemināšanos, kas izraisa ādas elastības un stiprības zudumu un grumbu parādīšanos [3]. Arī pārmērīgas melanīna ražošanas un ādas iedeguma indukcija izraisa ādas hiperpigmentāciju.

Tāpēc ādas novecošanos var novērst ar antioksidantiem ar brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitāti, kam var būt liela nozīme ar vecumu saistītu slimību, kas saistītas ar ROS, aizsardzībā un terapijā [4]. Otrs veids, kā aizkavēt novecošanos, ir elastāzes, kolagenāzes un tirozināzes inhibitoru izmantošana, kas ir ļoti spēcīgi kandidāti pretgrumbu un ādas balināšanas aktivitātēm, kas atbalsta ādas elastības saglabāšanu un var būt izplatīta pieeja pigmentācijas traucējumu novēršanai [5].

Ir ziņots, ka dabiskie antioksidanti, kas izolēti no augiem, mazina UV starojuma izraisīto fotonovecošanās risku gan in vitro, gan in vivo [6], un tie ir ieteicami kā kosmētiskās sastāvdaļas nekā sintētiskie antioksidanti izmaksu un blakusparādību ziņā. Turklāt daudzi in vitro un in vivo pētījumi ir parādījuši, ka fenola savienojumi, piemēram, fenola skābes, flavonoīdi un tanīni, var noņemt brīvos radikāļus un inhibēt elastāzes, kolagenāzes un tirozināzes enzīmus [7].

Ir ziņots par dabisko antioksidantu izmantošanu lokālajos preparātos, lai aizsargātu ādu pret oksidatīvo stresu, ko izraisa ārēji faktori [8]. Tomēr lielākā daļa antioksidantu molekulu ir iedzimtas nestabilas un var viegli oksidēties, veidojot neaktīvus savienojumus, pirms nonāk darbības vietā, kas apgrūtina to formulēšanu piemērotā un stabilā kosmētikas līdzeklī. Šie atklājumi pierāda, ka ir vajadzīgas unikālas piegādes sistēmas, lai uzlabotu šos antioksidantu preparātus [9].

Vairāki faktori ietekmē lokāli lietojamo polifenolu caurlaidību; fenola apakšklase, tās struktūra, molekulārais lielums un glikozīda vai aglikona forma, kā arī citi preparāta komponenti. Tomēr mijiedarbība ar ādas komponentiem, izmantojot fizikālo un ķīmisko metožu maisījumu, varētu uzlabot caurlaidību, atgriezeniski izjaucot stratum corneum slāņa barjeras struktūru. Iekapsulēšanas metodes ir viena no caurlaidību uzlabojošajām metodēm, ko visbiežāk izmanto, lai viegli stabilizētu polifenolus uzglabāšanas laikā, palielinot to antioksidantu iedarbību, uzsūkšanos caur ādu un iekļūšanu kosmētiskajā un lokālajā terapijā. Jaunizstrādātās iekapsulēšanas tehnoloģijas ietver nanoemulsijas, transferāzes, cietās lipīdu nanodaļiņas, nanokristālus un ribosomas [10].

cistanche side effects reddit

Cietās lipīdu nanodaļiņas (SLN) ir stabila ādas produktu piegādes sistēma. SLN tiek uzskatīti par daudzsološiem zāļu nesējiem lokālai lietošanai, pateicoties to fotostabilitātei, kontrolētas izdalīšanās īpašībām, oklūzijai, smaku maskējošam efektam un aktīvo sastāvdaļu iekļūšanas uzlabošanai caur ādu, palielinot tās mitrināšanu bez ādas kairinājuma pazīmēm, kā arī vienkāršībai. ražošana, zema toksicitāte un fiziskā stabilitāte [9,11].

Tāpēc ir ļoti svarīgi meklēt atbilstošu augu polifenolu avotu kā iespējamos terapeitiskos pretgrumbu un ādas balināšanas līdzekļus, izmantojot nanonesēju ievadīšanas sistēmu, kā arī tās spēju uzlabot ķermeņa antioksidantu sistēmu.

Pasaulē ir aptuveni 2000 persiku šķirņu [12]. Prunus (Rosaceae) ir slavena augu ģints, kurā ietilpst ar fenolu bagātas sugas [13–15]. Dažas šīs ģints sugas Ēģiptē audzē to ēdamo augļu vai dekoratīvo augu iegūšanai [16].

Prunus persica (L.) Partija (PP) ir mazs koks ar kailiem zariem un īsu stumbru, platu, noapaļotu vainagu [12], ko parasti audzē Rietumāzijā, Eiropā, Indijā un Ziemeļāfrikā [17]. Tradicionāli tās lapas ir izmantotas kā diurētiskie līdzekļi, caurejas līdzekļi, vermifūgas, insekticīdi, sedatīvi līdzekļi, pret garo klepu, leikodermijas ārstēšanai un kā febrifūgas līdzekļi [17]. Turklāt farmakoloģiskie pētījumi par lapām raksturoja to in vivo pretdiabēta, spazmogēno iedarbību, pretiekaisuma, antikoagulantu, hepatoprotektīvu, pretmalārijas, pretastmas un in vitro citotoksisku, pretmikrobu un slāpekļa oksīdu inhibējošu iedarbību ar ievērojamu antioksidantu iedarbību. [18–22].

Ir veikti daudzi pētījumi, lai izpētītu PP sekotāju, augļu un sēklu fenola profilu, to antioksidantu aktivitāti, kā arī farmakoloģiskās un uzturvērtības [13,14,23,24]. Tomēr par lapām bija pieejami ļoti maz datu. Līdz šim ir pieejams viens ziņojums, kurā aprakstīta piecu flavonola glikozīdu izdalīšana no etanola lapu ekstrakta [25]. Papildus ir raksturoti fenola savienojumi, tostarp fenolskābes un flflavonoīdi, izmantojot HPLC-MS analīzi ar flflavonolu kā dominējošām vielām starp visiem noteiktajiem savienojumiem [20,26].

Turklāt, lai gan ir ziņots, ka PP sēklām, augļiem, sekotājiem un citām sugām ir in vivo aizsargājoša iedarbība pret UV izraisītu fotonovecošanos un in vitro pretgrumbu un ādas balināšanas aktivitātes [15, 23, 27–32], nekad nav ziņots par PP lapu ekstraktu.

Liels daudzums PP lapu ir blakusprodukti, kas iegūti persiku koku audzēšanā un augļu konservu rūpniecībā [33]. PP sēklu, augļu un citu lapu šķirņu blakusprodukti ir novērtēti kosmētikā un kā diētiskā pārtika iespējamai valorizācijai [32, 34, 35]. Tomēr, cik mums ir zināms, lapu blakusprodukti PP var. Florida Prince nekad nav ticis pētīts un varētu būt interesants fitoķīmisko vielu avots. Salīdzinot ar citām nozarēm, kosmētikas tirgus ir pieejamāks un paplašinās, un tas var būt avots blakusproduktu valorizācijai [15]. Ādas kopšanas un ādas novecošanas produkti ir daži no vissvarīgākajiem kosmētikas potenciāliem.

Turpinot mūsu pētījumu par Ēģiptes ēdamo augu polifenoliem [36] un tā kā PP lapas tiek uzskatītas par blakusproduktiem un tika ziņots, ka tām ir ievērojama antioksidanta aktivitāte galvenokārt to augstā flavonolu satura dēļ, šī pētījuma mērķis ir pakļaut PPEE plašai fitoķīmiskai iedarbībai. tā fenola profila analīzi un iekļaut PPEE ielādētos SLN kā unikālu ādas piegādes sistēmu. Turklāt tika novērtēts pretnovecošanās un ādas balināšanas kosmētikas potenciāls, pētot PPEE, PPEE-SLN un izolēto sastāvdaļu in vitro antioksidantu aktivitāti, kā arī novērtējot to inhibējošo iedarbību pret ar ādu saistītiem enzīmiem. Papildus PPEE-SLN iekļaušanai lokālā kosmētiskā pretnovecošanās krēmā un produkta drošuma pārbaudei, kā arī PPEE-SLN krēmu preparātu iespējamās in vivo pretgrumbu aktivitātes novērtēšanai pret UV izraisītu fotonovecošanos. peles modelis. Tas varētu sniegt datus, lai turpinātu pētīt PPEE-SLN lapu iespējamo izmantošanu lokālos preparātos ar uzlabotu ādas caurlaidību.

2. Materiāls un metodes

2.1. Ģenerālis

NMR spectra were acquired in DMSO-d6 on an Avance 400 NMR spectrometer (Bruker bio spin Gmbh, Rheinstetten, Germany) at 400 MHz. Standard pulse sequence and parameters were used to obtain one-dimensional 1H and 13C-APT, and two-dimensional HSQC and HMBC spectra. 1H chemical shifts (δ) were measured in ppm, relative to TMS, and 13C-NMR chemical shifts to DMSO-d6 and were converted to TMS scale by adding 39.49. ORAC measurements were performed on a FLUOstar Omega Microplate Reader (BMG LABTECH Gmbh, Ortenberg, Germany). A Shimadzu UV–Visible-1601 spectrophotometer (Shimadzu, Kyoto, Japan) was used for recording the UV spectra. Chromatographic analysis (PC) was carried out on Whatman No. 1 paper, using solvent systems: (1) H2O; (2) 6% HOAc; (3) BAW (n-BuOH–HOAc–H2O, 4:1:5, upper layer). For 2-DPC, solvent 2 was used for the first way and solvent 3 for the second way. Materials: chemicals, solvents, elastase, collagenase, tyrosinase enzymes, and reference drugs (EDTA, kojic acid, and N-(Methoxysuccinyl)-Ala-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone with purities >95 procenti) tika iegūti no Sigma-Aldrich (Sigma-Aldrich, MO, ASV).

cistanche for sale

2.2. Augu materiāli

Prunus persica (L.) Batsch var. Florida Prince tika savākta 2020. gada jūnijā no EL-Hashash Farm, El-Bastan ieejas, Kairas-Aleksandrijas tuksneša ceļš K. 103, 18 k. iekšā, Ēģipte. Vaučera paraugs (4643) tika ievietots Floras un fitotaksonomijas pētījumu departamenta (CAIM), Dārzkopības pētniecības institūta Lauksaimniecības pētījumu centra herbārijā, Gizā, Ēģiptē. Prof. Dr. Abdel-Haleem Abdel-Mogaly, Lauksaimniecības pētījumu centra botānikas profesors, ir apstiprinājis savu identitāti.

2.3. Augu ekstrakta sagatavošana 

PP lapu parauga (2 kg) ekstrakcija tika veikta, izmantojot karstu EtOH/H2O (3:1, trīs reizes, katra pa 3 l, 8 stundas, ar atteci), kam sekoja šķīdinātāja iztvaicēšana pazeminātā spiedienā 50 ◦C, iegūstot amorfu ekstraktu. , PPEE, ar brūngani tumšu krāsu (101 g).

2.4. Kopējā polifenolu satura (TPC) noteikšana 

Folina-Ciocalteu reaģents, kā aprakstījis Li et al., [37], tika izmantots, lai novērtētu kopējā fenola satura daudzumu PPEE, kas izteikts kā mg ekvivalenta gallskābes/g sausā ekstrakta.

2.5. Kopējā flavonoīdu satura (TFC) noteikšana

Kopējā flavonoīdu satura noteikšanai tika izmantota alumīnija hlorīda kolorimetriskā metode, ko aprakstīja Bahromun et al., [38]. Rezultāti ir norādīti kā mg ekvivalenta kvercetīna/g sausā ekstrakta.

2.6. PPEE frakcionēšana un 1. savienojuma izolēšana

Iegūtais sausais materiāls (101 g), izšķīdināts 150 ml MeOH, tika uzklāts uz MCI gēla kolonnas (CHP20P, 75–150 mm; Mitsubishi Chemical Co., Diseldorfa, Vācija) un eluēja ar MeOH/H2O maisījumiem ar polaritāti, kas samazinās. Tā rezultātā veidojas četras galvenās frakcijas (I–IV). I frakcijas eluēšana tika veikta, izmantojot 30 procentus MeOH/H2O, 22 g; II frakcija tika eluēta ar 50% MeOH ūdens šķīdumu, 3,1 g; III frakcija ar 70% MeOH ūdens šķīdumu (4,6 g); frakcija IV, tika eluēta ar 90% MeOH ūdens šķīdumu (1,9 g). Koncentrētu III frakcijas šķīdumu atstāja uz nakti istabas temperatūrā, iegūstot 1. savienojuma neapstrādātu paraugu (765 mg). Tam seko filtrēšana un atkārtota izšķīdināšana verdošā EtOH, pēc tam atstāta istabas temperatūrā, lai iegūtu brūngani dzeltenu tīru 1 paraugu (530 mg).

2.7. Kempferola 3-O- -4C1-(6"-O-3,4-dihidroksifenilacetilglikopiranozīda) identifikācija (1)

R f vērtības: 34 (H2O), 39 (15 procenti HOAc), 44 (BAW). UV in MeOH λmax nm: 268, 316, 368; NaOAc: 267, 317, 369; NaOAc plus H3BO3: 268, 318, 340; NaOMe: 277, 37{186}}. Normāla skābes hidrolīze deva glikozi (Co-PC), kempferolu (Co-PC) un 3,4-dihidroksifeniletiķskābi (UV un 1H NMR spektri), UV λmax (MeOH): 224, 282 nm; λmax (MeOH plus A1C13): 220, 250 (sh), 291 nm; (MeOH plus NaOAc plus H3BO3) 211, 234 (sh), 288 nm. 1H KMR: δ ppm: 3,40 (s, 2H, C-H2), 6,60 (m, 3H aromātisks, H-2, H-5, H-6), - glikozidāzes apstrāde 1 [liofilizēts, hromatogrāfiski tīrs, sāli nesaturošs mandeļu enzīms, BDH Merck, Poole Dorset, UK (EC 3.2.1.21)] 24 stundas, 37 ◦C acetāta buferšķīdumā, pH 5,1: savienojums tika iegūts nemainīts. 1H-NMR no 1: δ ppm: kaempferola daļa: 8,0,3 (d, J=8 Hz, H-20 un H-60), 6,89 (d, J=8 Hz, H-30 un H-50), 6,45 (d, J=2 Hz, H-6), 6,21 (d, J=2 Hz, H -8); glikozes daļa: 5,42 (d, J=8 Hz, anomērs protons H-100), 4,04 (dd, J=12 Hz un J=4,5 Hz, H{{ 88}} a), 4,2 (d, J=12 Hz, H-600 b); 3,4-dihidroksifeniletiķskābes daļa: 3,46 (plats singlets, ∆ν1/2=4 Hz, CH2-7), 6,67 (m, 3H, H-2000, H{ {104}}, H{105}}). 13C-NMR 1: δ ppm: kaempferola daļa: 156,65 (C-2), 133,5 (C-3), 178,01 (C-4), 161,69 (C{120}} ), 99,13 (C-6), 164,58 (C-7), 93,90 (C-8), 156,71 (C-9), 104,39 (C-10 ), 121,34 (C-10), 133,66 (C-20 un C-60), 161,63 (C-40), 115,20 (C-30 un C{ {149}} ); glikozes daļa: 99,13 (C-100), 73,85 (C-200), 76,88 (C-300), 70,35 (C-400), 76,96 (C{{164}). } ), 62,25 (C-600); 3,4-dihidroksifeniletiķskābes daļa: 127,87 (C-1000), 116,35 (C-2000), 145,33 (C-3000), 148,92 (C{181}). }), 121,57 (C-5000), 117,0 (C-6000), 176,26 (C=O), 40,02 (C-H2).

2.8. In-Vitro pētījumi

2.8.1. Citotoksicitātes novērtējums cilvēka keratinocītos

Cilvēka keratinocītu šūnu līnija tika iegūta no VACSERA CO. (The Egyptian Company for the Production of Vaccines, Sera un Drugs, Giza, Egypt). MTT tests tika veikts PPEE un PPEE-SLN saskaņā ar Mostafa et al. metodi. [36].

2.8.2. In vitro antioksidantu testi

DPPH tests tika veikts, izmantojot Yardpiroon et al. [39], un C vitamīns tika izmantots kā pozitīva kontrole. ABTS testā tika izmantota Re et al. [40] metode, C vitamīns tika izmantots kā standarts. Karotīna balināšanas testā tika izmantota metode, ko aprakstīja Soulef et al., [14] pozitīvās kontroles BHT klātbūtnē. Katra testa parauga vērtība tika parādīta kā inhibīcijas līkne pie 50 procentiem vai IC50.

2.8.3. Anti-elastāzes, anti-kolagenāzes un anti-tirozināzes aktivitāšu novērtējums

Pretnovecošanās un ādas balināšanas aktivitātes tika novērtētas pēc metodēm, par kurām ziņo Mostafa et al. [41]. Anti-elastāzes testam 1 µg/ml cilvēka leikocītu elastāzes inkubēja ar HEPES buferšķīdumu pH 7,5 un katru no pārbaudītajiem ekstraktiem vai 1,4 mg/mL N-metoksisukcinil-Ala-Ala-Pro-hlormetilketonu (standarta inhibitoru). 96-iedobes plāksne 20 minūtes istabas temperatūrā, pirms kā substrāts pievieno 100 µL 1 mM N-metoksisukcinil-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilīda. Pēc 40 minūšu inkubācijas absorbcija tika mērīta pie 405 nm, izmantojot tukšo paraugu, kurā nebija ekstrakta/inhibitora. Pārbaudītie paraugi tika izmantoti koncentrācijas diapazonā no 25 līdz 300 µg/ml.

Antikolagenāzei 1 mg/ml 1. tipa kolagenāzes no Clostridium histolyticum, tā buferšķīduma (pH 7,4) un katrs no pārbaudītajiem ekstraktiem vai 1,4 mg/mL EDTA (standarta inhibitors) tika inkubēti 20 minūtes 37 ◦C temperatūrā pirms tam. pievienojot 100 µL FALGPA kā substrātu. Maisījumu inkubēja vēl 1 stundu 37 ◦ C temperatūrā, pēc tam pievienoja 200 µL 2 procentu ninhidrīna 200 mM citrāta buferšķīdumā (pH 5) un ievieto verdoša ūdens vannā uz 5 minūtēm. Pēc tam šķīdumam ļāva atdzist. Pēc tam pievienoja 200 µl 50 procentu izopropanola un izmērīja absorbcijas pie 540 nm. Pārbaudītie paraugi tika izmantoti koncentrācijas diapazonā no 25 līdz 300 µg/ml.
Antitirozināzes testam 5600 vienības/ml sēņu tirozināzes inkubēja ar katru no pārbaudītajiem ekstraktiem vai 1,4 mg/ml kojskābi (standarta inhibitoru) 15 minūtes 37 ◦C temperatūrā, pirms kā substrātu pievienoja 1 mM L-DOPA. . Izveidotā dopahroma absorbcija tika mērīta pie 475 nm. Pārbaudītie paraugi tika izmantoti koncentrācijas diapazonā no 75 līdz 500 µg/ml.

2.9. PPEE-SLN formulēšana un raksturojums

Formulēšana tika veikta saskaņā ar Choubey et al. [11]. Pirmkārt, glicerilmonostearāts tika izšķīdināts hloroforma-metanola maisījumā (1: 1), un pēc tam etanola ekstrakts tika izkliedēts šajā šķīdumā. Vēlāk organiskie šķīdinātāji tika noņemti, izmantojot rotācijas tvaicētāju, un šķīdumu karsēja. Pēc tam pievienoja Tween 80 un maisījumu maisīja ar ātrumu 3000 apgr./min 30 minūtes un pēc tam homogenizēja 4 stundas pirms filtrēšanas un žāvēšanas. PPEE-SLN raksturojums tika pārbaudīts, novērtējot formas un virsmas morfoloģiju, daļiņu izmēru, polidispersitātes indeksu (PDI), zeta potenciāla analīzi, iesprūšanas efektivitāti (PEE) un Furjē transformācijas infrasarkano (FT-IR) spektroskopijas pētījumus.

2.10. PPEE aktuālo krēmu formulu sagatavošana

2.10.1. PPEE-SLNs krēma formula

Divas krējuma formas (2 procenti un 5 procenti PPEE-SLN) tika sagatavotas, kā parādīts 1. tabulā saskaņā ar Mahawar et al. metodi. [42].

cistanche amazon

2.10.2. PPEE-SLNs krēma novērtēšanas parametri

Organoleptiskās īpašības, krējuma pH, smērējamības pētījumi, viskozitātes tests, homogenitātes tests, plākstera tests (Burchard tests), in vitro ādas caurlaidības pārbaude un stabilitātes pētījumi (ICH vadlīnijas) tika novērtēti saskaņā ar Matangi et al. [43]. Tika veikts mikrobu limita tests saskaņā ar Sekar et al. [44].

2.11. In-Vivo PPEE-SLNs krēma pretgrumbu pētījums

2.11.1. Eksperimentālie dzīvnieki

Piecdesmit kailu peļu tēviņi (HR{{0}}) (4-nedēļu veci), 17–24 g, tika iegūti no VACSERA. Eksperiments tika veikts pēc Oktobra Moderno zinātņu un mākslas universitātes (MSA) ētikas komitejas apstiprinājuma, protokola numura (PG1/EC1/2020PD) izlases lielums tika noteikts saskaņā ar (G. Power) programmatūru. Vienu nedēļu pirms in vivo pretgrumbu pētījuma peles varēja brīvi piekļūt pārtikai un ūdenim, un tās varēja aklimatizēties telpā ar gaisa kondicionētāju (23 ± 2 ◦C). Peles (50) tika iedalītas piecās grupās pēc nejaušības principa (n=10), kā parādīts 2. tabulā. Ārstēšana tika veikta 40 dienas trīs reizes nedēļā ar 0,5 g PPEE-SLNs krēma vai jebkuru citu apstrādi un tika uzklāta. uz muguras peles ādu un pēc tam pakļautas UV starojumam (365 nm).

cistanche para que serve

2.11.2. Grumbu skalas mērīšana

Pirms un pēc lokālas ārstēšanas divas reizes nedēļā tika uzņemtas muguras peles ādas fotogrāfijas. Ādas grumbu klasifikācija tika novērtēta, izmantojot Bissett vizuālo grumbu skalu [45]. Vērtēšanas skalas pamatā bija grumbu (smalka vai rupja) un keratozes tekstūra, kas sadalīta piecās pakāpēs: sliktāka (-2), nedaudz sliktāka (-1), bez izmaiņām (0), nedaudz uzlabota ( plus 1), un uzlabots ( plus 2).

2.11.3. Histoloģiskais novērtējums

Histoloģiskais novērtējums tika veikts saskaņā ar Elder et al. metodi. [46].

2.11.4. Superoksīda dismutāzes (SOD) aktivitāte

SOD aktivitāte tika novērtēta saskaņā ar Ukeda et al. metodi. [47].

2.12. Statistiskā analīze

Visi paraugi tika analizēti trīs eksemplāros. Dati tika attēloti kā vidējie ± standarta novirze (SD). IC50 vērtības (koncentrācija, kas nepieciešama 50 procentu inhibīcijai) tika aprēķinātas, izveidojot lineāro regresijas līkni, kas parāda parauga koncentrāciju un procentuālo inhibīciju. Statistiskais salīdzinājums tika veikts, izmantojot vienvirziena dispersijas analīzi (ANOVA), ko pabeidza Tukey tests vairākiem salīdzinājumiem. Dažādas antioksidantu aktivitāšu un enzīmu inhibīcijas testu vērtības tika salīdzinātas, izmantojot Pīrsona korelācijas testu, un atšķirības tika uzskatītas par statistiski nozīmīgām pie p < 0,05. Lai veiktu šīs analīzes, tika izmantota GraphPad Prism 5.03 operētājsistēmai Windows (GraphPad Software, Sandjego, CA, ASV).

3. Rezultāti

3.1. Kopējais fenola un flavonoīdu saturs

TPC tika noteikts spektrofotometriski PPEE kā 387,5 ± 4,28 mg GAE/g ekstraktā. Arī TFC tika lēsts kā 241,7 ± 3,25 mg QE / g ekstrakta. PPEE uzrādīja augstu fenola un flflavonoīdu savienojumu koncentrāciju. Abi rezultāti atbilst vērtībām, par kurām iepriekš ziņots PP lapu ekstraktiem, apstiprinot, ka flavonoīdi ir galvenās ķīmiskās sastāvdaļas PP lapās [20].

rou cong rong benefits

3.2. Izolēšana un struktūra Kempferola izskaidrošana

3-O- - 4C1-(600 -O-3,4-dihidroksifenilacetilglikopiranozīds), 1. savienojums

Pēc visu zināmo struktūru izšķiršanas šajā ekstraktā unikālo, potenciāli bioloģiski aktīvo savienojumu meklēšana kļuva efektīvāka. Saskaņā ar saņemtajiem 2-DPC analītiskajiem datiem tika konstatēts, ka PPEE fenoli vislabāk frakcionēti MCI gēla kolonnā, kas tika eluēta ar MeOH/H2O maisījumiem ar polaritāti, kas samazina polaritāti, un šajā procesā tika iegūtas četras galvenās kolonnas frakcijas. Amorfs materiāls tika atdalīts no III frakcijas karstā koncentrāta (desorbēts no kolonnas ar 70% MeOH ūdens šķīdumu), stāvot nakti istabas temperatūrā. Divas reizes kristalizējot šo materiālu no verdoša EtOH, tika iegūts hromatogrāfiski tīrs brūngani dzeltens amorfs pulveris 1. Tam bija hromatogrāfiskas īpašības (tumši purpursarkans plankums uz PC UV gaismā, kļūst citrondzeltens, kūpinot ar amonjaka tvaikiem ar mērenu migrāciju ūdens un organiskos šķīdinātājos. ) un krāsu reakcijas (citrondzeltena krāsa ar Naturstoff reaģentu), kas ierosināja kaempferola atvasinājumu ar brīvu 40 hidroksilgrupu un O-aizvietotu 3-O pozīciju. UV spektri 1 MeOH (268 nm, 316 nm, 360 nm) un pēc diagnostikas nobīdes reaģentu pievienošanas [48] bija tipiski 3-O-glikozilētā kaempferola spektriem (pozitīva nobīde ar NaOAc, stabila nobīde ar NaOMe). Normāla skābes hidrolīze 1 (2 N HCl ūdens, 3 h, 100 ◦C) radīja glikozi (salīdzinošā papīra hromatogrāfija, Co-PC), kempferolu un 3,4-dihidroksifeniletiķskābi (UV). absorbcijas un 1H-NMR spektri atsevišķiem paraugiem, kas izolēti ar hidrolizāta etilacetāta ekstrakta preparatīvām papīra hromatogrammām). Līdz ar to 1 ir kaempferola 3-O-(3,4-dihidroksifenilacetilglikozīds). Savienojums tiek iegūts nemainītā veidā pēc 24 stundu inkubācijas ar -glikozidāzes enzīmu, tādējādi pierādot, ka glikozildaļa ir acilēta. Molekulārā formula 1 tika secināta par C29H26O14 no tās negatīvā HRESI masas spektra, kas uzrādīja [MH]− jonu pie m/z=597,5302 (aprēķināts C29H25O14, 597,5015). ESI-MS eksperiments (negatīvo jonu režīms) deva kvazimolekulāro jonu maksimumu [MH]− pie m/z: 597, kas norāda uz 1 molekulmasu 598. Papildu fragmentu jonu pīķi ESI-MS-MS spektrā tika iegūti. novērots pie m/z: [MH]−: 447, 167 un 285, kas atbilst dihidroksifenilacetāta zudumam no pamatsavienojuma 1, savukārt fragmentu joni pie m/z 285 un m/z 167 tika attiecināti uz kaempferolu un dihidroksifeniletiķskābes daļas, attiecīgi. Lai noteiktu visu 1. molekulā esošo daļu piesaistes vietu un ļautu pilnībā piešķirt visas oglekļa un protonu rezonanses, 1. — KMR spektroskopiskā analīze, ieskaitot 1D- 1H un 13C, un 2D-HSQC un HMBC. , pēc tam tika veikts. No pieciem signāliem cukura reģionā starp δ ppm 62,25 un 76,9 un no anomēra oglekļa signāla, kas atrodas pie 99,13 ppm, tika pierādīts, ka cukura daļai jābūt pievienotai kaempferola 3. pozīcijā, jo šis C-3 oglekļa signāls. tika pārvietots uz augšu, un attiecīgie orto un para-oglekļa signāli tika novirzīti uz leju (skatīt eksperimentālo). Līdzīgas izmaiņas ir labi zināmas no Nawwar et al. [48]. To vēl vairāk apstiprināja HMBC spektrā atpazītās 3 J liela attāluma korelācijas, kurās tika atrasts viens šķērssignāls, kas korelē anomēra glikozes protona H-100 signālu pie δ 5,42 ar flavonola C-3 oglekli. signāls pie δ 133,5. Glikozes daļas konfigurācija tika iegūta no C-100 ķīmiskās nobīdes pie 99, 13 ppm. Cukura oglekļa ķīmiskās nobīdes vērtības apstiprināja šīs daļas piranozes formu [48]. 1H-NMR spektrs 1 arī bija ar ierosināto struktūru. Anomēra protonu signāla ķīmiskā nobīde pie δ 5,42 ppm (d, J=8 Hz) liecināja, ka anomēra ogleklis ir pievienots kaempferola daļai pie C-3 (δppm 133,5) un noteiktā savienojuma konstante 8 Hz, pierādiet glikozes daļas -konfigurāciju. Cukura daļas konformācija ir 4C1, kam seko iepriekš aprakstītās -konfigurācijas.

Turklāt 3,4-dihidroksifeniletiķskābes daļas pievienošana C-600 metilēnglikopiranozes daļai sekoja no šī oglekļa signāla lejupvērstās nobīdes līdz δ ppm 62,25 13C-KMR spektrā. To vēl vairāk apstiprināja krustveida maksimums HMBC spektrā, korelējot metilēnglikozes protonu signālus pie δ 4,04 (H-600 a) un δ 4,2 ppm (H-600 b) ar karbonilgrupas oglekli. 3,4-dihidroksifeniletiķskābes daļa pie δ 176,26 ppm. Šie un iepriekš minētie dati beidzot apstiprināja, ka savienojuma 1 struktūra ir jaunais kaempferols 3-O- - 4C1-(600 -O-3,{ {24}}dihidroksifenilacetilglikopiranozīds (KDPAG), par kuru ziņots pirmo reizi dabā, jo tas atspoguļo pirmo acilēšanu ar 3,4-hidroksifeniletiķskābi saistībā ar flflavonoīdu ķīmiju (1. attēls).

cistanche tubulosa supplement


Plašāka informācija: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Jums varētu patikt arī