Izmaiņas olbaltumvielu pārveidē un karbonskābes kataboliskajos procesos diabēta nieru slimības gadījumā Ⅱ

3. Rezultāti

3.1. Cilvēku subjekti

Nieru audiparaugi no 18 subjektiem ar DKD un 9 atsauces subjektiem bezDKDtika iegūti un pētīti (1. tabula). Vidējais vecums audu iegūšanas brīdī bija 550 gadi subjektiem ar DKD un 50,0 atsauces nefrektomijas subjektiem. Subjektu ar DKD 61,1% bija sievietes un 27,8% bija melnādainie. Lielākajai daļai DKD pacientu bija nodulāra glomeruloskleroze, un apmēram pusei podocītu pēdas procesu izzušana bija lielāka par 80%. Nefrotiskā diapazona proteīnūrija tika novērota 55,6% DKD pacientu. Sākotnējais eGFR bija 63,2 ± 26,2 ml/min. Novērošanas laikā pacienti zaudēja vidēji 14,5 ml/min/gadā eGFR, kas bija vidēji 47,7 mēneši. Kā molekulārā salīdzinājuma grupa tika iegūti deviņi atsauces nefrektomijas paraugi. Šos paraugus novērtēja aklsnieru patologs(CP) un neparādījahistoloģiskie pierādījumispecifiskidiabēta nieresslimība; tomēr klīniskās undemogrāfiskie datipiemēram, rase, proteīnūrija un eGFR nebija pieejami.

JAUNIE AUGI PAR DIABĒTA NIERESSLIMĪBA

3.2. Diferenciālā gēnu ekspresija un ceļa analīze diabēta cilvēka glomerulā un proksimālajā kanāliņā

DKD un atsauces grupās tika veiktas diferenciālās gēnu ekspresijas un ceļu analīzes. Abu grupu lāzera mikrodissektajos glomerulos un proksimālajos kanāliņos tika identificēti atšķirīgi izteikti gēni (DEG) (Papildu tabula S1; https://doi.org/10.6084/m9.figshare.14450190.v1, piekļūts 23 2022. gada janvāris). Zināmie glomerulārie marķieri tika samazināti DKD gadījumā, tostarp nefrīns (NPHS1, 3-kārtīgs samazinājums, p=1,0 × 10-4 ) un fosfolipāzes C epsilons 1 (PLCE1, 2).{18} }samazinājums, p=3,3 × 10−4). Tāpat proksimālie kanāliņu marķieri, tostarp nātrija-ūdeņraža apmaiņas kofaktors 3 (PDZK1, 4.{27}}reižu samazinājums, p=1.9 × 10-5 ) un nātrija-fosfāta kotransporteris (SLC34A1, 3.2-reizes samazinājums, p=8.1 × 10-4 ) tika samazināti DKD gadījumā, iespējams, atspoguļojot hroniskus ievainojumus.

Mēs pārbaudījām ceļa bagātināšanu, izmantojot transkriptogrammas tīkla analīzi cilvēka glomerulos un DKD proksimālajā kanāliņā un atsauces paraugos. Šī analīze ietver diferenciālās ekspresijas lielumu, iedarbības virzienu, nozīmīguma līmeni un proteīnu kodējošo gēnu tuvumu, kas sakārtoti pa x asi saskaņā ar zināmajām proteīnu un olbaltumvielu mijiedarbībām. Visvairāk bagātinātie glomerulu ceļi ietvēra GTPāzes mediētu signālu pārraidi (p=4,3 × 10-6) un G-proteīnu savienoto receptoru (GPCR) ligandu saistīšanos (p=8,1 × 10-6). 6). Proksimālajā kanāliņā galvenie ceļi bija rodopsīnam līdzīgi receptori (p=4,1 × 10–6) un ožas signalizācija (p=1,9 × 10–4). Interesanti, ka ribosomu (translācijas) ceļš tika bagātināts gan glomerulos, gan proksimālajā kanāliņā (1. attēls). Pilns atšķirīgi regulēto ceļu saraksts ir iekļauts S2 papildu tabulā; (https://doi.org/10.6084/m9.figshare.14450196.v1, apskatīts 2022. gada 23. janvārī)

Lai noteiktu DKD paraugos bagātināto translācijas ceļu iedarbības virzienu, KEGG ekvivalentā ceļa, ribosomas hsa03010, ceļa skata shēma tika apkopota gan glomeruliem, gan proksimālajiem kanāliņiem. Gēni aminoskābju un atvasinājumu translācijas un metabolisma GO ceļos, kas saskaņoti ar ribosomu KEGG ceļu, pārklājoties attiecīgi 130 un 87 no 186 gēniem. Kopējā ribosomu gēnu ekspresija tika regulēta gan DKD subjektu glomerulos, gan proksimālajos kanāliņos (2. attēls).

3.3. Diabētiskās peles nierēs ir mainīts tulkojums

Lai labāk izprastu ceļa bagātināšanas nozīmi cilvēka DKD biopsijas paraugos, mēs jautājām par diferenciālo ekspresiju db pelē, salīdzinot ar fona kontroles celmu, izmantojot lielapjoma RNS sekvencēšanu. Ceļu analīze (9 nedēļu vecumā) starp diabēta pelēm un kontroles celmu atklāja, ka vislabāk bagātinātais ceļš bija cGMP-proteīnkināzes G signalizācija (p=2.0 × 10−). 6) (3.A attēls). Viens no bagātinātajiem ceļiem bija ar translāciju saistītā ribosomu bioģenēze (p=0.047), kas "pārklājās" ar cilvēka DKD ceļa bagātināšanas datu kopu. Lai tieši pārbaudītu translāciju regulējošo proteīnu palielinātas transkripcijas un ekspresijas funkcionālās sekas, mēs veicām poliribosomu profilēšanu nierēs no db un fona kontroles pelēm. Šis tests nosaka vispārējo translācijas līmeni, pamatojoties uz ribosomu mRNS aizņemšanu. Poliribosomu profilēšana parādīja, ka polisomu un monosomu laukuma zem līknes attiecība ir palielināta pelēm ar cukura diabētu (9,76), salīdzinot ar kontroles pelēm (7,73, p < 0,05 attiecībā uz attiecību starpību), kas atbilst palielinātai globālajai translācijainieres diabēta gadījumā(3.B attēls).

Wecistanche atbalsta dienests

E-pasts:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel.:+86 15292862950