Ceilonas olīvu (Elaeocarpus Serratus) lapu ekstrakta un fitoķīmisko vielu pretmelanoģenēzes ietekme zebrafish modelī
Mar 23, 2022
Kontaktpersona:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Chi-Ya Huang 1, I-Hsuan Liu 2, Xiang-Zhe Huang 1, Hui-Jen Chen 1, Shang-Tzen Chang 1, Mei-Ling Chang 3, Yu-Tung Ho 1 un Hui-Ting Chang 1,*
Abstract:Themelanoģenēzeinhibējoša iedarbība zebrafish (Danio rerio) unantitirozināzeetanola aktivitāteekstraktsun tā fitoķīmiskās vielas no Ceilonas olīvu (Elaeocarpus serratus Linn.) lapām tika pētītas šajā pētījumā. Starp lapu ekstraktu un četrām šķīstošām frakcijām etilacetāta šķīstošā frakcija uzrāda vislabāko antitirozināzi unantimelanoģenēzeaktivitātes. Viena fenolskābe, gallikskābe un divi flavonoīdi, miricetīns un nozīmē alva, tiek izolēti no aktīvajām apakšfrakcijām, izmantojot bioloģiskās analīzes vadīto izolāciju; to struktūras ir noskaidrotas, pamatojoties uz 1D un 2D KMR, FTIR, UV un MS spektroskopiskām analīzēm. Šiem savienojumiem ir nozīmīgasantitirozināzeaktivitāte, izmantojot L-tirozīnu vai L-DOPA kā substrātu; mernsentīns parāda optimālo aktivitāti. Enzīmu kinētiskajā izmeklēšanā gan gallskābe, gan mearnsetīns ir konkurējoša tipa inhibitori pret sēņu tirozināzi, un miricetīns darbojas kā jaukta tipa.tirozināzeinhibitors. Lapaekstraktsun anetilacetātā šķīstošā frakcija uzrāda efektīvu darbību melanīna veidošanās kavēšanā zebrafijas embrijos. Mearnsetīnam piemīt arī daudzsološs antimelanoģenēzes efekts, kas ir pārāks par pozitīvo kontroli,arbutīns. Rezultāti atklāj, ka Ceilonas olīvu lapu ekstraktu un tā fitoķīmiskās vielas, īpaši mearnsetīnu, var izmantot kāantimelanoģenēzeun ādu balinošas sastāvdaļas.
Atslēgvārdi: antimelanoģenēzes efekts; Elaeocarpus serratus; melanīns; tirozināzes inhibitors; zebrafish
Herba cistanceskavē tirozināzes aktivitāti.
1. Ievads
Melanīnam ir būtiska loma daudzās bioķīmiskās funkcijās; tas nodrošina ādas aizsardzību pret ultravioletā starojuma (UV) bojājumiem, reaktīvo skābekļa sugu (ROS) likvidēšanu un citām bioķīmiskām reakcijām [1–3]. Pārmērīga melanīna uzkrāšanās izraisa arī hiperpigmentāciju, melasmu, vecuma plankumus, ādas tumšumu utt. [4,5]. Austrumu pasaulē cilvēkus interesē jautājums par ādas balināšanas efektu; kosmētikas industrija ir veltīta ādas balināšanas kosmētikas izstrādei pret melanoģenēzi. Ir vairāki mehānismi, tostarptirozināzeinhibējoša aktivitāte, melanocītu noņemšana un melanīna sintēzes traucējumi, lai parādītu melanoģenēzi inhibējošu aktivitāti. Daudzsološie reaģenti, kas inhibē melanoģenēzi, ir pētīti kopš 1940. gadiem [2,4,6,7]. Tomēr daļamelanoģenēzeinhibitoriem ir dažas blakusparādības; piemēram, hidrohinons var izraisīt eksogēnu ohronozi un pastāvīgu hipomelanozi [5,8]. Pārmērīga kojskābes lietošana var izraisīt alerģiju un vairogdziedzera audzējus [9,10].
Pēdējā laikā pētnieki ir centušies atrast daudzsološus melanogēnus reaģentus, kuriem nav/vieglas blakusparādības no augu dabīgiem produktiem [11–13]. DabiskitirozināzeIr ziņots par inhibitoriem no augu avotiem, tostarp vienkāršiem fenoliem, fenolskābēm, stilbēniem, flavonoīdiem, lignāniem, terpenoīdiem, hinoīdiem utt. [2,14–16]. Solano et al. norādīja, ka fenola savienojumiem un citiem dabiskajiem savienojumiem ir liels formelanīna inhibīcijas potenciāls, piemēram, arbutīns (fenola glikozīds, kas atrodams Arctostaphylos uva-ursi), zaļās tējas ekstrakts, alfa hidroksilskābe (AHA), askorbīnskābe utt. ].Arbutīnsplaši izmanto kā galveno sastāvdaļu komerciālos balināšanas produktos tirgū [4,17].Gallokatehīns-3-O-galāts (GCG), epigallokatehīns-3-O-galāts (EGCG) un epikatehīns {{6 }}Zaļajā tējā tika identificēts O-gallāts (EKG).ekstrakts; šiem savienojumiem piemīt laba tirozināzes inhibējošā efektivitāte [17]. Arktigenīns, lignāns, kas izolēts no Fructus arcticextract, varētu samazināt melanīna saturu zebrafish (Danio rerio) embrijos [18]. Lee et al. ziņoja, ka ginsenosīdi no Panax žeņšeņa lapām un ogām kavēmelanoģenēzezebrafish embrijs; aktīvie ginsenosīdi ir ginsenosīds Rh6, vina-ginsenosīds R4, vina-ginsenosīds R13, ginsenosīds Rh23 un floralginsenosīds A [19–21].
Elaeocarpus serratus Linn. (Tiliaceae), ko parasti sauc par Ceilonas olīvām, ir izplatīta Āfrikā, Austrālijā un Dienvidaustrumāzijā. Marinēts gurķis, kas izgatavots no Ceilonas olīvu ēdamajiem augļiem, ir izplatīts Šrilankā [22]. To tradicionāli izmanto, lai novērstu galvas utu un blaugznas Šrilankā. E. serratus ekstrakta bioaktivitāte tika novērtēta saistītajos pētījumos [22,23]. E.serratus lapu ekstraktam piemīt antibakteriāla iedarbība pret Plesiomonas, Salmonella typhi un Proteus spp. koncentrācijā 400 µg/mL ar plato caurumu difūzijas testu [23].E. serratus lapu ekstraktam bija potenciāls būt pretaudzēju, pretmikrobu un pesticīdu reaģentam sālsūdens garneļu (Artemia salina) letalitātes testā citotoksicitātes izmeklēšanā; lapas LC50ekstraktsbija 40 µg/ml pret sālījumā esošajām garnelēm [23]. Antioksidanti flavonoglikozīdi, tostarp miricitrīns, mearnsetīna 3-O- -D-glikopiranozīds, mearnsitrīns un tamariksetīna 3-O- -L-ramnopiranozīds, tika izolēti un identificēti no E. serratusleaf ekstrakta. [22].
Šī pētījuma mērķis ir novērtēt E. serratus lapu ietekmiekstraktsun tā daļasantitirozināzeaktivitāte (in vitro) unmelanoģenēzeinhibīcijas aktivitāte inzebrafish (in vivo). Tika veiktas ar biotestu vadītas frakcionēšanas un izolācijas metodes, lai atrastu daudzsološos savienojumus kā potenciālās antimelanoģenēzes sastāvdaļas. Efektīvu pretmelanoģenēzes sastāvdaļu izstrāde var palielināt augu dabisko produktu optimālu izmantošanu farmācijas un kosmētikas rūpniecībā.
2. Materiāli un metodes
2.1. Augu materiāls un ieguve
Apmēram 50 gadus vecas Ceilonas olīvu (Elaeocarpus serratus) lapas tika savāktas Taivānas Nacionālajā universitātē Taipejā, Taivānā septembrī. Svaigas lapas (3,95 kg) ekstrahēja ar 95% etanolu 7 dienas istabas temperatūrā. Filtrētaisekstraktstika žāvēts pazeminātā spiedienā ar rotācijas iztvaicētāju ar vannas temperatūru 50 ◦C [24]. Lapu ekstrakta raža (0,32 kg) bija 12,0 procenti (m/w no žāvētā svara).
cistancheekstrakts
2.2. Šķidruma-šķidruma nodalījums
Theekstraktstika pakļauta secīgai organiskā šķīdinātāja ekstrakcijai pieaugošā polaritātes secībā, sadalot šķidrumu-šķidrumu [24,25]. Lapu ekstraktu frakcionēja tonheksānā šķīstošā frakcija (HF, 9,1 procenti), etilacetātā šķīstošā frakcija (EF, 11,3 procenti), n-butanolā šķīstošā frakcija (BF, 17,3 procenti) un ūdenī šķīstošā frakcija (WF, 31). {13}} procenti ).
2.3. Kolonnu hromatogrāfija un plānslāņa hromatogrāfija
Bioaktīvā etilacetātā šķīstošā frakcija tika tālāk frakcionēta ar silikagela kolonnas hromatogrāfiju (CC). Atvērtās kolonnas hromatogrāfija tika veikta, pakāpeniski eluējot ar dažādu n-heksāna un etilacetāta attiecību [26]. Deviņpadsmit apakšfrakcijas (E1–E19) tika iegūtas ar plānslāņa hromatogrāfiju (TLC) [27]. Apakšfrakciju ienesīgums bija E1 (1.05 procenti), E2 (8,21 procenti), E3 (1,64 procenti), E4 (0,74 procenti), E5 (1,52 procenti), E6 ({ {59}}.86 procenti ), E7 (1,51 procenti), E8 (9,50 procenti), E9 (7,78 procenti), E10 (3,97 procenti), E11 (2,65 procenti), E12 (8,49 procenti), E13 (5,58 procenti), E14 (4,43 procenti), E15 (5,31 procenti), E16 (1,14 procenti), E17 (1,87 procenti), E18 (0,76 procenti) un E19 (2,96 procenti).
2.4. Augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija
Etilacetātā šķīstošās frakcijas aktīvās apakšfrakcijas tika analizētas un izolētas ar augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju (HPLC, L-2130, Hitachi, Tokija, Japāna), kas aprīkota ar preparatīvo RP-18 kolonnu (Purospher®, STAR RP{{ 3}} ar gala vāciņu, 250 × 10 mm, 5 µm). Gradienta kustīgā fāze sastāvēja no ūdens (A) un acetonitrila (B). Plūsmas ātrums bija 3 ml/min. Elucijas programma ietvēra lineāru gradientu no 30 līdz 35 procentiem B grupā A 0–15 minūtes, no 35 līdz 100 procentiem B grupā A 15–25 minūtes un pēc tam 5 minūtes līdzsvara ar 100 procentiem B. Tika konstatēti eluētie maksimumi. ar UV detektoru pie 254 nm [25,28].
2.5. Izolētu savienojumu identifikācija
Izolēto savienojumu struktūras tika noteiktas un raksturotas ar spektrālo analīžu palīdzību, ieskaitot ultravioleto redzamo spektroskopiju (UV/VIS, V-550, Jasco, Tokija, Japāna), Furjē transformācijas infrasarkano spektroskopiju (FTIR, FTS{{2}). }, Bio-rad, Hercules, CA, ASV) un masu spektroskopija (MS, MAT-958, Finnigan, MA, ASV). Kodolmagnētiskās krezonanses spektroskopija (KMR), ieskaitot 1D (1H-NMR, 500 MHz; 13C-NMR, 125 MHz) un 2D KMR (HSQC un HMBC), tika reģistrēta ar Bruker AVIII KMR spektrometru (Bruker Avance, Reinštetena, Vācija). 29–32].
2.6. Antitirozināzes tests un enzīmu kinētiskais pētījums
In vitroantitirozināzetests bija spektrofotometriskā analīze, kuras pamatā bija iepriekš aprakstītās metodes [33–35]. Kā substrāts tika izmantoti attiecīgi L-DOPA (3,4-dihidroksifenilalanīns) un L-tirozīns. 96-iedobes mikroplatēs tika sajaukti 40 µL parauga šķīduma un 70 µL kālija fosfāta buferšķīduma (0,1 M, pH 6,8), kam sekoja 50 µL sēņu tirozināzes ar 200 vienībām/ml. EC1.14.18.1) pēc inkubācijas 25 ◦C 10 min. Pēc tam mēs iedobē pievienojām 40 µL 2, 5 mM substrāta (L-tirozīns / L-DOPA) un maisījumu inkubēja 10 minūtes. Pēc inkubācijas katras iedobes absorbcija pie 475 nm tika mērīta ar ELISA (ar enzīmu saistītā imūnsorbcijas testa) lasītāju (SPECTROstar Nano, BMG LABTECH, Offenburga, Vācija). Pozitīvā kontrole bijaarbutīns, un atkārtojumu skaits bija trīs. Procentuālā inhibīcijatirozināzeaktivitāte tika aprēķināta pēc šāda vienādojuma: Inhibīcija ( procenti )=[(Akontroles–Akontroles tukšā parauga)–(Paraugs–Akontroles tukšā parauga)/(Akontroles–Akontroles tukšā parauga)] × 100. Pēc tam pusmaksimālā inhibējošā koncentrācija ( Parauga IC50) tika aprēķināts no koncentrācijas-atbildes līknes.
Fermentu kinētiskais pētījums tiek analizēts, izmantojot Lineweaver-Burk reakcijas ātruma un substrāta koncentrācijas savstarpējo grafiku, lai novērtētu parauga ietekmi uz substrāta un fermenta afinitāti. Koncentrācija notirozināzetika saglabāta nemainīga 200 vienības/ml, savukārt substrāta (L-tirozīna/L-DOPA) koncentrācija tika mainīta pie 0,5, 0,75,1,0 , 1,25 un 1,5 mM. Reakcija bija līdzīga antitirozināzes testam, kā aprakstīts iepriekš; tika sajaukti 40 µL parauga šķīduma un 70 µL kālija fosfāta buferšķīduma (0,1 M, pH 6,8), kam sekoja 50 µL 200 vienības/ml tirozināzes pievienošana 25◦◦ pēc inkubācijas. C 10 min. Pēc tam mēs iedobē pievienojām 40 µL substrāta un kārtīgi samaisām, un nekavējoties tika mērīti šķīduma kinētiskie mērījumi 3 min laikā no konstatētā viļņa garuma (475 nm). Abi kinētiskie parametri, Michaelis-Menten konstante (Km) un maksimālais ātrums (Vmax), tika aprēķināti no Lineweaver-Burk lineārā vienādojuma [36-38].
2.7. Antimelanoģenēzes ietekmes novērtējums zebrafish
Savvaļas tipa AB celma zebrafish (Danio rerio) tika uzturēts veselīgā ūdens vidē 26–30 ◦C ar 14:10 h gaismas-tumsas ciklu. Pēc 9 h pēc apaugļošanas (hpf) embriji tika ievietoti 24-iedobes plāksnē (3 embriji katrā iedobē), apstrādāti ar dažādu galīgo paraugu koncentrāciju, kas izšķīdināta 1% DMSO, un inkubēti 28 ◦C temperatūrā 48 stundas. (pie 57 ZS). Dzīva zebrazivs embrija digitālais attēls tika uzņemts ar stereomikroskopu (Olympus SZ61, Tokija, Japāna) ar kopējo palielinājumu 40x; pēc tam zebrafish embrija melanīna saturs tika analizēts ar ImageJ programmatūru. Pozitīva kontrole bijaarbutīns(komerciāla ādas balināšanas sastāvdaļa) un 1-fenil-2-tiourīnviela (PTU, melanīna sintēzes inhibitors). Replikāciju skaits bija sešas [21,39,40].
2.8. Statistiskā analīze
Pētījumā iegūtie dati tika analizēti ar Statistical Analysis System (SAS) v 9.2 (Cary, NC, USA) ar Scheffe testu, kas ir post hoc vairākkārtējas salīdzināšanas metode. Uzticamības intervāls tika noteikts 95 procenti.
dr vita OPC in theādas balināšana
3. Rezultāti un diskusijas
3.1. E. serratus lapu ekstrakta un tā frakciju antitirozināzes aktivitāte
Iegūšanas, izolācijas, identifikācijas shematiskā diagramma,antitirozināzeaktivitāte unantimelanoģenēzeE. serratus lapu ietekmeekstraktsir parādīts 1. attēlā. Lapu ekstrakts tika tālāk frakcionēts n-heksānā šķīstošā frakcijā (HF), etilacetātā šķīstošā frakcijā (EF), n-butanolā šķīstošā frakcijā (BF) un ūdenī šķīstošā frakcijā (WF) ar šķidrumu. -šķidrā starpsiena.
Tirozināzei, ko ražo melanocītu šūnas, ir galvenā loma sarežģītās melanīna sintēzes katalizēšanā; izpētitirozināzeinhibitors ir viens no ievērojamākajiem aizkavēšanas veidiemmelanoģenēze[2,5,41]. Lapu tirozināzes inhibīcijas aktivitātesekstraktsun četras frakcijas ir parādītas 2. attēlā. Izmantojot L-tirozīnu kā substrātu, tikai etilacetātā šķīstošajai frakcijai bija inhibējoša iedarbība pret tirozināzi koncentrācijā 400 ug/ml. Lapu ekstrakts, etilacetātā šķīstošā frakcija un n-butanolā šķīstošā frakcija uzrādīja antitirozināzes aktivitāti, mainot L-DOPA kā substrātu. Starp lapu ekstraktu un četrām frakcijām vislabāk uzrādīja etilacetātā šķīstošā frakcijaantitirozināzeaktivitāte ar IC50 vērtībām 279,38 un 166,95 ug/ml, izmantojot attiecīgi L-tirozīnu un L-DOPA kā substrātu (1. tabula).
1. tabula. Aktīvo apakšfrakciju IC50 vērtības pret sēņu tirozināzi.
Etilacetātā šķīstošā frakcija tika pakļauta ar biotestu vadītai frakcionēšanai, izmantojot preparatīvās kolonnas hromatogrāfijas un plānslāņa hromatogrāfijas metodes, un tika iegūtas deviņpadsmit apakšfrakcijas (E1–E19). Starp šīm apakšfrakcijām E7–E10 apakšfrakcijas uzrādīja augstāku tirozināzes inhibējošo efektu abos substrāta testos (L-tirozīns un L-DOPA). Pusmaksimālās inhibējošās koncentrācijas (IC50) vērtības aktīvajām apakšfrakcijām prettirozināzeir norādītas 1. tabulā. Visu E7–E10 apakšfrakciju IC50 vērtības bija zem 200 µg/mL; E7 un E9 apakšfrakcijas pat uzrādīja labāku veiktspēju salīdzinājumā ararbutīns, kas ir komerciāla balināšanas sastāvdaļa.
3.2. Savienojumu izolēšana un identificēšana no bioaktīvām apakšfrakcijām
Trīs savienojumi (ES1–3) tika izolēti no bioaktīvajām apakšfrakcijām (E7–E10), izmantojot augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju. Gallskābe (ES1): balts pulveris; mp 257 grādi; UV (MeOH) λmax (log ε) 215,5 (3,94), 268.0 (3,46) nm; IR (KBr) νmax 3495, 3416, 3285, 1647, 1542 un 1220 cm-1; EI-MS m/z 171 [M plus H] plus , saskaņā ar molekulāro formulu C7H6O5. Miricetīns (ES2): dzeltena adata; mp 358 grādi; UV (MeOH) λmax (log ε) 252,5 (4,43) un 374,0 (4,50) nm; IR (KBr) νmax 3421, 1663, 1596, 1520, 1229, 1202 un 1171 cm-1; EI-MS m/z 319,36 [M plus H] plus , molekulārā formula C15H10O8. Mernsetīns (4′-O-metilmiricetīns, ES3): dzeltens pulveris; mp 184 grādi; UV (MeOH) λmax (log ε) 259,5 (4,21) un 364,5 (4,26) nm; IR (KBr) νmax 3409, 2960, 2927, 2853, 1661, 1599, 1507, 1208 un 1163 cm-1; EI-MS m/z 333,0 [M plus H] plus , molekulārā formula C16H12O8. Šo savienojumu KMR dati ir apkopoti 2. tabulā Identificēto savienojumu ķīmiskās struktūras parādītas 3. attēlā.
2. tabula. Savienojumu 1H, 13C un HMBC KMR dati.
Starp šiem savienojumiem gallskābe ir fenolskābe; miricetīns un mearnsetīns pieder pie flavonoīdiem. Katra savienojuma saturs etilacetātā šķīstošajā frakcijā un E7–E10 apakšfrakcijās ir norādīts 3. tabulā. E7 apakšfrakcija bija bagāta ar mearnsetīnu (433,38 mg/g); primārā E8 apakšfrakcija saturēja gallskābi (417,64 mg/g). Galvenā apakšfrakciju E9 un E10 sastāvdaļa bija miricetīns (attiecīgi 406,41 un 336,41 mg/g). Trīs savienojumu saturs etilacetātā šķīstošajā frakcijā bija 59,72 mg/g (gallskābe), 45,21 mg/g (miricetīns) un 22,66 mg/g (mernsetīns).
3.3. Izolētu savienojumu antitirozināzes aktivitātes un enzīmu kinētiskais pētījums
AntitirozināzeŠo savienojumu aktivitāte no aktīvajām apakšfrakcijām ir attēlota 4. tabulā. Izmantojot L-tirozīnu kā substrātu, pētāmo savienojumu antitirozīna aktivitātes secība bija mearnsetīns > miricetīns > gallskābe > arbutīns; mearnsetīnam bija vislabākais inhibīcijas efekts ar IC50 vērtību 56,57 µg/ml (0,17 mM). Līdzīgi rezultāti tika novēroti L-DOPA, ko izmantoja kā substrātu; trīs fitoķīmisko vielu efektivitāte bija augstāka pararbutīns.
Īsts enzīmu inhibitors satur četrus inhibīcijas veidus, tostarp konkurējošu, nekonkurējošu, jaukta tipa (gan konkurējošu, gan nekonkurējošu) un nekonkurējošu [12]. Kinētiskās konstantes Km un Vmax nosaka enzīma sākotnējais ātrums pie dažāda substrāta. koncentrācijas Lineweaver-Burk parauglaukumā; tie krustojas pie y ass ir ekvivalents 1/Vmax, un tie krustojas pie x ass ir −1/Km. Fermentu kinētikas pētījumos par terpenoīdu savienojumiem no citrusaugļu mizas ēteriskās eļļas prettirozināze, citralaktēts kā nekonkurējošs inhibitors, un mircēns bija konkurētspējīgs inhibitors [36]. 3,7-dioleilkvercetīna inhibīcijas mehānisms pret sēņu tirozināzi tika izmantots, izmantojot konkurētspējīgu inhibīcijas modeli, lai nomāktu melanīna veidošanos [42].
4. tabula. Savienojumu pret sēņu tirozināzi IC50 vērtības
Trīs fitoķīmisko vielu tirozināzes inhibīcijas veids tika noskaidrots in vitro enzīmu kinētiskā pētījumā. 4. attēlā parādīts mearnsetīna Lineweaver-Burk grafiks (dubultā savstarpējā diagramma). Abu substrātu, L-tirozīna un L-Dopa, analīzēs dažādu mearnsetīna koncentrāciju lineārajai regresijas līnijai bija tāds pats krustojums uz y ass un pieaugošais slīpums. Gallskābes, miricetīna un mearnsetīna kinētiskie parametri ir apkopoti 5. tabulā. Gallskābes vai mearnsetīna klātbūtnē tika novērots Km un konstantes pieaugums Vmax, kas liecina, ka gan gallskābe, gan mearnsetīns bija konkurētspējīgs tirozināzes inhibitors. Tas norādīja, ka gallskābe un mearnsetīns var saistīties ar brīvutirozināzear augstu afinitāti un novērš substrāta (L-tirozīna vai L-DOPA) saistīšanos ar tirozināzes aktīvo vietu. Tika konstatēts, ka miricetīns ir jaukta tipa inhibitors, kas satur konkurējošu un nekonkurējošu inhibīciju, jo Km tika palielināts un Vmax tika samazināts. Nekonkurētspējīga inhibīcija pierādīja, ka savienojumi saistās ar tirozīnas-substrāta kompleksu, bet ne brīvo tirozināzi.
3.4. Ekstraktu, frakciju un izolētu fitoķīmisko vielu pretmelanoģenēzes ietekme
Zebrafish (Danio rerio) ir jauns un derīgs paraugorganisms melanoģenēzes pētījumiem jaunākajos pētījumos [18–21,40]. Theantimelanoģenēzelapu ekstrakta un četru frakciju ietekme in vivo zebrafish testā ir parādīta 5. attēlā.ekstraktsun etilacetātā šķīstošā frakcija uzrādīja labus rezultātus melanīna veidošanās inzebrafijas embriju kavēšanā. Koncentrācijā 200 µg/ml lapu ekstrakts un etilacetātā šķīstošā frakcija inhibēja attiecīgi 27,72 procentus un 35,60 procentus zebrafish embriju melanīna ražošanas. Visas ārstēšanas metodes neietekmēja zebrafish embriju augšanu ar 100 procentu izdzīvošanas līmeni.
6. attēlā parādīta savienojumu un pozitīvās kontroles, PTU un arbutīna, ietekme uzmelanoģenēzezebrafish koncentrācijā 50 µM. PTU ir spēcīgstirozināzeinhibitors, lai novērstu melanīna veidošanos, savukārtarbutīnsir komerciāls ādas balināšanas līdzeklis; abas pozitīvās kontroles var samazināt melanīna veidošanos zebrafish. Starp trim fitoķīmiskajām vielām miricetīnam bija neliela melanīna inhibīcija, savukārt mearnsetīnam bija labāka melanoģenēzes inhibīcijas aktivitāte zebrafish.
Efektīvās koncentrācijasmelanoģenēze inhibition activity in zebrafish of compounds are listed in Table 6. IC50 values of PTU and arbutin were 26.29 µM and 323.69 µM, respectively. The order of antimelanogenesis activity of examined compounds was PTU >mernsetīns >arbutīnsun miricetīns > gallskābe. Mearnsetīnam bija vislabākā efektivitāte ar IC50 vērtību 121,01 µM starp pārbaudītajām fitoķīmiskajām vielām.
Lai iegūtu vairāk informācijas, lūdzu, noklikšķiniet uz attēla.
4. Secinājumi
Themelanoģenēzeinhibējoša iedarbība unantitirozināzeŠajā pētījumā tika novērtēta Ceilonas olīvu (E. serratus) lapu ekstrakta aktivitāte. Starp lapāmekstraktsun tās četras frakcijas, etilacetātā šķīstošā frakcija bija vislabākāantitirozināzeaktivitāte. Fitoķīmiskās vielas, tostarp gallskābe, miricetīns un mearnsetīns, tika izolētas un identificētas no aktīvajām apakšfrakcijām, izmantojot biotestu vadītu hromatogrāfiju un spektrālās analīzes. Šo savienojumu antitirozināzes aktivitātes secība bija mearnsetīns> miricetīns> gallskābe. In vitro enzīmu kinētiskais pētījums atklāj, ka gallskābe un mearnsetīns bija konkurējoši tirozināzes inhibitori, un miricetīns bija jaukta tipa inhibitors. Zebrafish in vivo testa rezultāti atklāja, ka etilacetātā šķīstošajai frakcijai un trim fitoķīmiskām vielām bija nozīmīgamelanoģenēzeinhibējoša iedarbība. Mearnsetīna antimelanoģenēzes efekts bija labāks par pozitīvās kontroles iedarbību,arbutīns, zebrafish.