Hroniska nieru slimība palielina smadzeņu mikroasiņošanu pelēm un cilvēkiem

Kontaktpersona:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Wei Ling Lau1,2 & Ane CF Nunes 1 & Vitālijs Vasiļevko3 & David Floriolli4 & Long Lertpanit 1 & Javad Savoj 1 & Maria Bangash 1 & Zhihui Yao 1,5 & Krunal Shah6 & Sameen Naqvi 1 & Annlia Paganini-Hill6 & Nosratola D. Vaziri 1 un Deivids H Kribss3 un Marks Fišers6,7

Saņemts: 2018. gada 25. augustā /Pārskatīts: 2019. gada 28. janvārī /Pieņemts: 2019. gada 22. februārī /Publicēts tiešsaistē: 2019. gada 4. maijā

# Autors(-i) 2019

Cistanchevar atvieglotnieru slimība

Abstrakts

Palielinās smadzeņu mikroasiņošanahroniskanieresslimība(CKD) un to klātbūtne palielina izziņas pasliktināšanās un insulta risku. Mēs pētījām mijiedarbību starp CKD un smadzeņu mikrohemorāģijām (mikroasiņošanas neiropatoloģisko substrātu) peles un šūnu kultūras modeļos un pētījām mikroasiņošanas slodzes progresēšanu smadzeņu sērijveida attēlveidošanā no cilvēkiem. Pētījumi ar pelēm: tika pētīti divi HNS modeļi: adenīna izraisīts tubulointersticiāls nefrīts un ķirurģiska 5/6 nefrektomija. Šūnu kultūras pētījumi: bEnd.3 peles smadzeņu endotēlija šūnas tika audzētas līdz saplūšanai, un vienslāņu integritāte tika mērīta pēc 5–15% cilvēka urēmiskā seruma iedarbības vai pieaugošas urīnvielas koncentrācijas. Pētījumi ar cilvēkiem: Smadzeņu mikroasiņošanas progresēšana tika novērtēta ar sērijas MRI no kontroles, pirmsdialīzes HNS un dialīzes pacientiem. 5/6 nefrektomijas modelī mikrohemorāģijas palielinājās 2–2.{9}}pelēm ar HNS neatkarīgi no paaugstināta asinsspiediena. IgG iekrāsošanās palielinājās CKD dzīvniekiem, kas atbilst paaugstinātai hematoencefālisko barjeras caurlaidībai. BEnd.3 šūnu inkubācija ar urēmisko serumu vai paaugstinātu urīnvielu izraisīja no devas atkarīgu transendotēlija elektriskās pretestības kritumu. Paaugstināta urīnviela izraisīja aktīna citoskeleta traucējumus un samazinātu klaudīna{16}} ekspresiju. Cilvēkiem mikroasiņošanas izplatība abās HNS grupās bija 50 procenti, salīdzinot ar 10 procentiem vecuma grupās. Lielākajai daļai pacientu dialīzes grupā pēc 1,5 gada novērošanas MRI novēroja palielinātu mikroasiņošanu. CKD izjauc hematoencefālisko barjeru un palielina smadzeņu mikrohemorāģiju pelēm un mikroasiņošanu cilvēkiem. Paaugstināts urīnviela maina aktīna citoskeletu un cieši savienojamās olbaltumvielas kultivētās endotēlija šūnās, kas liecina, ka šis mehānisms (vismaz daļēji) izskaidro mikrohemorāģiju un mikroasiņošanu, kas novērota pētījumos ar dzīvniekiem un cilvēkiem.

Atslēgas vārdi Hroniska nieru slimība. Mikroasiņošana. Peles modelis. Endotēlija šūnu kultūra. Smadzeņu MRI

lai atvieglotuhroniskanieresslimība arcistanche

Ievads

Viens no nozīmīgākajiem insultu neiroloģijas atklājumiem pēdējos gados ir rašanāshroniskanieresslimībalai būtu ietekme, kas ievērojami pārsniedz tradicionālos riska faktorus, piemēram, hipertensiju un diabētu [10, 11]. Ņemot vērā lielo smadzeņu mikroasiņošanas un kognitīvo traucējumu izplatību (apmēram 50 procenti) pacientiem ar progresējošu HNS [2–4, 6, 7], šīs attiecības ir pelnījušas turpmāku izpēti.

Smadzeņu mikroasiņošana ir nelieli hemosiderīna-dzelzs perēkļi, ko var pierādīt ar magnētiskās rezonanses attēlveidošanu (MRI), kas, domājams, atspoguļo pamatā esošos smadzeņu mikrohemorāģijas [12, 13] un liecina par paaugstinātu insulta risku, gan hemorāģisku, gan išēmisku [9, 14]. Specifiskas MRI sekvences (gradienta atbalss un jutības svērtā attēlveidošana) parāda šīs signāla zuduma fokusa zonas smadzeņu parenhīmā, kuru izmērs ir mazāks vai vienāds ar 10 mm [12, 15]. Smadzeņu mikroasiņošana ir atkarīga no vecuma, un izplatība tuvojas 20 procentiem līdz 65 gadu vecumam [16]. Papildus vecumam hipertensija un smadzeņu amiloidā angiopātija ir vislabāk aprakstītie riska faktori mikroasiņošanas attīstībai [13, 17]. HNS vēlīnā stadijā mikroasiņošana ir sastopama līdz 50 procentiem iedzīvotāju [2–4].

Vienlaikus kognitīvie traucējumi ir gan izplatītāki, gan smagāki zemākā līmenīnieresfunkciju[18], sasniedzot 30–70 procentu izplatību hroniskas dialīzes pacientiem [6, 7]. Šķērsgriezuma analīzē, kurā piedalījās 338 hemodialīzes pacienti vecumā no 55 gadiem un kuriem bija atbilstošas ​​vecuma kontroles grupas, 34 procentiem dialīzes pacientu bija smagi kognitīvi traucējumi, salīdzinot ar 12 procentiem kontroles grupu [6]. Vēl 35 procentiem no dialīzes kohortas bija vidēji smagi kognitīvi traucējumi [6].

Vairāki pētījumi ar HNS nesaistītu kohortu ir parādījuši spēcīgu saistību starp smadzeņu mikroasiņošanu un kognitīvās funkcijas samazināšanos [19–22]. Epidemioloģiskie dati apstiprina MRI mikroasiņošanas slodzes un kognitīvās disfunkcijas līdzāspastāvēšanu pacientiem ar beigu stadijas nieru slimību (ESRD) [8, 23]. Turklāt nesenais ziņojums par 28 hroniskas dialīzes pacientiem ar sērijveida smadzeņu MRI liecināja par saistību starp jaunu mikroasiņošanu un mini-psihiskās stāvokļa pārbaudes (MMSE) rezultāta samazināšanos [4]. Turklāt ESRD pacientiem ir 3- līdz 4-reizes lielāks išēmisku un hemorāģisku insultu biežums, salīdzinot ar vispārējo populāciju [5]. Japānas hemodialīzes pacientu grupā, kuriem sākotnēji nebija insulta, smadzeņu mikroasiņošana bija neatkarīgs intracerebrālās asiņošanas prognozētājs 5-gada novērošanas periodā [9].

Šeit mēs ziņojam par rezultātiem no pētījumiem ar pelēm un pacientiem ar hronisku nieru slimību. Mēs atklājām palielinātu smadzeņu mikrohemorāģiju CKD pelēm un aprakstām traucētu endotēlija saspringto savienojumu un aktīna citoskeleta traucējumus kā potenciālus mikrohemorāģijas veidošanās mehānismus CKD vidē. Sērijas smadzeņu MRI retrospektīvā analīze no pacientiem, kuriem nav HNS, pirms dialīzes un hroniskas hemodialīzes subjektiem, apstiprināja ESRD kā nozīmīgu riska faktoru mikroasiņošanas slodzes progresēšanai.

Metodes

Eksperimenti ar pelēm

Eksperimentālie dzīvnieki un ārstēšanas grupas

Tika pētīti divi CKD peles modeļi. (1) Adenīna tubulointersticiāla nefrīta modelis: Peļu tēviņi C57BL/6J no Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME) vecumā no 10 līdz 12 nedēļām 18 dienas tika baroti ar diētu, kas satur 0,2 procentus adenīna, lai izraisītu hronisku intersticiālu nefropātiju. 2 nedēļas atgriezās pie parastā ēdināšanas un pēc tam 1 nedēļu atkārtoti tika pakļauta adenīna diētai, lai uzturētu HNS (1.a attēls). Kontroles peles tika uzturētas ar regulāru ēdināšanu. (2) 5/6 nefrektomijas modelis: 10 nedēļu vecu C57BL/6J peļu tēviņiem Džeksona laboratorijā tika veikta divpakāpju operācija, kas ietvēra kreisās puses daļēju nefrektomiju, kam pēc 1 nedēļas sekoja labās puses pilnīga nefrektomija. Dzīvnieki tika nogādāti laboratorijā 1 nedēļu pēc

otrā operācija. Šie divi modeļi tika izmantoti, lai noteiktu hipertensijas ietekmi; hipertensija ir 5/6 nefrektomijas modeļa pazīme, savukārt adenīna-CKD nav hipertensīva [24].

CKD dzīvnieki tika randomizēti bez lipopolisaharīdu (LPS) vai LPS injekcijām. (Izmēģinājuma pētījumos mēs noskaidrojām, ka ir nepieciešams ilgāks urēmijas ilgums, lai atklātu lielāku spontānu mikrohemorāģiju slogu neārstētiem HNS dzīvniekiem; pelēm, kas lieto adenīna diētu tikai 10 dienas pēc sākotnējām 18 dienām. ekspozīcijai bija 3.0 ± 0,4 mikroasiņojumi uz cm2.)

Piecas nedēļas pēc sākotnējās HNS indukcijas un līdzvērtīgā kontroles grupā pelēm tika ievadītas intraperitoneālas (ip) LPS injekcijas (Salmonella enterica serotype Typhimurium, L{{0}}MG, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO ), lai izraisītu smadzeņu mikroasiņošanu. LPS tika ievadīts trīs devās, 1 mg/kg 0, 6 un 24 stundās [25]. Ar LPS ārstētām pelēm tika dota hidratācija ar subkutānas fizioloģiskā šķīduma injekcijām divas līdz trīs reizes dienā 3 dienas pēc ārstēšanas ar LPS. Asinsspiediens (BP) tika mērīts 2 dienas pirms LPS injekcijām, izmantojot astes aproces pletizmogrāfiju (CODA-S2 daudzkanālu, Kent Scientific). Visus eksperimentus apstiprināja Kalifornijas Universitāte, Irvinas Institucionālā dzīvnieku aprūpes un lietošanas komiteja.

Audu novākšana un asins ķīmija

Peles tika eitanāzētas 1 nedēļu pēc LPS injekcijām vai līdzvērtīgā vecumā neārstētiem dzīvniekiem, veicot atasiņošanu, izmantojot sirds punkciju inhalējamā izoflurāna anestēzijā. Kā kanulu tika izmantota 26-mēra adata, kas tika ievietota kreisajā kambarī, un tika uzklāts ledusauksts PBS šķīdums ar plūsmas ātrumu 7–8 ml/min. Pēc

perfūziju 5 minūtes, kreisā smadzeņu puslode tika ātri sasaldēta Western blot veikšanai. Labā smadzeņu puslode un abas nieres tika fiksētas uz nakti 4 procentu paraformaldehīdā un pēc tam pirms sadalīšanas uzglabātas aukstā PBS. Serums tika sadalīts alikvotās daļās asins ķīmijai. Asins urīnvielas slāpeklis (BUN) tika mērīts, izmantojot kolorimetrisko komplektu no BioAssay Systems (Hayward, CA). Seruma kreatinīna līmenis tika mērīts, izmantojot kapilāro elektroforēzi O'Brien Nieru izpētes centrā (UT Southwestern, Dallas, TX).

Mikrohemorāģijas noteikšana

Smadzenes tika ievietotas 1,5 procentu agarozē un sadalītas ar vibratomu, lai radītu koronālās sekcijas (40 μm). Katra piektā sadaļa tika savākta Prūsijas zilajai krāsošanai, lai noteiktu mikrohemorāģijas [26]. Prūsijas zilā krāsošana tika veikta, izmantojot svaigi pagatavotu 5% kālija heksacianoferāta-trihidrātu un 10% sālsskābi. Divdesmit minūtes vēlāk sekcijas tika izskalotas ūdenī un nokrāsotas ar kodolātri sarkanu, dehidrētas un pārklātas ar vāku. Mikrohemorāģijas tika identificētas ar palielinājumu × 20, jo 0, 6 un 24 stundās tika ievadīti violeti zili nogulsnes, kas skaitītas ar trim injekcijām. Subkutāna fizioloģiskā šķīduma hidratācija tika veikta 3 dienas pēc LPS injekcijām. Astes asinsspiediens (BP) tika mērīts pirms LPS injekcijām. Peles tika nogalinātas 1 nedēļu pēc LPS injekcijas. b Reprezentatīvas H&E krāsotas nieru sekcijas, kas demonstrē adenīna izraisītu tubulointersticiālu traumu CKD pelēm (labais panelis), salīdzinot ar normālu nieri no CTL dzīvnieka (kreisais panelis), × 20 palielinājums. Mēroga josla=100 μm

neatkarīgi novērotāji, un pēc tam tika aprēķināts vidējais rādītājs. Novēroto pozitīvi iekrāsoto sekciju attēli tika uzņemti, izmantojot fotomikroskopu (Nikon Eclipse, Japāna) trim dzīvniekiem katrā grupā, lai aprēķinātu mikrohemorāģijas laukumu. Tika skenēti veseli slaidu attēli, un tika izmantota Nacionālā veselības institūta (www.imagej.nih.gov/ij/) bezmaksas programmatūra ImageJ (versija 10.2).

aprēķināt kopējo smadzeņu virsmas laukumu. Mikrohemorāģiju skaits tika normalizēts līdz kopējam smadzeņu virsmas laukumam vienam dzīvniekam.

Western blotēšana

Smadzeņu puslodes olbaltumvielu analīzei audu savākšanas laikā tika sasaldētas un homogenizētas ledus aukstā audu ekstrakcijas reaģentā I (Thermo Fisher Scientific), kas papildināts ar proteāzes inhibitoru kokteili (Roche Applied Science, Indianapolisa, IN). Olbaltumvielu koncentrācijas tika mērītas ar BCA proteīna testa komplektu (Thermo Fisher Scientific). SDS-PAGE gēla elektroforēze tika veikta ar 100 ug proteīna katrā paraugā. Olbaltumvielas tika pārnestas uz PVDF membrānām un pēc tam bloķētas

1 stunda 5% beztauku sausā vājpienā, kas sagatavots TBS-T buferšķīdumā (10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl un 0,1% Tween-20) ​​un inkubēts ar primārajām antivielām, kuru mērķis ir klaudīns. -5 (atšķaidīts 1:200, Sigma-Aldrich SAB4502981), okludīns (atšķaidīts 1:200, Invitrogen 711500, Thermo Fisher Scientific) un normalizēts uz GAPDH iekšējo kontroli (atšķaidīts 1:10,{19}}, Abcam, Kembridža, MA) 5% beztauku pienā TBS-T nakti 4 grādu temperatūrā. Pēc tam blotus 2 stundas istabas temperatūrā inkubēja ar attiecīgajām anti-trušu vai anti-peles sekundārajām antivielām. Pēc mazgāšanas ar TBS-T joslas tika noteiktas, izmantojot Luminescent Image Analyzer LAS-3000 (Fujifilm Life Science, Stamford, CT).

Imūnhistoķīmija

Lai noteiktu asins-smadzeņu barjeras (BBB) ​​noplūdi, sekcijas tika inkubētas ar biotinilētu anti-peles IgG sekundāro antivielu 1:100 1 stundu istabas temperatūrā (Vector Laboratories, Burlingame, CA, ASV). Pēc mazgāšanas ar PBS sekcijas 30 minūtes inkubēja ar avidīna-biotīna-peroksidāzes kompleksu (Vector Laboratories) atšķaidījumā 1:200. Krāsošana tika izstrādāta, izmantojot 3′,3′-diaminobenzidīnu (DAB, Vector Laboratories) kā hromogēnu. Procentuālā platība, kas iekrāsota ar IgG, tika analizēta, izmantojot ImageJ programmatūru ne-LPS CTL un CKD smadzenēs. Pozitīvas IgG krāsošanas slieksnis tika izvēlēts, manuāli novērtējot kontroles dzīvnieku IgG iekrāsošanai, un pēc tam šis slieksnis tika saglabāts vienāds visiem iekļautajiem dzīvniekiem [27].

Cistanche deserticola novērš nieru slimības

Šūnu kultūras eksperimenti

Smadzeņu endotēlija šūnu kultūra un seruma apstrāde

Iemūžinātas peles bEnd.3 šūnas tika iegādātas no American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). Endotēlija šūnu fenotips tika apstiprināts, izmantojot fon Vilebranda faktora imūnkrāsošanu.

Šūnu kultūras tika inkubētas pilnīgā Dulbecco modificētajā Ērgļa barotnē ar augstu glikozes saturu (DMEM, ATCC 30-2002), kas satur 25 mM glikozes, kas papildināta ar 10 procentu liellopu augļa serumu (FBS) un 1 procentu penicilīna-streptomicīna. mitrināts inkubators 37 grādu temperatūrā 5 procentu CO2 un 95 procentu gaisa atmosfērā. Šūnas tika izmantotas 5. pasāžā visos eksperimentos. Šūnas tika iesētas ar blīvumu 5 × 106 uz 12-poliestera Transvela ieliktņiem (0,4 μm poras, Costar), un saplūšana tika panākta 24–48 stundās. Pēc tam barotne tika mainīta, lai šūnas pakļautu dažādām FBS, cilvēka normālā seruma (HNS) vai urēmiskā seruma (CKD) koncentrācijām no dialīzes pacientiem. TEER rādījumi tika mērīti, izmantojot EVOM2 voltu/omu mērītāju (World Precision Instruments, Sarasota, FL) trīs vietās katrā iedobē, lai iegūtu vidējo. Eksperimenti turpinājās 21 dienu, un barotne tika atsvaidzināta ik pēc 3–4 dienām. NHS un urēmiskais serums bija no iepriekš glabātiem paraugiem, kas iegūti pēc IRB apstiprināšanas un informētas piekrišanas.

Urīnvielas šūnu kultūras eksperimenti

Lai pārbaudītu urīnvielas (visbiežāk saglabātā toksīna HNS) ietekmi, bEnd.3 šūnas tika inkubētas DMEM ar augstu glikozes saturu ar 10 procentiem tikai FBS vai barotnē, kas papildināta ar 42 vai 72 mg/dL (70 vai 120 μm) urīnvielu ( Sigma- Oldrihs). Šīs urīnvielas koncentrācijas aptuveni atbilst vērtībām pirms un pēc hemodialīzes, kas parasti konstatētas ESRD pacientiem, un tiek uzskatītas par klīniski nozīmīgiem [28]. Pēc 24-h inkubācijas perioda beigām tika izmērīts TEER, šūnas tika novāktas un apstrādātas Western blot analīzei. Aktīna citoskeleta vizualizācijai bEnd.3 šūnas tika audzētas uz stikla pārklājuma plāksnēm un 24 stundas pakļautas iepriekšminētajām urīnvielas koncentrācijām, fiksētas 10 minūtes atdzesētā 4% formalīnā/PBS un pēc tam apstrādātas imunofluorescences krāsošanai, izmantojot fluorescējošu aktistain 488. faloidīns ar DAPI kodola traipu (kataloga Nr. PHDG1-A, Cytoskeleton Inc., Denvera, CO). Katrai grupai tika izgatavoti trīs slaidi, un programmā ImageJ uz katra slaida tika attēloti trīs kadri, lai aprēķinātu falloidīna iekrāsošanās laukumu, kas normalizēts DAPI apgabalam.

Western blotēšana

bEnd.3 šūnas no urīnvielas eksperimentiem tika granulētas, pēc tam lizētas audu ekstrakcijas reaģentā I (Thermo Fisher Scientific), kas papildināts ar proteāzes inhibitoru kokteili (Roche Applied Science). Olbaltumvielu koncentrācijas tika mērītas ar BCA proteīna testa komplektu, un Western blot tika veikts, kā aprakstīts iepriekš, izmantojot claudin -5 (atšķaidīts 1:500) un okludīnu (atšķaidīts 1:500), kas normalizēts atbilstoši GAPDH iekšējai kontrolei (atšķaidīts 1:20). ,000). Western blots tika atkārtots vismaz trīs reizes katram paraugam.

Cilvēka studijas

Retrospektīvs smadzeņu MRI diagrammas pārskats

Elektroniskie medicīniskie ieraksti laikā no 2008. gada 1. janvāra līdz 2014. gada 31. decembrim Kalifornijas Universitātes Irvinas Medicīnas centrā tika pārbaudīti, izmantojot Honest Broker sistēmu un UCReX (Kalifornijas Universitātes pētījumu birža) pēc IRB apstiprināšanas. Tika identificēti pirmsdialīzes HNS (n =8) un hroniskas hemodialīzes pacienti (n =9), kuriem atsevišķos laika punktos tika veiktas vismaz divas smadzeņu MRI skenēšanas (no 10 sākotnēji identificētajiem hemodialīzes pacientiem 1 tika izņemts no galīgā analīze, jo radioloģijas PACS sistēmā trūkst attēlu). Kontroles grupas ar normālu nieru darbību (n=10) tika manuāli saskaņotas ar hemodialīzes HNS pacientiem pēc dzimuma un vecuma ± 5 gadi.

MRI pārskats smadzeņu mikroasiņošanai

Mikroasiņošanu skaitīja ārstējošais neiroradiologs (DF) un analizēja progresēšanu laika gaitā. Smadzeņu MRI ar T2* svērto un jutības svērto attēlveidošanu (SWI) un FLAIR (šķidruma vājinātas inversijas atgūšanas) attēliem tika veikti ar 1,5T un 3T MRI skeneriem. SWI sekvenču slāņa biezums tika veikts 2 mm ar starpslāņu intervālu 0. Mikroasiņojumi tika skaitīti, pamatojoties uz 2-mm aksiālo SWI. FLAIR bija par-

izveidots, lai noteiktu baltās vielas bojājumus 3 mm šķēles biezumā, arī ar starpslāņa intervālu 0.

Statistiskā analīze

Pārbaudot ar Grubsa testu (ārkārtēja studentizēta novirzes metode, http://graphpad.com/quick calls/grubbs1/), datu novirzes netika konstatētas. Atšķirības starp grupām pelēm un cilvēkiem tika salīdzinātas ar hī kvadrāta (Fišera precīzo) testu kategoriskiem mainīgajiem un t-testiem un ANOVA nepārtrauktiem mainīgajiem. Nepārtrauktos datus ziņo kā vidējo ± SEM. Peles datiem mēs veicām gan Kruskal-Wallis neparametrisko, gan vienvirziena ANOVA ar Tukey HSD testiem. Lai pārbaudītu CKD mijiedarbību, tika izmantota divvirzienu ANOVA (CKD-jā/nē un LPS-jā/nē). Atšķirības starp grupām tika uzskatītas par būtiskām, ja P < 0.05.="" skaitļi="" tika="" ģenerēti,="" izmantojot="" graphpad="" prism="" 4="" programmatūru="" (graphpad="" software,="" sandjego="">

Rezultāti

Izdzīvošana ar LPS ārstēšanu

CKD pelēm, kas tika ārstētas ar LPS, izdzīvošanas rādītājs bija 80 procenti. Bija tikai tās peles, kuras izdzīvoja līdz 1 nedēļai pēc ārstēšanas ar LPS

iekļauti galīgajā analīzē. Visas peles citās grupās izdzīvoja līdz eksperimenta beigām.

CKD Ievērojami palielinātas smadzeņu mikrohemorāģijas

Slogs pēc LPS ārstēšanas

Dzīvniekiem ar adenīna izraisītu un 5/6 nefrektomijas CKD bija ievērojami paaugstinātas urīnvielas slāpekļa (BUN) un seruma kreatinīna vērtības, salīdzinot ar CTL dzīvniekiem (1. tabula). Astes asinsspiediens bija ievērojami augstāks nefrektomijas HNS dzīvniekiem, salīdzinot ar CTL un adenīna HNS dzīvniekiem (1. tabula); tomēr mikroasiņošanas rādītāji abās HNS grupās bija līdzīgi. H&E krāsošana apstiprināja adenīna izraisītu tubulointersticiālu ievainojumu nierēs no CKD pelēm (1.b att.).

Vidējais smadzeņu mikrohemorāģijas slodze bija 2.0 ± 0,5 uz cm2 ne-LPS CTL pelēm un palielinājās 2–2{8}} reizes ne-LPS CKD dzīvniekiem (adenīna- CKD pelēm 4,5 ± 0,9 uz cm2;

nefrektomijas-CKD pelēm 4,2 ± 1,1 uz cm2) (1. tabula; 2.a attēls). Grupām, kas nav LPS, mikrohemorāģiju pieaugums bija nozīmīgs adenīna-CKD, salīdzinot ar CTL, bet ne nefrektomijas-CKD gadījumā. Ārstēšana ar LPS palielināja mikrohemorāģijas veidošanos tādā pašā mērā CTL un CKD dzīvniekiem līdz