Cistanche Deserticola polisaharīdiem ir neiroprotektīva iedarbība

lai iegūtu plašāku informāciju:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu, et al

Abstract:

Išēmijas insults ir slimība ar augstu saslimstības un mirstības līmeni.Cistanchedeserticolapolisaharīdi(CDP) piemīt plašs labvēlīgu efektu klāsts, tostarp hepatoaizsardzība un imūnsistēmas homeostāze. Cik zināms, CDP aizsargājošais efekts(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)nav pētīts neironiem, kas bojāti skābekļa un glikozes atņemšanas/reperfūzijas (OGD/RP) rezultātā. Šajā pētījumā OGD / RP ievainoja PC12 šūnu modeli. Īsumā, CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)({0}},05, 0,5 un 5 ug/ml) tika ievadīts pirms reperfūzijas. CDP aizsargājošais efekts(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)pēc tam tika novērtēts, pamatojoties uz šūnu dzīvotspēju, laktātdehidrogenāzes (LDH) noplūdi, [Ca2 plus] I, mitohondriju membrānas potenciālu (MMP) un šūnu apoptozi, andredox statusu pēc reperfūzijas novērtēja, pārbaudot reaktīvās skābekļa sugas (ROS), katalāzi ( CAT), glutationa peroksidāzi (GSH-Px) un kopējo antioksidantu kapacitāti. Pamatojoties uz faktu, ka ar Parkinsona slimību saistītais proteīns DJ-1 piedalās endogēnā antioksidācijā un veicneiroprotektīvsietekmi pēc išēmijas, mēs pētījām CDP mijiedarbību(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)un DJ{{0}}. DJ-1 ekspresija tika noteikta, izmantojot ELISA un Western blot analīzi, un DJ-1 translokācija tika novērtēta ar imunofluorescences palīdzību. Rezultāti parādīja, ka CDP (0,05, 0,5 un 5 ug/ml) mazināja PC12 šūnu nāvi, saglabāja MMP un kalcija homeostāzi; inhibēja oksidatīvo stresu un samazina šūnu apoptozi. Turklāt CDP (5 ug/ml) ievērojami stimulēja DJ{10}} sekrēciju un ekspresiju. Kopumā rezultāti liecināja, ka CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)iedarbojas aneiroprotektīvsiedarbība pret OGD/RP izraisītiem ievainojumiem, inhibējot oksidatīvo stresu un regulējot DJ-1 ceļu

Atslēgvārdi:Cistanche deserticola, polisaharīdi, neiroprotektīvs, skābekļa glikozes atņemšana/reperfūzija, oksidatīvais stressDJ-1

Noklikšķiniet uz Cistanche UK produktiem

1. Ievads

Išēmisks insults ir otrais galvenais mirstības cēlonis un galvenais ilgstošas ​​invaliditātes cēlonis visā pasaulē [1]. Paredzams, ka 2030. gadā insulta izraisīto nāves gadījumu skaits pieaugs līdz 7,8 miljoniem [2]. Ķīnā katru gadu no insulta mirst 58 līdz 142 cilvēki no 100,{9}}. Tādējādi ir jāizstrādā efektīvas stratēģijas, kas novērš išēmijas-reperfūzijas bojājumus. Plaši pierādījumi apstiprina, ka oksidatīvais stress ir galvenais faktors, kas veicina smadzeņu infarkta attīstību un progresēšanu reperfūzijas laikā[3,4]. Tāpēc, atklājot efektīvuneiroprotektīvsaģenti, kas spēj samazināt ROS un nomākt oksidatīvo stresu, ir piesaistījuši ievērojamu interesi pētniecībā. Ar Parkinsona slimību saistītais proteīnsDJ-1 mediē neiroprotekciju, stimulējot anti-apoptotisku un antioksidantu gēnu ekspresiju [4,5]. DJ-1 var pārvietoties mitohondrijās ar oksidatīvo stresu un mitogēna stimulāciju, un to var izdalīt ārpusšūnu matricā patoloģiskos apstākļos, piemēram, krūts vēža, melanomas un OGD/RP traumu gadījumā [6]. Turklāt dīdžejs -1 ir noderīgs išēmiskās neirodeģenerācijas terapeitiskajā mērķī, jo tam ir izšķiroša nozīme antioksidācijā [4,7]. Pēdējo 10 gadu laikā vairākas grupas ir apstiprinājušas, ka DJ{12}} to ir darījisneiroprotektīvsietekme uz in vivofokālajiem smadzeņu išēmijas modeļiem un in vitro OGD/RP modeļiem [6–9]. Tikmēr dažas zāles, tostarp ciklosporīns A un nātrija fenilbutirāts, atceļ neironu šūnu nāvi, izmantojot DJ-1 upregulation inischemia insultu [9,10] ].

Cistanchedeserticola, neatņemama žāvēta augaCistanchedeserticolaYCMa un Cistanche tubulosa Wight ražo galvenokārt tuksnešainajos apgabalos Ķīnas ziemeļos un ziemeļrietumos [11]. C. deserticola ir ēdama un ir godināta kā "tuksnešu žeņšeņs". Akupunktu receptēs to lieto kā hronisku nieru slimību, seksuālās impotences, sieviešu neauglības, leikorejas, metrorāģijas un senla aizcietējuma ārstēšanu [12].C. deserticola polisaharīdi, galvenā aktīvā sastāvdaļa, kas izolēta noCistanche deserticola. CDP, modulē imūno funkciju un lipīdu līdzsvaru un nodrošina aizsardzību pret novecošanos, oksidēšanos un aknu bojājumiem. Turklāt CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)novērš išēmijas-reperfūzijas bojājumus sirdī un aknās [13,14]. Jaunākie pētījumi ziņoja, ka CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)nav toksiskas[12,15,16], un citas fitoķīmiskas vielas, kas iegūtas no C. Deserticola, tostarp ehinakozīds, izoakteozīds, akteozīds un salidrosīds, irneiroprotektīvssekas [11,12]. Tomēr līdz šim nav ziņots par iespējamo CDP izmantošanu išēmiska insulta bojājumu mazināšanai.

Šajā pētījumā mēs izvirzām hipotēzi, ka CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)kavē oksidatīvo stresu neiroaizsardzības nodrošināšanai. CDP iespējamā aizsargājošā iedarbība(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)inskēmijas insulta bojājumi tika pārbaudīti, izmantojot OGD / RP ievainotas PC12 šūnas. Pēc tam tika izpētītas ar DJ-1 saistītās mijiedarbības.

2. Metodes

2.1. Šūnu kultūra un OGD/RP modelis

PC12 šūnas tika kultivētas RPMI 1640 barotnē, kas satur 10 procentus FBS, 37 grādu temperatūrā normoksiskā inkubatorā, kas satur 5 procentus CO2. Vide tika nomainīta ik pēc 48 stundām. Tika sagatavots OGD/RP modelis. PC12 šūnas tika mazgātas un pakļautas Earle līdzsvarotā sāls šķīdumam. Pēc tam šūnas tika pārvietotas uz anaerobo kameru, kas satur 5 procentus CO2 un 95 procentus N2, 37 grādu temperatūrā 4 stundas, un pēc tam ļāva tām atkārtoti oksidēties. Šajā posmā šūnām tika pievienots tāds pats daudzums barotnes. Pēc reoksigenācijas šūnas 24 stundas ievietoja normoksiskā inkubatorā.

2.2. Zāļu administrēšana

CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)tika iegādāts no Yuanye Biological Technology Co., Šanhajā, Ķīnā (C23J7Y18405, > 98 procentu tīrība). Nimodipīns, pirmās līnijas profilaktisks līdzeklis išēmijas insulta ārstēšanai, tika izmantots kā pozitīvs kontroles savienojums [17–19]. Nimodipīna injekciju veica uzņēmums Bayer Company. Šūnas tika nejauši sadalītas sešās grupās, proti, kontroles, vehicle (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP.(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)(0,05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)(0.5 ug/ml) un CDP (5 ug/ml). Nimodipīns un CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)tika pievienoti pirms reperfūzijas. Kontroles grupa tika kultivēta normālā barotnē un inkubēta normoksiskā stāvoklī.

2.3. Šūnu dzīvotspēja: MTT un NRU testi

PC12 šūnas (6 × 103 katrā iedobē) tika iesētas 96-iedobes kultūras plāksnē. Šūnas tika apstrādātas saskaņā ar katras grupas prasībām. MTT (Solarbio, Ķīna) pievienoja šūnām koncentrācijā 5 mg / ml un inkubēja 4 stundas 37 grādos. Formazāns ir sukcināta dehidrogenāzes reducēšanās produkts dzīvās šūnās [20]. DMSO tika pievienots, lai izšķīdinātu radīto zilo formazānu. Absorbcija pie viļņa garuma 490 nm tika noteikta ar Microplate Reader (Thermo, ASV) pēc tam, kad šūnas tika kratītas 10 minūtes 25 grādu temperatūrā. Šūnu dzīvotspējas rezultāti izpaudās procentos no kontroles grupas [21].

Neitrālās sarkanās uzņemšanas (NRU) tests tika veikts saskaņā ar iepriekš publicēto protokolu [22]. Kad reperfūzijas periodi bija pabeigti, šūnām tika pievienots neitrāls sarkans (Solarbio, Ķīna) ar koncentrāciju 50 ug/ml. Maisījumu inkubēja 3 stundas. Pēc tam šūnas tika ātri nomazgātas ar šķīdumu, kas satur 0,5 procentus formaldehīda un 1 procentu kalcija hlorīda. Pēc tam šūnas tika pievienotas maisījumam, kas satur 1 procentu etilskābes un 50 procentus bezūdens etanola. Plāksnes tika nolasītas pie 540 nm absorbcijas pēc tam, kad šūnas tika kratītas 20 minūtes 37 grādu temperatūrā. Šūnu dzīvotspējas rezultāti izpaudās procentos no kontroles grupas.

Cistanche deserticola polisaharīdipiederNeiroprotektīva iedarbība

2.4. Citotoksicitātes novērtējums

LDH ir citoplazmas enzīms, kas katalizē laktāta topiruvāta oksidāciju. Kad šūnas membrāna ir bojāta, LDH ātri izdalās ekstracelulārajā šķidrumā. Tāpēc LDH noteikšanu parasti veic citotoksicitātes novērtēšanai. [23]. Eksperimentālā procedūra sekoja komerciālā komplekta instrukcijām, ko nodrošina LDH testa komplekts (Jiancheng, Ķīna). Katra parauga absorbcija tika noteikta pie 440 nm ar mikroplašu lasītāju. Šūnu nāves procentuālais daudzums tika aprēķināts, izmantojot šādu formulu: Dzīvotspēja (procenti)=(OD apstrāde – ODTreatment tukšā)/(OD maks. LDH aktivitāte – OD maks. LDH aktivitāte tukšā) × 100 procenti.

2.5. Intracelulārā Ca2 plus koncentrācijas noteikšana

Ca2 plus intracelulārā koncentrācija tika mērīta ar Fluo-3/AM [15]. PC12 šūnas trīs reizes nomazgāja ar PBS un pēc tam inkubēja ar 2 μM Fluo -3/AM (Beyotime, Ķīna) 30 minūtes 37 grādu temperatūrā tumsā. Pēc tam šūnas trīs reizes mazgāja ar PBS, lai attīrītu ārpusšūnu krāsvielu. Fluo-3/AM fluorescences intensitāte tika noteikta ar lāzera skenēšanas konfokālo mikroskopu (Olympus, Japāna). Pelēktoņu vērtību aprēķināšanai tika izmantota programmatūras pakotne Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer un ImageJ

2.6. MMP mērīšana

JC-1 (5,5′,6,6′-tetrahloro-1,1′,3,3′-tetraetilimidakarbocianīns; Beyotime, Ķīna) ir ērta, spriegumam jutīga zonde, ko parasti izmanto krāsošanai. šūnām un MMP novērtēšanai [24]. PC12 šūnas divas reizes nomazgāja ar aukstu PBS un pēc tam inkubēja ar maisījumu, kas satur 50 procentus barotnes un 50 procentus darba šķidruma, 15 minūtes 37 grādos tumsā. Pēc tam maisījums tika izmests un aizstāts ar svaigu barotni. Sarkanie un zaļie fluorescences attēli tika uzņemti, izmantojot lāzera skenēšanas konfokālo mikroskopiju. MMP mērījumiem tika izmantota sarkanās un zaļās fluorescences signālu relatīvā proporcija [25]. Pelēktoņu vērtību aprēķināšanai tika izmantota programmatūras pakotneOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer un ImageJ.

2.7. Apoptozes noteikšanas tests, Hoechest33342 un plūsmas citometrijas analīze

Šūnu apoptozes pārbaudei tika izmantota DNS saistoša krāsviela Hoechst33342 [26]. Pēc reperfūzijas PC12 šūnas trīs reizes mazgāja ar PBS un inkubēja ar Hoechst33342 (Beyotime, Ķīna) ar koncentrāciju 5 ug/ml 15 minūtes 37 grādu temperatūrā tumsā. Pēc tam šūnas tika novērotas ar lāzera skenēšanas konfokālo mikroskopu. Apoptotiskajām šūnām bija intensīva zilā fluorescence un kodola kondensācija. Katram krāsošanas eksperimentam tika uzņemti un kvantitatīvi noteikti trīs nejauši lauki. Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer un ImageJ tika izmantoti pelēktoņu vērtību aprēķināšanai. Apoptotisko šūnu procentuālais daudzums tika aprēķināts, izmantojot šādu formulu: apoptotiskais daudzums / kopējais daudzums × 100 procenti [27].

2.8. ROS paaudzes mērīšana

Fluorescējošā zonde 2′,7′-dihlorfluoresceīna-diacetāts (DCFH-DA; Jiancheng, Ķīna) var iekļūt šūnu membrānās un var tikt hidrolizēta par nefluorescējošu DCFH. DCFH tiek oksidēts ar intracelulāro ROS līdz fluorescējošajam DCF [29]. Pēc reperfūzijas šūnas divas reizes nomazgāja ar PBS un pēc tam inkubēja ar DCFH-DA galīgajā koncentrācijā 10 μM 45 minūtes 37 grādu temperatūrā tumsā. Fluorescence tika novērota ar afluorescences spektrofotometru ar ierosmes viļņa garumu 485 nm un emisijas viļņa garumu 535 nm.

Cistanche deserticola polisaharīdipiederNeiroprotektīva iedarbība

2.9. Oksidatīvā stresa indikatoru noteikšana: CAT, GSH-Px un T-AOClīmeņi

Šūnas tika nokasītas un atkārtoti suspendētas PBS. Iegūtās šūnu suspensijas 45 reizes apstrādāja ar ultraskaņu uz ledus un centrifugēja ar ātrumu 1000 apgr./min 10 minūtes 4 grādu temperatūrā. Supernatanti tika paturēti un izmantoti noteikšanai [24]. Kopējais olbaltumvielu saturs šūnu supernatantā tika mērīts ar BCA proteīna testa reaģentu komplektu (KeyGEN, Ķīna). CAT, GSH-Px un T-AOC līmeņu aktivitātes tika mērītas saskaņā ar ražotāja norādījumiem (Jiancheng, Ķīna). Katra parauga absorbcija tika noteikta ar mikroplašu lasītāju.

2.10. Ekstracelulārās DJ-1 koncentrācijas mērīšana

PC12 šūnas (6 × 103 katrā iedobē) tika iesētas 96-iedobju kultūras plāksnēs. Pēc reperfūzijas šūnu supernatants tika savākts un analizēts ar DJ-1/PARK-7 ELISA komplektu (Raybio, ASV). ) saskaņā ar ražotāja norādījumiem [9]. Katra parauga absorbcija tika noteikta ar Microplate Reader pie divu viļņu garuma 450 nm vai 540 nm.

2.11. Western blot analīze

Šūnu proteīni tika ekstrahēti ar ledusaukstu līzes buferi saskaņā ar ražotāja norādījumiem (KeyGEN, Ķīna). Olbaltumvielu koncentrācija tika noteikta ar BCA proteīna testa reaģentu komplektu. Vienāds daudzums olbaltumvielu lizātu (20 ug) no katras grupas tika izšķīdināts 12% nātrija dodecilsulfāta-poliakrilamīda gēla elektroforēzē un pēc tam pārnests uz nitrocelulozes membrānu. Membrānu inkubēja ar PBS, kas satur 5 procentus vājpiena, 2 stundas istabas temperatūrā un pēc tam zondēja ar anti-PARK7/DJ-1 antivielām (ab76008, Abcam; atšķaidījums 1:1000) nakti 4 grādu temperatūrā. Pēc tam membrānu trīs reizes nomazgāja ar PBST un inkubēja ar sekundāro antivielu kazu anti-trušu IgG (SA00001-2, Proteintech Group; atšķaidījums 1:5000) istabas temperatūrā 2 stundas. Antivielu anti- -tubulīns (10759-1-AP, Proteintech Group; atšķaidījums 1:1000) tika uzskatīts par kontroli. Olbaltumvielu joslas tika vizualizētas ar pastiprinātas hemiluminiscences (ECL) reakcijas reaģentiem. Joslu blīvums tika mērīts ar QuantityOne Analysis programmatūru v.4.6.9.

2.12. Imūncitoķīmiskā analīze

PC12 šūnas tika fiksētas 4 procentu paraformaldehīdā 15 minūtes istabas temperatūrā pēc reperfūzijas apstrādes [9]. Pēc pārmērīga paraformaldehīda noņemšanas šūnas 10 minūtes istabas temperatūrā inkubēja PBS, kas satur 0,3 procentus Triton X-100. Pēc tam šūnas trīs reizes mazgāja ar PBS, pirms tās 1 stundu inkubēja ar 5% normālu kazas serumu. Pēc tam šūnas tika inkubētas ar trušu peles monoklonālo anti-ATP sintāzes ķēdi (MABS1304, EMD Millipore, atšķaidījums 1:200) mitohondriju iekrāsošanai un pēc tam inkubētas ar anti-PARK7/DJ-1 antivielu (atšķaidījums 1: 100) proteīna DJ-1 zondēšanai. Šūnas tika mazgātas un inkubētas ar kazas anti-trušu IgG-Alexa 488 (zaļš; A11034, Invitrogen; atšķaidījums 1:1000) un kazas anti-peles IgG-Alexa 594 (sarkans; A11032; Invitrogen; atšķaidījums 1:1000) min. Visbeidzot, šūnas trīs reizes nomazgāja ar PBS un uzmontēja uz stikla priekšmetstikliņiem ar montāžas barotni, kas satur DAPI. Imunofluorescējošie attēli tika vizualizēti, izmantojot lāzera skenēšanas konfokālo mikroskopu.

Cistanche deserticola polisaharīdipiederNeiroprotektīva iedarbība

2.13. Datu/statistiskā analīze

Visas vērtības tika parādītas kā vidējās ± SD. Nozīmīgums tika noteikts ar vienvirziena dispersijas analīzi (ANOVA), kam sekoja Daneta daudzu salīdzināšanas tests. p < .05="" tika="" uzskatīts="" par="" statistisko="" nozīmīgumu.="" eksperimentālie="" dati="" tika="" analizēti,="" izmantojot="" spss="" 17.0="" statistikas="">

3. Rezultāti

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)inhibēja OGD / RP izraisītus šūnu bojājumus

PC12 šūnām, kas pakļautas OGD / RP, bija ievērojams skaita samazinājums. Šūnu forma tika mainīta un šūnu membrāna tika salauzta. MTT testā šūnu dzīvotspēja CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)grupās ({{0}},05, 0,5 un 5 ug/ml) bija attiecīgi 58,91 procenti ± 5,40 procenti, 61,13 procenti ± 3,81 procenti un 68,57 procenti ± 3,24 procenti, p < 0,05="" (1.a="" attēls).="" ,="" un="" ar="" transportlīdzekli="" bija="" 51,68="" procenti="" ±="" 3,89="" procenti.="" šīs="" vērtības="" norādīja,="" ka="">(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)aizsargāja šūnas pret OGD / RP ievainojumiem un samazināja šūnu nāvi. Turklāt šūnu dzīvotspēja Nimo grupā bija 77,02 procenti ± 5,22 procenti, kas ir gandrīz vienāda ar 5 ug/ml CDP.(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)ārstētā grupa.

NRU testā šūnu dzīvotspēja CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)grupām ({{0}},05, 0,5 un 5 ug/ml) bija attiecīgi 52,03 procenti ± 4,72 procenti, 58,49 procenti ± 2,50 procenti un 69,17 procenti ± 3,91 procenti (1. B attēls) un ar transportlīdzekli bija 47,14 procenti ± 2,88 procenti. Vērtības liecināja par CDP no koncentrācijas atkarīgo aizsargājošo iedarbību.

Atšķirībā no nesēja (44,73 procenti ± 3,30 procenti), LDH izdalīšanās CDP tika ievērojami samazināta.(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)grupas. CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)grupām ({{0}},05, 0,5 un 5 ug/ml), LDH noplūdes rādītāji bija attiecīgi 32,41 procenti ± 3,70 procenti, 27,13 ± 2,79 procenti un 23,13 procenti ± 4,59 procenti, p < ,01="" (att.="" 1c).="" turklāt="" ldh="" noplūdes="" rādītāji="" nimo="" grupā="" bija="" 21,99="" procenti="" ±="" 4,02="" procenti,="" kas="" bija="" gandrīz="" vienāds="" ar="" 5="" ug/ml="" cdp="" apstrādātajā="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)novājināts OGD/RP izraisīts [Ca2 plus ]i pieaugums

Intracelulārais Ca2 plus līmenis PC12 šūnās pēc OGD/RP traumas tika paaugstināts līdz 4146,60 ± 195,97 atšķirībā no kontroles grupas (373,62 ± 75,69). CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)grupas ({{0}},05, 0,5 un 5 ug/ml) varētu atkarībā no devas samazināt intracelulāro Ca2 plus līmeni attiecīgi līdz 2921,25 ± 222,19, 2015,85 ± 230,53 un 1768,43 ± 426,12 A (C2 un Fig. ). Turklāt Ca2 plus līmenis grupā, kas saņēma 5 ug/ml CDP, samazinājās līdz līmenim, kas ir salīdzināms ar līmeni Nimo grupā (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)novājināta OGD/RP izraisīta MMP izkliede

Salīdzinot ar kontroles grupu (1,67 ± 0,89), nesēja grupa (0,48 ± 0,10) uzrādīja vairāk zaļās FL fluorescences nekā sarkanā FL fluorescence (2.B un D att.). Attiecības starp sarkano un zaļo FL fluorescenci tika samazinātas līdz 1,11 ± 0,26 un 1,18 ± 0,16 0,5 un 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)attiecīgi apstrādātās grupas, p < ,01.="" zaļās="" fl="" fluorescence="" tika="" ievērojami="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)novērsa OGD / RP izraisītu šūnu apoptozi

Šūnas, kurām bija kondensēti hromatīni vai fragmentēti kodoli, tika novērtētas kā apoptotiskas šūnas [30]. Hoechst33342 testa rezultāti atklāja kondensētu kodolu parādīšanos pēc OGD/RP (3.A un C att.). Transportlīdzekļa grupas kodolos tika novērota augsta FL fluorescences intensitāte. Kodolu FL fluorescences intensitāte bija novājināta 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)ārstētā grupa. Mēs analizējām apoptozes ātrumu PC12 šūnās, izmantojot citu citometriju, izmantojot FITC-Aneksīna V/PI dubulto krāsošanu (3.B un D att.). Kontroles grupai šūnu apoptozes līmenis bija 4,16 procenti ± 0,24 procenti, savukārt nesēja grupai bija 22,98 procenti ± 0,66 procenti. Ar 5 ug/ml CDP ārstētajā grupā šūnu apoptozes ātrums bija 7.86 procenti ± 1,16 procenti.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)novājināta OGD / RP izraisīta intracelulārā ROS uzkrāšanās un saglabāts redox statuss

CDP ietekme(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)Oksidatīvais stress tika pierādīts, pamatojoties uz ROS veidošanos, GSH-Px, CAT aktivitātēm un T-AOC līmeni. ROS līmenis OGD/RP ievainotajās PC12 šūnās palielinājās un kļuva ievērojami augstāks nekā kontroles grupā (p < 0,01).="" tikmēr="" ros="" līmenis="">(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)grupās ({{0}},05, 0,5 un 5 ug/ml) samazinājās atkarībā no devas (p < 0,01;="" 4.a="" att.).="" turklāt="" cdp="" arī="" ievērojami="" palielināja="" t-aoc="" (p="">< .05;="" 4.b="" att.),="" cat="" (p="">< 0,05;="" 4.="" c="" att.)="" un="" gsh-px="" (p="">< 0,05;="" 4.d="" att.)="" līmeni,="" salīdzinot="" ar="" transportlīdzekli.="" grupai.="" endogēno="" antioksidantu="" aktivitātes="">(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)grupas palielinājās.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)stimulēja dīdžeja sekrēciju-1 un uzlaboja dīdžeja izteiksmi-1

Tika konstatētas DJ-1 koncentrācijas izmaiņas šūnu supernatantā un atklāja iespējamo saistību starp DJ-1 un CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi). Tika novērota DJ-1 izdalīšanās no OGD/RP ievainotajām PC12 šūnām (5. att.). DJ-1 tika ievērojami paaugstināts 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)-ārstētajā grupā (38,66 ± 8,44 pg/ml) un ievērojami palielinājās nekā nesēju grupā (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) un kontroles grupā (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01) .

Lai izpētītu CDP ietekmi(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)attiecībā uz DJ-1 intracelulāro ekspresiju mēs izmērījām DJ-1 proteīna līmeni ar Western blot metodi. DJ-1 proteīna ekspresijas līmenis ievērojami palielinājās 24 stundas pēc reperfūzijas. Turpretim 5 ug/ml CDP pēcapstrāde ievērojami uzlaboja DJ-1 pārmērīgu ekspresiju, salīdzinot ar nesēju grupu (p < 0,01,="" 6.="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)uzlabota DJ{0}} translokācija mitohondrijās

PC12 šūnas tika iekrāsotas ar anti-PARK7/DJ-1 un anti-ATP sintāzes ķēdes antivielām (7. un 8. attēls). Anti-ATP sintāzes - ķēdes antivielu saites ar mitohondriju kompleksu I un saistošais antigēns tika lokalizēti mitohondriju iekšējā membrānā. Rezultāti atklāja, ka DJ{10}} pēc OGD/RP apvainojuma pārcēlās uz mitohondriju iekšējo membrānu (8. att.). Tikmēr dīdžeja-1 un mitohondriju dubultās krāsošanas rezultāti atklāja, ka CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)atvieglota DJ- 1 mitohondriju translokācija un līdzlokalizācija (8. att.). Šie rezultāti norādīja uz tiešu mijiedarbību starp DJ-1 unneiroprotektīvsCDP ietekme(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)(9. att.).

4. Diskusija

Šajā pētījumā mēs no pirmavotiem ziņojām, ka CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)efektīvi samazina OGD/RP izraisītos PC12 šūnu bojājumus, paaugstinot DJ-1 proteīna regulēšanu. CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)uzlabota šūnu dzīvotspēja, samazināts šūnu membrānas bojājums, saglabāts intracelulārais Ca2 plus homeostāze, novērsts MMP zudums, samazināta šūnu apoptoze, nomākts oksidatīvais stress, veicināta DJ-1 ekspresija un pastiprināta DJ-1 translokācija mitohondrijās. DJ-1 nesen tika iesaistīts regulēšanāneiroprotektīvsefekts un mitohondriju integritāte. Šie rezultāti sniedza pārliecinošus pierādījumus parneiroprotektīvsCDP ietekme(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)pret išēmiju. Turklāt CDP un DJ{0}} mijiedarbība spēlē aneiroprotektīvsloma OGD / RP izraisītos PC12 šūnu bojājumos. Iepriekš minētie rezultāti var uzlabot mūsu izpratni par CDP labvēlīgo ietekmi un sniegt noderīgu informāciju insulta terapijai nākotnē.

Išēmijas insults ir saistīts ar sarežģītu bioķīmisko un molekulāro mehānismu sēriju, tostarp eksitotoksicitāti, kalcija pārslodzi un oksidatīvo stresu [31]. OGD/RP tiek plaši izmantots kā išēmijas-reperfūzijas in vitro modelis un tiek izmantots neiroloģisko un bioķīmisko izmaiņu izpētei. PC12 šūnu līnija ir jutīga pret OGD/RP traumām [2]. Tam piemīt vairākas simpātisko neironu īpašības un īpašības [32] un tādējādi plaši izmantotas neironu šūnu līnijas pētījumiem, kas saistīti ar insulta izraisītu neiroloģisko bojājumu mehānismiem [33,34]. Daudzi pētījumi liecina, ka oksidatīvajam stresam ir būtiska nozīme insulta un smadzeņu išēmijas bojājumos [35–37]. Ar Parkinsona slimību saistītais proteīns DJ-1 var kavēt išēmisku neirodeģenerāciju un uzvedības disfunkciju, samazinot ar ROS izraisītu neironu bojājumu [7]. Tāpēc mēs izmantojām OGD / RP traumu PC12 šūnu modeli, lai izpētītuneiroprotektīvsCDP ietekme(Cistanchedeserticolapolisaharīdi).

OGD/RP izraisīto traumu pakāpe PC12 šūnās tika novērtēta ar MTT, NRU un LDH izdalīšanās testiem. CDP administrēšana(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)({0}},05, 0,5 un 5 ug/ml) uzlaboja šūnu izdzīvošanu un samazināja LDH izdalīšanos. CDP ārstēšanas labvēlīgā ietekme ietvēra arī intracelulārās kalcija pārslodzes samazināšanos un MMP saglabāšanos. Intracelulārā Ca2 plus koncentrācijas novirzes, īpaši mitohondriju kalcija pārslodze, ir saistītas ar neironu apoptozi un nāvi, ko izraisa išēmijas insults [38]. MMP var atspoguļot elektronu transportēšanas ķēdes efektivitāti, un tas ir norādīts kā šīs sistēmas patoloģisku traucējumu indekss [39]. Gan intracelulārā Ca2 plus koncentrācijas paaugstināšanās, gan MMP zudums var izraisīt neironu struktūras destabilizāciju un galu galā izraisīt šūnu bojājumus vai šūnu nāvi [21, 40]. Šajā pētījumā rezultāti parādīja, ka CDP ievērojami inhibēja intracelulāro Ca2 plus pārslodzi un palielināja MMP līmeni OGD / RP traumu PC12 šūnās. Apoptozei ir būtiska loma smadzeņu išēmijas-reperfūzijas traumas sarežģītajā patofizioloģijā. Pieaugošie dati liecina, ka apoptoze ir saistīta ar mitohondriju disfunkciju; MMP izkliede ir agrīns notikums, kas izraisa šūnu apoptozi [8, 39]. Apoptoze ir no enerģijas atkarīga ieprogrammētas šūnu nāves process, lai atbrīvotos no liekajām šūnām. Daudzi išēmiskā insulta neironi tiks pakļauti apoptozei [41]. Šajā pētījumā mēs veicām Hoechst33342 un aneksīna V-FITC/PI krāsošanu, lai pārbaudītu CDP ietekmi uz apoptozi [23,28]. Rezultāti parādīja, ka CDP saglabā kodola integritāti un samazina šūnu apoptozes ātrumu. Visi šie rezultāti norādīja, ka CDP anti-apoptotiskā aktivitāte veicināja labvēlīgo ietekmi uz neironu bojājumiem PC12 šūnās.

Šūnas tiek pakļautas išēmijas bojājumiem, ko izraisa pārmērīga ROS uzkrāšanās, kas var izraisīt lipīdu peroksidāciju, šūnu membrānas bojājumus, kalcija pārslodzi un mitohondriju disfunkciju, kas galu galā izraisa šūnu apoptozi un nāvi [42]. Arī endogēno antioksidantu, piemēram, SOD, CAT un GSH-Px, patēriņš liecināja par rašanos. 9. att. Iespējamie CDP aizsargājošās iedarbības mehānismi.(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)pret OGD/RP izraisītiem PC12 šūnu bojājumiem. CDP ārstēšana nomāc oksidatīvo stresu, stabilizē Ca2 plus koncentrāciju un MMP, uzlabo DJ-1 ekspresiju un lokalizāciju mitohondrijās. Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678 par oksidatīvo stresu išēmijas-reperfūzijas laikā. Šajā pētījumā OGD/RP grupa uzrādīja būtisku ROS pieaugumu un CAT, GSH-Px un T-AOC samazināšanos, salīdzinot ar 5 ug/ml CDP ārstēto grupu. Tomēr CDP grupās mēs novērojām būtisku ROS veidošanās un endogēno antioksidantu (CAT, GSH-Px un T-AOC) patēriņa samazināšanos. Labvēlīgā ietekme 5 ug/ml CDP grupā bija tuva Nimo grupai. Rezultāti liecināja, ka CDP kavē ROS veidošanos un atjauno fermentatīvo antioksidantu aizsardzību.

DJ-1 ir galvenais redoksreaktīvsneiroprotektīvsproteīns, kas ir saistīts ar oksidatīvā stresa regulēšanu insulta gadījumā. DJ-1 pārmērīgas ekspresijas labvēlīgā ietekme ietver šūnu izdzīvošanu no išēmijas reperfūzijas un mitohondriju funkcijas un morfoloģijas saglabāšanu, piemēram, mitohondriju caurlaidības pārejas poru atvēršanu [39,43]. Iepriekšējie pētījumi liecina, ka DJ-1 aizsargājošā iedarbība šūnās, kas pakļautas OGD/RP iedarbībai, ir saistīta ar tā antioksidanta īpašībām un mitohondriju translokāciju [43–45]. DJ-1 veic efektīvu endogēnu neiroprotekciju, lai mazinātu mitohondriju defektus, izmantojot translokāciju [46]. Vairāki pētījumi liecina, ka DJ{10}} translokācija var ietekmēt mitohondriju kustību, uzlabot šūnu un šūnu mijiedarbību un veicināt citus šūnu izdzīvošanas procesus.

DJ-1 ietekmē vairākus procesus, piemēram, šūnu migrāciju un adhēziju, ķīmijaksi, proliferāciju un apoptozi gan in vitro, gan in vivo modeļos [6,9,47,48]. Izmantojot OGD / RP ievainoto PC12 šūnu insulta modeli, mēs izpētījām iespējamo saistību starp CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)un DJ-1. DJ- 1 pārmērīga ekspresija tika noteikta ar ELISA un Western blot metodi. Līdztekus šai funkcijai galvenais eksperimentu atklājums parādīja, ka ievērojama dīdžeja -1 pārmērīga ekspresija notika CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)(5 ug/ml) tika ievadīts pirms reperfūzijas. Tas liecināja par iespējamuneiroprotektīvsietekme uz CDP un DJ attiecībām-1. Turklāt mēs esam novērojuši, ka DJ-1, kas atrodas mitohondrijās OGD/RP apstākļos un bagātīgā DJ-1 ekspresijā, samazināja šūnu jutību pret ROS un inhibēja oksidatīvo stresu [45]. Rezultāti liecināja, ka CDP regulē un uzlabo DJ-1, kas darbojas kā molekulāra saikne starp mitohondriju disfunkciju un oksidatīvo stresu un nodrošina insultam raksturīgās sekundārās šūnu nāves progresēšanu [5,47,49–51]. Tandēmā ar DJ-1 stabilizāciju mitohondrijās, CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)ārstēšana palielināja šūnu izdzīvošanu, stabilizēja Ca2 plus homeostāzi, uzlaboja MMP izkliedi un novērš ar mitohondriju saistītu apoptozi [43]. Kopumā mūsu rezultāti liecināja, ka CDP ir jaunsneiroprotektīvsišēmiska insulta ārstēšanas mehānisms.

5. Secinājums

Mūsu rezultāti norādīja, ka CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)aizsargā PC12 šūnas pret OGD/RP izraisītiem ievainojumiem, pateicoties antioksidanta iedarbībai, kas daļēji ir saistīta ar DJ-1 mediēto ceļu. Šie efekti ietver šūnu membrānas bojājumu ātruma samazināšanos, [Ca2 plus] I homeostāzes saglabāšanos, MMP izkliedes uzlabošanos, šūnu apoptozes inhibīciju, intracelulārās ROS vājināšanos un DJ-1 līmeņa modulāciju. Rezultāti arī norādīja, ka mijiedarbība starp CDP un DJ-1 pastiprina neiroaizsardzību un saglabā mitohondriju integritāti. Tāpēc neaizsargātos neironus var aizsargāt ar CDP(Cistanchedeserticolapolisaharīdi)uzlabojot DJ-1 izteiksmi išēmijas insulta laikā.

Pateicības

Šo pētījumu atbalstīja Ķīnas Nacionālais dabaszinātņu fonds (dotācija 81360649), Nacionālā zinātnes un tehnoloģiju pamatprogramma (dotācija 2015BAK45B01) un Ningxia Hui autonomā reģiona zinātnes un tehnoloģiju atbalsta programma (dotācija 2016BZ07).

Cistanche deserticola polisaharīdipieder Neiroprotektīva iedarbība

Atsauces

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans aizsargā kortikālos neironus pret hipoksijas izraisītu toksicitāti, samazinot HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: ātrās reaģēšanas programma insulta gadījumā Ķīnā, Lancet Neurol. 16 (2017) 27.–28.

[3] PM Džordžs, GK Steinbergs, Jaunā insulta terapija: insulta patofizioloģijas un tās ietekmes uz klīnisko ārstēšanu atrisināšana, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, NADPH oksidāzes saistītā patofizioloģija insulta eksperimentālos modeļos, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, The oksidācijas stāvokļi DJ{{ 1}} nosaka šūnu likteni, reaģējot uz oksidatīvo stresu, ko izraisa 4-hpr: autofagija vai apoptoze? Antioksīda redoksa zīme. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 uzlabo išēmisku šūnu nāvi in ​​vitro, iespējams, izmantojot mitohondriju ceļu, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56.–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira u.c., DJ{{ 1}} aizsargā pret neirodeģenerāciju, ko izraisa fokusa smadzeņu išēmija un reperfūzija žurkām, J. Cereb. Asins plūsma. Met. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, žurku primārās neironu šūnas, kurām ir skābekļa trūkums, uzrāda DJ-1 translokāciju veselos mitohondrijos: spēcīgs insulta terapeitiskais mērķis, CNS Neurosci. Tur. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Ciklosporīna A ārstēšana atceļ išēmijas izraisītu neironu šūnu nāvi, saglabājot mitohondriju integritāti, palielinot ar Parkinsona slimību saistīto proteīnu DJ-1, CNS Neurosci. Tur. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu u.c., Iepriekšēja apstrāde ar nātrija fenilbutirātu atvieglo smadzeņu išēmiju/ reperfūzijas bojājums, pārregulējot DJ-1 proteīnu, priekšā. Neirol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Neirofarmakoloģijas apskats, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): viena no labākajām tradicionālās ķīniešu medicīnas farmaceitiskajām dāvanām, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Ķīniešu augu izcelsmes zāļu iedarbība un mehānismi miokarda išēmijas-reperfūzijas bojājumu uzlabošanā, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches stimulē šūnu glutationa redoksciklu ar reaktīvām skābekļa sugām, kas rodas no mitohondriju elpošanas H9c2 kardiomiocītos, Pharm. Biol. 51 (2013) 64.–73.

[15] T. Vans, X. Džans, V. Sji,Cistanchedeserticola YC Ma, "Tuksneša žeņšeņs": pārskats, Am. J. Čins. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolanovārījums mazina sēklinieku toksicitāti, ko izraisa hidroksiurīnviela peļu tēviņiem, Asian J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Hercfelds, K. Štrauss, S. Simmermahers, K. Borks, R. Horstkorte, F. Dehgani, K. Šellers, Izmeklēšananeiroprotektīvsnimodipīna ietekme uz Neuro2a šūnām, izmantojot ķirurģijai līdzīgu stresa modeli, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadehs, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neiroprotektīvsnoskapīna ietekme uz smadzeņu skābekļa un glikozes atņemšanas traumu, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A aizsargā pret išēmiskiem traucējumiem žurku garozas neironu primārajā kultūrā pēc skābekļa un glikozes atņemšanas. ar reperfūziju, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Trans-cinnamaldehīds aizsargāja PC12 šūnas pret skābekļa un glikozes trūkumu /reperfūzijas (OGD/R) izraisīts ievainojums antiapoptozes un antioksidatīvā stresa rezultātā, Mol. Šūnu Biochem. 421 (2016) 67.–74.

[21] R. Čans, R. Džou, X. Cji, Dž. Vans, F. Vu, V. Jaņs, V. Džans, T. Suns, J. Li, J. Ju. Aloīna aizsardzības ietekme uz skābekli un glikozes trūkuma izraisīts ievainojums PC12 šūnās, Brain Res. Bullis. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol aizsargā išēmiskas PC12 šūnas, inhibējot ar hipoksiju saistītos transkripcijas faktorus un paaugstinot antioksidantu aizsardzības enzīmu līmeni, ACS Chem. Neirosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B aizsargā PC12 šūnas no skābekļa un glikozes trūkuma izraisītas neironu nāves, uzturot mitohondriju homeostāzi, inducējot no ubikvitīna atkarīgu p53 proteīna degradācija, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13.–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu u.c., Protective fffffects of aloperine on neonatal žurku primārā kultivēti hipokampu neironi, kas ievainoti skābekļa un glikozes atņemšanas un reperfūzijas dēļ, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parekoksibs aizsargā peles garozas neironus pret OGD/R izraisītu neirotoksicitāti, palielinot Bcl-2, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabilizē HER2 ekspresiju un uztur vēža cilmes šūnu populāciju olnīcu vēža šūnās, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Vangs, L. Pens, J. Džao, L. Džans, K. Guo, V. Džens, H. Čens, A. Gardenamīds, aizsargā RGC-5 šūnas no H(2)O( 2) izraisīti oksidatīvā stresa apvainojumi, aktivizējot PI3K/Akt/eNOS signalizācijas ceļu, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, propolisa dihlormetāna ekstrakti aizsargā šūnu no skābekļa un glikozes trūkuma izraisīta oksidatīvā stresa Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679, samazinot apoptozi, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Vans, J. Džans, T. Asakava, V. Li, S. Hans, K. Li, B. Sjao, H. Namba, K. Lu, K. Dongs,Neiroprotektīvsneiroserpīna ietekme uz žurku astrocītiem, kas apstrādāti ar skābekļa un glikozes atņemšanu un reoksigenāciju in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Litija joni vājina seruma deprivācijas izraisītu apoptozi PC12 šūnās, regulējot Akt/FoxO1 signālu. ceļi, Psychopharmacology (Berl), 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., Sirds slimību un insultu statistikas kopsavilkuma 2016. gada atjauninājums. Amerikas Sirds asociācijas ziņojums, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Muskarīna ligandu saistīšanās vietu regulēšana ar nervu augšanas faktoru PC12 feohromocitomas šūnās, Nature 297 (1982) 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanolone vājina augstu glikozes izraisītu apoptozi un novērš eksperimentālas diabētiskās neiropātijas sāpes: in vitro un in vivo pētījumi, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol aizsargā PC12 šūnas pret OGD/R izraisītu apoptozi, izmantojot mitohondriju mediētu signalizācijas ceļu, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oksidāzes kā oksidatīvā stresa avots un molekulārais mērķis išēmijas/reperfūzijas gadījumā savainojums, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Sarkanvīna ekstrakta, resveratrola orgānu aizsargājoša iedarbība oksidatīvā stresa izraisītā reperfūzijas bojājuma gadījumā, Oxid. Med. Šūna Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Atšķirīgi mPTP aktivācijas mehānismi išēmijas reperfūzijā: Ca2 plus plus , ROS, pH un neorganiskā polifosfāta ieguldījums, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, zemas devas etanola sagatavošana aizsargā pret skābekļa un glikozes atņemšanu / reoksigenācijas izraisītiem neironu bojājumiem, aktivizējot lielas vadītspējas. , Ca2 plus plus -aktivēts K plus plus Kanāli In Vitro, Neurosci. Bullis. 33 (2017) 28.–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Effect of inhibēšanas mitohondriju dalīšanās uz enerģijas metabolismu žurku hipokampu neironos išēmijas/reperfūzijas traumas laikā, Neurol. Res. (2016) 1.–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Huan, Z. Chengjun u.c., Protective effffects of Lycium barbarum polisaharīds uz jaundzimušo žurku primāri kultivētiem hipokampu neironiem, kas ievainoti skābekļa un glikozes atņemšanas un reperfūzijas dēļ, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptotiskie mehānismi pēc smadzeņu išēmijas, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin aizsargā astrocītus no hipoksijas in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rozengart, kalcija/kalmodulīna atkarīgā proteīna kināze regulē PINK1/Parkin un DJ{{3} } mitofagijas ceļi sepses laikā, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vaseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 ir svarīgs hipoksijas izraisītu šūnu reakciju starpnieks, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 106 (2009) 1111-1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Braiens Lūiss, S. Cukerbrauns, Metjū R. Rozengards, Kalcija/kalmodulīna atkarīgā proteīnkināze regulē PINK1/ Parkina un DJ-1 mitofagijas ceļi sepses laikā, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, transnitrozilācija no DJ-1 uz PTEN mazina neironu šūnu nāvi Parkinsona slimības modeļos, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 aizsargā pret šūnu nāvi pēc akūtas sirds išēmijas-reperfūzijas traumas, šūnu nāves dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Čello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Kuda, F. Kostanzo, dīdžejs{ {1}} ir uzticams seruma biomarķieris augsta riska endometrija vēža noteikšanai, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan u.c., DJ-1 aizsargā nigrostriatālu ass no neirotoksīna MPTP, modulējot AKT ceļu, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Kanets-Avils, MA Vilsons, DW Millers, R. Ahmads, K. Maklendons, S. Bandjopadjajs, MJ Baptista, D. Rings, GA Petsko, MR Kuksons, Parkinsona slimības proteīna dīdžejs -1 irneiroprotektīvscisteīna-sulfīnskābes izraisītas mitohondriju lokalizācijas dēļ, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Hiperglikēmijas izraisīta DJ inhibīcija-1 ekspresija apdraudēja išēmiskas pēckondicionēšanas kardioprotekcijas efektivitāti žurkām, Oxid. Med. Šūna Longev. (2013) (2013) 564902.