Phloridzin-jutīgs ehinakozīda un akteozīda transportēšana un izmainīts absorbcijas ceļš zarnās pēc Cistanche tubulosa ekstrakta lietošanas

Plašāka informācija:ali.ma@wecistanche.com

Tadatoshi Tanino et al

Abstract Objectives

Šī pētījuma mērķis bija aplūkot labvēlīgo ietekmiCistanche tubulosa ekstraktspar ehinakozīda (ECH) un akteozīda (ACT) zemās zarnu caurlaidības uzlabošanu.

Metodes

ECH un ACT absorbcija iekšāCistanche tubulosa ekstraktstika raksturots, izmantojot cilvēka zarnu Caco{0}} šūnu monoslāņus ar neskartiem savienojumiem. No glikozes transportētāja atkarīgā ECH un ACT absorbcija tika apstiprināta ar in-situintestinālās perfūzijas metodi.

Galvenie atklājumi

Šķietamā caurlaidība (Papp) būtiski neatšķīrās starp neskartu ECH un neskartu ACT. Floridzīna klātbūtnē ECH un ACT Papp lielā devā tika samazināts līdz 20 procentiem no attiecīgās neārstēšanas, bet floretīns un verapamils ​​to nemainīja.Cistanche tubulosa ekstraktspie zemām un lielām devām uzlaboja ECH un ACT Papp (abi trīs reizes), kā rezultātā tie lielā mērā piedalījās no nātrija atkarīgā glikozes transportētāja neatkarīgā absorbcijā. Zemā koncentrācijā floridīns ievērojami nomāca vienlaicīgu ECH un ACT līmeni portāla asinīs.

Secinājums

Diētiskā un ārstnieciskāCistanche tubulosa ekstraktsuzlabojot ECH un ACT uzsūkšanos zarnās, var labāk pārvaldīt cilvēku veselību, lai gan būtu jāsamazina floridīna jutīgā transporta iesaistīšanās.

Atslēgvārdiakteozīds; Caco{0}} šūnu vienslāņi;Cistanchetubulosa ekstrakts; ehinakozīds;phloridzin-jutīgs glikozes transportētājs

Cistanche tubulosa ekstrakts

Noklikšķiniet uz Cistanche tubulosa pulveri

Ievads

Cistanche tubulosa saknes tradicionāli izmanto medicīnā un pārtikā.Cistanche tubulosa ekstraktsIr zināms, ka tiem piemīt farmakoloģiska iedarbība dažādās smadzeņu slimībās, pretnovecošanās funkcijas, tauku vielmaiņa un matu augšana.[1–4]Pēdējā laikā iridoīdi, monoterpenoīdi, feniletanoīdu glikozīdi un lignāni ir izolēti noCistanche tubulosa[5,6] Feniletanoīdu glikozīdi, polifenolu savienojumu klase, ir galvenās ķīmiskās sastāvdaļas Cistanche sugās[7], lai gan to daudzums dažādās sugās ir atšķirīgs. Ehinakozīds (ECH; 1. attēls) ir viens no galvenajiem feniletanoīdu glikozīdiem HerbaCistanchis. Baktēriju izcelsmes enzīmi resnajā zarnā to hidrolizē par akteozīdu (ACT; saukts arī par verbaskozīdu).[8,9] ECH un ACT piemīt labvēlīga hepatoaizsardzības[10] un pretiekaisuma[11] aktivitāte grauzēju dzīvniekiem. Pārsteidzoši, ūdenī ļoti šķīstošais ECH uzlabo uzvedības un neiroķīmiskos rezultātus Parkinsona slimības peles modelī un inhibē kaspāzes{10}} un kaspāzes-8 aktivāciju smadzenīšu granulu neironos.[9] Ir labi zināms, ka asins-smadzeņu barjera stingri ierobežo ksenobiotiku iekļūšanu un izplatīšanos smadzenēs no asinīm. Wu et al.[12] arī parādīja, ka ūdenī šķīstošais ACT ātri izplatījās žurku smadzeņu audos. Tāpēc ECH un ACT var transportēt smadzenēs, zarnās un aknās, izmantojot īpašu sistēmu(-as).

Lai gan ir pārliecinoši pierādījumi, kas liecina, ka patēriņšCistanche tubulosa ekstraktsir labvēlīga cilvēka veselībai, tīra ECH caurlaidība caur Caco{{0}} šūnu monoslāņiem apikālajā koncentrācijā 8,4 ± 1,6 ug/ml ir vienāda ar paracelulārā transporta marķiermannīta koncentrāciju vai zemāka par to.[13] Ja žurkām perorāli ievada tīru ECH (deva, 1{{10}}0 mg/kg), uzsūkšanās ir ārkārtīgi ātra (Tmax, 15 min), un maksimālā seruma koncentrācija ir ļoti zema. (Cmax, 0,61 ± 0,32 ug/ml).[14] ECH absolūtā bioloģiskā pieejamība ir tikai 0,83 procenti. Līdzīgi, ja Caco-2 šūnas tiek inkubētas ar fenola frakciju, kas daļēji attīrīta no olīvu dzirnavu notekūdeņiem, tīra ACT uzņemšana ir ātra, maksimālā uzkrāšanās notiek pēc 30 min un kopējā uzkrāšanās efektivitāte ir 0,1 procents, nodrošinot intracelulāro līmeni 130 pmol/mg šūnu proteīna.[15] Žurkām tīra ACT maksimālā koncentrācija (0,13 ± 0,03 ug/ml) tika sasniegta 30 minūšu laikā pēc 100 mg/kg perorālas devas[12], kas nozīmē ātru uzsūkšanos zarnās. ACT, kā arī ECH perorālā biopieejamība ir diezgan zema (0,12 ± 0,04 procenti), kas liecina par pirmā loka iedarbības iespējamību zarnu traktā un aknās. Žurku žultī ECH metilēšanas un glikuronizācijas konjugāti ir galvenie metabolīti[16], lai gan metabolisma apjoms aknās joprojām nav skaidrs. Mēs sākotnēji noskaidrojām, ka ECH un ACT bija diezgan stabili žurku zarnu gļotādas un mākslīgās kuņģa skābes homogenātos (dati nav parādīti). Najar et al.[17] pierādīja, ka ACT inhibē P-glikoproteīna (P-gp)-ATPāzes aktivitāti līdzīgi kā verapamils ​​(reprezentatīvs P-gp inhibitors), kas nozīmē P-gp modulatoru; tomēr nav skaidrs, vai ACT ir pieejams kā P-gp substrāts. Interesanti, ka nesenie atklājumi par uztura flavonoīdu-D-glikozīdiem liecina, ka daudzu zāļu rezistences proteīns (MRP2) maskē no nātrija atkarīgo glikozes transportētāju (SGLT) 1-mediētu kvercetīna 4′-O- -glikozes uzņemšanu,[18]. ,19], kas ir atbildīgs par ļoti sliktu uzsūkšanos. Tomēr ļoti maz ir zināms par polifenola glikozīdu absorbcijas transportētāju, tostarp glikozes transportētāju, jutīgumu. Informācija par kvercetīna 4′-glikozīda un ātri hematoencefālisko barjeru caurlaidīgo ECH absorbcijas īpašībām pamudināja mūs izpētīt glikozīdiem jutīgo diētisko glikozīdu transportētāju. tubulosa.

Šajā pētījumā mēs pētījām glikozes transportētāja izraisītu neskartu ECH un ACT absorbciju, izmantojot cilvēka-zarnu trakta Caco{1}} šūnu monoslāņus. Vienlaikus ECH un ACT absorbcijas transportēšana tiek veikta vienlaikus ar uzturuCistanche tubulosa ekstraktstika raksturota ar in vitro modeli un in situ zarnu perfūzijas sistēmu ar portāla asins paraugu ņemšanu, kas var viegli atšķirt absorbcijas apjomu un izvairīšanos no pirmās novirzes aknās.

Materiāli un metodes

Materiāli

Neskartas ECH un ACT bija dāsnas dāvanas no EishinTrading Co., Ltd (Osaka, Japāna). Floridzīns un floretīns tika iegādāti no Tokyo Kasei Co., Ltd. (Tokija, Japāna). Verapamils ​​un p-kumarskābe, ko izmantoja kā iekšējos standartus augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijas (HPLC) testam, tika iegūti no Sigma-Aldrich (St Louis, MO). ,ASV). Visas pārējās izmantotās ķīmiskās vielas bija analītiskas kvalitātes un komerciāli pieejamas.

Augu materiāls un metanola ekstrakta sagatavošana

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) ir daudzgadīgs parazītaugs, kas aug uz Salvadoraor Calotropis sugu saknēm un izplatīts Ziemeļāfrikas, Arābijas un Āzijas valstīs. Žāvēti C. tubulosa stublāji tika saberzti pulverī un trīs reizes ekstrahēti ar metanolu ar atteci 3 stundas. Šķīdinātāja iztvaicēšana pazemināja spiedienu, lai iegūtu metanola ekstraktu. Tematiskais ekstrakts (komerciālā kategorija, partijas Nr. 20070130; reģistrētais tirdzniecības nosaukums, Sabaku Ninnjinn Kanka) bija dāsna dāvana no Eishin Trading Co., Ltd caur Muraoka un Morikawa (Kinki universitāte, Japāna), un botānisko identifikāciju veica profesors Jia Xiaoguang Sjiņdzjanas tradicionālās ķīniešu un etnoloģisko zāļu institūts.

Augu ekstrakta analīze: hromatogrāfija

Mēs noteicām ECH un ACT saturuCistanche tubulosa ekstrakts(partijas Nr. 20070130), izmantojot HPLC analīzi, kas aprakstīta zemāk. Iegūtie dati ir parādīti 1. tabulā.

Šūnu kultūra

Caco{{0}} šūnas, kas iegādātas no American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, ASV), tika izmantotas 38.–53. Tos audzēja barotnē, kas sastāvēja no Dulbecco modificētās Ērgļa barotnes (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kioto, Japāna), kas papildināta ar 0.1 mM neaizvietojamām aminoskābēm, 10% termiski inaktivēta liellopu augļa seruma, 100 V/ml penicilīns G un 0,1 mg/ml streptomicīna sulfāts.

Transporta pētījumi

Caco-2 šūnas tika pārklātas ar blīvumu 6,4 × 103 šūnas/cm2 uz polikarbonāta filtriem. Vienslāņi tika izmantoti transportēšanas eksperimentos 21–25 dienas pēc sēšanas. Neskarti ECH un ACT, kas bija līdzvērtīgi to saturamCistanche tubulosa ekstrakts (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Ehinakozīds iekšāCistanche tubulosa ekstrakts

In situ zarnu perfūzija

Wistar žurku tēviņi (230–250 g) tika iegūti no SLCJapan (Hamamatsu, Japāna). Pirms lietošanas dzīvnieki tika izmitināti telpā ar gaisa kondicionētāju 12 stundu gaismas/tumsas ciklā. Žurkas tika barotas ar standarta laboratorijas barību (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokija, Japāna) ar ūdeni ad libitum, un pirms testa tās tika badā visu nakti. In-siturecirculating perfūzijas pētījums tika veikts saskaņā ar modificēto procedūru, ko aprakstīja Mihara et al.[20]Īsumā, žurkas tika anestēzētas ar 25% uretāna šķīdumu (1 mg/kg), lai izvairītos no asinsspiediena pazemināšanās. Tika veikts vēdera viduslīnijas griezums un atklāta tievā zarna. Žultsvads tika sasiets, lai izvairītos no žults sekrēcijas perfūzā. Visu tievo zarnu kā vienu segmentu (no divpadsmitpirkstu zarnas līdz ileum) skaloja ar parasto fizioloģisko šķīdumu 37 grādos 10 minūtes, līdz mazgāšana parādījās dzidra. Stikla caurules, kas savienotas ar silikona caurulēm, tika kanulētas abos tievās zarnas galos un nostiprinātas ar šuvju diegu. Pēc tam tievās zarnas tika nomainītas vēderā, un kanulas tika savienotas ar peristaltisko sūkni. Portāla vēna tika kanulēta ar polietilēna caurulīti (PE10).Cistanche tubulosa ekstraktskomerciāli pieejams tika suspendēts Krebs-Henseleit bikarbonāta buferšķīdumā (pH 7,4), lai iegūtu galīgo koncentrāciju 4,5 mg/ml, un tika centrifugēts 10 min pie 8000 apgr./min, lai noņemtu nešķīstošās sastāvdaļas. Supernatants bez floridīna vai tā klātbūtnes (1 mM) tika savākts rezervuārā, kas tika uzturēts 37 ± 0, 5 grādu temperatūrā visā eksperimenta laikā. Norādītajos laikos asinis tika ņemtas caur portāla vēnas kanulu. Pēc asins paraugu centrifugēšanas iegūtā plazma tika atdalīta ar acetonitrilu, kas satur iekšējo standartu, un tika centrifugēta ar ātrumu 3000 apgr./min. Supernatanti tika iztvaicēti, un atlikums tika izšķīdināts ar kustīgo fāzi, kas sastāvēja no acetonitrila un 0,5% etiķskābes. Sajauktais šķīdums tika ievietots HPLC kolonnā. Žurkas tika izmantotas saskaņā ar ētiskām procedūrām, ievērojot Japānas valdības un Kinki universitātes izdotās vadlīnijas par laboratorijas dzīvnieku kopšanu un lietošanu.

HPLC analīze

HPLC analīze tika veikta sistēmā, kas aprīkota ar aShimadzu SPD{{0}}A, UV detektoru, Shimadzu LC-10A sūkni un Shimadzu C-R4A hromatopac integratoru (Kioto, Japāna). ECH un ACT tika atdalīti, izmantojot Inertsil ODS kolonnu (5 μm, 4,6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japāna). Tika izmantota acetonitrila un 0,5% etiķskābes kustīgā fāze attiecībā 15:85 (v/v) ar plūsmas ātrumu 1,0 ml/min. Noteikšana tika veikta pie 334 nm

Kinētiskā analīze

Acīmredzamie caurlaidības koeficienti (Papp) tika aprēķināti pēc savienojumu transportēšanas laika lineārās daļas slīpuma caur Caco{0}} šūnu monoslāņiem, šādi: P dQ dt AC lietotne=( ) ( )

kur dQ/dt ir caurlaidības koeficients, C0 ir izšķīdušās vielas sākotnējā koncentrācija donora kamerā un A ir membrānas virsmas laukums (4,7 cm2).

Žurku in situ zarnu perfūzijas pētījumā laukums zem plazmas koncentrācijas-laika līknes (AUC0–90) portāla vēnā no nulles brīža līdz pēdējam mērījumam tika aprēķināts saskaņā ar lineāro trapecveida likumu.

Akteozīds iekšāCistanche tubulosa ekstrakts

Fizikāli ķīmiskās īpašības

Savienojumu polārās virsmas laukums un nepolārās virsmas laukums tika aprēķināts, izmantojot programmu SAS (versija 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, ASV). Eksperimentāli noteiktas log P un pKa vērtības tika iegūtas no literatūras.

Statistiskā analīze

Dati tika analizēti ar vienvirziena dispersijas analīzi, kam sekoja Tukey post-hoc tests. Varbūtības vērtības, kas mazākas par 5 procentiem, tika uzskatītas par nozīmīgām.

Rezultāti

ehinakozīda un akteozīda absorbējošā transportēšana caur Caco-2 šūnu monoslāņiem

Pelēm un žurkām neskartu ECH[10,14] un ACT[12,21] ievada perorāli devās 100–1000 mg/kg. TheCistanche tubulosa ekstraktsizmantotā deva saturēja aptuveni 30 procentus ECH un 15 procentus ACT. Tā kā ekstrakts mainīja osmotisko spiedienu un pH inkubācijas vidē, koncentrācijas 4,5 un 13,5 mg/ml tika noteiktas, pamatojoties uz perorālo devu (neskartie savienojumi: 2–20 mg/2{{2{{31} }}} g ķermeņa masas) pelēm. Ekstrakts mazās (4,5 mg/ml) un lielās devās (13,5 mg/ml) saturēja 2.0 un 6,1 mg ECH un 1.{35}} un attiecīgi 3.{39}} mg ACT. Mēs izmantojām C. tubulosa ekstrakta daudzumu, kas bija daudz mazāks par ECH un ACT perorālo devu, par kuru ziņots cilvēkiem (ieteicamais ekstrakta uztura daudzums: 15{41}} mg, kas satur aptuveni 45 mg forECH un 22,5 mg ACT). Lietojot mazas un lielas neskartu savienojumu devas, absorbcijas profili (2. attēls) un Papp būtiski neatšķīrās starp ECH un ACT kā ECH ekvivalentu (2. tabula). Kad barotnē tika ievietots C. tubulosa ekstrakts lielā devā 13,5 mg/ml, Pappvalues ​​(attiecīgi 1,27 ± 0,13 un 0,34 ± 0,03 × 10-6 cm/s) ECH un ACT vienlaikus bija trīs reizes augstākas nekā (attiecīgi 0,38 ± 0,09 un 0,10 ± 0,03 × 10–6 cm/s) veseliem ECH un ACT (2. tabula). Ekstrakts, atšķirībā no neskartiem savienojumiem, ievērojami uzlaboja ECH un ACT absorbcijas transportu.

Floridīna, floretīna un verapamila inhibējošā iedarbība

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0,3 mM) floretīna nevarēja izmantot ievērojamas šūnu toksicitātes dēļ. Turklāt P-gp ir identificēts kā svarīgs spēlētājs, kas ir atbildīgs par mijiedarbību starp augu izcelsmes zālēm un klīniski nozīmīgiem P-gpsubstrātiem. Verapamils ​​neuzlaboja neskartu savienojumu absorbcijas transportēšanu (3. attēls).

Floridzīns ievērojami kavēja ECH un ACT absorbcijas transportēšanu ekstraktā (mazā devā) (2. tabula un 4. attēls). Ekstrakts lielā devā nomāca pret floridzīnu jutīgo inhibīciju, lai gan neskartu ECH un ACT transportēšana bija jutīgāka pret floridīnu (2.

In-situ zarnu perfūzijas pētījums

In situ pētījumā mēs pārbaudījām, vai ECH un ACT irCistanche tubulosa ekstraktstika transportēti ar SGLT1, kas atrodas tievās zarnas apikālajā pusē. Kad tika perfūzēts uztura ekstrakts mazā devā (4, 5 mg/ml), ECH un ACT ātri parādījās portāla asinīs (5. attēls). AUC tika noteikts kā 2702,8 ± 384,1 μm·min ECH un 698,3 ± 197,2 μm·min ACT. Pēc tam, kad AUC tika normalizēts ar saturu noCistanche tubulosa ekstrakts, absorbētais daudzums būtiski neatšķīrās starp ECH un ACT. SGLT1-jutīgais floridīns, atšķirībā no floretīna, būtiski nomāca vienlaikus lietotā ECH (AUC, 649,4 ± 248,2 μm·min) un ACT (nav noteikts) absorbcijas transportu.

Diskusija

Dažas augu izcelsmes sastāvdaļas ir P-gp substrāti, kas ļoti izteikti aknās, zarnās, smadzenēs un nierēs. P-gp ir noteicošais faktors augu izcelsmes līdzekļu, tostarp asinszāles, kurkumīna, ehinācijas, žeņšeņa, ginka un ingvera in vivo biopieejamībai, izvietojumam un izplatībai.[22,23]Genisteīna biopieejamība{{5} }glikozīdu, flavonoīdu atvasinājumu, ierobežoja arī zarnu MRP2 transportētājs.[24] Tāpēc šis pētījums tika izstrādāts, lai izpētītu ECH un ACT vienlaikus lietoto uztura un zāļu absorbcijas īpašības.Cistanche tubulosa ekstrakts.

Polarizētie Caco{{0}} šūnu monoslāņi, kā arī zarnas[25] izsaka galvenos zarnu zāļu izplūdes transportētājus, piemēram, P-gp, MRP un krūts vēža rezistences proteīnu.[26]Diētiski flavonoīdi. Ir pierādīts, ka kvercetīns[27] un miricetīns[28] inhibē P-gp izraisītu izplūdi gan šūnu līnijās, gan dzīvnieku modeļos. Verapamils, P-gp inhibitors, nemainīja ACT un ECH caurlaidību caur Caco-2 šūnu monoslāņiem (3. attēls), norādot, ka neskartu ECH un ACT neierobežoja P-gp izplūdes sūknis. Mūsu iepriekšējie pētījumi parādīja, ka MRP2 proteīni netika ekspresēti Caco{13}} šūnu monoslāņos.[29] P-gp un MRP{16}}mediētu izplūdi var izslēgt ECH un ACT transportēšanā. Daži kvercetīna glikozīdi ar zemu lipofilitāti tika absorbēti efektīvāk nekā pats kvercetīns.[30] Ir arī svarīgi atzīmēt, ka ACT ar cukura daļu ātri izplatās smadzeņu audos. Mūsu uzmanība tika pievērsta divu glikozes transportētāju inenterocītu kombinētajai darbībai: SGLT sukas robežas membrānā un atvieglotā difūzijas glikozes transportēšana (GLUT) bazolaterālajā membrānā. Caco-2 šūnu kultūru var izmantot kā modeli, lai pētītu floretīnu jutīgo GLUT2, un floridzīnu jutīgo SGLT1 un 2 transportētājus.[31–34]Glikoze tiek transportēta no Caco-2 monoslāņu apikāla uz bazolaterālo pusi. ar lielu ātrumu ar Pappof 36,8 ± 1,1 × 10–6 cm/s.[35] Tam piemīt augstāks papptāna transcelulārā transporta marķiera propranolola saturs (23,4 ± 2,8 × 10-6 cm/s). Kā parādīts 2. tabulā, neskartam ECH un ACT bija daudz zemāks Papp nekā tas, kas ziņots glikozē un pasīvajā propranololā. Mēs aprēķinājām sadalījuma koeficienta (oktanols-ūdens) logaritmu, kas tika aprēķināts kā –2,32 un 0,077 attiecīgi ECH un ACT. Tiek uzskatīts, ka polārie hidrofilie savienojumi tiek transportēti pa paracelulāru ceļu (pāri ciešiem savienojumiem). Šķiet, ka divi feniletanoīdu glikozīdi, tāpat kā mannīts, tiek transportēti pa paracelulāru ceļu. Tomēr floridīns dramatiski samazināja neskarta ECH un ACT absorbcijas caurlaidību (2. tabula), kas liecina, ka apikālam SGLT1 ir liela nozīme neskarta ECH un ACT absorbcijā zarnās. Izmantojot ekvivalentu devu, augstāka hidrofobā ACT caurlaidība bija tuvu ECH caurlaidībai (2. attēls un 2. tabula). Yoshikawa et al.[36] ir pierādījuši, ka tievajās zarnās intensīvi izpaužas atvieglojošie transportētāji (GLUT 1 un 2), kā arī pret floridzīnu jutīgais SGLT1. Tā kā absorbētais savienojumu daudzums ir balstīts uz masas līdzsvaru starp uzņemšanu un izvadīšanu, mēs novērtējām GLUT2 līdzdalību. Glikoze šķērso enterocītu apikālās membrānas ar SGLT1 ar augstu afinitāti un zemu kapacitāti un iziet cauri bazolaterālajai membrānai caur GLUT2 ar zemu afinitāti un lielu kapacitāti. Floretīns (specifisks GLUT2 inhibitors) neatcēla neskartu ECH un ACT transportēšanu (3. attēls). Funes et al.[37] parādīja, ka ACT spēcīgi mijiedarbojās ar fosfolipīdu membrānu fosfātu grupām. Tā kā ACT struktūrā ir daudz hidroksilgrupu, visticamākā mijiedarbība ir ūdeņraža saites starp šīm grupām un glicerīna polārgalvām vai fosfolipīdu fosfātu grupām. Kad neskarts ECH un tā ekvivalents ACT tika inkubēts ar Caco-2 monoslāņiem 11 stundas, ACT uzkrāšanās šūnās (0,24 ± 0,04 nmol/cm2) bija trīs reizes lielāka nekā ECH (0,07 ± 0,01 nmol/cm2). Mēs domājām, ka SGLT{74}}jutīgie ECH un ACT lēnām tika pārvietoti no enterocītiem uz asinsriti, iespējams, izraisot zemo PAPP. Salīdzinot ar ļoti hidrofilo ECH, ACT zemā caurlaidība var būt saistīta ar interkalāciju šūnu membrānās.

Cistanche tubulosa ekstrakts

Polifenolu savienojumi tiek patērēti augu maisījumos to klīniskās lietošanas laikā, un tie ir komerciāli pieejami kā uztura bagātinātāji. In vitro pētījumā tika pierādīts, ka fenola epikatehīna uzsūkšanos neietekmē dzērienu pārtikas materiālu sastāvdaļu sastāvs.[38] Turpretim Hypericum perforatumL. produktu matricas ietekmē kvercetinglukozīdu (rutīna un izokvercitrīna) un hiperozīdu transportēšanu cauri Caco-2 šūnām matricas fitoķīmiskā sastāva un transportēšanas īpašību atšķirību dēļ, ti, paracelulārā pārnešana un nesēja mediēta vai aktīva transportēšana.[39] Šajā pētījumā C. tubulosa nodrošināja trīs reizes lielāku transepitēlija transportu nekā neskarts ECH un ACT (2. attēls un 2. tabula). Mēs domājam, ka komponenti intheCistanche tubulosa ekstraktsaktivizē pret floridīnu jutīgo transportētāju un/vai paātrina intracelulārā ECH un ACT izvadīšanu.Cistanche tubulosa ekstraktsŠķita, ka liela deva lielā mērā maskēja floridīna jutīgā transporta spēju (2. tabula). Uztura ogļhidrāti[40] un olbaltumvielas[41] mijiedarbojas ar dažiem polifenoliem kuņģa-zarnu traktā.Morikawa et al.[10] parādīja, ka piecus iridoīdus, kankanosīdus AD un kankanolu, monoterpēna glikozīdu, kankanosīdu E, divus feniletanoīdu oligoglikozīdus, kankanosīdus F un G un acilētu oligocukuru, kankanozi, var izolēt noCistanche tubulosa ekstrakts

pašlaik lietots. Citas sastāvdaļas, tostarp olbaltumvielasCistanche tubulosa ekstrakts, paliek neskaidrs. Kopā ar iepriekšminētajām spekulācijām mēs esam izstrādāti, lai pārbaudītu, vai citi komponenti mijiedarbojas ar SGLT1 un kavē ECH un ACT absorbciju.

In vivo eksperimenti nevar viegli atšķirt uzsūkšanās apjomu un izvairīšanos no pirmās izdalīšanās caur aknām. In-situ zarnu perfūzijas modelim ir priekšrocības salīdzinājumā ar in vivo un in vitro modeļiem, jo ​​ir viegli kontrolēt eksperimenta parametrus un izslēgt citu orgānu ietekmi un uzturēt neskartu zarnu asins piegādi.[22] Pret floridzīnu jutīgā glikozes transportētāja iesaistīšanās tika novērtēta anin-situ zarnu perfūzijas sistēmā. Kā parādīts 5. attēlā, absorbētie ECH un ACT vienlaicīgie daudzumiCistanche tubulosa ekstrakts (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >Cilvēkiem pilnībā uzsūcas 1 × 10–6 cm/s, savukārt slikti uzsūcas zāles un peptīdi (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10–6 cm/s (2. tabula), kas liecina par augstu perorālo biopieejamību dzīvniekiem un cilvēkiem. Crespy et al.[43] parādīja, ka izplūde in situ zarnu perfūzijas pētījumā būtiski neatšķīrās starp floridīnu un floretīnu. Viņi [44] arī parādīja, ka floridīna ar augstu jutību pret SGLT1 perorālā biopieejamība žurkām bija tikai 10 procenti. Turpmākajos pētījumos jānovērtē ECH biopieejamība un pirmā loka iedarbība uz aknām, ja to lieto pēc diētiskā ekstrakta perorālas ievadīšanas lielā devā. In situ rezultāti nozīmē, ka uzņemšanaCistanche tubulosa ekstraktsvar uzlabot neskarta ECH un ACT zemo oraabsorbciju.

Secinājums

Diētiskā un ārstnieciskāCistanche tubulosa ekstraktsECH un ACT absorbcijas uzlabošana zarnās var palīdzēt labāk pārvaldīt cilvēku veselību, lai gan ir jāsamazina floridīna jutīgā transporta iesaistīšanās.

Deklarācijas

Interešu konflikts

Autors(-i) paziņo(-i), ka viņiem nav interešu konfliktu, ko atklāt

Finansējums

Šo darbu daļēji atbalstīja Kinki universitātes Augsto tehnoloģiju pētniecības centrs.

Pateicības

Autori vēlas pateikties Osamu Muraoka (Kinki universitāte, Osaka, Japāna) un Toshio Morikawa (Kinki universitāte, Osaka, Japāna) par piegādiCistanche tubulosa ekstraktsun tīras sastāvdaļas. Mēs esam ļoti pateicīgi Masahiro Iwaki (Kinki Universitāte) par atbalstu studijām.

Cistanche tubulosa ekstraktsproduktiem

No: "Ehinakozīda un akteozīda pārvietošana, kas ir jutīga pret floridīnu un izmainīts absorbcijas ceļš zarnās pēc zāļu lietošanasCistanche tubulosa ekstrakts' autorsTadatoshi Tanino et al

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, 1457.–1465. lpp.,Feniletanoīdu glikozīdi, ko transportē ar SGLT1

Atsauces

1. Tanaka J et al. Ietekme noCistanche tubulosa ekstraktspar dažādām smadzeņu slimībām. Ēdienu stils 21 2008; 12: 24–26.

2. Tanaka J et al. Pretnovecošanās funkcijasCistanche tubulosa ekstrakts. Ēdienu stils 21 2008; 12: 27–29.
3. Tanaka J et al. Skaistumkopšanas un matu augšanas funkcijasCistanche tubulosa ekstrakts. Ēdienu stils 21 2008; 12: 29–32.
4. Tanaka J et al. Tauku metabolizējošs efektsCistanche tubulosa ekstrakts. Ēdienu stils 21 2008; 12: 30–33.
5. Yoshizawa F et al. Cistanche tubulosa Schrenk (Āķis) f.II sastāvdaļas. jauna feniletanoīda glikozīda un jauna neoligāna glikozīda izolācija un struktūra. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M et al. Feniletanoīdu oligoglikozīdi un acilēti oligocukuri ar vazorelaksējošu aktivitāti no Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF et al. Herba cistances feniletanoīdu glikozīdu analīze ar RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L et al. Herba cistanču feniletanoīdu glikozīdu metabolisma regulēšana suņu kuņģa-zarnu traktā. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432–435.
9. Geng X et al. Ehinakozīda neiroprotektīvā iedarbība Parkinsona slimības peles MPTP modelī. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. Morikawa T et al. Acilēti feniletanoīdu oligoglikozīdi ar hepatoprotektīvu aktivitāti no tuksneša auga Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD et al. Ar syringa Vulgaris augu šūnu kultūrām biotehnoloģiski attīrītā verbaskozīda ietekme periodontīta grauzēju modelī. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707–717.
12. Wu YT et al. Akteozīda noteikšana Cistanche deserticola un Boschniakia rossica un tā farmakokinētika brīvi kustīgām žurkām, izmantojot LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A et al. Echinacea alkilamīdu un kofeīnskābes konjugātu caurlaidības pētījumi, izmantojot caco-2 šūnu vienslāņu modeli. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. Jia C et al. Ehinakozīda noteikšana žurku serumā ar apgrieztās fāzes augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju ar ultravioleto staru noteikšanu un tās pielietošana farmakokinētikā un biopieejamībā. J Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. Cardinali A et al. Verbaskozīdi no olīvu dzirnavu ūdens: to bioloģiskās pieejamības un zarnu absorbcijas novērtējums, izmantojot in vitro gremošanas/caco{1}} modeļa sistēmu. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C et al. Ehinakozīda, laba antioksidanta, metabolisms žurkām: tā žults metabolītu izolēšana un identificēšana. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA et al. Dažu fitokomponentu P-glikoproteīna ATPāzes aktivitātes modulēšana. Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA et al. Uztura flavonoīda kvercetīna 4′-beta-glikozīda izplūde caur cilvēka zarnu caco{4}} šūnu monoslāņiem ar apikālu daudzu zāļu rezistenci saistītu proteīnu-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA et al. Uztura flavonoīdu kvercetīna 4′-beta-glikozidāzes uzņemšana šūnās ar nātrija atkarīgo glikozes transportētāju SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K et al. Eperizona pirmā loka metabolisms žurkām zarnās. Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B et al. Verbaskozīda antihiperalgētiskā aktivitāte divos neiropātisko sāpju modeļos. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601.

22. Kuks TJ et al. Hlorpirifosa zarnu caurlaidība, izmantojot vienreizējas zarnu perfūzijas metodi žurkām. Toksikoloģija 2003; 184: 125–133.

23. Kumar YS et al. P-glikoproteīna un citohroma P-450-mediēta augu izcelsmes zāļu mijiedarbība. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25: 3–16.
24. Walle UK et al. Genisteīna-7-glikozīda transportēšana ar cilvēka zarnu CACO-2 šūnām: iespējamā MRP2 loma. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. Ito K et al. Zāļu transportētāju apikālā / bazolaterālā virsmas ekspresija un tās loma vektoru zāļu transportēšanā. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L et al. Caco-2 šūnu kultūras absorbcijas zarnās novērtēšanā: dažu vienlaikus lietotu zāļu un dabisko savienojumu ietekme bioloģiskajās matricās. (Helsinku Universitāte, Somija, 2006) Akadēmiskā disertācija, 1.–66. lpp.
27. Scambia G et al. Kvercetīns pastiprina adriamicīna iedarbību pret daudzām zālēm rezistentā MCF-7 cilvēka krūts vēža šūnu līnijā: P-glikoproteīns kā iespējamais mērķis. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459–464.
28. Choi DH et al. Antioksidanta miricetīna ietekme uz losartāna un tā aktīvā metabolīta EXP-3174 farmakokinētiku žurkām: citohroma P450 3A4, citohroma P450 2C9 un P- glikoproteīna inhibīcija ar miricetīnu. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T et al. Paklitaksela-2′-etilkarbonāta priekšzāles var apiet P-glikoproteīna mediētu šūnu izplūdi, lai palielinātu zāļu citotoksicitāti. Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC et al. Uztura kvercetīna glikozīdu un kvercetīna absorbcija veseliem ileostomijas brīvprātīgajiem. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL et al. Zarnu glikozes uzsūkšanās difūzā sastāvdaļa ir saistīta ar glikozes izraisītu GLUT2 piesaisti suku plāksnes membrānai. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Matter K et al. Endogēno plazmas membrānas proteīnu šķirošana notiek no divām vietām kultivētās cilvēka zarnu epitēlija šūnās (Caco-2). Šūna 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L et al. SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 un GLUT5 heksozes transportera mRNS klātbūtne un diferenciālā ekspresija Caco-2 šūnu klonos saistībā ar šūnu augšanu un glikozes patēriņu. Biochem J 1994; 298: 629–633.

34. Mesonero J et al. No cukura atkarīga fruktozes transportētāja GLUT 5 ekspresija Cac-2 šūnās. Biochem J 1995; 312: 757–762.

35. Walgren RA et al. Kvercetīna un tā glikozīdu transportēšana caur cilvēka zarnu epitēlija Caco-2 šūnām. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T et al. Heksozes transportētāju (SGLT1, GLUT1, GLUT2 un GLUT5) salīdzinošā ekspresija visā peles kuņģa-zarnu traktā. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. Verbaskozīda, fenilpropanoīda glikozīda no citrona verbenas, ietekme uz fosfolipīdu modeļu membrānām. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP et al. Šokolādes matricas sastāva ietekme uz kakao flavan{1}ola bioloģisko pieejamību in vitro un biopieejamību cilvēkiem. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S et al. Ļoti mainīgs fenolu saturs asinszāles produktos ietekmē to transportēšanu cilvēka zarnu Caco-2 šūnu modelī: produktu standartizācijas farmaceitiskais un biofarmaceitiskais pamatojums. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD et al. Pārtikas ietekme uz kakao flavanolu uzsūkšanos un farmakokinētiku. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C et al. Etanols un polifenolu nesaturoša vīna matrica stimulē cilvēka zarnu Caco-2 šūnu diferenciāciju. To saistību ar procianidīnu bagāto vīnogu sēklu ekstraktu ietekme. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursons P et al. Korelācija starp perorālo zāļu uzsūkšanos cilvēkiem un šķietamajiem zāļu caurlaidības koeficientiem cilvēka iekšējā epitēlija (Caco-2) šūnās. Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V et al. Kvercetīna, floretīna un to glikozīdu zarnu absorbcijas salīdzinājums žurkām. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V et al. Floretīna un floridīna bioloģiskā pieejamība žurkām. J Nutr 2001b; 131: 3227–3230.