Cistanche Tubulosa feniletanoīdu glikozīdi inducē apoptozi H22 hepatocelulārās karcinomas šūnās, izmantojot gan ārējos, gan iekšējos signalizācijas ceļus

Kontaktpersona: Odrija Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pasts:audrey.hu@wecistanche.com

Pengfei Yuan, Jinyu Li, Adila Aipire, Yi Yang, Lijie Xia, Sjiņhui Van, Yijie Li un Jinyao Li

Abstrakts

Fons:Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight ir tradicionālā ķīniešu medicīna, kas parazitē Tamarix auga saknēs un ir izmantota vīriešu impotences, sterilitātes, ķermeņa vājuma ārstēšanai un kā toniks. Tomēr tā pretvēža iedarbība uz hepatocelulāro karcinomu joprojām ir nenotverama. Šeit mēs pētījām pretvēža iedarbībuC. tubulosa feniletanoīdu glikozīdi(CTPG) uz H22 hepatocelulārās karcinomas šūnām gan in vitro, gan in vivo un tā mehānismi. Metodes: H22 šūnu morfoloģiju, dzīvotspēju, apoptozi, šūnu ciklu un mitohondriju membrānas potenciālu (Δψm) analizēja attiecīgi ar apgriezto mikroskopiju, MTT testu un plūsmas citometriju. Olbaltumvielu ekspresija un aktivācija apoptozes ceļā tika noteikta ar Western blot. In vivo pretvēža iedarbība tika novērtēta ar audzēja peles modeli, kas izveidots, izmantojot Kunmingas peļu tēviņus. Rezultāti: CTPG terapija būtiski nomāca H22 šūnu augšanu no devas un laika atkarīgā veidā, kas korelēja ar palielinātu apoptozi un šūnu cikla apstāšanos G0/G1 un G2/M fāzēs. Turklāt ar CTPG apstrādātajās H22 šūnās tika novērota hromosomu kondensācija. CTPG terapija ievērojami palielināja Bax/Bcl-2 attiecību, samazināja Δψm un uzlaboja citohroma c izdalīšanos. Sašķeltās kaspāzes-8 un kaspāzes-9 līmenis gan ārējā, gan iekšējā signalizācijas ceļā tika ievērojami palielināts, kas secīgi aktivizēja kaspāzes-7 un -3, lai šķeltu PARP. Visbeidzot, CTPG (Cistanchetubulosafeniletanoīdu glikozīdi) kavēja H22 šūnu augšanu pelēm un uzlaboja audzēja peļu izdzīvošanas līmeni. Secinājumi: Šie rezultāti liecināja, ka CTPG nomāca H22 šūnu augšanu gan ar ārējo, gan iekšējo apoptozes ceļu palīdzību.

Fons

Aknu vēzis visā pasaulē ieņēma sesto vietu vēža sastopamības ziņā un ceturto vietu vēža izraisīto nāves gadījumu ziņā. Turklāt tas ieņēma ceturto vietu vēža sastopamības ziņā un pirmo vietu vēža mirstības ziņā valstīs ar zemu sociāli demogrāfisko indeksu [1]. Ķīnā aknu vēzis ir trešais galvenais ar vēzi saistītās nāves cēlonis 2015. gadā [2]. Vairāk nekā 90 procenti primāro aknu vēža gadījumu pasaulē ir hepatocelulārā karcinoma (HCC) [3]. Pašlaik aknu rezekcija ir galvenā HCC terapijas iespēja. Tomēr mazāk nekā 30 procenti pacientu ar HCC atbilda ārstnieciskas aknu rezekcijas kritērijiem, un kopējais 5-gadu izdzīvošanas rādītājs joprojām ir tik zems kā 35-50 procenti augstā recidīvu biežuma dēļ [4, 5 ]. Ārstēšanas iespēju pieejamība pacientiem ar vidēju līdz progresējošu HCC ir ļoti ierobežota. Sorafenibu, molekulāri mērķētu medikamentu, FDA ir apstiprinājusi kā pirmās izvēles līdzekli progresējošas HCC ārstēšanai. Tomēr sorafenibs pagarina dzīvildzi tikai aptuveni 3 mēnešus, un atbildes reakcija ir mazāka par 4 procentiem [6, 7]. Ir steidzami jāizstrādā jaunas zāles vai stratēģijas pret HCC. Tradicionālā ķīniešu medicīna (TCM) atsevišķi vai kopā ar citām stratēģijām ir izmantota, lai ārstētu HCC, un tā parādīja klīniskos ieguvumus, tostarp ilgāku izdzīvošanas laiku, uzlabotu dzīves kvalitāti, samazinātu nevēlamo blakusparādību skaitu un tā tālāk [8, 9].Cistanche, sava veida TCM, ir dažādas bioloģiskas funkcijas, piemēram,antioksidācija, pretiekaisuma, pretnovecošanās,un neiroprotekcijas [10, 11]. Feniletanoīdu glikozīdi tiek uzskatīti par galvenajām aktīvajām sastāvdaļāmCistanche, kam ir dažādas aktivitātes, tostarp antioksidācija, pretiekaisuma, hepatoprotekcijas un neiroprotezēšana [12–15]. Mūsu grupa par to ir ziņojusiCistanche tubulosa feniletanoīdu glikozīdi(CTPG) varēja izraisīt apoptozi melanomas B16-F10 šūnās un kavēt audzēju augšanu pelēm [16]. Šajā pētījumā mēs izmērījām CTPG pretvēža iedarbību uz HCC H22 šūnām gan in vitro, gan in vivo un pētījām tā mehānismus. Mēs noskaidrojām, ka CTPG izraisīja apoptozi H22 šūnās gan ar ārējiem, gan iekšējiem signalizācijas ceļiem un nomāca H22 audzēju augšanu pelēm.

Metodes

Šūnu līnija

Peles H22 hepatocelulārās karcinomas šūnas tika iegūtas no Sjiņdzjanas galvenās bioloģisko resursu un gēnu inženierijas laboratorijas, Sjiņdzjanas universitātes (Urumči, Siņdzjana, Ķīna) un kultivētas RPMI 1640 barotnē (Gibco), kas papildināta ar 100 U/ml penicilīnu un 100 ug/ml. streptomicīns un 10% termiski inaktivēts liellopu augļa serums (Gibco) 37 grādu temperatūrā mitrinātā atmosfērā ar 5% CO2.

MTT tests

CTPG tika iegādāts no Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, Ķīna), un galvenie CTPG savienojumi tika kvalificēti un kvantificēti ar augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju [16]. Šūnu dzīvotspēja tika novērtēta ar 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolija bromīdu (MTT) (Sigma, Sentluisa, MO , ASV) tests. H22 šūnas tika inokulētas 96-iedobju plāksnēs ar blīvumu 2 × 104 šūnas 100 ul barotnē katrā iedobē un kultivētas 37 grādu temperatūrā. Pēc 24 stundām šūnas attiecīgi 24, 48 un 72 stundas apstrādāja ar dažādu koncentrāciju CTPG (0, 100, 200, 300 un 400 ug/ml) vai 0,3 procentiem DMSO (vienāds ar 400 ug/ml CTPG). . Pēc centrifugēšanas ar ātrumu 1000 apgr./min 7 minūtes, supernatants tika izmests un katrai iedobei pievienoja 100 ul MTT šķīduma (5 mg/ml PBS). Plāksnes inkubēja 37 grādu temperatūrā 4 stundas un pievienoja 100 ul DMSO, lai izšķīdinātu izveidotos formazāna kristālus. OD490 vērtības tika noteiktas ar 96- iedobes mikroplašu lasītāju (Bio-Rad Laboratories, CA, ASV). Šūnu dzīvotspēja tika aprēķināta pēc formulas: Šūnu dzīvotspēja (procenti)=(OD apstrādāta/ODneapstrādāta) × 100 procenti.

Apoptozes noteikšana

H22 šūnas tika apstrādātas ar dažādu koncentrāciju CTPG (0, 100, 200, 300 un 400 ug/ml) vai 0,3 procentiem DMSO 24 stundas un pēc tam iekrāsotas ar aneksīnu V FITC/ Propīdija jodīda (PI) Apoptozes noteikšanas komplekts (YEASEN, Ķīna) saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Paraugi tika analizēti ar plūsmas citometriju (BD FACSCalibur, ASV).

Mitohondriju membrānas potenciāla noteikšana

H22 šūnas 24 stundas apstrādāja ar dažādām CTPG koncentrācijām (0, 200 un 400 ug/ml) un pēc tam 20 stundas krāsoja ar membrānu caurlaidīgo JC-1 krāsvielu (Beyotime, Ķīna). min pie 37 grādiem. Pēc divreizējās mazgāšanas ar JC-1 buferšķīdumu paraugi tika atkārtoti suspendēti ar 300 ul JC-1 buferšķīduma un analizēti ar plūsmas citometriju (BD FACSCalibur, ASV).

Šūnu cikla analīze

H22 šūnas tika inokulētas 60 mm kultūras trauciņos un apstrādātas ar dažādu koncentrāciju CTPG (0, 100, 200, 300 un 400 ug/ml) vai 0,3 procentiem DMSO. 24 h. Visas šūnas tika savāktas un divas reizes mazgātas ar PBS. Šūnas tika fiksētas 70% ledusaukstā etanolā -20 grādu temperatūrā 2 stundas un divas reizes mazgātas ar PBS, pēc tam atkārtoti suspendētas 300 ul propīdija jodīda/RNāzes krāsošanas buferšķīdumā (BD Biosciences). Pēc 10 minūtēm istabas temperatūrā paraugi tika savākti ar plūsmas citometriju (BD FACSCalibur, ASV), un šūnu cikla sadalījums tika analizēts ar ModFit LT 3.0 programmatūru.

Hoechst 33 258 krāsošana

H22 šūnu kodolu morfoloģiskās izmaiņas tika analizētas ar membrānu caurlaidīgu DNS saistošo krāsvielu Hoechst 33 258 krāsošanu. H22 šūnas tika iesētas 6-iedobes plāksnē ar koncentrāciju 1 × 105 šūnas/iedobē 2 ml barotnē. Pēc 60% ~ 70% saplūšanas šūnas 24 stundas apstrādāja ar CTPG (0, 100, 200, 300 un 400 ug / ml). Šūnas tika savāktas un fiksētas ar 4% ledusaukstu paraformaldehīdu 4 grādu temperatūrā 10 minūtes. Pēc mazgāšanas ar PBS šūnas tika iekrāsotas ar Hoechst 33 258 (Beyotime, Ķīna) 4 grādos 10 minūtes. Paraugus novēroja ar apgrieztu fluorescences mikroskopu (Nikon Eclipse Ti-E, Japāna).

Western blot

Anti-caspase-3, anti-caspase-3, Anti-Bcl-2 un anti-Bax tika iegādātas no Beyotime Biotech Co., Ltd. (Šanhaja, Ķīna). Anti-kaspāze-7, pretšķelšanās-kaspāze-7, anti-kaspāze-8, pretšķelšanās-kaspāze-8, anti-kaspāze-9, pret -Caved-caspase-9, anti-PARP, anti-šķelto PARP, anti-peles IgG-HRP un anti-trušu IgG-HRP tika iegādāti no Cell Signaling Technology. Anti- -aktīns tika iegādāts no Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Pekina, Ķīna).

H22 šūnas tika apstrādātas ar dažādu koncentrāciju CTPG (0, 100, 200, 300 un 400 ug/ml) vai 0,3 procentiem DMSO 24 stundas. Šūnas tika savāktas un lizētas ar šūnu līzes šķīdumu RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) 30 minūtes uz ledus. Paraugi tika izgriezti uz leju (12,{11}} g 15 minūtes 4 grādu temperatūrā), lai savāktu supernatantus, un olbaltumvielu koncentrācijas tika mērītas ar BCA komplektu (Thermo Fisher Scientific, ASV). Vienāds daudzums olbaltumvielu katrā paraugā tika izolēts ar 12% SDS-PAGE un pārnests uz PVDF membrānām (Biosharp, Ķīna). Pēc bloķēšanas ar TBST buferšķīdumu, kurā bija 5 procenti beztauku piena, membrānas tika inkubētas ar atbilstošām primārajām antivielām un sekundārajām antivielām, kas konjugētas attiecīgi ar mārrutku peroksidāzi (HRP). Pēc mazgāšanas ar TBST mērķa proteīni tika atklāti ar ECL testa komplektu (Beyotime, Ķīna).

Paziņojums par dzīvniekiem un ētiku

6-8 nedēļas vecas Kunmingas peļu tēviņi tika iegādāti no Sjiņdzjanas Medicīnas universitātes Dzīvnieku laboratorijas centra (Urumci, Sjiņdzjana, Ķīna). Peles tika turētas Sjiņdzjanas universitātes standarta kontrolētā temperatūrā, gaismas ciklā. Visi pētījumi ar dzīvniekiem tika veikti saskaņā ar Sjiņdzjanas Universitātes Dzīvnieku kopšanas un lietošanas komitejas vadlīnijām. Protokolu apstiprināja Sjiņdzjanas Universitātes Sjiņdzjanas galvenās bioloģisko resursu un gēnu inženierijas laboratorijas (BRGE-AE001) Eksperimentu ar dzīvniekiem ētikas komiteja.

Audzēja peles pētījums

Audzēja peles modeļa ierosināšanai Kunmingas peļu tēviņiem labajā sānā subkutāni injicēja 1 × 106 H22 šūnas 100 ul PBS. Pēc 3 dienām peles tika nejauši sadalītas 3 grupās (7 peles grupā). Kontroles grupai subkutāni ap audzēju injicēja 0, 1 ml DMSO. CTPG-200 un CTPG- 400 grupām ap audzēju subkutāni injicēja 200 vai 400 mg/kg CTPG 0,1 ml DMSO. Peles tika ārstētas ik pēc 2 dienām līdz 21 dienai. Audzēju izmēri tika mērīti, izmantojot suportus līdz 25 dienām, un audzēja tilpums tika aprēķināts pēc formulas: audzēja tilpums (mm3)=(garums × platums2)/2. Pēc 25 dienām audzēja peļu izdzīvošana tika uzraudzīta katru dienu līdz šī pētījuma beigām.

Statistiskā analīze

Statistisko nozīmīgumu aprēķināja, izmantojot vienvirziena dispersijas analīzi starp ārstēšanas un kontroles grupām. Visi dati tika izteikti kā vidējā ± standarta novirze (SD). p < 0,05="" tika="" uzskatīts="" par="" statistiski="">

Rezultāti

CTPG samazināja H22 šūnu dzīvotspēju in vitro

Lai izpētītu CTPG pretvēža iedarbību uz HCC, H22 šūnas in vitro tika apstrādātas ar dažādām CTPG koncentrācijām (0, 100, 200, 300 un 400 ug/ml). Pēc 24 stundām H22 šūnu morfoloģija tika novērota, izmantojot apgrieztu mikroskopu. Mēs noskaidrojām, ka H22 šūnu morfoloģija ir dramatiski mainījusies ar CTPG ārstēšanu. Palielinoties CTPG koncentrācijai, šūnas kļuva mazas un apaļas, un arī šūnu skaits tika ievērojami samazināts (1.a attēls). MTT tests tika izmantots, lai analizētu H22 šūnu dzīvotspēju pēc CTPG apstrādes attiecīgi 24, 48 un 72 stundas. CTPG būtiski samazināja H22 šūnu dzīvotspēju atkarībā no devas un laika (1.b attēls). CTPG pie 300 ug/ml sasniedza vislabāko inhibēšanas ātrumu (1.c attēls). CTPG IC50 vērtības H22 šūnām ir 236 ug/ml 24 stundās un 169,8 ug/ml 48 stundās.

CTPG izraisīja apoptozi H22 šūnās

Lai noskaidrotu, vai H22 šūnu dzīvotspējas samazināšanās ir saistīta ar apoptozes indukciju, H22 šūnas tika apstrādātas ar dažādu koncentrāciju CTPG (0, 100, 200, 300 un 400 ug/ml) 24 stundas un iekrāsotas. ar PI un aneksīnu V. Plūsmas citometrijas rezultāti parādīja, ka CTPG būtiski inducēja H22 šūnu apoptozi (ieskaitot agrīnu un vēlu apoptozi) atkarībā no devas (2.a attēls). Lai gan lielā CTPG deva arī ievērojami palielināja H22 šūnu nekrozi, nekrozei ir neliela nozīme H22 šūnu augšanas kavēšanā, jo tās īpatsvars ir mazāks (8,3 procenti), salīdzinot ar apoptozi (52,6 procenti). Turklāt H22 šūnu kopējie proteīni tika izolēti pēc apstrādes ar CTPG un tika konstatētas anti-apoptotiskās B šūnu limfomas 2 (Bcl-2) un proapoptotiskās BCL-2- saistītās X proteīna (Bax) izpausmes. Western blot. Pelēktoņu skenēšanas dati parādīja, ka Bax un Bcl-2 ekspresijas līmeņi tika attiecīgi palielināti un samazināti. Bax/Bcl-2 attiecība tika ievērojami palielināta (2.b attēls). Šie rezultāti liecina, ka CTPG inducē apoptozi H22 šūnās.

CTPG izraisa hromosomu kondensāciju un šūnu cikla apstāšanos H22 šūnās

Ir ziņots, ka zāļu izraisīti DNS bojājumi un šūnu cikla apstāšanās var kavēt audzēja šūnu augšanu un izraisīt apoptozi audzēja šūnās [17, 18]. Lai noteiktu kodolu morfoloģiju H22 šūnās pēc CTPG apstrādes 24 stundas, H22 šūnas tika iekrāsotas ar Hoechst 33 342 un novērotas, izmantojot apgrieztu fluorescējošu mikroskopiju. Ar CTPG apstrādātās šūnas uzrādīja no devas atkarīgu kodolu spilgti kondensētā hromatīna palielināšanos, savukārt neapstrādātajās šūnās bija viendabīgi iekrāsoti kodoli (3.a attēls). Šūnu cikla sadalījums H22 šūnās tika tālāk analizēts ar PI krāsošanu pēc CTPG apstrādes 24 stundas. Kā parādīts 3.b attēlā, CTPG terapija ievērojami palielināja G0/G1- un G2/M fāzes šūnu īpatsvaru un ievērojami samazināja S fāzes šūnu īpatsvaru, kas liecina, ka CTPG inducēja G 0/G1 un G2/M fāzes apturēšana H22 šūnās. Lielā CTPG deva arī ievērojami palielināja sub G1 šūnu īpatsvaru.

CTPG samazināja mitohondriju membrānas potenciālu un palielināja citohroma c izdalīšanos

No mitohondriju atkarīgajam ceļam ir svarīga loma apoptozes indukcijā [19, 20]. Mitohondriju membrānas potenciāla (Δψm) izmaiņas var novērot ar JC-1 krāsošanu, jo JC-1 agregāts (sarkanā fluorescence) var sadalīties monomērā (zaļā fluorescence), samazinoties Δψm [21]. Pēc 24 stundu ilgas apstrādes ar CTPG H22 šūnas tika iekrāsotas ar JC- 1 krāsu. Plūsmas citometrijas dati parādīja, ka sarkanā fluorescence FL-2 kanālā un zaļā fluorescence FL-1 kanālā tika ievērojami samazināta un palielināta pēc apstrādes ar CTPG. PE−FITC plus šūnu īpatsvars tika ievērojami palielināts (4.a att.), kas liecina, ka CTPG samazināja Δψm H22 šūnās. Tas atbilst palielinātajai Bax/Bcl-2 attiecībai. Līdz ar to mēs novērojām, ka citohroma c izdalīšanās tika ievērojami palielināta pēc ārstēšanas ar CTPG (4.b attēls). Šie rezultāti liecināja, ka CTPG var daļēji izraisīt apoptozi H22 šūnās, izmantojot no mitohondriju atkarīgu (iekšējo) ceļu.

CTPG aktivizēja kaspāzes ceļu un novērsa DNS labošanu

Pēc tam tika analizēta CTPG izraisītā kaspāzes aktivizēšana, izmantojot gan ārējos, gan iekšējos signalizācijas ceļus. Pēc CTPG apstrādes 24 stundas no H22 šūnām tika izolēti kopējie proteīni, un pro- un šķelto kaspāžu līmenis tika noteikts ar Western blot. Salīdzinot ar neapstrādātu vai DMSO kontroli, CTPG apstrāde ievērojami paaugstināja ne tikai šķeltās kaspāzes -8 līmeni (ārējais ceļš), bet arī šķeltās kaspāzes -9 (iekšējais ceļš) līmeni (att. 5). Secīgi aktivētā kaspāze-8 un -9 šķeļa pakārtoto prokaspāzi-3 un -7, kas tika novērotas 5. attēlā. Aktivētā kaspāze-3 sašķēla DNS. poli (ADP-ribozes) polimerāzes (PARP) labošanas enzīms, lai novērstu DNS atjaunošanos un uzkrātu DNS bojājumus, kā parādīts 3.a attēlā.

Šie rezultāti liecināja, ka CTPG izraisīja apoptozi H22 šūnās, izmantojot gan ārējos, gan iekšējos signalizācijas ceļus.

CTPG nomāc H22 HCC augšanu in vivo un uzlabo audzēja peļu izdzīvošanas līmeni

Visbeidzot, CTPG pretvēža iedarbība uz HCC tika novērtēta audzēja peles modelī, kas tika noteikts ar H22 šūnu subkutānu injekciju. Pēc 3 dienu H22 šūnu injekcijas audzēja peles tika ārstētas ar CTPG 8 reizes. Peļu ķermeņa svars un audzēja izmēri tika uzraudzīti norādītajos laika punktos. Kā parādīts 6.a attēlā, peļu ķermeņa masai katrā grupā nav būtisku atšķirību, kas liecina, ka izvēlētajām CTPG devām nav acīmredzamu blakusparādību. Interesanti, ka audzēja augšana pelēm, kas tika ārstētas gan ar 200 mg/kg, gan ar 400 mg/kg CTPG, tika ievērojami kavēta (6.b attēls). Turklāt divas CTPG terapijas devas eksperimenta beigās ievērojami uzlaboja audzēja peļu dzīvildzi (3/7, 3/7), salīdzinot ar kontroles grupu (0/7) (6.b attēls). Mēs arī atklājām, ka CTPG no devas atkarīgā veidā ievērojami uzlaboja splenocītu proliferāciju, kas izolēti no Kunmingas peļu tēviņiem (6.c attēls), kas liecina, ka CTPG ir imūnstimulējoša iedarbība.

Diskusija

TCM jau ilgu laiku ir izmantots dažādu slimību, tostarp vēža, ārstēšanai. Ir ziņots, ka TCM var izraisīt apoptozi dažāda veida audzēja šūnās, izmantojot gan ārējos (ar nāves receptoru starpniecību), gan iekšējos (no mitohondrijiem atkarīgos) signalizācijas ceļus, lai radītu pretvēža iedarbību [22–25]. Abi ceļi var aktivizēt attiecīgi kaspāzi -8 un -9 [24, 26]. Šeit mēs noskaidrojām, ka CTPG ievērojami nomāca H22 šūnu augšanu, inducējot apoptozi un šūnu cikla apstāšanos. Sašķeltās kaspāzes -8 un -9 līmenis tika ievērojami paaugstināts ar CTPG ārstēšanu, kas liecina, ka apoptozes indukcijā bija iesaistīti gan ārējie, gan iekšējie signalizācijas ceļi. Mūsu iepriekšējais pētījums parādīja, ka CTPG izraisīja apoptozi melanomas B16-F10 šūnās, izmantojot no mitohondrijiem atkarīgo ceļu, kas paaugstināja šķeltās kaspāzes-9 līmeni, bet ne kaspāzes-8 līmeni [16]. CTPG var aktivizēt atšķirīgus signalizācijas ceļus dažāda veida audzēja šūnās.

Mitohondriju membrānas integritāti stingri regulē BCL-2 proteīnu saimes locekļi, tostarp Bax un Bcl-2 [27, 28]. Bax un Bcl-2 attiecībai ir izšķiroša nozīme no mitohondrijiem atkarīgajā apoptozes ceļā [29]. H22 šūnās, kas apstrādātas ar CTPG, Bax/Bcl-2 attiecība bija ievērojami paaugstināta, kas varētu izraisīt šajā pētījumā novēroto Δψm samazināšanos un citohroma c izdalīšanos. Līdz ar to pro-kaspāze{11}} tika sadalīta un aktivizēta. Visbeidzot, aktīvās kaspāzes -8 un -9 iniciatori aktivizēja kaspāzes izpildītāju-3, lai šķeltu PARP, lai novērstu DNS labošanu. Kopumā šie rezultāti liecināja, ka CTPG izraisīja apoptozi H22 šūnās, izmantojot gan ārējos, gan iekšējos signalizācijas ceļus.

Audzēja peles modelī CTPG ievērojami nomāca H22 HCC augšanu un ievērojami uzlaboja audzēja peļu izdzīvošanu. Interesanti, ka CTPG atkarībā no devas veicināja splenocītu proliferāciju no Kunmingas pelēm, kas atbilst mūsu iepriekšējam pētījumam [16].

Šie rezultāti liecināja, ka CTPG var nomākt H22 HCC augšanu pelēm, izmantojot gan tiešu pretvēža iedarbību, gan netiešu imūnsistēmas uzlabošanos.

Secinājumi

CTPG nomāca H22 šūnu augšanu gan in vitro, gan in vivo un izraisīja apoptozi H22 šūnās, izmantojot gan ārējos, gan iekšējos signalizācijas ceļus. Šie dati norādīja, ka CTPG varētu būt potenciāls kandidāts HCC ārstēšanai.