Cistanche deserticola kvalitātes kontroles metodes

lai iegūtu plašāku informāciju:ali.ma@wecistanche.com

Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei un citi.

Tradicionālā ķīniešu medicīnaCistancheir sulīgs kātsCistanche deserticolaYC Ma vai Cisanche tubulosa (Schenk) Wight ar sausām zvīņainām lapām. Tam ir nieres jaņ tonizējošas, esences un asiņu barošanas, zarnu mitrināšanas un caurejas uc funkcijas. To galvenokārt lieto nieru jaņģa deficīta, esences un asiņu trūkuma, impotences un neauglības, vidukļa un ceļu sāpīguma un vājuma, vājuma gadījumā. muskuļu un kaulu, zarnu sausums un aizcietējums. Mūsdienu farmakoloģiskie pētījumi liecina, kaCistancheir daudzas funkcijas, piemēram, uzlabo seksuālo funkciju, pretojoties Alcheimera slimībai un Parkinsona slimībai, uzlabo mācīšanās un atmiņas spējas, novērš novecošanos, novērš nogurumu, aizsargā aknas un veic caureju [4]. Liels skaits pētījumu ir apstiprinājuši, ka feniletanoīdu glikozīdi inCistanche deserticolair acīmredzama ietekme uz mācīšanās un atmiņas spēju uzlabošanu, pretošanos Alcheimera slimībai un Parkinsona slimībai (4, oligosaharīdiem un polioliem ir caureju veicinoša un caureju veicinoša iedarbība 64 ). "Ķīnas Tautas Republikas farmakopeja" mēra tikai feniletanoīdu glikozīdu ehinakozīda un verbaskozīda saturuCistanchedeserticola, bet nenosaka tā caureju veicinošās iedarbības aktīvās sastāvdaļas, tāpēc ir grūti panākt visaptverošu ārstniecisko materiālu analīzi.Cistanchedeserticola. Kvalitātes kontrole. Lai pārvarētu šo ierobežojumu un izveidotu vairāku indeksu kvalitātes novērtēšanas sistēmu, kas saistīta ar galvenajām funkcijām un norādēm.Cistanchedeserticola, šajā pētījumā tika izmantota HPLCELSDP4, lai izveidotu kvantitatīvu analīzes metodi betaīna, mannīta, fruktozes, glikozes un saharozes medicīniskajos materiālos.Cistanchedeserticola. Turklāt 58 partijas noCistanchedeserticoladažādas izcelsmes ārstniecības materiāli un 10 zāļu partijasCistancheSiņdzjanas Hotan apgabalā tika pārbaudīti, kas var sniegt atsauci visaptverošai zāļu kvalitātes kontrolei un novērtēšanai.Cistanchedeserticolanākotnē.

Noklikšķiniet, lai cistanche ekstrakts dod labumu produktiem

1 Instruments un reaģenti

1.1 Instrumenti

Sartorius elektroniskais svars BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija; ALLTECH 2000ES iztvaikošanas gaismas izkliedes detektors (EISD); Ultraskaņas tīrīšanas līdzeklis KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd.). 1.2. Reaģenti

Kontrolviela: betaīns (partija: {0}}, tīrība: 99,2 procenti), mannīts (partija: 10053-201304, tīrība: 99,0 procenti), D-fruktoze (partija: 111504-201703). , tīrība: 99,8 procenti ), D — bezūdens glikoze (partijas numurs: 110833-201506, tīrība: 99,9 procenti ), saharoze (partijas numurs: 111507-201303, tīrība: 99,8 procenti ), visas iegādātas no Ķīnas Nacionālā institūta Pārtikas un zāļu kontrolei.

Ārstnieciskie materiāli noCistanchedeserticolatika savākti Iekšējā Mongolijā, Siņdzjanā, Gansu un citās vietās, kopā ar 58 partijām. Pekinas Universitātes Farmācijas skolas profesors Tu Pengfei tos identificēja kā žāvētus, mīkstus stublājus.CistanchedeserticolaLidangaceae auga YCMa, kā parādīts 3. tabulā.

Ārstnieciskie materiāli noCistanchedeserticolatika savākti Hotan apgabalā, Siņdzjanā, kopumā 10 partijās. Pekinas Universitātes Farmācijas skolas profesors Tu Pengfei tos identificēja kā kaltētus mīkstus stublājus ar Liedangaceae auga Cistanche tubulosa (Schenk) Wight zvīņainām lapām, kā parādīts 4. tabulā.

1.3. Reaģenti

Acetonitrils ir hromatogrāfisks tīrs (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), metanols ir hromatogrāfisks (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.), un ūdens ir īpaši tīrs ūdens.

2 Metodes un rezultāti

2.1. Hromatogrāfiskie apstākļi

Hromatogrāfiskā kolonna bija ShodexAshaipak NH2P-50 4E polimēra gēla kolonna (250 mm × 4,6 mm, 5 μm); kustīgā fāze bija acetonitrils-ūdens (77∶23); plūsmas ātrums bija 0,7 ml·min-1; kolonnas temperatūra bija 25 grādi; Gaismas izkliedes detektors (ELSD): dreifējošās caurules temperatūra bija 100 grādi, un nesējgāzes plūsmas ātrums bija 3 L·min-1.

2.2. Standartšķīduma pagatavošana

Paņemiet atbilstošu daudzumu betaīna, mannīta, fruktozes, glikozes un saharozes, precīzi nosveriet to, pievienojiet ūdeni, lai pagatavotu jauktu šķīdumu, kas satur 0,25 mg betaīna, mannīta, fruktozes, glikozes un saharozes katrā. 1 ml, labi sakratiet un iegūstiet.

2.3. Testa šķīduma pagatavošana

Paņemiet apmēram 1.0 gCistanchemedicīnisko pulveri (izlaists caur sietu Nr. 4), precīzi nosver, ieliek 100 ml brūnā mērkolbā, precīzi pievieno 50 ml 50 procentu metanola, cieši aizbāž, sakrata, nosver to, iemērc 30 minūtes un pēc tam ultraskaņā (jauda 250 W, frekvence 35 kHz) 40 minūtes, izņem, ļauj atdzist, vēlreiz nosver, pievieno 50 procentu metanola, lai samazinātu masu, kārtīgi sakratiet un ļaujiet. tas stāv. Precīzi aspirējiet 5 ml supernatanta, ievietojiet to 25 ml mērkolbā, atšķaidiet līdz atzīmei ar 50% metanolu, labi sakratiet un filtrējiet caur 0,2 μm mikroporainu membrānu.

2.4. Noteikšanas metode

Precīzi ievelciet attiecīgi 5 un 10 μL standartšķīduma un 5 μL testa šķīduma, injicējiet tos šķidruma hromatogrāfā, pierakstiet pīķa laukumu un aprēķina saskaņā ar ārējā standarta divu punktu metodes logaritmisko vienādojumu.

2.5 Sistēmas piemērotības pārbaude

Saskaņā ar 2.1. punktā minētajiem hromatogrāfijas apstākļiem precīzi ievelk attiecīgi 5 μ salīdzināmā šķīduma un testa šķīduma un injicē tos augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijā, izmēra un pieraksta hromatogrammu, kā parādīts 1. attēlā. Hromatogrāfiskās pīķi no testa parauga uzrādīja tādu pašu aiztures laiku kā atsauces vielas hromatogrāfijas maksimumiem, izšķirtspēja bija laba un hromatogrāfijas apstākļi bija iespējami.

Piezīme: A. Kontrolviela; B.CistancheNr.49 paraugs; 1. betaime ; 2. fnuckese ; 3. mannibols; 4. glikoze ; 5. sucreve

1.att. References vielas un Cistanche Nr.49 parauga HPLC profili

2.6. Lineāro attiecību pārbaude

Ņemiet atbilstošu daudzumu betaīna, mannīta, fruktozes, glikozes un saharozes kā atsauces vielas, precīzi nosveriet tās un pievienojiet ūdeni, lai katrs 1 ml satur betaīnu 0.496 0 mg, mannīts {{3} }.994 0 mg, augļi 1.0126 mg, glikoze 1.0882 mg un saharoze 0,9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0,9920, 1,9840, 2,9760 μ, mannīts 0,1988, 0,4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 μ, fruktoze 0,5063, 1.012 6. 2.{40}}. 4.{42}}. 5.{44}}. Hromatogrāfiskie apstākļi tika ievadīti un atklāti, un tika reģistrēts pīķa laukums; tad par abscisu tika izmantota katras etalonvielas injekcijas daudzuma logaritma vērtība X (ug), un pīķa laukuma logaritma vērtība Y bija ordināta, un tika novilkta standarta līkne. Rezultāti ir parādīti 1. tabulā.

1. tabula Lineāro attiecību izpētes rezultāti

2.7 Precizitātes pārbaude

Precīzi ievelciet testa šķīdumu (paraugs Nr. 49), iepriekšminētajos hromatogrāfijas apstākļos, nepārtraukti injicējiet 6 reizes, izmēra katras hromatogrāfiskās pīķa pīķa laukumu un aprēķina tā RSD vērtību. Rezultāti Betaīna, mannīta, fruktozes, glikozes un saharozes pīķu apgabalu RSD bija attiecīgi 0,84 procenti, 2,56 procenti, 1,27 procenti, 2,62 procenti un 1,52 procenti, kas norāda, ka izmantotā instrumenta precizitāte šis pētījums bija labs. 2.8. Atkārtojamības pārbaude

Paņemiet 6 paraugusCistanchedeserticola(paraugs Nr. 49), sagatavo testa šķīdumu saskaņā ar 2.3. punktā minēto metodi, izmēra katras hromatogrāfiskās pīķa pīķa laukumu un aprēķina atbilstošo saturu. Rezultāti Vidējais betaīna, mannīta, fruktozes, glikozes un saharozes (n=6) saturs bija 7,93 procenti, 7,27 procenti, 8,74 procenti, 2,75 procenti un 4,81 procenti, un RSD bija 2,83 procenti, {{94 procenti. 18}},97 procenti un attiecīgi 2,60. procenti , 1,40 procenti , norādot, ka metodei ir laba atkārtojamība. 2.9. Stabilitātes pārbaude

Paņemiet testa šķīdumu (paraugs Nr. 49), injicējiet to 0, 4, 8, 12, 16 un 24 h pēc sagatavošanas mērījumiem un aprēķiniet katras hromatogrāfiskās pīķa RSD vērtību. Rezultāti Betaīna, mannīta, fruktozes, glikozes un saharozes RSD bija attiecīgi 0,61 procenti, 1,92 procenti, 1,34 procenti, 2,83 procenti un 0,69 procenti, kas norāda, ka testa šķīdumam bija laba iedarbība. stabilitāte 24 stundu laikā. 2.10. Atveseļošanās tests

Paņemiet 6 paraugusCistanchedeserticolaar zināmu saturu (paraugs Nr. 49), precīzi nosveriet 0,25 g, ievietojiet tos 50 ml brūnā mērkolbā un precīzi ievelciet 25 ml sajauktā standartšķīduma koncentrācijā 1: 1 (kas satur {{10}},7900 mg betaīna). paraugam tika pievienoti mL-, fruktoze 0,7236 mg"mL-1, mannīts 0,8812 mg·mL-1, glikoze 0,2708 mg·mL-1, saharoze 0,4883 mg"mL-'), un testa šķīdums tika sagatavots saskaņā ar metodi saskaņā ar 2.3. Noteikts saskaņā ar iepriekšminētajiem hromatogrāfijas apstākļiem, aprēķināts tā atgūšana, rezultāti parādīti 2. tabulā, norādot, ka metodei ir laba precizitāte.

2. tabula: 5 pārbaudāmo komponentu parauga atgūšanas ātruma mērījumu rezultāti (n{2}})

3 Diskusija

3.1. Indeksa komponentu izvēle

Kopējais oligosaharīdu daudzums noCistancheir efektīvās daļasCistanchepar caurejas līdzekļiem. Autors analizēja šīs daļas ķīmisko sastāvu ar LC-MS un atsauces vielu un konstatēja, ka šī daļa galvenokārt sastāv no betaīna, mannīta, fruktozes, glikozes un saharozes. Tāpēc šie 5 komponenti tika atlasīti kā indeksa komponentiCistanchedeserticola, un tika izveidota satura noteikšanas metode.

3.2. Hromatogrāfijas kolonnu izvēle

Pieci pārbaudāmie komponenti, betaīns, mannīts, fruktoze, glikoze un saharoze, ir relatīvi polāri un nevar tikt saglabāti apgrieztās fāzes Cn kolonnā. Parasti maksimumi parādās 1-2 minūšu laikā, un komponentus nevar atdalīt. Amino kolonnas Waters Bonoapar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 μm) un Phenomenex Bondclone 10 NH (300 mm × 3,9 mm, 10 μm) cukura un poliolu atdalīšanai, un polimēru bāzes aminokolonnas Prevail Carbohydrate ES ( 250 mm × 4,6 mm, 5 μm), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm × 4,6 mm, 5 μm). Rezultāti liecina, ka polimēra matricas aminokolonna var efektīvi atdalīt šīs piecas sastāvdaļas.

3.3 Detektora izvēle

Piecām pārbaudāmajām sastāvdaļām nav acīmredzamas UV absorbcijas, un UV detektora saturu nevar tieši noteikt. Tāpēc šajā rakstā tika izveidota kvantitatīvā analīzes metode cukura spirta komponentiemCistanchedeserticolaizmantojot HPLC-EISD. Rezultāti liecina, ka metodei ir augsta jutība, laba atkārtojamība un augsta precizitāte, un to var izmantot kvalitātes kontrolei.Cistanchedeserticolaun citi ārstniecības materiāli, kas satur betaīnu un cukura spirtus.

3.4. Testa šķīduma pagatavošanas metodes izpēte

Tika salīdzināti attiecīgi dažādi ekstrakcijas šķīdinātāji, tostarp ūdens, 30 procenti metanola, 50 procenti metanola, 70 procenti metanola, metanols utt. Rezultāti parādīja, ka, izņemot nedaudz zemāku 70 procentu metanola un metanola šķīdinātāja ekstrakcijas ātrumu, citos šķīdinātājos nebija būtiskas atšķirības, tāpēc tika veikta tieša atlase. 50% metanols tika izmantots kā šķīdinātājs sadaļā "Satura noteikšana".CistancheĶīnas Tautas Republikas farmakopejā, un tas tika sagatavots saskaņā ar attiecīgā testa šķīduma sagatavošanas metodi un pēc tam atšķaidīts 5 reizes, lai noteiktu cukura spirta sastāvdaļas.

3.5. Paraugu ar dažādām bāzēm noteikšana un analīze

Šajā pētījumā 5 komponentu saturs 58 partijāsCistanchedeserticolaun 10 partijasCistanchedeserticolatika noteikti ārstnieciskie materiāli. Betaīna, mannīta, fruktozes, glikozes un saharozes masas daļas 58 partijāsCistanchedeserticolaparaugi bija 2,73 procenti -17,65 procenti , 2,46 procenti -16,34 procenti , 2,52 procenti {{10}},74 procenti , 0,97 procenti -14,06 procenti , 3,15 procenti -27,16 procenti ; Mannīts, fruktoze un glikoze bija 1.00 procenti -13,04 procenti , 2,98 procenti -8,85 procenti, 1,09 procenti -5,33 procenti 10 sērijāsCistancheparaugi, attiecīgi, un betaīns un saharoze netika atklāti. Zāļu saturs dažādās sērijās ļoti atšķiras, un nav noteikumu, kas būtu jāievēro, kas liecina par nepieciešamību noteikt satura noteikšanas standartu, lai kontrolētu ārstniecisko materiālu kvalitāti. Turklāt šī metode var efektīvi atšķirt divu veiduCistanchebāzes augi, proti,Cistanchenesatur betaīnu un saharozi, savukārt šo divu komponentu saturs ir lielāksCistanche deserticola. Tas arī nodrošina pamatu, lai analizētu abu ārstniecisko materiālu tekstūras un dzīvotnes atšķirībasCistanche deserticola. Salīdzinot ar ārstniecisko materiāluCistanche deserticola, tekstūra ir maigāka, un tā ir vietēji pazīstama kā "Soft Dayun", kamērCistanchetiek saukts par "Chai Dayun", jo tas satur saharozi (3,15% ~ 27,16%). ).Cistanche deserticolagalvenokārt tiek izplatīts Alksā Iekšējā Mongolijā, savukārtCistanchegalvenokārt tiek izplatīts Siņdzjanas Hotanas apgabalā, kur temperatūra ir augstāka nekā Alksas apgabalā, un vietējā apgabalā bieži tiek izmantota pilienveida apūdeņošana, taču, kad temperatūra pazeminās,Cistanchecietīs nopietnus bojājumus. Sasalšanas bojājumiem, no vienas puses, ir noteikta saistība ar tā lielo ūdens saturu, un, no otras puses, tas ir saistīts ar tajā esošajām sastāvdaļām. Betaīns 243 ir svarīga osmotisko regulēšanas viela, kurai ir svarīga loma, lai uzlabotu augu izturību pret stresu, piemēram, izturību pret sāļumu, sausumu, zemu temperatūru un spēcīgu gaismu. Tas ir tieši tāpēc, ka sastāvā ir augsts betaīna satursCistanche deserticolaka tai ir labāka izturība pret sāļu-sārmu, sausuma un sasalšanas bojājumiem nekāCistanche, un tā izplatība ir salīdzinoši plaša.

3.6. AnalīzeCistanchedeserticoladažādas izcelsmes paraugi

Starp 58 tuksneša partijāmcistancheārstniecisko materiālu paraugi, 45 partijas tika ražotas no Alxa League, Iekšējās Mongolijas, 3 partijas bija no Wangyedi (Dengkou apgabals), Iekšējā Mongolijā, un 1 partija nebija zināma. Visām 49 ārstniecisko materiālu partijām bija atšķirīgs 5 komponentu saturs. Tomēr būtiskas atšķirības nav. Analīzes iemesls var būt tas, ka visi ārstniecības materiāli ir ražoti vienā tuksneša apgabalā, ekoloģija un ģeogrāfiskā vide ir līdzīga, kā arī produkta kvalitāte ir samērā viendabīga un stabila. Ir 3 partijas ražotas Minqin apgabalā, Gansu, un 6 partijas no Sjiņdzjanas. Saskaņā ar 2. attēlā redzamo analīzi, salīdzinot ar Iekšējā Mongolijā ražotajiem ārstnieciskajiem materiāliem, galvenā atšķirība atspoguļojas fruktozes un saharozes saturā. Saharozes saturs ārstnieciskajos materiālos bija salīdzinoši augstāks, taču, ņemot vērā nelielo abu izcelsmes paraugu daudzumu, šis secinājums ir jāpārbauda, ​​savācot vairāk paraugu. 3.7. Kopsavilkums

Šajā pētījumā HPLC Wang ISD tika izveidots 5 caurejas līdzekļu aktīvo sastāvdaļu vienlaicīgai noteikšanai, kas nodrošināja ērtāku, efektīvāku un precīzāku metodi caurejas līdzekļu kvalitātes kontrolei.Cistanche deserticola, un nodrošināja pamatu kvalitātes standarta uzlabošanai un turpmākai attīstībaiCistanchedeserticola. jēgpilnu atsauci.

Atsauces

【1】 Valsts Farmakopejas komisija. Ķīnas Tautas Republikas farmakopeja: A 【M】. Pekina: Ķīnas farmācijas zinātnes un tehnoloģiju prese, 2015;135.

【2】 Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Pētījumu progress par farmakoloģisko aktivitātiCistancheIzstāde. Ķīniešu augu medicīna, 2003, 34(9); 113415.

【3】 Sjue Haijana. Jiao Danyuan, Yao Jun. Kopējo glikozīdu farmakoloģiskās iedarbības izpēte Cilantro [J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 34(4): 486-488.

【4】 An Čunna, Džans Hunnings, Pu Sjaopins. Neirofarmakoloģijas pētījumu progressCistanche deserticolaIzstāde [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46(12): 887-890.

【5】 Gao Juhongs, Ke Zunji. Pētījumu progress par farmakoloģisko iedarbībuCistanche deserticolaAlcheimera slimības ārstēšanā []. Shanghai Tradicionālās ķīniešu medicīnas žurnāls, 2018, 52(1): 109-112.

【6】 Džans Baišuns, Džao Sjuvens, Čeņs Šuanhou u.c. Atsevišķu daļu caureju veicinoša iedarbībaCistanche deserticolaEksperimentālie pētījumi □. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10(1I1): 31-32.

【7】 Džans Baišuns, Čeņs Šuanhou, Džao Sjuvens u.c.Cistanche deserticolagalaktitola ekstrakts Devas un atbildes reakcijas pētījums par izkārnījumu iedarbību [J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10 (12): 28-29.

【8】 Gao Jundzja, Dzjan Jons, Dai Fans u.c. Pētījumi par ārstnieciskajām vielāmCistanche deserticolapar caurejas līdzekļiem Pētījumi [J]. Modernā ķīniešu medicīna Ķīnā, 2015, 17(4): 307-311.

【9】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong u.c. Trīs aktivitātes noCistanche deserticoladažādu ietekmējošo faktoru ietekmē Kvantitatīvā komponentu analīze J. Chinese Herbal Medicine, 2013, 44 (22): 32233230.

【10】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong u.c. NoteikšanaCistanche deserticolaHPLCEISD Galactitol saturs. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

【11】 Zhao Kuijun, Liang Lijuan, Bi Dan u.c. HPLCELSD noteikšanaCistancheun caurule Galaktitola saturs inCistanche[J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 19(8): 52-54.

【12】 Van Guipings, Sjue Sjaomins, Lu Čao u.c. Betaīna ietekme uz augu stresa pretestības uzlabošanu un tās darbības mehānisms.Jiangxi Agricultural Journal, 2014, 26(8): 2226.

【13】 Van Cindzje, Van Li. Pārskats par augu aukstumizturības gēnu pētījumiem. Lauku ekonomika un tehnoloģijas, 2018, 29(8): 23-25.