Cistanches Herba izejvielu un vīna ar tvaiku apstrādātu produktu sastāva un ārstnieciskās efektivitātes atšķirības

Abstract:

MērķisSalīdzināt Roucongrong (Cistanches Herba) ķīmiskā sastāva un ārstnieciskās efektivitātes izmaiņas pirms un pēc apstrādes, lai precizētu sautēšanas ar vīnu principu.

Metodes LC-MS tika izmantotas, lai identificētu ķīmiskā sastāva veidus pirms un pēc Cistanches Herba pagatavošanas, apvienojumā ar daudzfaktoru statistisko analīzi, lai noteiktu komponentu atšķirības pirms un pēc sautēšanas ar vīnu. Efektivitātes atšķirība tika pierādīta ar žurku hidrogenētā kortizonekidnija jang deficīta modeli.

RezultātiKopumā tika identificētas 45 ķīmiskās sastāvdaļasCistanches Herba paraugi; Savienojumi veicināja atšķirības starpCistanches Herba un vīnā sautēta Cistanches Herbairehinakozīds, verbaskozīds, izoakteozīds un tubulozīds B; Kopējais feniletanoīdu glikozīdu ekstrakts no Cistanches Herba labāk iedarbojas uz žurku modeļa uzlabošanos ar nieru jaņ deficītu nekā vīnā sautētais Cistanches Herba. Secinājums Cistanche sastāvs tiek mainīts pēc sautēšanas ar vīnu, un ir pastiprināta ietekme uz nieru jaņ deficītu. Pārveidošanas sastāvdaļas no Cistanches Herbato vīnā sautētās Cistanches Herba var būt aktīvās sastāvdaļas, kas stiprina nieres un atbalsta jaņ.

Atslēgas vārdi: Cistanches Herba; vīnā sautētas Cistanches Herba;nieru jaņ deficīts;ehinakozīds;verbascoside; izoakteozīds; tubulozīds B

PĀRDOŠANAS AUGSTAS KVALITĀTES CISTANŠES ZĀĻI

Wecistanche atbalsta dienests

E-pasts:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel.:+86 15292862950

Tas ir pazīstams kā "žeņšeņs" un galvenokārt izplatīts Iekšējā Mongolijā, Ningsijā (Azuqi), Gansu (Changma), Sjiņdzjanas un citos reģionos [1]. Cistanche pēc būtības ir silts, pēc garšas ir salds un sāļš, un tas nonāk nieru un resnās zarnas meridiānos. Tas baro aknas un nieres, labvēlīgi ietekmē būtību un asinis, kā arī mitrina zarnas un mazina aizcietējumus. To var lietot nieru yang deficīta, impotences un neauglības, vidukļa un ceļgalu sāpju, muskuļu un kaulu vājuma, zarnu sausuma un aizcietējuma gadījumā [2]. Mūsdienu pētījumi liecina, ka Cistanche gaļīgie stublāji ar zvīņlapām galvenokārt satur dažādas ķīmiskas sastāvdaļas, piemēram, feniletanola glikozīdus, ciklopentānētera terpēnus un to glikozīdus, lignānus, cukurus utt. [3], un tiem ir vairākas farmakoloģiskas iedarbības, piemēram,pretnovecošanās,antioksidants,pret demenci,pretnoguruma līdzeklis, kā arī zarnu mitrināšana un aizcietējuma mazināšana [4].

Pēc sautēšanas ar vīnu tiek pastiprināta Cistanche nieres tonizējošā un jangu uzlabojošā iedarbība. Apstrādes princips nav skaidri izskaidrots. Fan Yanan et al. [5-7] pētīja Cistanche ietekmi uz žurku defekāciju, imūnsistēmu, zarnās šķīstošiem neirotransmiteriem un saistīto gēnu ekspresiju pirms un pēc apstrādes. Da et al. izmantoja feniletanola glikozīdu ietekmi pirms un pēc apstrādes, lai izskaidrotu tā apstrādes principu; Džan Čao et al. [8] izmantoja feniletanola glikozīdu satura izmaiņas pirms un pēc apstrādes, lai izskaidrotu apstrādes principu; Zhang Shuyun et al. [9] izmantoja betaīna satura izmaiņas pirms un pēc apstrādes, lai izskaidrotu apstrādes ietekmi uz Cistanche. Esošajā literatūrā par Cistanche apstrādi galvenokārt ir pievērsta uzmanība farmakoloģijai, un komponentu pētījumos arī uzmanība pievērsta konkrētu komponentu satura izmaiņām, trūkst sistemātiskas komponentu atšķirību izpētes. Šajā eksperimentā tika izmantota šķidruma hromatogrāfijas-masspektrometrijas (LC-MS) tehnoloģija apvienojumā ar daudzfaktoru statistisko analīzi, lai identificētu Cistanche ķīmiskos komponentus, atrastu atšķirību marķierus starp neapstrādātiem Cistanche un vīnā sautētiem produktiem un izpētītu atšķirību iedarbībā. neapstrādāti Cistanche un vīnā sautēti produkti, izmantojot žurku modeli nieru jaņ deficītam, ko izraisa hidrokortizons, lai izskaidrotuCistanche nieru tonizēšanai un jaņ veicināšanaiun vīnā sautētas Cistanche apstrādes princips.

PĀRDOŠANAS AUGSTAS KVALITĀTES CISTANŠES ZĀĻI

1 Materiāli

1.1 Instrumenti

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL elektrostatiskā lauka tandēma jonu lamatas augstas izšķirtspējas masas spektrometrs (Thermo Fisher Scientific, ASV), Theraio Xcaliber darbstacija; BT125D 1/100000 elektroniskais balanss (Sartorius Instrument System, Vācija); KQ500DE CNC ultraskaņas tīrītājs (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); XHF-D ātrgaitas izkliedētājs (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Multiskan FC mikroplašu lasītājs (Thermo Scientific); HC-3518 ātrgaitas centrifūga (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B daudzfunkcionāls žurku brīvprātīgo aktivitāšu reģistrators (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2. Narkotikas

Masu spektrometrijas pakāpes metanols (Fisher); masas spektrometrijas pakāpes skudrskābe (masas daļa 99%, Sigma Aldrich); ūdens (Watsons destilēts ūdens); Jinkui Shenqi Pills (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd. Pharmaceutical Factory, partijas numurs 1701653); hidrokortizona sukcināta nātrija sāls (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., partijas numurs 011705067); superoksīda dismutāzes (SOD) komplekts (partijas numurs 20170115) un malondialdehīda (MDA) komplekts (partijas numurs 20170117) tika iegādāts no Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; testosterons (T) un estradiols (E2) tika noteikti Qingdao Kechuang kvalitātes pārbaudes centrā, un kreatinīns (CREA) un urīnvielas slāpeklis (BUN) tika noteikts Iekšējās Mongolijas Medicīnas universitātes analīzes un testēšanas centrā.

1.3 Dzīvnieki

100 SD žurku tēviņi, kas sver 180-200 g, tika iegādāti no Xinglong Experimental Animal Farm Haidian rajonā, Pekinā, licences numurs: SCXK (Pekina) 2016-0003. Šo eksperimentu ar dzīvniekiem ir apstiprinājusi Pekinas Ķīniešu medicīnas universitātes Ētikas komiteja, ētikas numurs: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4. Paraugi

Sešas Cistanche deserticola partijas kā autentiskas atzina Pekinas Ķīniešu medicīnas universitātes Ķīniešu medicīnas skolas profesors Li Sjangri, un tās ieguva no Orobanchaceae dzimtas auga Cistanche deserticola YC Ma kaltētiem gaļīgiem kātiem ar zvīņlapām. Sīkāka informācija par paraugiem ir parādīta 1. tabulā.

1. tabula Cistanches Herba paraugu informācijas lapa

2 Metodes

2.1. Parauga sagatavošana

2.1.1. Neapstrādātu produktu sagatavošana Paņemiet tīru Cistanche deserticola, mīkstina to, sagriež biezās šķēlēs un nosusina.

2.1.2. Vīnā sautētu produktu gatavošana

Ņem 100 g Cistanche deserticola šķēles, pievieno 30 ml rīsu vīna, labi samaisa un sautē, līdz vīns uzsūcas. Sautējiet to ūdenī 12 stundas, izņemiet un ļaujiet tai nedaudz atdzist un nosusiniet. Neapstrādātus Cistanche deserticola un vīnā sautētu Cistanche deserticola paraugus skatiet 1. attēlā.

2.2 Pētījums par Cistanche deserticola sastāvdaļu atšķirībām pirms un pēc sautēšanas vīnā

2.2.1. Šķīduma sagatavošana

Ņem apmēram {{0}},2 g sausa parauga pulvera (izlaists caur 65-sietu), precīzi nosver, ievietojiet 50 ml brūnā mērkolbā, pievienojiet 25 ml 50% metanola. ūdens šķīdumu, cieši noslēdz, nosver masu, mērcē 30 minūtes, 40 minūtes apstrādā ar ultraskaņu (jauda 250 W, frekvence 35 kHz), atdzesē, vēlreiz nosver, pievieno 50% metanola ūdens šķīdumu, lai kompensētu zaudēto masu, sakrata. labi, ļaujiet nostāvēties, filtrējiet supernatantu caur 0,22 μm mikroporainu filtra membrānu un ievietojiet filtrātu brūnā šķidrās fāzes pudelē, lai iegūtu šķīdumu.

PĀRDOŠANAS AUGSTAS KVALITĀTES CISTANŠES ZĀĻI

2.2.2. Hromatogrāfiskie apstākļi

Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 hromatogrāfijas kolonna (100 mm × 2,1 mm, 1,7 μm), kolonnas temperatūra 35 grādi; parauga kameras temperatūra 10 grādi, parauga injekcijas tilpums 3 μL, metanols (A)-0,1% skudrskābes ūdens šķīdums (B) kā kustīgā fāze, gradienta eluēšana: 0-4 min, 10%{ {13}}% metanola; 4-18 min, 26%-40% metanola; 18-24 min, 40%-100% metanola; 24-28 min, 100% metanols. Tilpuma plūsmas ātrums bija 0,3 ml/min, un noteikšanas viļņa garums bija 330 nm.

2.2.3. Masu spektrometrijas apstākļi

Tika izmantots elektrosmidzināšanas jonizācijas avots (ESI), skenēšana negatīvā jonu režīmā, kapilārā temperatūra 350 grādi, apvalka gāzes tilpuma plūsmas ātrums 30 arb, palīggāzes tilpuma plūsmas ātrums 10 arb, izsmidzināšanas spriegums 3

KV, kapilārais spriegums –35 V, caurules lēcas spriegums –110 V, skenēšanas diapazons m/z 100-1 000, datu vākšanas sistēma Xcalibur 2.1.

2.2.4. Galveno komponentu analīze (PCA)

Pēc precīzu masas saglabāšanas laika datu pāru divdimensiju matricas iegūšanas instrumentu panelī tiks parādīta visa automātiski importētā precīzā saglabāšanas laika informācija, un analīzei tiks izmantota paplašinātā statistikas moduļa PCA metode.

2.2.5. Ortogonālā daļējā mazāko kvadrātu diskriminējošā analīze (OPLS-DA) LCMS apvieno augstu šķidruma hromatogrāfijas atdalīšanu ar masu spektrometrijas augsto jutību. Apkopotie dati ir diezgan lieli, un datu apstrādei ir nepieciešama daudzfaktoru statistiskā analīze. OPLS-DA sadala datus divās grupās un izmanto uzraudzītu statistikas modeli, lai iegūtu lielu skaitu ortogonalizētu spektru, kas skaidri parāda atšķirības starp abām paraugu grupām. Papildu attēlā S-Plot formātā katrs punkts apzīmē precīzu masas saglabāšanas laika datu pāri, X ass attēlo mainīgo, jo tālāk datu punkts atrodas no nulles punkta, jo lielāks ir punkta ieguldījums izlases starpībā. ; Y ass attēlo korelāciju starp paraugiem tajā pašā paraugu grupā, jo tālāk precīzais masas un aiztures laika datu pāris atrodas no nulles punkta, jo spēcīgāka ir korelācija. Tāpēc masas precīzie aiztures laika datu pāri abos S formas līknes galos atspoguļo visuzticamākos raksturīgos jonus no katras paraugu grupas.

PĀRDOŠANAS AUGSTAS KVALITĀTES CISTANŠES ZĀĻI

2.2.6. Masu spektrometrijas struktūras analīze

Pēc raksturīgo jonu iegūšanas tika veikta elementu sastāva un savienojumu saskaņošana, aprēķinot precīzu relatīvo molekulmasu un apvienojot esošo datubāzi un attiecīgo literatūru, lai identificētu diferenciālos komponentus.

2.3. Pētījums par atšķirību iedarbībā pirms un pēc sautēšanas ar vīnu

2.3.1. Cistanche deserticola ekstrakta sagatavošana

Cistanche deserticola (partijas numurs 160901) un atbilstošo vīnā sautētu Cistanche deserticola pulveri ekstrahēja saskaņā ar "2.2.1" nosacījumiem, filtrēja pēc ultraskaņas apstrādes, atkārtoja divas reizes, filtrātu apvienoja, koncentrēja ar vakuumdestilāciju un sasaldēja. žāvētas.

2.3.2. Eksperimentu ar dzīvniekiem grupēšana un zāļu ievadīšana

1. att. Cistanches Herba A un vīnā sautētas Cistanches Herba B

(1) Grupēšana: žurkām tika nodrošināta brīva piekļuve ūdenim un diētai. Pēc 1 nedēļas adaptīvās barošanas tie tika nejauši sadalīti 5 grupās (2. tabula) ar 10 žurkām katrā grupā, proti, parastā grupa, modeļu grupa, neapstrādāta Cistanche deserticola grupa (PR), vīnā sautēta Cistanche deserticola grupa (PW). , un pozitīvās kontroles Jinkui Shenqi Pill grupa (JK). (2) Modelēšana: izņemot parasto grupu, visām pārējām četrām grupām 14 dienas pēc kārtas tika injicēta hidrokortizona nātrija sukcināta injekcija im ar devu 20 mg/kg. Normālajai grupai injicēja tādu pašu parastā fizioloģiskā šķīduma devu. Tika novērots katras grupas žurku vispārējais stāvoklis, lai noteiktu, vai tām ir tādi simptomi kā bailes no aukstuma, priekšroka karstumam, aukstām ekstremitātēm, dzidrs un garš urīns, saritināta un izliekta mugura, blāvi un netīri mati un garīga depresija. Tajā pašā laikā tika izmērīts katras grupas žurku ķermeņa svars, spontāno aktivitāšu skaits, ēdiena uzņemšana, ūdens uzņemšana, urīna izdalīšanās un citi rādītāji.

(3) Ievadīšana: Deva žurkām tika aprēķināta, pamatojoties uz Jinkui Shenqi Pills un Cistanche deserticola klīnisko devu. Katrai Cistanche deserticola grupai deva bija 1,80 g/kg neapstrādātu zāļu daudzuma izteiksmē. Konkrētās devas ir parādītas 2. tabulā. Katrs Cistanche deserticola un Jinkui Shenqi Pills ekstrakts tika sagatavots noteiktas koncentrācijas šķīdumos ar dejonizētu ūdeni. Šķīdumu ievadīja intragastrāli katru dienu ar intragastrālo tilpumu 10 ml/kg 30 dienas pēc kārtas. Parastā grupa un modeļa grupa katru dienu tika ievadītas intragastrāli ar vienādu daudzumu dejonizēta ūdens. Ķermeņa svars tika mērīts katru nedēļu, un intragastrālais tilpums tika pielāgots atbilstoši žurku ķermeņa svaram. Pēc ievadīšanas žurkas tika badā 12 stundas. Pēc pentobarbitāla anestēzijas asinis tika savāktas no vēdera aortas seruma indeksa noteikšanai. Attiecīga indeksa noteikšanai tika izņemtas nieres, sēklinieki, epididīms, sēklas pūslīši un prostata.